CN110279730B - 一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的应用 - Google Patents

一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的应用，属于制药技术领域。本发明提供的冰川茶藨子提取物为冰川茶藨子果实经过醇或水超声提取得到。所述冰川茶藨子提取物可显著降低糖尿病小鼠餐后血糖含量，主要通过抑制α‑淀粉酶，蔗糖酶和麦芽糖酶活性降低餐后血糖，因此，冰川茶藨子提取物能够用于制备糖苷酶抑制剂或制备降低餐后血糖药物。

Description

一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的 应用
技术领域
本发明属于制药技术领域，具体涉及一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的应用。
背景技术
糖尿病(diabetes mellitus，DM)是由遗传和环境因素相互作用而引起的以持续高血糖为特征的慢性代谢性疾病，已成为影响全球居民健康的主要慢性非传染性疾病之一。持续高血糖是糖尿病的主要表型并随时间的推移导致严重的糖尿病并发症，包括冠状动脉疾病，中风，外周动脉疾病，视网膜病变，肾病和神经病变。现代药理研究表明，几乎所有Ⅱ型糖尿病都要经过葡萄糖耐量缺损(impaired glucose tolerance，IGT)阶段，IGT的主要临床特征表现为餐后高血糖。研究认为餐后高血糖是引起糖尿病人大血管并发症和微血管并发症的重要因素，而这些并发症是引起糖尿病死亡率增大的一个主要原因。利用α-葡萄糖苷酶抑制剂抑制人淀粉酶以及人小肠α-葡萄糖苷酶的活性，将餐后血糖(postprandialblood glucose，PBG)水平保持接近正常范围，是控制血糖波动，治疗和预防糖尿病及其并发症的重要方法。
目前，国内DM药物市场中应用的α-葡萄糖苷酶抑制剂主要有阿卡波糖(acarbose)、伏格列波糖(voglibose)和米格列醇(miglitol)，它们都能够通过抑制体内糖苷酶的活性，减少淀粉和寡糖的降解，减少葡萄糖的产生以及延缓葡萄糖的吸收入血来实现其降低餐后高血糖的药效活性。阿卡波糖主要通过抑制淀粉酶及蔗糖酶的活性，抑制淀粉和蔗糖的分解起到降糖作用的。米格列醇和伏格列波糖主要是通过抑制蔗糖酶及麦芽糖苷酶的活性，减少蔗糖和麦芽糖的进一步的水解来起到降糖作用。但是它们的价格较贵，对于多数长期服药的糖尿病患者，经济压力较大，并且有腹泻，腹部绞痛，胀气和呕吐等副作用。因此，从天然植物资源中，寻找和发现具有抑制α-葡糖苷酶的天然成分及其潜在的成药化合物，并开发成安全、高效的降血糖天然药物具有重要学术价值和社会意义。
冰川茶藨子(Ribesglaciale Wall.)为虎耳草科(Saxifragaceae)茶藨子属植物(Ribes)，落叶灌木，花期4～6月，果期7～9月。分布于中国陕西省、甘肃省、河南省、湖北省、四川省、贵州省、云南省、西藏等。生于山坡或山谷丛林及林缘或岩石上，海拔900～3000米。缅甸北部、不丹至克什米尔地区也有分布。冰川茶藨子果味酸，可供食用，也可医用，常用于烧、烫伤，漆疮，胃痛。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种具有新药效的冰川茶藨子提取物及冰川茶藨子提取物在制备降低餐后血糖药物中的应用。
本发明提供了一种冰川茶藨子提取物，包括以下步骤制备得到：
将冰川茶藨子果实经烘干粉碎，与体积浓度95％乙醇水溶液或水混合，超声提取，固液分离，收集提取液得到冰川茶藨子提取物；
所述冰川茶藨子果实的质量与体积浓度95％乙醇水溶液或水的体积比为1g:4～6ml。
优选的，所述超声提取的温度40～60℃，所述超声提取的时间为2～3h。
优选的，所述超声提取的频率为20kHz；所述超声提取的次数为2～4次。
本发明提供了一种糖苷酶抑制剂，包括所述冰川茶藨子提取物。
本发明提供了所述的冰川茶藨子提取物在制备降低餐后血糖药物中的应用。
本发明提供了所述的冰川茶藨子提取物在制备抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的药物中的应用。
优选的，所述药物的剂型包括软胶囊。
优选的，所述软胶囊包括以下重量份的组分：冰川茶藨子提取物75～85份，DHA5～10份和维生素E10～15份。
优选的，所述软胶囊包括以下重量份的组分：冰川茶藨子提取物80份，DHA 8份和维生素E12份。
本发明提供了一种冰川茶藨子提取物，以体积浓度95％乙醇水溶液或水为提取溶剂经超声处理得到的提取液为冰川茶藨子提取物。实验证明，本发明提供的所述冰川茶藨子提取物可显著降低糖尿病小鼠餐后血糖；分子机制实验证实：冰川茶藨子醇提取物在浓度5mg/mL条件下对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率分别为97.1％和92.1％，这表明冰川茶藨子提取物具有抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的作用。因此，本发明所述冰川茶藨子提取物作为降低餐后血糖活性成分，具有良好的降血糖的作用，并且其功效显著、作用机理清楚、靶点明确，符合药物制剂开发的要求。同时本发明提供的冰川茶藨子提取物是一种纯天然的、植物源的可显著降低餐后血糖的活性成分，具有绿色安全的特点。
附图说明
图1为本发明冰川茶藨子提取物和阿卡波糖降低餐后血糖效果图，其中图1-A为阿卡波糖、冰川茶藨子醇提取物和冰川茶藨子水提取物对正常小鼠体内降血糖作用；图1-B为阿卡波糖、冰川茶藨子醇提取物和冰川茶藨子水提取物对糖尿病小鼠体内降血糖作用；
图2为本发明不同浓度下阿卡波糖和冰川茶藨子提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值，其中图2-A为阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值；图2-B为冰川茶藨子醇提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值；图2-C为冰川茶藨子水提取物对α-葡萄糖苷酶抑制活性IC50值；
图3为本发明不同浓度下阿卡波糖和冰川茶藨子提取物α-淀粉酶抑制活性IC50值，其中图3-A为阿卡波糖对α-淀粉酶抑制活性IC50值；图3-B为冰川茶藨子醇提取物对α-淀粉酶抑制活性IC50值；图3-C为冰川茶藨子水提取物对α-淀粉酶抑制活性IC50值。
具体实施方式
本发明提供了一种冰川茶藨子提取物，包括以下步骤制备得到：
将冰川茶藨子果实经烘干粉碎，与体积浓度95％乙醇水溶液或水混合，超声提取，固液分离，收集提取液得到冰川茶藨子提取物；所述冰川茶藨子果实的质量与体积浓度95％乙醇水溶液或水的体积比为1g:4～6ml。
在本发明中，所述冰川茶藨子果实优选包括鲜果和干果。所述干果为鲜果自然晾干得到。所述烘干的温度优选为40～50℃，更优选为45℃。所述粉碎后优选包括将冰川茶藨子果实粉过筛。所述过筛的孔径没有限制，采用本领域所熟知的植物粉过筛孔径即可。所述冰川茶藨子果实的质量与体积浓度95％乙醇水溶液或水的体积比优选为1g:5ml。
在本发明中，所述超声提取的温度优选为40～60℃，更优选为50℃。所述超声提取的时间优选为2～3h，更优选为2.5h。所述超声提取的频率优选为20kHz；所述超声提取的次数优选为2～4次，更优选为3次。
本发明提供了一种糖苷酶抑制剂，包括所述冰川茶藨子提取物。所述的冰川茶藨子提取物降低餐后血糖活性是通过抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性发挥作用的。本发明提供了所述的冰川茶藨子提取物在制备降低餐后血糖药物或制备抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的药物中的应用。
在本发明中，所述药物的剂型优选包括软胶囊。所述软胶囊优选包括以下重量份的组分：冰川茶藨子提取物75～85份，DHA 5～10份和维生素E10～15份；更优选包括以下重量份的组分：冰川茶藨子提取物80份，DHA 8份和维生素E12份。
所述软胶囊的制备方法优选包括以下步骤：将冰川茶藨子提取物、DHA和维生素E混合均匀制成软胶囊内容物料，然后将软胶囊内容物料和软胶囊壳料在压制设备上进行压囊处理制成冰川茶藨子提取物软胶囊。
在本发明中，所述软胶囊优选口服用药，1天三次，吃饭时服用，剂量是800mg/次。
下面结合实施例对本发明提供的一种冰川茶藨子提取物及其在制备降低餐后血糖药物中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
本发明所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，同时所用材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实验仪器：H1850R低温离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司)，Epoch2酶标仪(BioTek公司)，BE9010恒温振荡器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司)，CTXNW-100B循环超声提取机(北京弘祥隆生物技术开发有限公司)，N-1210BV-WB旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，天平(奥豪斯仪器有限公司)，FDU-1100冷冻干燥机(埃朗科技国际(上海)有限公司)，PTA-125纯水仪(成都沛斯特科技有限公司)。
实验材料与药品：
动物：KM小鼠。试剂：麦芽糖、蔗糖和阿卡波糖，Solaibio公司；α-葡萄糖苷酶(来源于酵母菌)和猪胰腺α-淀粉酶，爱尔兰Megazyme公司，葡萄糖，上海麦克林生化科技有限公司，p-NPG(4-Nitrophenyl glucopyranoside，纯度>98％)，美国Sigma公司；淀粉，广州天骏生物科技有限公司。
实施例1
将干燥后的冰川茶藨子果实粉碎称重，然后用体积浓度95％乙醇水溶液超声提取，料液比为1:5(g：ml)，超声提取温度40℃，提取时间3h，提取次数4次，超声频率20kHz。超声提取结束后，进行固液分离，收集上清液，得到冰川茶藨子醇提取物。
实施例2
将干燥后的冰川茶藨子果实粉碎称重，然后用水超声提取，料液比为1:6(g：ml)，超声提取温度60℃，提取时间2h，提取次数2次，超声频率20kHz。超声提取结束后，进行固液分离，收集上清液，得到冰川茶藨子醇提取物。
实施例3～4
冰川茶藨子提取物降低糖尿病小鼠PGB药效研究
①糖尿病小鼠造模方法：6周龄清洁级雄性昆明小鼠(体重18～22g)，动物饲养在可控制的环境中，温度22±2℃，每天光照和黑暗各12h，自由饮水和喂以商业饲料。适应一周后，通过静脉注射四氧嘧啶(60mg/kg体重)诱导糖尿病。72h小时后测定空腹血糖(FBG)水平。血糖水平在11.0mM(198mg/dL)和20.0mM(360mg/dL)之间的动物被认为是用于餐后血糖(PBG)评估的糖尿病小鼠。
②受试物干预动物实验及指标检测：将正常和糖尿病小鼠禁食过夜并随机分成4组，每组10只小鼠：第1组：2g/kg淀粉灌胃正常或糖尿病小鼠；第2组：冰川茶藨子醇提物(400mg/kg)加淀粉(2g/kg)灌胃正常或糖尿病小鼠；第3组：冰川茶藨子水提物(400mg/kg)加淀粉(2g/kg)灌胃正常或糖尿病小鼠；第4组：用阿卡波糖(4mg/kg)和淀粉(2g/kg)灌胃正常或糖尿病小鼠。在0，30，60和120min收集来自尾静脉的血液样品，并通过血糖仪(RocheDiagnostics GmbH，China)测定血糖浓度。
以阿卡波糖作为阳性对照，研究了冰川茶藨子两种提取物在正常小鼠体内降血糖作用。淀粉灌胃2g/kg之后0，30，60，90和120min检测血糖水平(图1-A)。对照组的血糖水平在30min达到峰值然后下降。与对照组相比，400mg/kg冰川茶藨子醇或水提物和4mg/kg阿卡波糖组小鼠的血糖水平降低，但三组间差异不显著。
在四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠中进行餐后降血糖实验。与对照组相比，400mg/kg冰川茶藨子醇或水提物和4mg/kg阿卡波糖组小鼠的餐后血糖水平显著降低(p<0.001)(图1-B)。结果有力地证实了冰川茶藨子提取物具有降低小鼠餐后血糖水平能力。
实施例5～6
冰川茶藨子提取物α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶抑制活性研究
以阿卡波糖作为阳性对照，分别研究了冰川茶藨子醇提取物和水提取物对α-葡萄糖苷酶(来源于酵母菌)，蔗糖酶(来源于大鼠小肠)，麦芽糖酶(来源于大鼠小肠)和α-淀粉酶(来源于猪胰)的抑制活性。冰川茶藨子醇提取物在浓度5mg/mL下对α-葡萄糖苷酶(来源于酵母菌)，α-淀粉酶(来源于猪胰)，蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制率分别为97.1％，92.1％，14.8％和0％。冰川茶藨子水提取物在浓度5mg/mL下对α-葡萄糖苷酶(来源于酵母菌)，α-淀粉酶(来源于猪胰)，蔗糖酶和麦芽糖酶的抑制率分别为94.9％，93.6％，57.5％和33.1％。由以上结果可知冰川茶藨子醇或水提取物均具有很强的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶抑制活性。此外，冰川茶藨子水提取物还具有一定的蔗糖酶和麦芽糖酶抑制活性，结果见表1和图2～图3。
表1冰川茶藨子提取物(mg/mL)对多种来源α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性
Figure BDA0002139857740000061
可以看出，冰川茶藨子提取物可显著降低糖尿病小鼠餐后血糖。并且分子机制实验证实冰川茶藨子提取物通过抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性降低餐后血糖。
实施例7
冰川茶藨子提取物制备降低餐后血糖药物中的应用
软胶囊的制备方法如下：
将冰川茶藨子提取物80g，DHA 8g和维生素E12g混合均匀制成软胶囊内容物料，然后将软胶囊内容物料和软胶囊壳料在压制设备上进行压囊处理制成冰川茶藨子提取物软胶囊。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种用于降低餐后血糖的冰川茶藨子提取物，其特征在于，包括以下步骤制备得到：
将冰川茶藨子果实经烘干粉碎，与体积浓度95％乙醇水溶液或水混合，超声提取，固液分离，收集提取液得到冰川茶藨子提取物；
所述冰川茶藨子果实的质量与体积浓度95％乙醇水溶液或水的体积比为1g:4～6ml。
2.根据权利要求1所述冰川茶藨子提取物，其特征在于，所述超声提取的温度40～60℃，所述超声提取的时间为2～3h。
3.根据权利要求1或2所述冰川茶藨子提取物，其特征在于，所述超声提取的频率为20kHz；所述超声提取的次数为2～4次。
4.一种糖苷酶抑制剂，其特征在于，包括权利要求1～3任意一项所述冰川茶藨子提取物。
5.权利要求1～3任意一项所述冰川茶藨子提取物在制备降低餐后血糖药物中的应用。
6.权利要求1～3任意一项所述冰川茶藨子提取物在制备抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的药物中的应用。
7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型包括软胶囊。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述软胶囊包括以下重量份的组分：冰川茶藨子提取物75～85份，DHA5～10份和维生素E10～15份。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述软胶囊包括以下重量份的组分：冰川茶藨子提取物80份，DHA8份和维生素E12份。
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