CN110283812B - 金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的制备方法 - Google Patents

金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于环境保护领域，涉及一种金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的制备方法。本发明所述的制备方法包括如下步骤：(1)合成金属有机骨架材料MOF；(2)将定量的聚乙烯醇加入到纯水溶液中，加热搅拌使PVA完全溶解，得到PVA溶液；(3)将漆酶加入到水中，混匀后加入PVA溶液和金属有机骨架材料，将混合物涡旋混匀后，超声除去气泡；(4)取混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布在整个玻璃片上；(5)将滴完的玻璃片放入‑20℃冰箱中冷冻，取出复合材料重复冷冻‑解冻循环，最后得到MOFs/PVA冻凝胶固定化酶。以染料茜素绿为目标污染物，本发明制备的MOFs/PVA冻凝胶固定化漆酶对水中茜素绿的去除率明显提高。

Description

金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的制备方法
技术领域：
本发明属于环境保护领域，涉及一种金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的制备方法。
背景技术：
漆酶(双氧氧化还原酶)属于蓝铜氧化酶家族，最早由十九世纪末日本学者Yoshida从漆树中发现并分离所得。漆酶在自然界中分布广泛，在原核生物、真菌、昆虫和高等植物中都有发现，但其结构、性质和含量却有较大区别。漆酶可催化降解多种底物，如某些芳香族化合物(如酚类、芳香胺类、硫酚等)、染料、农药、药物和个人护理产品(PPCPs)等。因此，漆酶是环保领域的研究热点之一。
漆酶具有很好的生物技术潜力，它能够氧化多种底物，因而适合用于染料脱色或降解废水中多种有机污染物。然而，受漆酶价格较高、游离酶环境稳定性差及回收困难等因素的影响，游离漆酶难以在废水处理中大规模应用。漆酶的固定化可以提高酶的热稳定性及其对极端pH条件和化学试剂的耐受性，并且固定化的漆酶可以通过简单的机械操作与反应产物分离，使漆酶可以循环使用，从而大幅降低应用成本。包埋法是指酶在多孔固体基质中的物理保留的方法，多孔基质有聚乙烯醇、壳聚糖、海藻酸钠和聚丙烯酰胺等。该法的优点是酶自身结构的改变小、固定化效率高和反应条件温和，酶不易失活，但其缺点在于传质阻碍较高。在包埋法中，常用的包埋剂主要是有机材料(包括生物聚合物和合成聚合物)。但是包埋法制备的固定化漆酶，其比表面积较小，传质能力受到一定限制，使其去除污染物过程耗时较长。因此，如何增大其比表面积，增强传质能力是提高固定化漆酶去除污染物能力的重要思路。
金属有机骨架材料(MOFs)是由金属离子和多官能团有机配体组装而成的晶体材料。MOFs兼具无机材料刚性和有机材料柔韧性的特征，具有高比表面积、高孔隙率、高吸附容量和良好的热稳定性等特点，这些特点有利于增强酶的负载能力，提高固定化酶的稳定性并降低传质阻力。
发明内容：
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种金属有机骨架材料-MOF复合冻凝胶来固定漆酶的制备方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
(1)合成金属有机骨架材料(Metal-Organic Frameworks，MOFs)。
(2)将定量的聚乙烯醇(PVA)加入到纯水溶液中，在90-95℃条件下加热搅拌使PVA完全溶解，得到最终浓度为120mg/mL的PVA溶液。
(3)将8mg漆酶(Lac)加入到2mL水中，混匀后加入2mL PVA溶液和240mg金属有机骨架材料。将混合物涡旋混匀后，超声10s除去气泡。
(4)用移液枪取200μL混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布在整个玻璃片上。
(5)将滴完的玻璃片放入-20℃冰箱中冷冻12h以上。取出复合材料解冻后继续冷冻1h，然后解冻再冷冻1h。总共重复冷冻-解冻循环，最后得到MOFs/PVA冻凝胶固定化酶。
所述的制备方法中，
步骤(1)中金属有机骨架材料MOF选自：ZIF-67、HKUST-1、MIL-53(Al)、MIL-68(Al)、MIL-100(Fe)、MIL-101(Cr)、MIL-101(Fe)，优选为：MIL-53(Al)、MIL-68(Al)、MIL-100(Fe)、MIL-101(Cr)；更优选为：MIL-68(Al)。
步骤(2)中所述的温度为90-95℃。
步骤(3)中所用的金属有机骨架材料具有较大的比表面积，可以有效提高载体(冻凝胶)的比表面积。
步骤(3)中的涡旋是保证三者之间混合均匀，超声是有效去除涡旋过程中产生的微小气泡同时进一步混匀三者。
步骤(4)中是将混合溶液滴于载体(如玻片上)，以制成片状或者膜状。
步骤(5)中冷冻温度是不高于-20℃。
步骤(5)中初次冷冻时间为12小时，其余冷冻时间为1小时,。
步骤(5)中冷冻-解冻循环次数为3-6次。
本发明制备了一种新的聚乙烯醇包埋联合MOF吸附的复合材料。使用聚乙烯醇和MOFs混合材料固定漆酶，可以有效地减少漆酶渗漏，在缓冲体系中，短时间反应(5min)内基本检测不到漆酶渗漏，30天后漆酶渗漏率低于20％。通过冷冻方式将凝制成片状可以方便材料的回收。另外，冻凝胶制备过程可以产生大量孔隙，大幅提高材料的比表面积，提高传质能力。MOF的良好吸附性能可以与漆酶的降解能力形成协同作用，提高材料对水中污染物的去除，也能有效调节高浓度污染物对漆酶降解性能的冲击。本发明制备的MOFs/PVA冻凝胶固定化漆酶吸附降解水中有机物，实现了MOFs/PVA冻凝胶的生物再生。且以染料茜素绿为目标污染物，MOFs/PVA冻凝胶固定化漆酶对水中茜素绿的去除率明显提高。与其他固定化技术相比，冻凝胶包埋漆酶不需要复杂的操作技术与高昂的使用成本；与纯吸附法去除污染物相比，MOFs/PVA冻凝胶固定化漆酶具有更高的去除率和更多的循环次数；与酶促降解去除污染物相比，固定化漆酶具有更多的循环次数与环境稳定性。因此，从去除和分离效果上来说，固定化漆酶将吸附与酶促降解的协同效应用于废水深度处理是可行的。
附图说明
图1为本发明制备的金属有机骨架材料MIL-68(Al)/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶液氮冷冻脆断制取断面扫描电镜图；
图2为金属有机骨架材料MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶冷冻干燥后的氮气吸附-解吸等温线和孔径分布。
图3为MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶(简称MIL-68(Al)/PVA/Lac)、MIL-68(Al)/PVA冻凝胶(简称MIL-68(Al)/PVA)和漆酶粉末冷冻干燥后的热重分析。
图4为MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶和游离漆酶的pH稳定性和热稳定性。
(a)酶在25℃条件下的不同pH缓冲溶液中保存24h；(b)酶在50℃、pH为4.0的缓冲溶液中保持8h。
图5为MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的操作稳定性。
图6为不同pH条件下游离和固定化漆酶对茜素绿的去除效果。
图7为游离漆酶、固定化漆酶以及冻凝胶对茜素绿的去除动力学曲线。
图8为MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶重复使用性研究。
具体实施方式
实施例1金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的制备
(1)参照文献“Yang,Q.,Vaesen,S.,Vishnuvarthan,M.,Ragon,F.,Serre,C.,Vimont,A.,Daturi,M.,De Weireld,G.,and Maurin,G.(2012).Journal of MaterialsChemistry 22,10210.”，通过溶剂热法合成MIL-68(Al)。
(2)将定量的聚乙烯醇(PVA)加入到纯水溶液中，在90℃条件下加热搅拌使PVA完全溶解，得到最终浓度为120mg/mL的PVA溶液。
(3)将8mg漆酶(Lac)加入到2mL水中，混匀后加入2mL PVA溶液和240mg MIL-68(Al)粉末。将混合物涡旋混匀后，超声10s除去气泡。
(4)用移液枪取200μL混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布在整个玻璃片上。
(5)将滴完的玻璃片放入-20℃冰箱中冷冻12h以上。取出复合材料解冻后继续冷冻1h，然后解冻再冷冻1h。总共重复四次冷冻-解冻循环，最后得到MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶。
实施例2金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定漆酶的性能检测方法
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶表征
使用扫描电镜(SEM)观察MIL-68(Al)表面、MIL-68(Al)/PVA冻凝胶和MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的表面以及液氮冷冻脆断制取断面的形貌(图1)；MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的表面积和孔径分布通过77K条件下的氮气吸附-脱附来表征，结果如图2所示；MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶和漆酶粉末在N2保护下通过热重及同步热分析仪以10℃/min的升温速率测定其热性能的变化(图3)。
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的酶活测定：
取2mL pH为4的柠檬酸-磷酸加入到4mL EP管中，加入2片MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶，加入1mL ABTS(1mM)混匀，30℃条件下反应5min。用紫外分光光度计测定溶液在λ＝420nm处吸光度值变化。定义1min氧化1μmoL ABTS所需漆酶的量为一个酶活单位(U)。对于游离漆酶的测定方法与MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶类似，只需要将MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶换成游离酶。对于漆酶活力计算公式如下：
Figure GDA0003608447470000041
式中△A为420nm处吸光度变化值；
V为反应的总体积(mL)；
ε为摩尔消光系数(36000M-1cm-1)；
t为反应时间(min)；
M为漆酶质量(mg)。
MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的酶活回收率R的计算公式如下：
Figure GDA0003608447470000042
其中Ai为MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶酶活(U)；
Af为与MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶中含有漆酶量相同的游离漆酶酶活(U)。
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶pH稳定性和热稳定性研究测定：
将游离漆酶与固定化材料分别在25℃、pH为2.2-8.0的柠檬酸-磷酸缓冲溶液中保持24h，然后按照酶活测定的方法测定酶活。
相对酶活(％)＝(不同条件下24h后的酶活/初始阶段酶活)×100％
分别将游离酶和MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶分散于50℃条件下的最适pH的缓冲溶液中，每1h取样测定酶活，分别研究游离酶和MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的热稳定性。所有样品一式三份，取平均值。
图4显示了在不同pH值缓冲溶液中保持24h后的MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶和游离酶的相对活性。游离漆酶在pH为5.0时酶活最大，且当pH低于4.0时游离酶pH稳定性下降迅速，仅在pH为4.0-5.0之间保持相对酶活的50％以上。固定化漆酶在pH为2.2-5.0范围内均保留79％以上的初始酶活，特别是在pH为3.0和4.0条件下，24h后酶活仍保持为100％。可见，固定化后的漆酶在酸性条件下稳定性有显著提高，漆酶的固定化改善了其pH稳定性并增强了其对环境的适应能力。
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶操作稳定性的研究
将MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶，加入2mL pH为3的柠檬酸-磷酸缓冲液，再加入1mL浓度为lmmol/L的ABTS溶液计时反应5min，时间到后将MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶取出终止反应，反应后的溶液在波长为420nm处测定吸光度值并计算酶活。每次反应结束后，用pH为4的柠檬酸-磷酸缓冲液简单清洗两遍MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶表面重复上述过程，测量计算重复使用后的相对酶活。
以ABTS为底物，使用MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶进行10个反应循环，其操作稳定性结果如图5所示。在前3个循环中，固定化漆酶保留了100％的初始酶活。随后的7次循环中酶活开始逐渐降低，至最后一次循环时，仍保留了58％以上的初始酶活。本研究所得固定化漆酶体现出了良好的操作稳定性。此外，相对于传统的、高成本和费力的过滤和离心技术，冻凝胶所具有的良好机械和沉淀性能，加速了重复使用过程中的分离，减少了再生使用成本，进一步证明了MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的应用潜力。
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶在不同pH下对茜素绿去除效果的影响
将10mL最适浓度且pH为3.0-8.0的茜素绿溶液于50mL离心管中，再加入2片MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶或MIL-68(Al)/PVA冻凝胶或与MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶包埋漆酶量相等的漆酶粉末。在30℃条件下，150rpm振荡反应24h，然后在波长为640nm条件下测定溶液吸光度At。计算MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶、MIL-68(Al)/PVA冻凝胶以及游离酶对不同浓度茜素绿的去除率。去除率公式如下：
Figure GDA0003608447470000051
A0：初始茜素绿溶液吸光度。
图6表明，在pH为3和4时，固定化漆酶对茜素绿溶液去除率高于93％。在中性环境中，游离酶的对茜素绿的去除率接近0，而固定化漆酶由于MIL-68(Al)良好的吸附性能，仍能去除60％的茜素绿。可见，MIL-68(Al)的吸附与漆酶的酶促降解协同效应，可以有效缓解因反应体系pH不适宜而产生的污染物去除率降低的趋势，因此MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶具有实际应用潜力。
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶去除茜素绿的平衡时间研究
在最适浓度和最适pH条件下，每隔一定时间测定反应体系中的溶液吸光度，绘制反应体系中茜素绿去除率的动力学曲线。
吸附-降解反应的持续时间是影响固定化酶对水中污染物去除性能的重要指标。MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶、MIL-68(Al)/PVA冻凝胶和游离酶去除茜素绿(10mL20mg/L)的动力学曲线如图7所示。在12h达到去除平衡后，固定化漆酶、MIL-68(Al)/PVA冻凝胶和游离酶对茜素绿的去除率分别为95.86％、65.32％和83.11％。
关于MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶多次去除茜素绿研究
在最适浓度和最适pH条件下进行脱色反应，反应12h后取出MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶，不做任何处理，直接将MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶加入新的反应体系中进行脱色反应。以上步骤重复进行多次且一式三份。
MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶可以容易地从反应体系中分离而重复使用。固定化漆酶重复使用6次后仍保持68％以上的去除率(图8)。
实施例3：
参考实施例1和2，制备不同的金属有机骨架材料来制备MOF/PVA冻凝胶固定化酶，并相对酶活、pH稳定性、茜素绿去除率的研究比较，其结果如表1所示：
表1多种MOF基冻凝胶固定化漆酶效果比较
MOF基冻凝胶 相对酶活 pH稳定性 茜素绿去除率
PVA/Lac 28.43％ - 92.57％
ZIF-67/PVA/Lac 22.55％ 不稳定 13.31％
HKUST-1/PVA/Lac 29.41％ 不稳定 42.41％
MIL-53(Al)/PVA/Lac 27.45％ 稳定 64.40％
MIL-68(Al)/PVA/Lac 39.22％ 稳定 95.86％
MIL-100(Fe)/PVA/Lac 30.39％ 稳定 90.40％
MIL-101(Cr)/PVA/Lac 22.55％ 稳定 95.05％
MIL-101(Fe)/PVA/Lac - 不稳定 16.72％
结果表明：MIL-68(A1)/PVA冻凝胶固定化漆酶的相对酶活(游离酶酶活为100％)为39.22％，是上述冻凝胶固定化漆酶中酶活最高的，高于大部分包埋法的酶活回收率(通常低于20％)。冻凝胶固定化漆酶对于有机污染物的去除能力是评价该材料实际应用的关键，其中PVA/Lac、MIL-68(Al)/PVA/Lac、MIL-100(Fe)/PVA/Lac以及MIL-101(Cr)/PVA/Lac冻凝胶固定化漆酶对茜素绿的去除率均高于90％。MIL-68(Al)/PVA/Lac、MIL-100(Fe)/PVA/Lac以及MIL-101(Cr)/PVA/Lac在pH＝3时稳定性较好。因此，本发明优选的金属有机骨架材料MOF为MIL-68(Al)/PVA/Lac、MIL-100(Fe)/PVA/Lac以及MIL-101(Cr)/PVA/Lac，更优选的是MIL-68(Al)/PVA/Lac。
实施例4
参考实施例1，改变聚乙烯醇的用量，其它条件不变，制备MIL-68(A1)/PVA冻凝胶固定化漆酶，所制备的产品性能如表2所示：
冻凝胶中聚乙烯醇浓室(mg/<u>mL</u>) 机械强度<sup>*</sup>
20 差
40 一般
60 好
*其中机械强度测定方法是将酶活测定过程中的材料取出，放入含有适量水的小烧杯中，磁力搅拌(1000rpm)搅拌30min，看其破碎程度。(差：有大量碎屑；一般：有少量碎屑；好：没有碎屑)
结果表明：在最终体积为0.2mL的冻凝胶固定化酶中，聚乙烯醇浓度为60mg/mL(即12mg PVA)是，冻凝胶固定化酶的机械强度较好。
实施例5：
参考实施例1，改变MIL-68(Al)、聚乙烯醇(PVA)和Lac的比例，其它条件不变，制备的产品(体积为200μL)性能如表3所示：
表3MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶优化正交表
Figure GDA0003608447470000071
注：其中机械强度测定方法是将酶活测定过程中的材料取出，放入含有适量水的小烧杯中，磁力搅拌(1000rpm)搅拌30min，看其破碎程度。(差：有大量碎屑；一般：有少量碎屑；好：没有碎屑)
结果表明：
综合上述不同比例材料的酶活回收率和机械强度等因素，其优化的复合材料制备步骤为：将定量的PVA加入到纯水溶液中，在90℃条件下加热搅拌使PVA完全溶解，得到最终浓度为120mg/mL的PVA溶液。将8mg Lac加入到2mL纯水中，混匀后加入2mL PVA溶液和240mgMIL-68(Al)粉末。将混合物涡旋混匀后，超声10s除去气泡。用移液枪取200μL混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布于整个玻璃片上。将滴完的玻璃片放入-20℃冰箱中冷冻12h以上。取出复合材料解冻后继续冷冻1h，然后解冻再冷冻1h。总共重复四次冷冻-解冻循环，最后得到MIL-68(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶。
实施例6：
(1)分别称取3.25g Al(NO3)3·9H2O和1.44g H2BDC，置于100mL微波反应罐中，加入25mL水后，磁力搅拌10min，使反应物混合均匀。将反应罐置于微波反应器中，在300W、210℃条件下，反应90min。反应结束后，自然冷却至室温，取出内容物，4000rpm离心5min，弃去上清液，产物依次用DMF、无水乙醇、水超声洗涤，得到白色粉末。
(2)将定量的聚乙烯醇(PVA)加入到纯水溶液中，在90℃条件下加热搅拌使PVA完全溶解，得到最终浓度为120mg/mL的PVA溶液。
(3)将8mg漆酶(Lac)加入到2mL水溶液中，混匀后加入2mL PVA溶液和240mg MIL-53(Al)粉末。将混合物涡旋混匀后，超声10s除去气泡。
(4)用移液枪取200μL混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布在整个玻璃片上。
(5)将滴完的玻璃片放入-20℃冰箱中冷冻12h以上。取出复合材料解冻后继续冷冻1h，然后解冻再冷冻1h。总共重复四次冷冻-解冻循环，最后得到MIL-53(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶。
性能：MIL-53(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶的酶活回收率为27.45％，在酸性条件下稳定存在，质量为24.4mg的MIL-53(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶对于20mL,20mg/L的茜素绿溶液去除率为64.40％。
实施例7：
(1)参照文献“Férey,G.,Mellot-Draznieks,C.,Serre,C.,Millange,F.,Dutour,J.,Surble,S.,and Margiolaki,I.(2005).SCIENCE 309,2040-2042.”，水热合成MIL-101(Cr)。分别称取4g Cr(NO3)3·9H2O和1.66g对苯二甲酸于聚四氟乙烯内胆中，加入425μL质量分数为40％的氢氟酸和48mL纯水，磁力搅拌15min后超声0.5h混匀。随后水封内胆，加盖放入不锈钢反应釜内密封，移入烘箱，在210℃下反应8h。冷却至室温，取出内胆，开盖将其中绿色液体及结晶用少量DMF洗入塑料离心管中离心并去除上层溶液后继续向离心管中加入适量DMF，稍做搅拌后超声30min并离心去除上层溶液，重复三次。将上述操作中DMF换为无水乙醇继续进行三次清洗后将离心管中固体移入蒸发皿中放置烘箱，80℃烘干待用。
(2)将定量的聚乙烯醇(PVA)加入到纯水溶液中，在90℃条件下加热搅拌使PVA完全溶解，得到最终浓度为120mg/mL的PVA溶液。
(3)将8mg漆酶(Lac)加入到2mL水溶液中，混匀后加入2mL PVA溶液和240mg MIL-101(Cr)粉末。将混合物涡旋混匀后，超声10s除去气泡。
(4)用移液枪取200μL混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布在整个玻璃片上。
(5)将滴完的玻璃片放入-20℃冰箱中冷冻12h以上。取出复合材料解冻后继续冷冻1h，然后解冻再冷冻1h。总共重复四次冷冻-解冻循环，最后得到MIL-101(Cr)/PVA冻凝胶固定化漆酶。
性能：MIL-101(Cr)/PVA冻凝胶固定化漆酶的酶活回收率为22.55％，在酸性条件下稳定存在，质量为24.4mg的MIL-53(Al)/PVA冻凝胶固定化漆酶对于20mL,20mg/L的茜素绿溶液去除率为95.05％。

Claims (8)

1.金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶的制备方法包括以下步骤：
(1)合成金属有机骨架材料MOF，所述的金属有机骨架材料MOF选自MIL-53(Al)、MIL-68(Al)、MIL-100(Fe)、MIL-101(Cr)；
(2)将定量的聚乙烯醇PVA加入到纯水溶液中，加热搅拌使PVA完全溶解，得到PVA溶液；
(3)将漆酶加入到水中，混匀后加入PVA溶液和金属有机骨架材料，将混合物涡旋混匀后，超声除去气泡；
(4)取混合溶液滴在1×2cm玻片上，将溶液涂布在整个玻璃片上；
(5)将滴完的玻璃片放入-20℃冰箱中冷冻，取出复合材料重复冷冻-解冻循环，最后得到MOFs/PVA冻凝胶固定化酶。
2.根据权利要求1所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，步骤(2)中所述加热的温度为90-95℃。
3.根据权利要求1所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，步骤(3)中的涡旋是保证三者之间混合均匀，超声是有效去除涡旋过程中产生的微小气泡同时进一步混匀三者。
4.根据权利要求1所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，步骤(4)中是将混合溶液滴于玻片上，以制成片状或者膜状。
5.根据权利要求1所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，步骤(5)中冷冻温度是不高于-20℃。
6.根据权利要求1所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，步骤(5)中初次冷冻时间为12小时，其余冷冻时间为1小时。
7.根据权利要求1所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶，其特征在于，步骤(5)中冷冻-解冻循环次数为3-6次。
8.权利要求1-7中任一项权利要求所述的金属有机骨架材料/聚乙烯醇冻凝胶固定化漆酶在吸附降解水中有机物中的应用。
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