CN110294745A - 五元杂环类衍生物及其制备方法和其在医药上的用途 - Google Patents

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CN110294745A CN201810239601.6A CN201810239601A CN110294745A CN 110294745 A CN110294745 A CN 110294745A CN 201810239601 A CN201810239601 A CN 201810239601A CN 110294745 A CN110294745 A CN 110294745A
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Abstract

本发明提供了一种通式(I)所示的五元杂环类衍生物或其药学上可接受的盐、及其制备方法，以及它们作为治疗剂，特别是作为选择性转染期间重排(RET)激酶抑制剂的用途。其中通式(I)中的A，B，C，D，E，X，R1，R2，R3的定义与说明书中的定义相同。

Description

五元杂环类衍生物及其制备方法和其在医药上的用途
技术领域
本发明涉及一种新的五元杂环类衍生物、其制备方法以及含有该衍生物的药物组合物以及其作为治疗剂特别是作为选择性转染期间重排(RET)激酶抑制剂的用途。
背景技术
转染期间重排基因(RET)是一种原癌基因，在人体内编码酪氨酸激酶受体，从而对细胞的繁殖和存活进行调控。该基因的活化需要通过与胶质细胞衍生的神经营养因子家族的受体以及该家族的α受体共同作用，来形成二聚体，通过磷酸化作用，调节信号通路，行使信号传导和调节生命活动的功能。转染期间重排基因(RET)异常表达与多种癌症疾病相关。该基因通过染色体重排与其他基因发生融合或者是通过定点的变异，可以不依赖配体而处于持续激活状态，导致信号通路异常，从而导致细胞的过度增殖和癌症的产生。
近年来，越来越多证据显示，转染期间重排基因(RET)融合和激活性突变是某些癌症诱发的驱动力。转染期间重排基因(RET)融合多见于乳头状甲状腺癌和非小细胞肺癌，如30％散发的和70％辐射诱导的乳头状甲状腺癌以及约2％的非小细胞肺癌由于转染期间重排基因(RET)的融合驱动。转染期间重排基因(RET)突变多见于甲状腺髓样癌，如超过50％的甲状腺髓样癌以及近乎所有的先天性髓样癌和多发性内分泌腺瘤病是由于转染期间重排基因(RET)的定点突变造成。并且该基因与其他癌症驱动基因不重合，有着显著的特异性。
目前主要采取具有转染期间重排基因(RET)抑制活性的多重激酶抑制剂来治疗转染期间重排基因(RET)融合的癌症病人。但是在此条件下，由于脱靶效应和药物毒性，药物的剂量不足以达到足够抑制转染期间重排基因(RET)表达的水平。此外，在治疗癌症的过程中，癌细胞会通过变异产生耐药性。而一旦耐药性产生，病人的治疗选择将会变得非常的有限。因此，目前非常需要一种药物来选择性地抑制异常表达的转染期间重排基因(RET)、转染期间重排基因(RET)融合以及治疗转染期间重排基因(RET)变异的癌症。
市场上还未有选择性地针对于转染期间重排基因(RET)靶点设计的药物，而采用多重激酶抑制剂可以对转染期间重排基因(RET)阳性的患者起到治疗作用。目前已经公开了一系列的选择性转染期间重排(RET)激酶抑制剂专利，其中包括 WO2016127074、WO2017079140、WO2017011776等，目前处于临床I期的药物为 BLU-667、Loxo-292、GSK-3352589等。但这些对于抗肿瘤研究是远远不够的，仍有必要研究和开发选择性转染期间重排(RET)激酶抑制剂，来解决未满足的医疗需求。
发明内容
本发明的目的之一在于公开了一类新的五元杂环类衍生物或其药学上可接受的盐。
本发明提供一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中：
A、B和C独立地选自C、N、O或S，使得含有A、B和C的环是五元芳族杂环；
D选自氧原子或NH；
E选自卤素；
X选自氢原子、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；当X为氢原子时，该处不含有手性中心；
R1、R2、R3独立地是不存在的或独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
本发明的优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中：
B和C独立地选自C、N、O或S，使得含有B和C的环是五元芳族杂环；
D、E、X、R1、R2、R3的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案，一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中E优选为氟原子，X优选为甲基，D优选为NH。
本发明的优选方案，一种通式(IIa)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIa-1)、(IIa-2)、(IIa-3)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R2和R3独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
本发明的优选方案，一种通式(IIb)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIb-1)、(IIb-2)、(IIb-3)、(IIb-4)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R2和R3独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
本发明的优选方案，一种通式(IIc)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIc-1)、(IIc-2)、(IIc-3)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R1、R2和R3独立地是不存在的或独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、 C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
本发明的优选方案，一种通式(IId)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IId-1)、(IId-2)、(IId-3)、(IId-4)、(IId-5)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R1独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基，R2和R3的定义如通式(I)中所述。
本发明的优选方案，通式(I)所述的化合物为：
或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐。
进一步，本发明提供一种通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐的制备方法，该方法包括：
通式(IA)化合物与(IB)化合物反应，得到通式(I)化合物，其中，A，B，C， D，E，X，R1、R2、R3的定义如通式(I)中所述。
进一步，本发明提供一种通式(IB)化合物的制备方法，该方法包括：
通式(IB-1)化合物与(IB-2)反应，得到通式(IB-3)化合物，与手性辅基反应生成(IB-4)化合物，经还原生成(IB-5)化合物，通过酸解，得到(IB)化合物，其中，E和X的定义如通式(I)中所述。
进一步，本发明提供一种通式(IA)化合物的制备方法，该方法包括：
化合物(Ia)通过酯化反应得到化合物(Ib)；化合物(Ib)通过金属化反应得到不同的有机金属化合物(Ic)；化合物(Ic)与化合物(Id)通过偶联反应得到化合物 (Ie)；化合物(Ie)通过水解得到化合物(IA)，其中，A、B、C、D、R1、R2、R3的定义如通式(I)中所述。
更进一步，本发明提供一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的通式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
本发明提供一种通式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其作为转染间重排(RET)激酶抑制剂用于癌症的治疗，其中所述的癌症优选为肺癌、甲状腺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌等。
本发明提供一种通式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备转染期间重排(RET) 激酶抑制剂中的用途。
本发明提供一种通式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，或其药物组合物在制备治疗由转染期间重排(RET)基因驱动的疾病的药物中的用途，其中所述的疾病优选为癌症等，其中所述的癌症优选为肺癌、甲状腺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌等。
本发明在说明书和权利要求书中所使用的部分术语定义如下：
“烷基”当作一基团或一基团的一部分时是指直链或者带有支链的脂肪烃基团。优选为C1-C20烷基，更优选为C1-C6烷基。烷基基团的实施例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正已基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2- 二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、 2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代或未取代的。
“环烷基”是指饱和或部分饱和的单环、稠环、桥环和螺环的碳环。优选为C3-C12环烷基，更优选为C3-C8环烷基，最优选为C3-C6环烷基。单环环烷基的实施例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等，优选为环丙基、环己基。
“烷氧基”是指(烷基-O-)的基团。其中，烷基见本文有关规定。C1-C6的烷氧基为优先选择。其实施例包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基等。
“酰基”是指(烷基-C(O)-)的基团，其中，烷基见本文有关规定。C1-C6的酰基为优先选择。其实施例包括但不限于甲酰基、乙酰基、丙酰基等。
“卤素”是指氟、氯、溴和碘。
“含卤烷基”是指含有卤素取代的烷基，其中卤素和烷基见本文有关规定。C1-C6的含卤烷基为优先选择。其实施例包括但不限于单氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基等。
具体实施方式
实施例给出了式(I)所表示的代表性化合物的制备及相关结构鉴定数据。必须说明，以下实施例式用于说明本发明而不是对本发明的限制。1H NMR图谱式用Bruker 仪器(400MHz)测定而得，化学位移用ppm表示，使用四甲基硅烷内标准(0.00ppm)。1H NMR的表示方法：s＝单峰，d＝双重峰，m＝多重峰，br＝变宽的，dd＝双重峰的双重峰，dt＝三重峰的双重峰。若提供耦合常数时，其单位为Hz。
实施例1
(S)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑
-3-基)氨基)嘧啶-2-基)噻吩-2-甲酰胺
第一步
2-氯-6-甲基-N-(5-甲基-1H-吡唑-3-基)嘧啶-4-胺
在100mL单口瓶中，加入化合物(1a)(9.72g,60mmol)、化合物(1b)(7.0g,72mmol)、DMSO 30mL和DIPEA(11.6g,72mmol)，于60℃反应24小时。TLC监测反应至原料消失，降低温度至室温，加入乙酸乙酯(200mL)，水洗(30mL×3)，饱和食盐水洗一次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂得棕黄色粘稠液体。加入 80mL二氯甲烷，静置3小时，析出白色固体(1c)9.9g，产率74％。
MS m/z(ESI):224.3[M+1]
第二步
5-溴-噻吩-2-羧酸甲酯
在250mL单口瓶中，加入5-溴-2-噻吩羧酸(1d)(4.1g,20mmol)和甲醇50mL，冷却至0℃，缓慢滴加二氯亚砜(11.2g,100mmol)，滴加完成后，升温至80℃反应过夜。TLC监测原料至少量，降温至室温，减压除去溶剂至少量，加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，乙酸乙酯(180mL)萃取，有机相水洗两次(25mL×2)，饱和食盐水洗一次(25mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，减压除去溶剂得淡黄色固体(1e)3.1 g，产率71％。
MS m/z(ESI):221.2[M+1]
第三步
5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)噻吩-2-羧酸甲酯
在100mL单口瓶中，加入化合物(1e)(3.4g,15.8mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2(1.29g,1.6mmol)、联硼酸频哪醇酯(6.1g,23.7mmol)、醋酸钾(4.6g,47.4mmol)和二氧六环40mL，抽换氮气三次，于90℃反应3小时。LC-MS监测反应至原料消失，降低温度至室温，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤，母液除去溶剂至少量，硅胶拌样，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(10:1)，快速硅胶柱层析分离产物，得白色固体(1f)4.72g，产率>100％，核磁和LC-MS鉴定混有少量联硼酸频哪醇酯。
MS m/z(ESI):187.3[硼酸]
第四步
5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)噻吩-2-羧酸甲酯
在50mL单口瓶中，加入化合物(1c)(670mg,3mmol)、化合物(1f)粗品(2.23 g,8.3mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2(730mg,0.9mmol)、一水合磷酸钾(1.6g,6mmol)、三环己基膦(500mg,1.8mmol)和二氧六环20mL、水2mL，抽换氮气三次，于80℃反应过夜。LC-MS监测反应至原料消失，降低温度至室温，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤，母液水洗(25mL×2)，饱和食盐水洗一次(25mL)，无水硫酸钠干燥，硅胶拌样，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(20:1)，快速硅胶柱层析分离产物，得淡黄色固体(1g)907mg，产率92％。
MS m/z(ESI):330.4[M+1]
第五步
5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)噻吩-2-甲酸锂
在100mL单口瓶中，加入化合物(1g)(658mg,2mmol)、一水合氢氧化锂(168 mg,4mmol)，和甲醇6mL，水6mL，于60℃反应3小时，TLC监测反应至原料消失，降低温度至室温，减压除去甲醇后，加入20mL水，用乙酸乙酯洗涤(5mL×2)，水相在真空下浓缩，得淡黄色粗品(1h)，直接用于下步合成。
MS m/z(ESI):316.4[M+1]
第六步
1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1基)吡啶-3-基)-1-乙酮
在100mL单口瓶中，加入5-乙酰基-2-溴吡啶(1i)(4.00g,20mmol)、4-氟吡唑 (1j)(2.06g,24mmol)和DMF 50mL，于110℃反应7小时，TLC检测反应至原料点消失，降低温度至室温后，倒入冰水中，析出黄色固体，大量水洗，过滤，干燥得淡黄色固体(1k)3.31g，产率81％。
MS m/z(ESI):206.4[M+1]
第七步
(S)-N-((S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺
在250mL三口瓶中，加入化合物(1k)(2.05g,10mmol)、叔丁基亚磺酰胺(1.46 g,12mmol)、钛酸四乙酯(4.58g,20mmol)，抽换氮气三次后，加入无水THF 50mL，抽换氮气三次，于75℃反应过夜。TLC监测反应至原料点消失，降低温度至室温，液氮乙醇浴降温至-78℃，滴加四仲丁基硼氢化锂30mL(1M in THF)，约1小时滴加完成。LC-MS检测至中间体完全消失，恢复室温，加入10mL甲醇淬灭反应，硅藻土过滤，乙酸乙酯(100mL)洗涤，减压除去溶剂至少量，加入20mL水，用乙酸乙酯萃取(60mL×2)，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，硅胶拌样，洗脱剂为二氯甲醇/甲醇(20:1)，快速硅胶柱层析分离，得白色固体(1l)2.51g，产率81％。 MS m/z(ESI):311.5[M+1]
第八步
(S)-1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)-1-乙胺盐酸盐
在100mL单口瓶中，称量化合物(1l)(1.15g,3.7mmol)，用5mL甲醇溶解，加入氯化氢的二氧六环溶液10mL(2.2M)，立即有白色固体析出，室温下继续反应2.5 小时，LC-MS监测反应至原料消失，加入大量乙醚析出更多白色固体，过滤，收集白色滤饼，真空干燥，得白色固体(1m)651mg，产率63％。
MS m/z(ESI):207.4[M+1]
第九步
(S)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑 -3-基)氨基)嘧啶-2-基)噻吩-2-甲酰胺
在50mL单口瓶中，称量化合物(1h)(90mg,0.3mmol)，加入2mL DMF，冷却至0℃，加入HATU(171mg,0.45mmol)，0℃搅拌半小时，加入化合物(1m)(109 mg,0.39mmol)以及DIPEA(155mg,1.2mmol)，恢复至室温，反应过夜。LC-MS 监测反应至原料消失，加入乙酸乙酯40mL，水洗三次(10mL×3)，饱和食盐水洗 (10mL)，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后，硅胶拌样，展开剂为二氯甲醇/甲醇 (12:1)，硅胶制备板分离产物，得化合物(1)30mg，收率20％。
MS m/z(ESI):504.7[M+1]
1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.99(s,1H),9.83(s,1H),9.02(d,J＝7.6Hz,1H),8.68(d,J＝4.3Hz,1H),8.49(s,1H),8.02(d,J＝8.5Hz,1H),7.88-7.92(m,3H),7.83(d,J＝3.7Hz,1H),6.86(br,1H),6.32(br,1H),5.21(q,J＝7.4Hz,1H),2.32(s,3H),2.25(s, 3H),1.56(d,J＝6.9Hz,3H)ppm.
实施例2
(S)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑 -3-基)氨基)嘧啶-2-基)呋喃-2-甲酰胺
第一步
5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)呋喃-2-羧酸甲酯
在100mL单口瓶中，称量化合物(2e)(2.05g,10.0mmol)、PdCl2(dppf)CH2Cl2(410mg,0.5mmol)、联硼酸频哪醇酯(3.1g,12.0mmol)以及醋酸钾(2.94g,30.0mmol)，加入二氧六环45mL，抽换氮气三次，于90℃反应5小时。LC-MS监测反应至原料消失，降低温度至室温，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯洗涤，母液除去溶剂至少量，硅胶拌样，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(10:1)，快速硅胶柱层析分离产物，得白色固体(2f)1.50g，产率60％，核磁和LC-MS鉴定混有少量联硼酸频哪醇酯。
MS m/z(ESI):171.3[硼酸]
第二步
5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)呋喃-2-羧酸甲酯
在50mL单口瓶中，称量化合物(1c)(672mg,3mmol)、化合物(2f)粗品(1.18 g,4.8mmol)，Pd2(dba)3(276mg,0.3mmol)、一水合磷酸钾(1.92g,9mmol)以及三环己基膦(168mg,0.6mmol)，加入二氧六环10mL，水1mL，抽换氮气三次，于 80℃反应12小时。LC-MS监测反应至原料消失，降低温度至室温，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(50mL)洗涤，母液水洗(10mL×2)，饱和食盐水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，硅胶拌样，洗脱剂为二氯甲烷/甲醇(35:1)，快速硅胶柱层析分离产物，得淡黄色固体(2g)540mg，产率58％。
MS m/z(ESI):314.1[M+1]
第三步
5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑-3-基)氨基)嘧啶-2-基)呋喃-2-甲酸锂
在100mL单口瓶中，加入化合物(2g)(300mg,1mmol)、一水合氢氧化锂(80 mg,2mmol)和甲醇2mL，水2mL，于60℃反应2小时，TLC监测反应至原料消失，降低温度至室温，减压除去溶剂至少量，加入少量甲苯继续除去少量水，真空干燥，得淡黄色粗品(2h)310mg，直接用于下步合成。
MS m/z(ESI):300.5[M+1]
第四步
(S)-N-(1-(6-(4-氟-1H-吡唑-1-基)吡啶-3-基)乙基)-5-(4-甲基-6-((5-甲基-1H-吡唑 -3-基)氨基)嘧啶-2-基)呋喃-2-甲酰胺
在50mL单口瓶中，加入化合物(2h)(183mg,0.6mmol)，化合物(1m)(200mg,0.72mmol)、4mL DMF和DIPEA(312mg,2.4mmol)，最后加入HATU(342mg,0.9 mmol)，室温反应过夜。LC-MS监测反应至原料消失，加入乙酸乙酯50mL，水洗 (10mL×2)，饱和食盐水洗(10mL)，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后，硅胶拌样，洗脱剂为二氯甲醇/甲醇(40:1)，快速硅胶柱层析分离产物，得化合物(2)230 mg，收率79％。
MS m/z(ESI):488.3[M+1]
生物学评价
测试例1、本发明化合物对RET酶活性测定
以下方法用于测定本发明优选化合物在体外条件下对重组人源RET蛋白的激酶活性的抑制程度。本方法使用Cisbio公司的 KinEASE-TK酪氨酸激酶试剂盒 (货号62TK0PEB)，通过测定生物素化的多肽底物磷酸化程度，以时间分辨-荧光能量共振转移方法(TR-FRET)进行测定。人源RET蛋白购买于Carna bioscience (日本，货号08-159-5g)。
详细方法参考试剂盒说明书，将实验流程简述如下：将本发明中的化合物先溶解于DMSO中，终浓度为10mM。接着以试剂盒中提供的缓冲液进行梯度稀释，使受试化合物在反应体系中的终浓度范围为16000nM～0.008nM,DMSO的终浓度为 0.1％。
测试的三磷酸腺苷(ATP)浓度为预先测定的对应ATP Km值的5倍(15μM)。化合物首先和一定量的RET蛋白在室温下孵育15分钟，随后向反应液中加入ATP 和生物素化的多肽底物启动磷酸化反应。并在37℃下孵育半小时。随后向反应中加入偶联有铕系元素化合物的抗磷酸化酪氨酸抗体和偶联有修饰化的别藻蓝蛋白 XL665的链霉亲和素，并在室温下继续孵育1小时。孵育结束后，在酶标仪以 TF-FRET模式上测定各孔在激发波长为304nM，读取各孔在发射波长为615nM和 665nM下的荧光强度，自动算出比值。通过与对照组荧光强度比值进行对比，计算化合物在各浓度下的抑制率，进而通过GraphPad Prism5以对数浓度-抑制率进行曲线拟合，计算化合物的IC50值，见下表1。
选用对照激酶为KDR(一种受体酪氨酸激酶)，以试剂盒中提供的缓冲液进行梯度稀释，使受试化合物在反应体系中的终浓度范围为400000nM～87nM，稀释倍数为2.5倍，其余反应条件同上，DMSO的终浓度为0.1％。
表1本发明优选化合物对RET激酶活性抑制的IC50数据及选择性抑制数据
化合物 RET IC<sub>50</sub> KDR IC<sub>50</sub> KDR/RET ratio
对照化合物BLU-30 19.2 1969 98
化合物1 10.8 2553 236
备注：对照化合物BLU-30的结构式如下式所示：
从表1可以看出，本发明的优选化合物对RET蛋白具有良好的抑制作用，并且对于KDR激酶组有着优秀的选择性。其RET体外酶活性IC50为10.8nM，KDR选择性KDR/RET ratio为236倍，相比较于Blueprint公司的化合物BLU-30 (WO2016127074)有着更优的体外酶活性和激酶选择性。本发明的化合物有望用于转染期间重排(RET)基因异常驱动的癌症疾病治疗。

Claims (12)

1.一种通式(I)所示的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中：
A、B和C独立地选自C、N、O或S，使得含有A、B和C的环是五元芳族杂环；
D选自氧原子或NH；
E选自卤素；
X选自氢原子、C1-C6烷基或C3-C6环烷基；当X为氢原子时，该处不含有手性中心；
R1、R2、R3独立地是不存在的或独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中E为氟原子，X为甲基，D为NH。
3.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中：
B和C独立地选自C、N、O或S，使得含有B和C的环是五元芳族杂环；
D、E、X、R1、R2、R3的定义如权利要求1中所述。
4.根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIa-1)、(IIa-2)、(IIa-3)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R2和R3独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
5.根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIb-1)、(IIb-2)、(IIb-3)、(IIb-4)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R2和R3独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
6.根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IIc-1)、(IIc-2)、(IIc-3)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R1、R2和R3独立地是不存在的或独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基。
7.根据权利要求3所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其为通式(IId-1)、(IId-2)、(IId-3)、(IId-4)、(IId-5)所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐：
其中，R1独立地选自氢原子、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6酰基、C3-C6环烷基或C1-C6含卤烷基，R2和R3的定义如权利要求1中所述。
8.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，其中所述的化合物选自：
或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐。
9.一种根据权利要求1所述的通式(I)化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐的制备方法，该方法包括：
通式(IA)化合物与(IB)化合物反应，得到通式(I)化合物，其中，A，B，C，D，E，X，R1、R2、R3的定义如权利要求1中所述。
10.一种药物组合物，所述的药物组合物含有有效剂量的根据权利要求1～8中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，及可药用的载体、赋形剂或它们的组合。
11.根据权利要求1～8中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，或根据权利要求10所述的药物组合物在制备转染期间重排(RET)激酶抑制剂中的用途。
12.根据权利要求1～8中任一项所述的化合物或其立体异构体、互变异构体或其药学上可接受的盐，或根据权利要求10所述的药物组合物在制备治疗由转染期间重排(RET)基因驱动的疾病的药物中的用途，其中所述的疾病优选为癌症，其中所述的癌症优选为肺癌、甲状腺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌。
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