CN1102709A - 快速唾液癌胚抗原检测试纸 - Google Patents

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Abstract

一种快速唾液癌胚抗原检测试纸，由硝酸纤维素 微孔滤膜、牛血清白蛋白、抗CEA单克隆抗体组成， 在0.25μm～0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价 结合1～10μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋 白上又共价结合10～50ng/cm的抗CEA单克隆抗 体。本发明无放射性污染及放射性防护问题，无需特 殊设备和受过特殊训练的操作人员，特异性强、检测 结果可靠、价格低廉，便于向基层医疗卫生单位推广 普及应用。

Description

本发明是一种快速唾液癌胚抗原检测试纸。
癌胚抗原（CEA）是癌和胚胎组织产生的一种糖蛋白，是世界上公认的肿瘤标志之一。CEA的检测被广泛应用于消化道肿瘤的诊断及术后观察。目前国内外检测癌胚抗原（CEA），主要是放射免疫分析和酶联免疫吸附测定。放射免疫分析主要是应用放射性同位素标记抗CEA抗体，制备成诊断试剂盒，用来检测人血清及各种体液中的CEA，最后需要用放射性同位素测定仪来测定分析。该法存在放射性污染和放射性防护问题，需要特殊的实验室和昂贵的设备，对操作者需要特殊训练，操作复杂。酶联免疫吸附测定法主要是应用辣根过氧化物酶标记抗CEA抗体，以聚苯乙烯等材料制成的反应板为固相载体来结合抗CEA单克隆抗体，制备成酶免疫分析的诊断试剂盒，并通过酶标测定仪来检测人血清及各种体液中的CEA。该法对实验室的条件要求较高，设备较昂贵、成本高、操作复杂、费时。上述两种方法均难以在基层医疗单位普及推广，更不适合于人群的肿瘤筛查。
本发明的目的是为克服CEA放射免疫分析和酶联免疫吸附测定法之不足，提供一种操作简便，结果准确，成本低，无污染的快速唾液癌胚抗原检测试纸。
本发明的目的是这样实现的。由硝酸纤维素微孔滤膜、牛血清白蛋白、抗CEA单克隆抗体组成，在0.25μm～0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合1～10μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合10～50μng/cm的抗CEA单克隆抗体。
本发明是一种以单克隆抗体夹心法酶联免疫测定为原理，选用纸片（微孔滤膜）为固相载体的快速唾液CEA检测试纸。本试纸为胃癌、结肠癌等恶性肿瘤的筛查、诊断、疗效观察提供了简便可靠的方法，尤其适用于大范围的人群普查。本试纸仅取唾液为检测标本，受检者无痛苦、易于接受、易于操作、简便快捷，甚至受检者在家也可如法操作。一滴唾液、一块试纸、十分钟内即能显示检测结果。使用时，取唾液一滴，滴于试纸上，待唾液渗入后，滴加酶标抗体一滴，室温放置2～3分钟后，滴加底物溶液和显色剂。如显片状兰色为阳性，无色为阴性。全过程10分钟内即可完成。灵敏度为65ng/ml;批内变异为4.5%，批间变异为9.2%，平均回收率为97.7%，与NCA（Non specific eross-reactive antigen）无交叉反应，该试纸及试剂（酶标抗体，底物溶液和显色剂）4℃～8℃保存观察六个月结果稳定。
本发明无放射性污染及放射性防护问题，无需特殊设备和受过特殊训练的操作人员，特异性强、检测结果可靠、价格低廉（每人份成本仅一元钱人民币）。便于向基层医疗卫生单位推广普及应用。适用于任何检验科室及家庭自检，对癌症的早期发现，早期治疗有重大意义。
检测原理：如图1。将试纸2与一层玻璃纤维滤纸3和四层普通滤纸4共同压装在一个带圆孔的扁塑料盒1内。如果滴入试纸上的唾液中含有一定量的CEA，便与试纸上抗体相结合，再将辣根过氧化物酶标记的抗CEA抗体滴在试纸上，这样便形成了固相抗体-CEA-酶标抗体的复合物，此时加入底物溶液（H2O2）和显色剂（四甲基联苯胺硫酸盐），便显兰色。如果唾液中CEA含量过低或无CEA，固相抗体-CEA-酶标抗体的复合物便不能形成。酶标抗体便通过试纸上的微孔渗入普通滤纸中，此时加入底物溶液和显色剂后不显色。本试纸经临床试用证明：对胃癌诊断的附合率达90.7%;对结肠癌的诊断附合率达87.1%，经门诊一千余例患者中筛查出胃癌4例，结肠癌2例，直肠癌1例，肺癌2例，喉癌2例。
附图说明：
附图1为本发明的使用示意图
1塑料盒、2试纸、3玻璃纤维试纸、4普通滤纸
实施例：
（1）选用0.3μm的硝酸纤维素微孔滤膜，共价结合4μg/cm牛血清白蛋白再结合20ng/cm的抗CEA单克性抗体，制备成试纸。
酶标抗体选用辣根过氧化物酶通过改良高碘酸钠法标记于抗CEA单克隆抗体上，经320倍稀释制备成酶标抗体溶液。
底物溶液：0.6mmol/L H2O2。
显色剂：1.0mmol/L四基联苯胺硫酸盐。
（2）选用0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜，共价结合6ng/cm的牛血清白蛋白，再结合25ng/cm的抗CEA单克隆抗体，制备成试纸。
酶标抗体：同上法标记，经200倍稀释制备成酶标抗体溶液。
底物溶液：0.4mmol/L H2O2。
显色剂：0.8mmol/L四基联苯胺硫酸盐。

Claims (3)

1、一种快速唾液癌胚抗原检测试纸，其特征在于由硝酸纤维素微孔滤膜、牛血清白蛋白、抗CEA单克隆抗体组成，在0.25μm～0.45μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合1～10μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合10～50ng/cm的抗CEA单克隆抗体。
2、按照权利要求1所述的快速唾液癌胚抗原检测试纸，其特征在于在0.3μm的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合4μg/cm的牛血清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合20ng/cm的抗CEA单克隆抗体。
3、按照权利要求1所述的快速唾液癌胚抗原检测试纸，其特征在于在0.4的硝酸纤维素微孔滤膜上共价结合6μg/cm的牛清白蛋白，在牛血清白蛋白上又共价结合25ng/cm的抗CEA单克隆抗体。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2006122450A1 (en) * 2005-05-20 2006-11-23 Calypte Biomedical Corporation Oral fluid rapid immunochromatography test
CN102182116A (zh) * 2011-03-14 2011-09-14 东莞南方医大代谢医学研发有限公司 一种收集生物样本的滤纸制备及运用方法
CN111879934A (zh) * 2020-08-12 2020-11-03 上海市动物疫病预防控制中心(上海市兽药饲料检测所、上海市畜牧技术推广中心) 一种犬癌胚抗原免疫梳、犬癌胚抗原检测试剂盒

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