CN110268264A - 使用化合物结合的基材测试和筛选的系统和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了用于检测生物样品中的抗体的组合物、方法、试剂盒和系统。在一些实施方案中，所述方法/系统特别用于检测患者中针对病原体灭活化合物处理的RBC的抗体。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年12月23日提交的美国临时申请序列号62/438,909的优先权权益，其内容通过引用整体并入本文。
技术领域
本公开涉及使用化合物结合的基材(例如试剂血红细胞)测试和/或筛选生物样品的系统和方法。
背景技术
血液或血液成分的输血是常用的医疗实践。通常在接受者中输血或使用血液产品之前测试血液产品供体与接受者之间的相容性。
血型抗原是红细胞上的多态性蛋白质或碳水化合物残留物。这些抗原可以在缺乏它们的个体中刺激抗体反应，并且一些抗体(例如，临床上重要的抗体)可以导致溶血性输血反应或溶血性疾病。在红细胞上有超过300种血型抗原(BGA)，因此输血接受者经常暴露于这些抗原，并且对于常规红细胞输血观察到对血型抗原的免疫应答。在具有多次暴露于同种异体红细胞和/或某些病症(例如，SCD，地中海贫血)的患者中，免疫应答更频繁。
临床上重要的血型同种抗体的检测(交叉匹配测试)是输血前测试中的关键测试。供体和患者典型地被分型为ABO和Rh(D)，因为这些被认为是安全输血的最关键抗原。对于少量抗原，典型地不进行分型，例如Rh(C/c和E/e)、Kell(K/k)、Duffy(Fya,Fyb)、Kidd(Jka/Jkb)和MNS(M/N和S/s)系统，但筛选血浆中针对这些抗原的抗体。如果患者的抗体筛选为阴性，则红细胞(RBC)输血的单位也必须与ABO-和Rh(D)相容。如果存在针对临床上重要的次要抗原的抗体，则单位应另外缺乏相应的抗原。常规地，抗体筛选试验已经作为固相红细胞粘附试验(例如Galileo System,Immucor)或试管中的凝集试验进行，例如抗球蛋白试验(例如直接抗球蛋白试验(DAT)、间接抗球蛋白试验(IAT))。这涉及使用已知特异性的人RBC，针对血浆或血清样品进行测试。在孵育期后，并且最常添加二抗溶液，观察混合物的血细胞凝集。最近，该测试也使用本领域已知的微孔板和柱凝集技术系统进行，其也可以在一定程度的自动化下使用。然而，目前的测试在其可检测的临床重要抗体的范围内受到限制。
血液制品和其他生物材料传播疾病仍然是严重的健康问题。已经将诸如补骨脂素和补骨脂素衍生物这样的核酸靶向化合物(用于UVA光光化学处理)导入血液制品如血小板和血浆中以在输血前灭活病原体并降低输血传播感染的风险。已经开发了其他核酸靶向化合物，例如S-303(例如amustaline)，用于RBC的病原体灭活处理。S-303化合物与污染病原体和白细胞的核酸形成共价交联，以阻止复制并降低输血传播感染的风险。然而，一定量的这些化合物或其衍生物具有与RBC成分中的其他亲核物质反应的潜力，包括RBC表面上的那些，其在某些情况下可导致化合物或其衍生物(例如，部分(moiety))变为与RBC结合，例如通过形成表面结合的加合物。即使这些病原体灭活的RBC通常被认为是安全的和非免疫原性的，但是在某些情况下，与RBC结合的化合物或其衍生物可以被预先存在的抗体识别或在某些患者中引起不希望的免疫应答。
因此，需要用于检测患者中针对病原体灭活化合物处理的RBC的抗体的方法/系统。
发明内容
除了其他用途之外，本公开的组合物，方法，试剂盒和系统提供了用于检测生物样品中的抗体的方式，例如筛选用于在输注处理的RBC之前预先存在的交叉反应性抗体的病原体灭活的RBC的潜在接受者。在一些实施方案中，所述组合物，方法，试剂盒和系统特别可用于检测患者中针对S-303化合物处理的RBC的抗体。
在一个方面，提供了试剂盒，其包含：(a)含有第一基材的第一容器，其中某部分(moiety)与第一基材的表面结合，并且其中所述部分选自任意式I，II，III，IV，V，VI，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体；(b)含有第二基材的第二种容器，其中第二基材的表面不含结合的部分(moiety)。在一些实施方案中，该部分选自任意式I，II，III，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，该部分选自任意式IV，V和VI的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，该部分选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，该部分是S-303，S-303的衍生物，或任意前述者的盐。在一些实施方案中，该部分是S-303或其盐的非易碎类似物。在一些实施方案中，与基材表面结合的部分以每个基材单元至少约10,000个部分的负载水平存在。在一些实施方案中，结合至基材表面的部分以至少约50个部分/μm2的负载水平存在。在一些实施方案中，化合物和与表面结合的部分(moiety)是相同的。在一些实施方案中，化合物和与表面结合的部分是不同的。在一些实施方案中，第一和第二基材各自包含聚合物颗粒、基质或测定板的一部分。在一些实施方案中，第一基材包含红细胞，其中第二基材包含红细胞，并且其中第一和第二基材的红细胞获自一种或多种共同供体。在一些实施方案中，所述试剂盒还包含含有第三基材的第三容器，其中所述部分(moiety)的第一水平与所述第一基材的表面结合，其中所述部分的第二水平与所述第三基材的表面结合，其中第二水平小于第一水平。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分的第一水平是结合到第三基材表面的部分的第二水平的至少3-倍高。在一些实施方案中，第三基材包含聚合物颗粒、基质或测定板的一部分。在一些实施方案中，第三基材包含红细胞，并且其中第一、第二和第三基材的红细胞获自一种或多种共同供体。在一些实施方案中，第一基材包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个样品，其中第一基材的每个样品包含从不同血液供体获得的红细胞，和其中第二基材包含相应的样品，该样品包含来自每个不同血液供体的红细胞。在一些实施方案中，2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个样品代表多种血型。在一些实施方案中，第一基材和第二基材包含从O型血供体获得的红细胞。在一些实施方案中，第一基材、第二基材和第三基材包含从O型血供体获得的红细胞。在一些实施方案中，第一基材和第二基材包含约0.5％-约5％红细胞的在缓冲悬浮介质中的红细胞。在一些实施方案中，第一基材、第二基材和第三基材包含约0.5％-约5％红细胞的在缓冲悬浮液中的红细胞。在一些实施方案中，包含第一基材的第一容器，包含第二基材的第二容器，和/或包含第一容器和第二容器的试剂盒适于在2-8℃下储存。在一些实施方案中，包含第一基材的第一容器，包含第二基材的第二容器，和/或包含第一容器和第二容器的试剂盒适于在室温下储存。在一些实施方案中，包含第一基材的第一容器，包含第二基材的第二容器，和/或包含第一容器和第二容器的试剂盒适于在低于-20℃的温度下储存。
在另一方面，提供了一种制备一组基材的方法，该方法包括：a)提供第一和第二样品，每个样品包括基材；b)用化合物处理第一样品的基材，其中用该化合物的处理导致某部分(moiety)与第一样品的基材表面结合；其中第二样品未用化合物处理，从而产生包含具有表面结合部分(moiety)的基材的第一样品和缺乏表面结合部分(moiety)的基材的第二样品的组，并且其中所述化合物选自由任意式I，II，III，IV(a)-IV(h)，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体组成的组。在一些实施方案中，提供了制备一组聚合物颗粒的方法，该方法包括：a)提供包含聚合物颗粒的第一和第二样品；b)用化合物处理第一样品的聚合物颗粒，其中用该化合物的处理导致某部分(moiety)与第一样品颗粒表面结合；其中第二样品未用化合物处理，从而产生包含具有表面结合部分(moiety)的聚合物颗粒的第一样品和不含表面结合部分(moiety)的第二聚合物颗粒样品的组，并且其中所述化合物选自任意式I，II，III，IV(a)-IV(h)，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，提供了制备一组红细胞的方法，该方法包括：a)提供包含红细胞的第一和第二样品；b)用化合物处理第一样品的红细胞，其中用该化合物的处理导致所述部分(moiety)与第一样品的红细胞表面结合；其中第二样品未用化合物处理，从而产生包含第一个具有表面结合部分(moiety)的红细胞样品和第二个不含表面结合部分(moiety)的红细胞样品的组，并且其中化合物是选自式I，II，III，IV(a)-IV(h)，VII，VIII和IX中任一个的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，化合物选自式I，II，III，VII，VIII和IX中任一个的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，化合物选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，化合物是S-303的衍生物或其盐。在一些实施方案中，化合物是S-303或其盐的非易碎类似物。在一些实施方案中，表面结合的部分(moiety)是S-303的衍生物或其盐。在一些实施方案中，表面结合的部分(moiety)是S-303或其盐的非易碎类似物。在一些实施方案中，与红细胞表面结合的部分(moiety)以每个红细胞至少约10,000个部分(moiety)的负载水平存在。在一些实施方案中，结合至红细胞表面的部分(moiety)以至少约50个部分(moiety)/μm2的负载水平存在。在一些实施方案中，化合物和表面结合的部分(moiety)是相同的。在一些实施方案中，化合物和表面结合的部分(moiety)是不同的。在一些实施方案中，第一和第二样品的红细胞获自相同的血液供体。在一些实施方案中，第一和第二样品的红细胞获自O型血液供体。在一些实施方案中，用化合物处理第一样品的基材，其中在2-8℃下用化合物的处理导致某部分(moiety)在第一个样品的基材表面上的结合。在一些实施方案中，用化合物处理第一样品的基材，其中在室温下用化合物的处理导致某部分(moiety)与第一样品的基材表面结合。在一些实施方案中，该方法还包括在步骤(b)之后：洗涤第一和第二样品。在一些实施方案中，该方法在步骤(b)之后还包括：将第一和第二样品重悬于缓冲的悬浮介质中，约0.5％-约5％的红细胞。在一些实施方案中，该方法还包含，在步骤(b)之后：向第一和第二样品中加入冷冻保存剂；并冷冻第一和第二样品。在一些实施方案中，该方法还包括在步骤(b)之后，将第一和第二样品储存在冷藏温度(例如2-8℃)下。在一些实施方案中，该方法包括在步骤(b)之后，将第一和第二样品储存在低于约-20℃。在一些实施方案中，该方法包括在步骤(b)之后，将第一和第二样品储存在室温下。在一些实施方案中，该方法还包括：用该化合物处理包含红细胞的第三样品，其中用该化合物处理第三样品的红细胞导致第二水平的所述部分(moiety)结合到第三样品的红血球细胞表面。其中第一水平的所述部分(moiety)与第一样品的红细胞表面结合，并且其中第二水平小于第一水平。在一些实施方案中，该方法还包括在用化合物处理第三样品后，洗涤第三样品。在一些实施方案中，该方法还包括在用化合物处理第三样品后：向第三样品中加入冷冻保存剂；并冷冻第三样品。在一些实施方案中，该方法还包含在用化合物处理第三样品后：将第三样品重悬于缓冲的悬浮介质中(以约0.5％-约5％的红细胞)。在一些实施方案中，该方法还包括在用化合物处理第三样品后，将第三样品储存在冷藏温度或室温下。
在另一个方面，提供了测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法，该方法包含：a)提供包含血清或血浆的样品；b)使样品与基材接触，其中部分(moiety)与基材表面结合；并且其中所述部分选自式I，II，III，IV，IV(a)-IV(h)，V，VI，VII，VIII和IX中任一个的化合物及其衍生物，或任意前述物质的盐或立体异构体；和c)测定来自样品的抗体和基材的表面结合部分(moiety)之间的结合量，其中抗体和表面结合部分之间的结合表明抗体结合该化合物。在一些实施方案中，测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法包含：a)提供包含血清或血浆的样品；b)使样品与聚合物颗粒(例如珠子，微球体)，基质或测定板的一部分接触，其中部分(moiety)结合到聚合物颗粒(例如珠子，微球体)，基质或测定板的一部分的表面；其中所述部分选自式I，II，III，IV，IV(a)-IV(h)，V，VI，VII，VIII和IX中任一个的化合物及其衍生物，或任意前述物质的盐或立体异构体；c)测定来自样品的抗体与聚合物颗粒(例如珠子，微球体)，基质或测定板的一部分的表面结合部分(moiety)之间的结合量，其中抗体与表面结合部分(moiety)之间的结合表明抗体与该化合物结合。在一些实施方案中，测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法包含：a)提供包含血清或血浆的样品；b)使样品与红细胞接触，其中部分(moiety)与红细胞表面结合；其中所述部分选自式I，II，III，IV(a)-IV(h)，VII，VIII和IX中任一个的化合物，及其衍生物，或任意上述者的盐或立体异构体；和c)测定来自样品的抗体和红细胞的表面结合部分(moiety)之间的结合量，其中抗体和表面结合部分之间的结合表明抗体结合该化合物。在一些实施方案中，化合物选自式I，II，III，VII，VIII和IX中任一个的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，化合物选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，化合物是S-303的衍生物或其盐。在一些实施方案中，化合物是S-303或其盐的非易碎类似物。在一些实施方案中，表面结合的部分是S-303的衍生物或其盐。在一些实施方案中，表面结合的部分是S-303或其盐的非易碎类似物。在一些实施方案中，与红细胞表面结合的部分以每个红细胞至少约10,000个部分(moiety)的负载水平存在。在一些实施方案中，结合至红细胞表面的部分(moiety)以至少约50个部分/μm2的负载水平存在。在一些实施方案中，化合物和表面结合的部分(moiety)是相同的。在一些实施方案中，化合物和表面结合的部分(moiety)是不同的。在一些实施方案中，步骤(c)包含将来自样品的抗体和表面结合的部分(moiety)之间的结合量与参比物进行比较，并且其中与参比物相比增加的结合量表明样品中存在抗体。在一些实施方案中，步骤(c)包含测定来自样品的抗体和不含表面结合部分(moiety)的红细胞之间的结合量。在一些实施方案中，步骤(c)还包含测定来自样品的抗体和具有减少量的表面结合部分的红细胞之间的结合量。在一些实施方案中，步骤(b)包含使样品和红细胞与抗人球蛋白接触，并且其中步骤(c)包含测定凝集量。
在另一个方面，提供了向患者提供红细胞输血的方法，其中红细胞输血包括用病原体灭活化合物处理的红细胞，该方法包含：a)提供包含来自患者的血清或血浆；b)使样品与第一基材接触，其中部分(moiety)与基材表面结合；c)与参比物相比，测定来自样品的抗体和第一基材的表面结合部分(moiety)之间的结合量，其中抗体与表面结合部分之间的结合表明抗体结合用病原体灭活化合物处理的红细胞；d)确定结合量是否高于参比值；f)根据确定结合量不高于参比值，向患者提供输血。在一些实施方案中，表面结合的部分(moiety)选自式I，II，III，IV，V，VI，VII，VIII和IX中任一个的化合物，及其衍生物，或任意上述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，表面结合的部分选自任意式I，II，III，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，表面结合的部分选自任意式IV，V和VI的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，表面结合的部分选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，表面结合的部分是S-303，S-303的衍生物，或任意前述者的盐。在一些实施方案中，表面结合的部分是S-303或其盐的非易碎类似物。在一些实施方案中，化合物和表面结合的部分是相同的。在一些实施方案中，化合物和表面结合的部分是不同的。在一些实施方案中，第一基底包含聚合物颗粒，基质或测定板的一部分。在一些实施方案中，第一基材包含红细胞。在一些实施方案中，步骤(c)包括测定来自样品的抗体和缺乏表面结合部分(moiety)的第二基材之间的结合量。在一些实施例中，第二基材与第一基材相同。在一些实施方案中，步骤(c)还包含测定与第一基材相比，来自样品的抗体和具有较少量表面结合部分(moiety)的第三基材之间的结合量。在一些实施方案中，第三基材与第一基材相同。在一些实施方案中，步骤(b)包含使样品和基材与抗人球蛋白接触，并且其中步骤(c)包括测定凝集量。在一些实施方案中，与基材表面结合的部分(moiety)与病原体灭活化合物不同。
在另一个方面，提供了包含人红细胞的组合物，其中选自任意式I，II，III，IV(a)-IV(h)，VI，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物或任意前述物质的盐或立体异构体的部分(moiety)与人红细胞表面结合。在一些实施方案中，该部分选自任意式I，II，III，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述者的盐或立体异构体。在一些实施方案中，该部分是S-303或其盐的非易碎类似物。
附图说明
图1是显示经处理的红细胞的抗体染色水平的示意图。
图2是显示经处理的红细胞的抗体染色水平的示意图。
图3是显示经处理的红细胞的抗体染色水平的示意图。
图4是显示经处理的红细胞的抗体染色水平的示意图。
图5是显示经处理的红细胞的抗体染色水平的示意图。
图6是显示经处理的红细胞的抗体染色水平的示意图。
详细描述
本公开提供了使用其上结合有化合物的基材测试和/或筛选生物样品的方法和系统。我们已经发现，尽管根据本公开的各种实施方案使用的化合物(例如，病原体灭活化合物)对于红细胞(RBC)的处理(例如，病原体灭活)可以是安全有效的，但是这种处理具有化合物与RBC中的其他亲核试剂反应的可能性，其在某些情况下可导致化合物与RBC结合，例如与RBC表面结合(例如，形成表面结合的加合物)。如果在输注处理的RBC的患者中存在这样的抗体，这种结合还可以导致对化合物具有特异性的抗体或其部分(portion)也与处理的RBC结合。因此，重要的是测试生物样品(例如，来自患者的样品)以评估化合物或其部分(portion)的抗体(例如临床重要的抗体)的存在或不存在。本申请考虑了本文所述的方法/系统，并且使用包含结合在基材上的本公开化合物的组合物和/或试剂盒识别这些方法/系统在测试生物样品中抗化合物抗体的存在中的用途。根据一些实施方案，所述方法/系统特别适用于在输血之前检测患者中预先存在的抗体，其与病原体灭活化合物处理的RBC反应。
本文提供了化合物结合的基材(例如，病原体-灭活化合物-结合的RBC)的组合物和试剂盒/系统，制备该组合物的方法，及其用途。
本文使用的冠词“一”和“一个”指的是冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法对象。举例来说，“一种基材”表示一种基材或一种以上的基材。
如本文所用的术语，“生物样品”或简称“样品”是指样品，例如，但不一定是从动物(例如人)获得的样品，该样品或其成分可以用于评估本公开方法的抗体的存在，不存在和/或水平。这样的样品包括但不限于任意生物样品，例如生物流体(例如血液，血清，血浆，淋巴液，精液，痰液，唾液，粘液，泪液等)，以及任意从动物(例如人)获得的样品，其可以测定抗体的存在或不存在。
如本文所用的“烷基”是指含有碳和氢的环状，支链或直链化学基团，例如甲基，戊基和金刚烷基。烷基可以是未取代的或被一个或多个取代基取代，例如卤素，烷氧基，酰氧基，氨基，羟基，硫氢基，羧基，苄氧基，苯基，苄基或其他官能团。烷基可以是在一个或几个位置上饱和的或不饱和的(例如包含-C＝C-或-C-C-亚基)。典型地，除非另有说明，烷基包含1至12个碳原子，例如1至10个碳原子或1至8个碳原子。
如本文所用的“杂烷基”是指具有一个或多个并入链中的N，O，S或P杂原子的烷基链。杂原子可以不含任意，包含一个或多于一个上述取代基。“杂原子”还包括杂原子N，S和P的氧化形式。杂烷基的实例包括但不限于甲氧基，乙氧基和其他烷氧基；含醚基团，含酰胺基团，如多肽链；环系，如哌啶基，内酰胺和内酯；和其他将杂原子结合到碳链中的基团。典型地，除非另有说明，除杂原子外，杂烷基还包含1至12个碳原子，例如1至10个碳原子或1至8个碳原子。
“芳基”或“Ar”是指具有单环(例如，苯基)或多个稠合环(例如，萘基或蒽基)的不饱和芳族碳环基团，其任选未取代或被氨基，羟基，C1-8烷基，烷氧基，卤素，硫氢基和其他取代基取代。
“杂芳基”基团是具有单环(例如，吡啶基或呋喃基)或多个稠合环(例如，吖啶基，吲哚基或苯并噻吩基)并且在至少一个环内具有至少一个杂原子例如N、O或S的不饱和芳族碳环基团。所述环任选是未取代的或被氨基，羟基，烷基，烷氧基，卤素，硫氢基，酰氧基，羧基，苄氧基，苯基，苄基和其他取代基取代。
组合物
本文提供含有具有表面结合部分的基材的组合物，其中表面结合部分适合于结合针对化合物的抗体，例如用于制备可能存在于生物样品中的病原体灭活的红细胞的化合物。
基材
如本领域普通技术人员所理解的，基材可以是本领域已知的任意固体支持物。固体支持物可以由适于结合表面结合部分的任意材料(例如，生物的，合成的)或基质组成。固体支持物的实例包括聚合物或共聚物(例如，聚酯，聚醚，聚烯烃，聚酰胺，多糖，聚氨酯，苯乙烯和苯乙烯衍生物，聚苯乙烯，纤维素)，塑料，玻璃，金和其他金属等。固体支持物的其他实例包括细胞(例如RBC)，细胞膜和其他细胞衍生材料。固体支持物可以以二维形式(例如，板)或三维形式(例如，细胞，颗粒，珠子或其他球形或准球形物体)呈现表面结合的部分。固体支持物的其他实例包括颗粒(例如聚合物颗粒)，例如珠粒和微球体(例如，合成珠粒和微球体，聚合物或共聚物的珠粒和微球体)。粘合剂也可用于赋予固体支持物的完整性和结构。基材可以是测定板的一部分。特定的固体支持物由一种或多种材料组成，生物样品不会与之结合或基本上不结合。例如，固体支持物可以由抗体不结合或基本上不结合的材料组成(例如，不包含特定抗体结合的抗原的材料)。特别地，固体支持物由抗病原体灭活的红细胞的抗体不结合或基本上不结合的材料组成。
用于本发明组合物和方法的任意固体支持物可适用于表面结合部分的共价或非共价连接。在一些实施方案中，固体支持物是惰性的。在一些实施方案中，表面结合的部分可以与固体支持材料本身共价或非共价结合。在其他实施方案中，固体支持材料用反应性基团(例如，胺(-NH2)或铵(-NH3+或-NR3+)官能团，醇官能团(-OH)，羧基官能团(-COOH)，异氰酸酯官能团(-NCO)官能化，其可与表面结合部分相互作用或以其他方式共价或非共价结合。
对于基材在各种不同温度下稳定可能是有利的，例如室温，冷藏温度或冷冻温度。在一些实施方案中，基材在室温下是稳定的。在一些实施方案中，基材在冷藏温度下稳定(例如1-6℃、2-8℃、2-4℃)。在一些实施方案中，基材在0℃或低于0℃(例如-20℃)下稳定。在一些实施方案中，基材在-80℃下稳定。
根据本公开的某些实施方案，基材包含RBC。例如，通常用于免疫血液学测试的RBC可以是本文提供的基材。
在一些实施方案中，RBC由人血制备。基材可包括来自任意血型的RBC，例如O型，A型，B型或AB型供体。RBC可以专门设计用于支持一种或多种抗体混合物的拆分。在一些实施方案中，RBC表达选自抗原C，c，E，e，K，k，Fya，Fyb，Jka，Jkb，M，N，S，s，P1，Lea和Leb的抗原。在一些实施方案中，RBC表达Rh(D)。在一些实施方案中，RBC具有选自R1R1，R2R2，R1 wR1，R0r和rr的Rh型。RBC可以在室温下储存(例如，在0.5％-5％RBC的缓冲悬浮介质中)，冷藏温度(例如，在0.5％-5％RBC的缓冲悬浮介质中)，或者可以冷冻它们(例如，在冷冻保存剂中，例如Glycerolyte，并储存在-80℃下)。
在本发明组合物中用作基材的RBC可以从单一供体获得，或者它们可以从两种或更多种供体(例如，从两种或更多种供体获得的RBC的混合物)获得。在一些实施方案中，RBC基材包含获自2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个或更多个体供体的RBC。在一些情况下，来自两个或更多个供体的RBC具有一种或多种共同特性，例如ABO血型或其他RBC抗原的存在或不存在(例如，常见的RBC抗原，临床相关的RBC抗原)。在其他情况下，来自两个或更多个供体的RBC在某些性质方面是异质的，例如ABO血型或其他RBC抗原的存在或不存在(例如，常见的RBC抗原，临床相关的RBC抗原)。在一些实施方案中，RBC基材包括具有ABO血型混合物的RBC。在一些实施方案中，RBC基材相对于Rh因子是均质的。在其他实施方案中，RBC基材相对于Rh因子是异质的。在一些实施方案中，RBC基材相对于以下抗原中的任意一种或多种是均质的：Csa、Csb、Era、Erb、Vel、ABTI、Lan、Ata、Jra、AnWj、Sda、Batty(By)、Biles(Bi)、Box(Bxa)Christiansen(Chra)、HJK、HOFM、JFV、JONES、Jensen(Jea)、Katagiri(Kg)、Livesay(Lia)、Milne、Oldeide(OIa)、Peters(Pta)、Rasmussen(RASM)、Reid(Rea)、REIT、SARA、Torkildsen(Toa)和Bennett-Goodspeed(Bg)。在一些实施方案中，RBC基材相对于以下抗原中的任意一种或多种是异质的：Csa、Csb、Era、Erb、Vel.ABTI、Lan、Ata、Jra、AnWj、Sda、Batty(By)、Biles(Bi)、Box(Bxa)Christiansen(Chra)、HJK、HOFM、JFV、JONES、Jensen(Jea)、Katagiri(Kg)、Livesay(Lia)、Milne、Oldeide(OIa)、Peters(Pta)、Rasmussen(RASM)、Reid(Rea)、REIT、SARA、Torkildsen(Toa)和Bennett-Goodspeed(Bg)。
用作本文所述组合物和方法中的基材的RBC可通过本领域已知的任意方法获得。例如，RBC可以通过标准RBC捐赠技术(例如，血浆分离置换法，双红色收集)获得。或者，RBC可以通过从全血的其他成分中分离RBC从全血捐赠中获得，例如，通过离心或其他标准分级分离技术。在一些实施方案中，在用表面结合部分官能化之前或之后，通过本领域已知的任意方法对RBC进行灭菌。
本领域技术人员将理解，根据本公开的一些实施方案，化合物可以以阵列结合到基材上。如本文所用，术语“阵列”是指结合化合物在基材如玻璃或塑料上的一般有序排列。典型地，阵列可以是化合物结合的一系列规则间隔的界定区域的形式。可以将这种阵列描述为芯片。例如，多孔微孔板中的阵列可以通过自动设备扫描。
表面结合的部分(moiety)
根据本申请的不同实施方案，部分(moiety)结合到基材的表面。在一些实施方案中，该部分是病原体灭活化合物。在一些实施方案中，该部分是病原体灭活化合物的(例如，部分(portion))的衍生物。在一些实施方案中，该部分是具有与病原体灭活化合物类似或共同部分的化合物。可以用病原体灭活化合物处理基材，使得化合物或其衍生物结合到基材表面。或者，可以用本身是病原体灭活化合物的衍生物的部分处理基材，使得反应性部分(moiety)本身与基材结合，或其进一步的衍生物与基材结合。或者，可以用具有与病原体灭活化合物类似或共同部分(portion)的化合物处理基材，使得类似或共同部分与基材结合。在一些实施方案中，该部分(moiety)是包含吖啶的化合物的衍生物，例如吖啶诱变剂，单烷基化剂，双烷基化剂，吖啶芥子(例如，6-氯-9-(3-[(2)-氯乙基)乙基氨基]丙基氨基)-2-甲氧基吖啶，Sigma#I2888)，或吖啶半芥子(例如，6-氯-9-[3-(2-氯乙基氨基)丙基氨基]-2-甲氧基吖啶二盐酸盐，Sigma#I3636)，且可以用包含吖啶的化合物或其衍生物处理基材。
病原体灭活化合物是使红细胞或其他基于血液的组合物中的一种或多种含核酸的病原体失活的化合物，该含核酸的病原体能够在人，其他哺乳动物或脊椎动物中引起疾病。病原体可以是单细胞或多细胞的。病原体的实例是细菌，病毒，原生动物，真菌，酵母，霉菌和支原体，其在人类，其他哺乳动物或脊椎动物中引起疾病。病原体的遗传物质可以是DNA或RNA，并且遗传物质可以作为单链或双链核酸存在。
已经开发了病原体灭活化合物，其典型地具有与病原体反应更具体地、与病原体核酸反应的亲电子基团。例如，美国专利号5,691,132；6,177,441；6,410,219；6,143,490；和6,093,725描述了具有核酸靶向成分的化合物以及与核酸反应以使病原体失活的亲电子成分的用途；其公开内容在此引入作为参考。美国专利美国专利号6,093,725和6,514,987(其公开内容在此引入作为参考)描述了化合物，其中化合物的核酸靶向成分通过可水解的连接基与反应性亲电子成分连接。含有这种可水解连接基的化合物可称为易碎化合物。在某些条件下，易碎化合物的连接基将发生水解反应，从而使核酸靶向成分和化合物的亲电子成分解偶联。含有通过不可水解的连接基与亲电子成分结合的核酸靶向成分的化合物可称为非易碎化合物。
在一些实施方案中，病原体灭活化合物包括含有官能团的化合物，所述官能团是或能够形成并且已经例如原位形成反应性基团的官能团，如亲电子基团。在一些情况下，病原体灭活化合物需要光活化才能具有反应性。在一些情况下，病原体灭活化合物不需要光活化以具有反应性。例如，官能团可以是芥子基团，芥子基团中间体，芥子基团等效物，环氧化物，甲醛或甲醛合成子。这些官能团能够原位形成反应性基团，例如亲电子氮丙啶，氮丙啶鎓，硫杂丙环或硫杂丙环鎓离子。芥子基团可以是单-或双-(卤代乙基)胺基团或单(卤代乙基)硫化物基团。芥子等效物是通过类似于芥子的机制反应的基团，例如通过形成反应性中间体如氮丙啶鎓和氮丙啶基团或硫杂丙环和硫杂丙环鎓基团。实例包括氮丙啶衍生物，单-或双-(甲磺酰基乙基)胺基，单-(甲磺酰基乙基)硫化物基团，单-或双-(甲苯磺酰基乙基)胺基团和单-(甲苯磺酰基乙基)硫化物基团。甲醛合成子是分解成甲醛的任意化合物，其包括羟胺如羟甲基甘氨酸。病原体灭活化合物的反应基团能够与病原体的核酸反应，例如与核酸上的亲核基团反应。反应性基团也能够与猝灭剂的亲核基团反应。
在一些实施方案中，病原体灭活化合物包括将化合物靶向核酸的成分，例如锚定部分。锚定部分包含能够与核酸生物聚合物(例如DNA或RNA)非共价结合的部分，并且还被称为核酸结合配体、核酸结合基团或核酸结合部分。在某些实施方案中，锚定部分通过可水解的连接基与反应性亲电子成分连接。
在一些实施方案中，处理本文提供的基材的化合物，或与本文提供的基材表面结合的所得部分是非易碎化合物或其衍生物。非易碎化合物可以是如下任意的式I，II或III的化合物。
式I为：
其中n为包括1-12的整数，且X为CH2、NH、O或S，
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
式II为：
其中n为包括1-12的整数，
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
式III为：
其中R1，R2，R3，R4和R5中的一个或两个独立地是(2-氯乙基)氨基或(2-溴乙基)氨基，任选在胺上具有第二个2-乙基卤代基团，通过1-9个碳的链连接在三环上，其中链任选地含有一个或多个选自氧，氮和硫的杂原子，其中链任选地包含一个或多个不饱和键或羰基，并且其中链是任选地被一个或多个低级烷基取代；且
其余的R1，R2，R3，R4和R5独立地为氢，低级烷基，低级烷氧基，卤素，-CH2OR6或-CH2NR7R8，其中R6，R7和R8各自独立地为氢或低级烷基。
具体的非易碎化合物包括如下：
及其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
在一些实施方案中，处理本文提供的基材的化合物，或与本文提供的基材表面结合的所得部分是易碎化合物或其衍生物。易碎化合物可以是任意式IV，V或VI的化合物，或任意式IV，V或VI的化合物的衍生物，如下。
式IV为：
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的至少一个为如下定义的-V-W-X-E，且其余的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，
其中-R10独立地为H、-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
V独立地为-R11-、-NH-R11-或-N(CH3)-R11-，其中-R11-独立地为-C1-8烷基-、-C1-8杂烷基-、-芳基-、-杂芳基-、-C1-3烷基-芳基-、-C1-3杂烷基-芳基-、-C1-3烷基-杂芳基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-、-芳基-C1-3烷基-、-芳基-C1-3杂烷基-、-杂芳基-C1-3烷基-、-杂芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-；
W独立地为-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝S)-O-、-O-C(＝S)-、-C(＝S)-S-、-S-C(＝S)-、-C(＝O)-S-、-S-C(＝O)-、-O-S(＝O)2-O-、-S(＝O)2-O-、-O-S(＝O)2-、-C(＝O)-NR10-、-NR10-C(＝O)-、-O-P(＝O)(-OR10)-O-、-P(＝O)(-OR10)-O-、-O-P(＝O)(-OR10)-；
X独立地为-R11-；且
E独立地选自-N(R12)2、-N(R12)(R13)、-S-R12和
其中-R12为-CH2CH2-G，其中G各自独立地为-Cl、-Br、-I、-O-S(＝O)2-CH3、-O-S(＝O)2-CH2-C6H5或-O-S(＝O)2-C6H4-CH3；且
其中R13独立地为-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
在式IV的一些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。在另外的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个为氢。
在式IV的一些实施方案中，R9为-V-W-X-E。在一些实施方案中，V为-NH-R11-。在一些这样的实施方案中，R11为-C1-8烷基-，例如甲基或乙基。在具体的实施方案中，V为-NH-R11-，其中R11是直链-C1-8烷基-。在一些实施方案中，V为-N(CH3)-R11-。在一些这样的实施方案中，R11为-C1-8烷基-，例如甲基或乙基。在具体的实施方案中，V为-N(CH3)-R11-，其中R11是直链-C1-8烷基-。
在式IV的一些实施方案中，W为-C(＝O)-O-。在一些实施方案中，W为-C(＝O)-NR10-。在一些实施方案中，W为-C(＝O)-NH-。
在式IV的一些实施方案中，X为-R11-，其中-R11-为-C1-8烷基-。在一些实施方案中，X为甲基。在一些实施方案中，X为乙基。在一些实施方案中，X为直链-C1-8烷基-。
在的一些实施方案中式IV，E为-N(R12)2，其中R12为-CH2CH2-G。在一些这样的实施方案中，G各自独立地为-Cl、-Br或-I。在一些这样的实施方案中，G部分均为-Cl。
在式IV的一些实施方案中，R9为-NH-C1-8烷基-C(＝O)-O-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。在一些实施方案中，R9为
-NH-(CH2)-C(＝O)-O-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)2-C(＝O)-O-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)-C(＝O)-O-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)2-C(＝O)-O-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)3-C(＝O)-O-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2或
-NH-(CH2)-C(＝O)-O-(CH2)3-N(CH2CH2Cl)2。
在一些这样的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
在式IV的一些实施方案中，R9为-NH-C1-8烷基-C(＝O)-NH-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。在一些实施方案中，R9为-NH-(CH2)-C(＝O)-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)2-C(＝O)-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)-C(＝O)-NH-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)2-C(＝O)-NH-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、
-NH-(CH2)3-C(＝O)-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2或
-NH-(CH2)-C(＝O)-NH-(CH2)3-N(CH2CH2Cl)2。
在一些这样的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
式V为：
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，
其中-R10独立地为H、-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
R20为-H或-CH3；且
R21为-R11-W-X-E，
其中-R11-独立地为-C1-8烷基-、-C1-8杂烷基-、-芳基-、-杂芳基-、-C1-3烷基-芳基-、-C1-3杂烷基-芳基-、-C1-3烷基-杂芳基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-、-芳基-C1-3烷基-、-芳基-C1-3杂烷基-、-杂芳基-C1-3烷基-、-杂芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-；
W独立地为-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝S)-O-、-O-C(＝S)-、-C(＝S)-S-、-S-C(＝S)-、-C(＝O)-S-、-S-C(＝O)-、-O-S(＝O)2-O-、-S(＝O)2-O-、-O-S(＝O)2-、-C(＝O)-NR10-、-NR10-C(＝O)-、-O-P(＝O)(-OR10)-O-、-P(＝O)(-OR10)-O-、-O-P(＝O)(-OR10)-；
X独立地为-R11-；且
E独立地选自-N(R12)2、-N(R12)(R13)、-S-R12和
其中-R12为-CH2CH2-G，其中G各自独立地为-Cl、-Br、-I、-O-S(＝O)2-CH3、-O-S(＝O)2-CH2-C6H5或-O-S(＝O)2-C6H4-CH3；
且其中R13独立地为-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
在式V的一些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。在另外的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8的至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6或至少7个为氢.在式V的一些实施方案中，R20为H。在一些实施方案中，R20为-CH3。
在的一些实施方案中式V、R21为-R11-W-X-E。在一些实施方案中，R11为-C1-8烷基-，例如甲基或乙基。在一些实施方案中，R11是直链-C1-8烷基-。在一些实施方案中，R11为-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-或-(CH2)8-。
在式V的一些实施方案中，W为-C(＝O)-O-。在一些实施方案中，W为-C(＝O)-NR10-。在一些实施方案中，W为-C(＝O)-NH-。
在式V的一些实施方案中，X为-R11-，其中-R11-为-C1-8烷基-。在一些实施方案中，X为甲基或乙基。在一些实施方案中，X是直链-C1-8烷基-。在一些实施方案中，X为-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-,或-(CH2)8-。在一些这样的实施方案中，R20为H。在一些这样的实施方案中，R20为-CH3。
在式V的一些实施方案中，E为-N(R12)2，其中R12为-CH2CH2-G。在一些这样的实施方案中，G各自独立地为-Cl、-Br或-I。在一些这样的实施方案中，G部分均为-Cl。
在式V的一些实施方案中，R21为-C1-8烷基-C(＝O)-O-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。在一些实施方案中，R21为-(CH2)-C(＝O)-O-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)2-C(＝O)-O-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)-C(＝O)-O-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)2-C(＝O)-O-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)3-C(＝O)-O-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2或-(CH2)-C(＝O)-O-(CH2)3-N(CH2CH2Cl)2。在一些这样的实施方案中，R20为H。在一些这样的实施方案中，R20为-CH3。在任意上述实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自可以为氢。
在式V的一些实施方案中，R21为-C1-8烷基-C(＝O)-NH-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。在一些实施方案中，
R21为-(CH2)-C(＝O)-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、
-(CH2)2-C(＝O)-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、
-(CH2)-C(＝O)-NH-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、
-(CH2)2-C(＝O)-NH-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、
-(CH2)3-C(＝O)-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2或
-(CH2)-C(＝O)-NH-(CH2)3-N(CH2CH2Cl)2。
在一些这样的实施方案中，R20为H。在一些这样的实施方案中，R20为-CH3。在任意上述实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自可以为氢。
式VI为：
其中R44、R55、R3、R4、R5和R8的至少一个为-V-W-X-E，且其余的R44、R55、R3、R4、R5和R8独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，
其中-R10独立地为H、-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
V独立地为-R11-、-NH-R11-或-N(CH3)-R11-，其中-R11-独立地为-C1-8烷基-、-C1-8杂烷基-、-芳基-、-杂芳基-、-C1-3烷基-芳基-、-C1-3杂烷基-芳基-、-C1-3烷基-杂芳基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-、-芳基-C1-3烷基-、-芳基-C1-3杂烷基-、-杂芳基-C1-3烷基-、-杂芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-；
W独立地为-C(＝O)-O-、-O-C(＝O)-、-C(＝S)-O-、-O-C(＝S)-、-C(＝S)-S-、-S-C(＝S)-、-C(＝O)-S-、-S-C(＝O)-、-O-S(＝O)2-O-、-S(＝O)2-O-、-O-S(＝O)2-、-C(＝O)-NR10-、-NR10-C(＝O)-、-O-P(＝O)(-OR10)-O-、-P(＝O)(-OR10)-O-、-O-P(＝O)(-OR10)-；
X独立地为-R11-；且
E独立地选自-N(R12)2、-N(R12)(R13)、-S-R12和
其中-R12为-CH2CH2-G，其中G各自独立地为-Cl、-Br、-I、-O-S(＝O)2-CH3、-O-S(＝O)2-CH2-C6H5或-O-S(＝O)2-C6H4-CH3；
且其中R13独立地为-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
应理解，在上式IV中，吖啶核是锚定部分，-V-W-X-基团包含易碎连接基，并且E基团是效应基团。类似地，在上面的式VI中，补骨脂素核是锚定部分，-V-W-X-基团包含易碎连接基，并且E基团是效应基团。式V是式IV的子式。
在一些实施方案中，式IV的易碎化合物是式IV(a)-IV(h)的化合物，或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)，其中未具体指出的所有可变基团与上面的式IV相同：
式IV(a):W独立地为-O-C(＝O)-、-C(＝S)-O-、-O-C(＝S)-、-C(＝S)-S-、-S-C(＝S)-、-C(＝O)-S-、-S-C(＝O)-、-O-S(＝O)2-O-、-S(＝O)2-O-、-O-S(＝O)2-、-C(＝O)-NR10-、-NR10-C(＝O)-、-O-P(＝O)(-OR10)-O-、-P(＝O)(-OR10)-O-、-O-P(＝O)(-OR10)-；
式IV(b):V独立地为-R11-或-N(CH3)-R11-，其中-R11-独立地为-C1-8烷基-、-芳基-、-杂芳基-、-C1-3烷基-芳基-、-C1-3杂烷基-芳基-、-C1-3烷基-杂芳基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-、-芳基-C1-3烷基-、-芳基-C1-3杂烷基-、-杂芳基-C1-3烷基-、-杂芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-；
式IV(c):-R11-独立地为-芳基-、-杂芳基-、-C1-3烷基-芳基-、-C1-3杂烷基-芳基-、-C1-3烷基-杂芳基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-、-芳基-C1-3烷基-、-芳基-C1-3杂烷基-、-杂芳基-C1-3烷基-、-杂芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基-、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基-、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基-；
式IV(d):-R12为-CH2CH2-G，其中G各自独立地为-Br、-I、-O-S(＝O)2-CH3、-O-S(＝O)2-CH2-C6H5或-O-S(＝O)2-C6H4-CH3；
式IV(e):E独立地选自-N(R12)(R13)、-S-R12和其中-R12为-CH2CH2-G，其中G各自独立地为-Cl、-Br、-I、-O-S(＝O)2-CH3、-O-S(＝O)2-CH2-C6H5或-O-S(＝O)2-C6H4-CH3；且其中R13独立地为-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
式IV(f):W独立地为-C(＝S)-O-、-O-C(＝S)-、-C(＝S)-S-、-S-C(＝S)-、-C(＝O)-S-、-S-C(＝O)-、-O-S(＝O)2-O-、-S(＝O)2-O-、-O-S(＝O)2-、-C(＝O)-NR10-、-NR10-C(＝O)-、-O-P(＝O)(-OR10)-O-、-P(＝O)(-OR10)-O-、-O-P(＝O)(-OR10)-；
式IV(g):-R12为-CH2CH2-G，其中G各自独立地为-O-S(＝O)2-CH3、-O-S(＝O)2-CH2-C6H5或-O-S(＝O)2-C6H4-CH3；
式IV(h):R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的至少一个为如对式IV所定义的-V-W-X-E，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的至少一个选自-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，且其余的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，其中R10如对式IV所定义。
在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物，或与本文提供的基材表面结合的所得部分是非易碎化合物，例如任意式IV、V或VI的化合物的非易碎类似物。这种非易碎化合物可以是如下任意的式VII，VIII或IX的化合物。
式VII为：
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9的至少一个为-V-X-E，其中V、X和E如对式IV所定义，且其余的R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，
其中-R10独立地为H、-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基。
或其盐或立体异构体(吡咯对映异构体和非对映异构体)。
在式VII的一些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。在另外的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8的至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个或至少7个为氢。
在式VII的一些实施方案中，R9为-V-X-E，其中V、X和E如对式IV所定义。在一些实施方案中，V为-NH-R11-。在一些这样的实施方案中，R11为-C1-8烷基-，例如甲基或乙基。在具体的实施方案中，V为-NH-R11-，其中R11是直链-C1-8烷基-。在一些实施方案中，V为-N(CH3)-R11-。在一些这样的实施方案中，R11为-C1-8烷基-，例如甲基或乙基。在具体的实施方案中，V为-N(CH3)-R11-，其中R11是直链-C1-8烷基-。
在式VII的一些实施方案中，X为-R11-，其中-R11-为-C1-8烷基-。在一些实施方案中，部分(moiety)-V-X-为-NH-C1-8烷基-。在一些实施方案中，部分(moiety)-V-X-为-NH-(CH2)-、-NH-(CH2)2-、-NH-(CH2)3-、-NH-(CH2)4-、-NH-(CH2)5-、-NH-(CH2)6-、-NH-(CH2)7-或-NH-(CH2)8-。在一些实施方案中，部分(moiety)-V-X-为-N(CH3)-C1-8烷基-。在一些实施方案中，部分(moiety)-V-X-为-N(CH3)-(CH2)-、-N(CH3)-(CH2)2-、-N(CH3)-(CH2)3-、-N(CH3)-(CH2)4-、-N(CH3)-(CH2)5-、-N(CH3)-(CH2)6-、-N(CH3)-(CH2)7-或-N(CH3)-(CH2)8-。
在式VII的一些实施方案中，E为-N(R12)2，其中R12为-CH2CH2-G。在一些这样的实施方案中，G各自独立地为-Cl、-Br或-I。在一些这样的实施方案中，G部分(moiety)均为-Cl。
在式VII的一些实施方案中，R9为-NH-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。
在一些实施方案中，R9为-NH-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、-NH-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、-NH-(CH2)3-N(CH2CH2Cl)2、-NH-(CH2)4-N(CH2CH2Cl)2、-NH-(CH2)5-N(CH2CH2Cl)2、-NH-(CH2)6-N(CH2CH2Cl)2、-NH-(CH2)7-N(CH2CH2Cl)2或-NH-(CH2)8-N(CH2CH2Cl)2。在一些这样的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
式VIII为：
其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，
其中-R10独立地为H、-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
R20为-H或-CH3；且
R21为-R11-X-E，其中R11、X和E如对式V所定义；
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
在式VIII的一些实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。在另外的实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7、R8中至少1、至少2、至少3、至少4、至少5、至少6或至少7个为氢。
在式VIII的一些实施方案中，R20为H。在一些实施方案中，R20为-CH3。
在式VIII的一些实施方案中，R21为-R11-X-E，其中R11、X和E如对式V所定义。在一些实施方案中，R11为-C1-8烷基-，例如甲基或乙基。在一些实施方案中，R11是直链-C1-8烷基-。在一些实施方案中，R11为-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-,或-(CH2)8-。
在的一些实施方案中式VIII,X为-R11-，其中-R11-为-C1-8烷基-。在一些实施方案中，部分(moiety)-R11-X-为-C1-8烷基-。在一些这样的实施方案中，R20为H。在一些这样的实施方案中，R20为-CH3。在一些实施方案中，部分(moiety)-R11-X-为-(CH2)-、-(CH2)2-、-(CH2)3-、-(CH2)4-、-(CH2)5-、-(CH2)6-、-(CH2)7-,或-(CH2)8-。在一些这样的实施方案中，R20为H。在一些这样的实施方案中，R20为-CH3。
在式VIII的一些实施方案中，E为-N(R12)2，其中R12为-CH2CH2-G。在一些这样的实施方案中，G各自独立地为-Cl、-Br或-I。在一些这样的实施方案中，G部分均为-Cl。
在式VIII的一些实施方案中，R21为-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。在一些实施方案中，R21为-(CH2)-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)2-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)3-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)4-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)5-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)6-N(CH2CH2Cl)2、-(CH2)7-N(CH2CH2Cl)2或-(CH2)8-N(CH2CH2Cl)2。在一些这样的实施方案中，R20为H。在一些这样的实施方案中，R20为-CH3。在任意上述实施方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自可以为氢。
式IX为：
其中R44、R55、R3、R4、R5和R8的至少一个为-V-X-E，其中V、X和E如对式VI所定义；
且其余的R44、R55、R3、R4、R5和R8独立地选自-H、-R10、-O-R10、-NO2、-NH2、-NH-R10、-N(R10)2、-F、-Cl、-Br、-I、-C(＝O)-R10、-C(＝O)-O-R10和-O-C(＝O)-R10，
其中-R10独立地为H、-C1-8烷基、-C1-8杂烷基、-芳基、-杂芳基、-C1-3烷基-芳基、-C1-3杂烷基-芳基、-C1-3烷基-杂芳基、-C1-3杂烷基-杂芳基、-芳基-C1-3烷基、-芳基-C1-3杂烷基、-杂芳基-C1-3烷基、-杂芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3烷基、-C1-3杂烷基-芳基-C1-3杂烷基、-C1-3烷基-杂芳基-C1-3杂烷基或-C1-3杂烷基-杂芳基-C1-3杂烷基；
或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)。
用于本发明组合物和方法的适合的病原体灭活化合物的具体实例是β-丙氨酸,N-(吖啶-9-基),2-[双(2-氯乙基)氨基]乙酯(在本文中也称为“S-303”，其结构如下，包括其盐。
在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物或与本文提供的基材表面结合的所得部分为S-303。在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物或与本文提供的基材表面结合的所得部分为S-303的衍生物。在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物或与本文提供的基材表面结合的所得部分是S-303或其衍生物的非易碎类似物。
在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物或与本文提供的基材表面结合的所得部分为选自以下化合物的化合物，或其盐或立体异构体(包括对映异构体和非对映异构体)：
在上述化合物的一些实施方案中，所述化合物为盐酸盐。在上述化合物的任意一些实施方案中，所述化合物是二盐酸盐。在一些实施方案中，所述化合物为S-197的二盐酸盐。在一些实施方案中，所述化合物为S-220的二盐酸盐。
在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物或与本文提供的基材表面结合的所得部分是任意前述化合物的衍生物(例如水解衍生物)。在一些实施方案中，与本文提供的基材一起处理的化合物或与本文提供的基材表面结合的所得部分是任意前述化合物的非易碎类似物。
本文提供的化合物的衍生物可包括核酸靶向部分，核酸靶向部分的一部分，亲电子部分或亲电子部分的一部分。本文提供的化合物的衍生物可包括a)核酸靶向部分或核酸靶向部分的一部分，和b)亲电子部分或亲电子部分的一部分。本文提供的化合物的衍生物可仅包括核酸靶向部分或核酸靶向部分的一部分。本文提供的化合物的衍生物可仅包括亲电子部分或亲电部分的一部分。当化合物是非易碎的时，其衍生物可包括a)核酸靶向部分或核酸靶向部分的一部分，和b)亲电子部分或亲电子部分的一部分，其中a)和b)通过不能水解的连接基彼此结合。当化合物易碎时，其衍生物可包括a)核酸靶向部分或核酸靶向部分的一部分，和b)亲电子部分或亲电子部分的一部分，其中a)和b)通过可水解的连接基彼此结合。当化合物易碎时，其衍生物可包括a)核酸靶向部分或核酸靶向部分的一部分，其与代表可水解连接基的水解产物的部分结合。当化合物易碎时，其衍生物可包括亲电部分或与表示可水解连接基的水解产物的部分结合的亲电子部分的一部分。代表水解产物的部分包括但不限于任意前述物质的醇，胺羧酸，酯和盐或立体异构体。
本文所述的任意化合物或衍生物可以是与基材反应的原料，以形成本文提供的任意组合物。或者，本文所述的任意化合物或衍生物可以在本文提供的任意组合物中与基材结合。本文提供的任意衍生物可以由其为衍生物的化合物形成，或者可以独立于其为衍生物的化合物制备(例如，合成)等同的分子结构。
应理解，给定的基材单元(例如，单个红细胞，单个聚苯乙烯珠)将含有一个或多个表面结合的部分。表面结合的部分在给定的基材单元上可以是均匀的。或者，表面结合的部分可以在给定的基材单元(例如，红细胞)上是异质的。给定基材单元上的异质性可以由基材单元与多组化合物或衍生物的反应产生。给定基材单元上的异质性也可以由基材单元与均相化合物或衍生物的反应产生，其中化合物或衍生物与基材的反应导致两种或更多种不同的反应产物结合到基材表面。在一些情况下，表面结合的部分可以在任意特定的基材单元上是均质的，但在基材单元(例如，红细胞)的集合上是异质的。这可能是由于不同基材单元与不同化合物或衍生物反应，然后混合所得基材单元以形成表面结合的基材单元(例如红细胞)的异质集合。
在本文所述的任意实施方案中，表面结合部分可以以一定量存在于基材表面上，也称为基材的负载水平。可以基于每个基材单位来描述负载水平，例如，基于每个细胞(例如，红细胞)，每个珠子或每个颗粒(例如，每个细胞的部分，每个珠子的部分，每个颗粒的部分)。在一些实施方案中，基材的负载水平可以为至少约1,000、至少约2,000、至少约3,000、至少约4,000、至少约5,000、至少约6,000、至少约8,000、至少约10,000、至少约12,000、至少约14,000、至少约17,000、至少约20,000、至少约25,000、至少约30,000、至少约35,000、至少约40,000或至少约50,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，基材的负载水平可以不超过约50,000、约75,000或约100,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，基材的负载水平可以在约1,000-约100,000、约1,000-约75,000、约1,000-约50,000、约1,000-约25,000、约5,000-约50,000、约5,000-约25,000、约5,000-约15,000、约8,000-约15,000、约25,000-约50,000、约25,000-约40,000、约25,000-约35,000、约25,000-约30,000、约30,000-约40,000或约30,000-约35,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，基材的负载水平可以约为1,000、约2,000、约3,000、约4,000、约5,000、约6,000、约7,000、约8,000、约9,000、约10,000、约11,000、约12,000、约13,000、约14,000、约15,000、约16,000、约17,000、约18,000、约20,000、约22,000、约24,000、约26,000、约28,000、约30,000,about、约32,000、约35,000、约40,000、约45,000、约50,000、约60,000、约70,000、约80,000、约90,000或约100,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。
可以基于每个单位面积，例如基于每个单位表面积描述负载水平(例如部分/μm2基材表面积)。在一些实施方案中，基材的负载水平可以为至少约5、至少约7、至少约10、至少约15、至少约20、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约50、至少约60、至少约70、至少约80、至少约90、至少约100、至少约120、至少约140、至少约160、至少约180、至少约200、至少约225、至少约250、至少约275、至少约300、至少约350、至少约400、至少约450或至少约500个部分/μm2。在一些实施方案中，基材的负载水平可以不超过约500、约750或约1,000个部分/μm2。在一些实施方案中，基材的负载水平可以在约5-约1,000、约5约750、约5-约500、约20-约500、约20-约400、约20-约200、约20-约100、约30-约200、约30-约100、约50-约100、约100-约500、约100-约400、约140-约400、约140-约300、约140-约250或约180-约300个部分/μm2。在一些实施方案中，基材的负载水平可以约为5、约7、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约110、约120、约130、约140、约150、约160、约170、约180、约190、约200、约225、约250、约275、约300、约325、约350、约375、约400、约425、约450、约475、约500、约600、约700、约800、约900或约1,000个部分/cm2。
负载水平可以在基材单元的集合上基本上是均质的，或者在基材单元的集合上可以是异质的。本文提供的负载水平可表示跨基材单元集合的加权平均负载水平。负载水平可以通过本领域已知的任意方法测量，例如，通过在加入基材之前标记(例如，放射性标记，免疫标记，化学标记，化学发光，荧光标记)化合物，然后在组合化合物与基材后检测标记。或者或另外，可以通过在添加到基材后直接或间接标记(例如，免疫标记，免疫荧光，化学发光)化合物，然后检测标记物来测量负载水平。通常，这种标记与本文提供的试剂盒和方法中使用的化合物分开进行(例如，作为对照，作为标准曲线)，作为确定绝对负荷水平或相对负荷水平的参比物或参比点。这种标记可以使用定量或半定量方法直接定量，或者可以与参考标准比较，例如细胞，珠子或在表面上具有已知量的类似标记分子的其他材料(例如，FACS分析)。
在一些实施方案中，组合物(例如，结合部分的基材)在室温下是稳定的。在一些实施方案中，组合物在冷藏温度(例如2-8℃)下稳定。在一些实施方案中，组合物在0℃和/或低于0℃(例如-20℃)下稳定。在一些实施方案中，组合物在-80℃下稳定。该组合物可适合于中室温下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月或约12个月或以上。该组合物可以适合于在冷藏温度下储存至少约1小时、约2小时、约4,小时、约12,小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月或约12个月或以上。该组合物可以适合于在0℃和/或低于0℃下储存至少约1小时、约2小时、约4,小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约3个月、约6个月、约9个月或约1年或以上。该组合物可以适合于在-80℃下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12,小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约3个月、约6个月、约9个月或约1年或以上。该组合物可以在液体，缓冲液或任意适合的溶液(例如，非反应性溶液)存在下储存。例如，在基材是红细胞的情况下，可以将组合物储存在红细胞添加剂溶液，血库盐水，缓冲悬浮介质或其他适合的溶液中。红细胞添加剂溶液和缓冲悬浮介质在本领域中是已知的。当基材是红细胞时，组合物可以作为约0.3％-约10％RBC、约0.5％-约5％RBC、约0.5％-约1％RBC、约1％-约1.5％RBC、约1.5％-约2％RBC、约2％-约2.5％RBC、约2.5％-约3％RBC、约3％-约3.5％RBC、约3.5％-约4％RBC、约4％-约4.5％RBC、约4.5％-约5％RBC或约0.5％、约1％、约1.5％、约2％、约2.5％、约3％、约3.5％、约4％、约4.5％或约5％RBC的混悬液储存。如果将组合物冷冻用于储存，则还可以加入冷冻保存剂，例如本领域已知的任意冷冻保存剂。
本文提供的组合物(例如，结合部分的基材)的稳定性和适合性可取决于表面结合部分的性质。例如，缺乏可水解连接基的表面结合部分(例如，非易碎化合物或其衍生物，或易碎化合物的水解产物)可比含有可水解连接基的表面结合部分更稳定(例如，易碎化合物或其衍生物)。在一些实施方案中，本文提供的含有缺乏可水解连接基的表面结合部分的组合物在室温下是稳定的。在一些实施方案中，组合物在冷藏温度下稳定。在一些实施方案中，组合物在0℃和/或低于0℃稳定。在一些实施方案中，组合物在-80℃下稳定。该组合物可适合于在室温下储存至少约1小时、约2小时、约4,小时、约12,小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月或约12个月或以上。该组合物可适合于在冷藏温度下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月或约12个月或以上。该组合物可适合于在0℃和/或低于0℃下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约3个月、约6个月、约9个月或约1年或以上。该组合物可适合于在-80℃下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约3个月、约6个月、约9个月或约1年或以上。在一些实施方案中，本文提供的包含含有可水解连接基的表面结合部分的组合物在室温下稳定。在一些实施方案中，该组合物在冷藏温度下稳定。在一些实施方案中，该组合物在0℃和/或低于0℃下稳定。在一些实施方案中，该组合物在-80℃下稳定。该组合物可以适合于在室温下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月或约12个月或以上。该组合物可以适合于在冷藏温度下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约4个月、约6个月、约9个月或约12个月或以上。该组合物可以适合于在0℃和/或低于0℃下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周、约2个月、约3个月、约6个月、约9个月或约1年或以上。该组合物可以适合于在-80℃下储存至少约1小时、约2小时、约4小时、约12小时、约24小时、约48小时、约72小时、约1周、约2周、约3周、约4周、约5周,2个月、约3个月、约6个月,9个月或约1年或以上。
试剂盒
本文提供了各种试剂盒，其包含本文所述的任意组合物(例如，具有表面结合部分的基材)。在一些实施方案中，试剂盒包含说明材料，所述说明材料描述了基材和/或具有表面结合部分的基材的在实施本文所述的任意方法中的用途。试剂盒还可以包含对于实施本文所述的任意方法可能是必需的或有用的其他成分的任意组合。尽管本文描述了示例性试剂盒，但是根据本公开内容，其他有用试剂盒的内容对于技术人员将是显而易见的。
本文提供了用于本文描述的方法检测生物样品中抗体的存在的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒包括含有第一基材的第一容器，其中部分与第一基材的表面结合，并且其中所述部分选自本文所述的化合物及其衍生物；和包含第二基材的第二容器，其中第二基材的表面不含结合的部分。与第一基材表面结合的部分可以是本文所述的任意化合物或衍生物，例如病原体灭活化合物或其衍生物。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分是S-303或其衍生物。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分是S-303或其衍生物的非易碎类似物。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分选自式I，II，III，IV，IV(a)-IV(h)，V，VI，VII，VIII和XI的化合物，及其衍生物，以及任意前述物质的盐和溶剂化物。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分选自式I，II，III，VII，VIII和XI的化合物及其衍生物，以及任意前述物质的盐和溶剂化物。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分选自式IV，V和VI的化合物及其衍生物，以及任意前述物质的盐和溶剂化物。在一些实施方案中，与第一基材表面结合的部分选自式IV(a)-IV(h)化合物及其衍生物，以及任意前述物质的盐和溶剂化物。
第一和第二基材可以由任意适合的基材材料构成，例如本文所述的任意基材材料。第一和第二基材可以由细胞(例如，红细胞)组成。或者，第一和第二基材可以由细胞膜或细胞衍生的材料组成。例如，第一和第二基材可包括衍生自红细胞的膜制剂，例如红细胞重影(即裂解的红细胞膜)。或者，第一和第二基材可以由固体载体组成。如本文所述，固体支持物可由材料(例如，生物的，合成的)或基质组成，包括但不限于聚合物或共聚物(例如，聚酯，聚醚，聚烯烃，聚酰胺，多糖，聚氨酯，苯乙烯和苯乙烯衍生物，聚苯乙烯，纤维素)，塑料，玻璃，金和其他金属等。固体支持物可以二维形式呈现表面结合部分(例如，板，多孔板)或三维形式(例如，细胞，珠子或其他球形或准球形物体)。基材可以是测定板的一部分。特定的固体支持物由一种或多种材料组成，生物样品不会结合或基本上不会结合这些材料。例如，固体支持物可以由抗体(例如，对化合物特异的抗体或其部分)不结合或基本上不结合的材料组成。特别地，固体支持物由抗病原体灭活的红细胞的抗体不结合或基本上不结合的材料组成。通常，第一和第二基材将由相同的材料构成。在一些实施方案中，第一和第二基材可包含固定在固体支持物表面上的红细胞或由其衍生的膜制剂，例如前述固体支持物。红细胞或膜制剂可以以本领域已知的各种方式固定在固体支持物的表面上，例如通过在细胞表面上表达的非血型抗原的抗体或通过使用聚-L-赖氨酸，有机染料或凝集素(例如，对半乳糖基部分具有特异性的凝集素)的粘附。优选地，所使用的试剂与细胞表面相容并且能够在整个测定方法中稳定地保持细胞或膜与固体支持物的结合。
在一些实施方案中，第一和第二基材均为红细胞。第一和第二基材的RBC可以从一个或多个共同供体或不同的血液供体获得。在一些情况下，第一基材的RBC和第二基材的RBC具有一种或多种共同的性质，例如ABO血型(例如，血型O)，Rh型或其他RBC抗原的存在或不存在(例如，常见的RBC抗原，临床上重要的RBC抗原，临床相关的RBC抗原)。在其他情况下，第一基材的RBC和第二基材的RBC在某些性质方面不同，例如ABO血型或其他RBC抗原的存在或不存在(例如，常见的RBC抗原，临床相关的RBC抗原)。。在一些实施方案中，第一和第二基材显示通常存在于生物样品(例如，全血，红细胞，血清或血浆)中的一种或多种抗原。这种抗原的存在可以用作对照以指示生物样品与第一和/或第二基材适当接触。
第一基材(例如，红细胞)上的表面结合部分的负载水平可以是本文所述的任意负载水平，例如足以检测针对化合物或其部分的抗体的负荷水平。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以为至少约1,000、至少约2,000、至少约3,000、至少约4,000、至少约5,000、至少约6,000、至少约8,000、至少约10,000、至少约12,000、至少约14,000、至少约17,000、至少约20,000、至少约25,000、至少约30,000、至少约35,000、至少约40,000或至少约50,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以不超过约50,000、约75,000或约100,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以在约1,000-约100,000、约1,000-约75,000、约1,000-约50,000、约1,000-约25,000、约5,000-约50,000、约5,000-约25,000、约5,000-约15,000、约8,000-约15,000、约25,000-约50,000、约25,000-约40,000、约25,000-约35,000、约25,000-约30,000、约30,000-约40,000或约30,000-约35,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以约为1,000、约2,000、约3,000、约4,000、约5,000、约6,000、约7,000、约8,000、约9,000、约10,000、约11,000、约12,000、约13,000、约14,000、约15,000、约16,000、约17,000、约18,000、约20,000、约22,000、约24,000、约26,000、约28,000、约30,000,about、约32,000、约35,000、约40,000、约45,000、约50,000、约60,000、约70,000、约80,000、约90,000或约100,000个部分/基材单位(例如每个红细胞)。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以为至少约5、至少约7、至少约10、至少约15、至少约20、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约50、至少约60、至少约70、至少约80、至少约90、至少约100、至少约120、至少约140、至少约160、至少约180、至少约200、至少约225、至少约250、至少约275、至少约300、至少约350、至少约400、至少约450或至少约500个部分/μm2。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以不超过约500、约750或约1,000个部分/μm2。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以在约5-约1,000、约5约750、约5-约500、约20-约500、约20-约400、约20-约200、约20-约100、约30-约200、约30-约100、约50-约100、约100-约500、约100-约400、约140-约400、约140-约300、约140-约250或约180-约300个部分/μm2。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以约为5、约7、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40、约45、约50、约55、约60、约65、约70、约75、约80、约85、约90、约95、约100、约110、约120、约130、约140、约150、约160、约170、约180、约190、约200、约225、约250、约275、约300、约325、约350、约375、约400、约425、约450、约475、约500、约600、约700、约800、约900或约1,000个部分/cm2。典型地，第一基材的负载水平足以检测生物样品中的抗体。特别地，该负载水平足以区分来自患者的生物样品，所述患者对来自生物样品的病原体灭活的红细胞(例如通过输注施用的RBC)具有或预期具有免疫应答(例如预先存在的抗体)，该生物样品对病原体灭活的红细胞(例如通过输注施用的RBC)不具有或未预期具有免疫应答(例如预先存在的抗体)。
所述试剂盒可以进一步包括含有第三基材的第三容器，其中所述部分的第一水平与所述第一基材的表面结合，所述部分的第二水平与所述第三基材结合，且第二水平低于第一水平。本领域普通技术人员将理解，该部分的第二水平可以提供体内参考，用于在部分的第一水平检测针对表面结合部分的抗体。因此，在一些实施方案中，第一和第三基材的相对负载水平足以足以区分来自患者的生物样品，所述患者对来自生物样品的病原体灭活的红细胞(例如通过输注施用的RBC)具有或预期具有免疫应答(例如预先存在的抗体)，该生物样品对病原体灭活的红细胞(例如通过输注施用的RBC)不具有或未预期具有免疫应答(例如预先存在的抗体)。第一基材的负载水平可以高至第三基材的负载水平的至少约1.5-倍、约2-倍、约3-倍、约4-倍、约5-倍、约6-倍、约7-倍、约8-倍、约9-倍、约10-倍、约20-倍、约30-倍、约40-倍、约50-倍、约100-倍、约250-倍、约500-倍,1,000-倍、约5,000-倍或约10,000-倍。在一些实施方案中，第一基材的负载水平可以高至第三基材的负载水平约为2-倍-约500-倍、约2-倍-约100-倍、约2-倍-约50-倍、约2-倍-约20-倍、约2-倍-约10-倍、约2-倍-约5-倍、约4-倍-约100-倍、约4-倍约50-倍、约4-倍-约20-倍或约4-倍-约10-倍。在一些实施方案中，第一基材的负载水平为至少约100、约110、约120、约130、约140、约150、约160、约180、约200、约225、约250、约275、约300、约325、约350、约400、约450、约500个部分/μm2，且第三基材的负载水平不超过约100、约90、约80、约70、约60、约50、约40、约30个部分/μm2。在一些实施方案中，第一基材的负载水平约为110-约750、约110-约500、约110-约400、约110-约300、约140-约750、约140-约500、约140-约400、约140-约300、约200-约400、约200-约300个部分/μm2，且第三基材的负载水平在约10-约100、约20-约100、约30-约100、约40-约100、约50-约100个部分/μm2。在一些实施方案中，第一基材的负载水平约为110、约120、约130、约140、约150、约160、约180、约200、约225、约250、约275、约300、约325、约350、约400、约450、约500个部分/μm，且第三基材的负载水平约为10、约20、约30、约40、约50、约60、约70、约80、约90、约100个部分/μm2。在一些实施方案中，第一基材的负载水平为至少约15,000、约17,000、约20,000、约25,000、约30,000、约40,000或约50,000个部分/基材单位(例如红细胞)，且第三基材的负载水平不超过约14,000、约12,000、约10,000、约8,000、约6,000或约5,000个部分/基材单位(例如红细胞)。在一些实施方案中，第一基材的负载水平约为15,000-约75,000、约17,000-约75,000、约20,000-约75,000、约25,000-约75,000、约30,000-约75,000、约40,000-约75,000、约15,000-约50,000、约17,000-约50,000、约20,000-约50,000、约25,000-约50,000、约30,000-约50,000、约40,000-约50,000个部分/基材单位(例如红细胞)，且第三基材的负载水平在约1,000-约15,000、约3,000-约15,000、约5,000-约15,000、约10,000-约15,000、约1,000-约14,000、约3,000-约14,000、约5,000-约14,000、约7,000-约14,000、约10,000-约14,000、约5,000-约12,000、约5,000-约10,000个部分/基材单位(例如红细胞)。在一些实施方案中，第一基材的负载水平约为15,000、约17,000约20,000、约25,000、约30,000、约35,000、约40,000、约45,000、约50,000、约60,000、约75,000个部分/基材单位(例如红细胞)，且第三基材的负载水平约为1,000、约3,000、约5,000、约7,000、约10,000、约12,000、约14,000个部分/基材单位(例如红细胞)。如本文公开的负载水平可以包括绝对量，例如上述举出的那些，或相对负载水平，例如第一基材相对于第三基材的负载水平。
典型地，第三基材将由与第一和/或第二基材相同的材料构成。在一些实施方案中，第一、第二和第三基材是相同的。在第一和第三基材上的表面结合部分的化学结构或结合化学存在异质性的情况下，第三基材可具有与第一基材相同或不同的表面结合部分分布。在一些实施方案中，第一、第二和第三基材由RBC组成，并且这三种基材的RBC从一个或多个共同供体获得。在一些实施方案中，第一、第二和第三基材均显示出一种或多种通常存在于生物样品(例如，全血，红细胞，血清或血浆)中的抗原。
除了如本文所述的主要组之外，可以根据本发明的一些实施方案使用辅助组。辅助组的RBC可以从一个或多个共同供体获得。辅助组的RBC可以从与主要组的RBC相同或不同的供体获得。第二组的表面结合部分可以与第一组的表面结合部分相同或不同。辅助组的表面结合部分可以与第一组的表面结合部分相同，并且两个组的负载水平可以相同或不同。第一和第二组的基材可以显示另外的抗原，例如通常在生物样品(例如全血，红细胞，血清或血浆)中发现的一种或多种抗原。第一组的另外的抗原可以与第二组的另外的抗原相同或不同。
本文提供的试剂盒的第一、第二和任选的第三容器可以由适于储存第一、第二和任选的第三基材的任意材料制成，其可以具有或不具有表面结合的部分。容器可以由玻璃，塑料或任意适合的聚合材料制成。容器可以是无菌的，并且可以进一步提供用于保持容器内容物无菌的环境。可以理解，容器适于在适当的温度(例如室温，冷藏温度，冷冻温度，0℃，-20℃，-80℃)下储存其内容物。
本文提供的试剂盒可以进一步含有添加剂溶液，缓冲剂或可以用于实施本文提供的任意方法的其他溶液。添加剂溶液，缓冲剂或其他溶液可用于储存试剂盒的基材(例如含有表面结合部分或不含表面结合部分的基材)。添加剂溶液，缓冲剂或其他溶液可用于使试剂盒的基材(例如，含有表面结合部分或不含表面结合部分的基材)与一种或多种生物样品接触的过程。根据添加剂溶液，缓冲剂或其他溶液的预期用途的不同，这些成分可以与试剂盒的基材(例如，含有表面结合部分的基材或不含表面结合部分或基材)预混合，或者可以将它们单独包含在试剂盒中。
本文提供的试剂盒可以进一步含有另外的成分(例如，试剂)，用于在接触生物样品时或之后可视化或以其他方式确定与表面结合部分结合的抗体的存在或不存在。这可以包括抗人球蛋白或诱导凝集的其他材料，以及可用于可视化方法(如IAT或DAT)的任意其他成分。在某些实施方案中，本文提供的试剂盒可含有适合用作对照(例如标准品)的材料。
如本领域技术人员将容易理解的，还提供了包含前述试剂盒的系统。例如，该系统还包括可以根据本文描述的方法使用的自动化设备。
制备方法
本文提供了制备一组基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的方法。在一些实施方案中，该方法包含提供第一和第二样品，每个样品包含基材；并且用本文提供的化合物或衍生物处理第一样品的基材。在一些实施方案中，该方法包含提供包含聚合物颗粒(例如珠子，微球)的第一和第二样品；并且用本文提供的化合物或衍生物处理第一样品的聚合物颗粒。在一些实施方案中，该方法包含提供包含RBC的第一和第二样品；并且用本文提供的化合物或衍生物处理第一样品的RBC。在一些实施方案中，第一和第二样品的RBC获自相同的血液供体。处理步骤可以进一步包括另外的试剂，例如酸，碱，适合的催化剂，或可以促进化合物或衍生物与基材反应的任意其他试剂。在处理步骤中可以使用适合的溶剂(例如水)或缓冲液(例如RBC添加剂溶液，血库盐水)。处理步骤可以导致所述部分与第一样品的基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的表面共价或非共价结合。在一些实施方案中，所得表面结合部分具有与用于处理第一样品的基材(例如聚合物颗粒，RBC)的化合物或衍生物相同或基本相同的化学结构。在一些实施方案中，所得表面结合部分具有与用于处理第一样品的基材(例如聚合物颗粒，RBC)的化合物或衍生物基本上不同的化学结构。例如，所得的表面结合部分可以是一类反应的水解产物。由于第二样品未经过化合物处理，因此它与第一样品一起生成一个组，其中包括具有表面结合部分的第一基材样品(如聚合物颗粒，RBC)和不含表面结合部分的第二基材样品(如聚合物颗粒，RBC)。
在一些实施方案中，制备一组基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的方法可以进一步包括使第一和第二样品与一种或多种另外的抗原(例如一种或多种抗原)反应的一个或多个步骤，所述一种或多种抗原通常在生物样品(例如，全血，红细胞，血清或血浆)中发现。与一种或多种另外的抗原的反应可以在用化合物或衍生物处理之前，同时或之后进行。如果适合，溶剂和另外的试剂可以用于与一种或多种另外的抗原的反应。
用于制备一组基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的方法可以进一步包括在用化合物或衍生物处理基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的步骤之后洗涤第一和第二样品的一个或多个步骤。该方法还可以进一步包括猝灭步骤，以促进从基材处理混合物中除去过量的游离化合物或衍生物。在一些实施方案中，猝灭剂可以是谷胱甘肽。猝灭步骤可以在洗涤步骤之前，同时或之后进行。在某些实施方案中，该方法还包括将第一和第二样品(例如，聚合物颗粒，RBC)悬浮在缓冲的悬浮介质中的步骤。在某些实施方案中，该方法还包括在洗涤后向第一和第二样品中加入冷冻保存剂的步骤。
在一些实施方案中，将第二样品与第一样品类似或相同地处理，不同之处在于从处理步骤中省略化合物或衍生物。这可以用于协调第一和第二样品的特性，使得第二样品提供适合的对照。
该方法可以进一步包括以与处理第一样品相同的方式用化合物或衍生物处理包含基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的第三样品，使得用该化合物或衍生物处理导致与第一样品的基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的表面结合的所述部分的水平相比，第三样品的基材(例如，聚合物颗粒，RBC)表面结合的所述部分的水平较低。因此，第一水平的所述部分与第一样品的基材(例如，聚合物颗粒，RBC)表面结合，并且第二水平低于第一水平。在一些实施方案中，这可以通过用不同量的化合物或衍生物处理第三样品的基材(例如聚合物颗粒，RBC)而不是第一样品的基材(例如聚合物颗粒，RBC)来实现。在一些实施方案中，这可以替代地通过用化合物或衍生物处理第三样品的基材(例如聚合物颗粒，RBC)比处理第一样品的RBC的时间更短的时间来实现。在另一个替代方案中，第三样品用比用于处理第一样品的化合物或衍生物更少量的化合物或衍生物处理，并且对第三样品进行处理的时间比处理第一样品的时间短。此外，本文描述的关于第一样品的任意另外的制备步骤也可以对第三样品进行。
在一些实施方案中，使第三样品与一种或多种另外的抗原反应，例如通常在生物样品(例如，全血，红细胞或血浆)中发现的一种或多种抗原。与一种或多种另外的抗原的反应可以在用化合物或衍生物处理之前，同时或之后进行。如果适合，溶剂和另外的试剂可以与一种或多种另外的抗原一起用于反应。
在一些实施方案中，在用化合物或衍生物处理基材(例如，聚合物颗粒，RBC)的步骤之后，对第三样品进行一个或多个洗涤步骤。该方法还可以进一步包括猝灭步骤，以促进从处理混合物中除去过量的游离化合物或衍生物。猝灭步骤可以在洗涤步骤之前，同时或之后进行。在某些实施方案中，该方法还包括将第三样品(例如，聚合物颗粒，RBC)悬浮在缓冲的悬浮介质中的步骤。在某些实施方案中，该方法还包括在洗涤后向第三样品中加入冷冻保存剂的步骤。
在一些实施方案中，第一、第二和第三样品被相同地处理，不同的是，相对第一样品来说，第三样品的处理步骤中使用的化合物或衍生物的量更少，并且从第二样品的处理步骤中省略化合物或衍生物。
可以通过本领域已知的任意合适的方法评估基材上表面结合部分的同一性和负载水平。例如，可以通过在添加到基材之前标记(例如，放射性标记，免疫标记，化学标记，荧光标记，化学发光)化合物，然后在将化合物与基材组合之后检测标记来确定负载水平。或者或另外，可以通过在添加到基材后直接或间接标记(例如，免疫标记，免疫荧光，化学发光)化合物然后检测标记物来测量加载水平。通常，这种标记与本文提供的试剂盒和方法中使用的化合物分开进行(例如，作为对照，作为标准曲线)，作为确定绝对负荷水平或相对负荷水平的参比物或参比点。这种标记可以使用定量或半定量方法直接定量，或者可以与参考标准比较，例如细胞，珠子或在表面上具有已知量的类似标记分子的其他材料(例如，FACS分析)。可以监测基材中是否存在至少一定水平的特定得到的表面结合部分。可以监测基材中所有得到的表面结合部分的至少一定负载水平的存在。
可以根据本领域已知的任意方法对第一、第二和任选的第三样品进行灭菌。灭菌可以在用化合物或衍生物处理之前或之后进行。
可以包装一组包括第一、第二和任选的第三样品的基材(例如，聚合物颗粒，RBC)用于储存。可以使用本领域已知的任意适合的储存容器(例如，盒，袋，罐，管)。在一些实施方案中，储存容器是无菌的。在一些实施方案中，需要冷冻。例如，当基材结合部分含有如上所述的可水解连接基时，可以冷冻所述组中的样品用于储存。在另外的实施方案中，可以不冷冻所述组中的样品。
使用方法
本文提供了使用本文描述的试剂盒测试生物样品的方法。在不同实施方案中，本文所述的试剂盒中的基材包含聚合物颗粒，基质，测定板的一部分，或细胞，例如RBC。
测试样品的方法
本文提供了测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法，该方法包含：a)提供包含血清或血浆的样品；b)使样品与基材接触，其中某部分(moiety)与基材表面结合；并且其中所述部分选自任意式I，II，III，IV，IV(a)-IV(h)，V，VI，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述物质的盐或立体异构体；c)测定来自样品的抗体和基材的表面结合部分之间的结合量，其中抗体和表面结合部分之间的结合表明抗体结合该化合物。
在一些实施方案中，测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法包含：a)提供包含血清或血浆的样品；b)使样品与聚合物颗粒(例如珠子，微球体)，基质或测定板的一部分接触，其中某部分(moiety)结合到聚合物颗粒的表面(例如珠子，微球体)，基质或测定板的一部分；其中所述部分选自任意式I，II，III，IV，IV(a)-IV(h)，V，VI，VII，VIII和IX的化合物及其衍生物，或任意前述物质的盐或立体异构体；c)测定来自样品的抗体与聚合物颗粒的表面结合部分(例如珠子，微球体)，基质或测定板的一部分之间的结合量，其中抗体与表面结合部分之间的结合表明抗体结合该化合物。
在一些实施方案中，测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法包含：a)提供包含血清或血浆的样品；b)使样品与红细胞接触，其中某部分(moiety)与红细胞表面结合；其中所述部分选自任意式I，II，III，IV(a)-IV(h)，VII，VIII和IX的化合物，及其衍生物，或任意上述者的盐或立体异构体；c)测定来自样品的抗体和红细胞的表面结合部分之间的结合量，其中抗体和表面结合部分之间的结合表明抗体结合该化合物。
本文提供了用于测试样品中是否存在结合化合物的抗体的方法。在一些实施方案中，该方法包含提供包含血清或血浆的样品，并使样品与基材(例如RBC)接触，其中所述部分与基材表面结合，然后测定来自样品的抗体和基材的表面结合部分之间的结合量。
在一些实施方案中，测定步骤包括将来自样品的抗体和表面结合部分之间的结合量与参比物进行比较，其中与参考物相比增加的结合量表明样品中存在抗体。在一些实施方案中，参比物是与具有表面结合部分的基材相同的基材，不同的是不存在表面结合部分。
在一些实施方案中，测定步骤包括测定来自样品的抗体和不含表面结合部分的基材(例如RBC)之间的结合量。该方法可以进一步包括测定与样品相比，来自样品的抗体和具有较少量表面结合部分的基材(例如RBC)之间的结合量。
在一些实施方案中，测定来自样品的抗体与基材(例如RBC)之间的结合量的步骤包括使已添加样品的基材与抗人球蛋白接触，并且测定步骤包括测定凝集量。可以使用常规的测量方法，例如固相红细胞粘附测定(例如Galileo System,Immucor)或IAT和DAT(例如凝胶卡,ID-Card DiaScreen凝胶卡,Bio-Rad)。
在一些实施方案中，本文提供的测试方法用于确定受试者是否预期对病原体灭活的红细胞输注具有免疫应答。可用于输注到受试者中的示例性病原体灭活的红细胞组合物描述于US 6,270,952，US 2003/0113704，US 7,655,392和WO 2009/126786中，其各自的内容通过引用并入本文。在一些实施方案中，该方法中使用的基材上的表面结合部分与用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物或这种病原体灭活化合物的衍生物相同。在另外的实施方案中，该方法中使用的基材上的表面结合抗原是用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物的类似物或这种类似物的衍生物。例如，如果用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物是易碎化合物(例如，S-303)，则病原体灭活化合物的非易碎类似物可用作基材上的表面结合部分。非易碎类似物可以表现出与病原体灭活化合物相似的抗体结合表位，并且与病原体灭活化合物本身一样，可以表现出与抗体相似的结合亲和力。使用非易碎类似物作为表面结合部分的优点可以是含有非易碎表面结合部分的基材可以比含有易碎表面结合部分的基材更稳定。因此，含有非易碎表面结合部分的基材可以适合在室温或冷藏温度下储存，而含有相应易碎表面结合部分的基材可能需要冷藏库储存以避免表面结合部分的降解(例如通过易碎连接基的水解)。
在一些实施方案中，样品来自需要输注红细胞的受试者。例如，样品可以是血清样品，血浆样品或来自需要输注红细胞的受试者的其他血液样品。在一些实施方案中，测试本文提供的样品的方法包括从受试者获得样品的第一步。可以通过本领域已知的任意方法从受试者获得样品，例如通过从手臂或手指的标准血液抽取。
可以使用本文提供的任意组合物或试剂盒进行该方法。当将组合物或试剂盒储存在冰箱中时，在将试剂盒或组合物的基材(例如红细胞)与样品接触之前，将组合物或试剂盒从冰箱中取出并解冻。该试剂盒可以在冰箱中或在室温下解冻。
提供输血的方法
本文提供了向有需要的受试者提供输血的方法，其中输血包括用病原体灭活化合物(例如，本文所述的病原体灭活化合物)处理的RBC。该方法包括提供来自受试者的样品(例如，血清样品或血浆样品)；使样品与基材(例如，聚合物颗粒，RBC)接触，其中所述部分与基质表面结合，测定与参比相比，来自样品的抗体与样品的表面结合部分之间的结合量，确定抗体和表面结合部分之间的结合量是否高于参比物；并且，根据确定结合量不高于参比物的测定结果，向受试者提供病原体灭活的红细胞的输注。表面结合部分可以与用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物相同。或者，表面结合部分可以是用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物的衍生物(例如水解衍生物)。在另一个替代方案中，表面结合部分可以是用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物的类似物。例如，如果用于处理用于输注的红细胞的病原体灭活化合物含有易碎的连接基(例如，S-303)，则表面结合的部分可以是其非易碎的类似物或这种非易碎的类似物的衍生物。
在一些方面，该方法包括提供来自受试者的样品(例如，血清样品或血浆样品)；使样品与基材(例如，聚合物颗粒，RBC)接触，其中所述部分与基材表面结合，测定与参比物相比来自样品的抗体与样品的表面结合部分之间的结合量，确定抗体和表面结合部分之间的结合量是否高于参比物；并且，根据确定结合量高于参比物，提供未经病原体灭活的红细胞输注给受试者。表面结合部分可以与用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物相同。或者，表面结合部分可以是用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物的衍生物(例如水解衍生物)。在另一个替代方案中，表面结合部分可以是用于处理输注用红细胞的病原体灭活化合物的类似物。例如，如果用于处理输注用红细胞病原体灭活化合物含有易碎的连接基(例如，S-303)，则表面结合的部分可以是其非易碎的类似物或这种非易碎的类似物的衍生物。
在一些实施方案中，该方法包含提供包含血清或血浆的样品，并使样品与基材(例如，聚合物颗粒，RBC)接触，其中所述部分结合到基质的表面，随后是测定来自样品的抗体和基材的表面结合部分之间的结合量。
在一些实施方案中，测定步骤包括将来自样品的抗体和表面结合部分之间的结合量与参比物进行比较，其中与参比物相比增加的结合量表明样品中存在抗体。在一些实施方案中，参比物是与具有表面结合部分的基材相同的基材，不同的是不存在表面结合部分。
在一些实施方案中，测定步骤包括测定来自样品的抗体与不含表面结合部分的基材(例如聚合物颗粒，RBC)之间的结合量。该方法可以进一步包括测定与样品相比，来自样品的抗体与具有较少量表面结合部分的基材(例如聚合物颗粒，RBC)之间的结合量。
在一些实施方案中，测定来自样品的抗体与基材(例如，聚合物颗粒，RBC)之间的结合量的步骤包括使已添加样品的基材与抗人球蛋白接触，并且测定步骤包括测定凝集量。可以使用常规的测量方法，例如IAT和DAT。
在一些实施方案中，使用不含表面结合部分的基材作为参比物，确定抗体与基材的表面结合部分的结合量不高于参比物。在一些实施方案中，使用具有较低负载水平的表面结合部分的基材作为参比物，确定抗体与基材的表面结合部分的结合量不高于参比物。仅在存在或不存在表面结合部分或相对于表面结合部分的负载水平，使参比基材与测试基材不同可能是有利的。
可以采集来自受试者的样品，并且在预期输注红细胞之前即刻或在5分钟，10分钟，30分钟，1小时，2小时，4小时，12小时或24小时，48小时，72小时，1周，2，周，3周，4周或5周或更长时间期限内测试抗体与表面结合部分的结合。如果受试者在一段时间内接受多于一次的红细胞输注，则可以在每次输注红细胞(例如，病原体灭活的红细胞)之前，或仅在第一次输注红细胞(例如，病原体灭活的红细胞)之前，或在医学专业人员确定的周期性基础上，根据本文所述的方法测试来自受试者的样品。
具体实施方案
通过下列非限制性实施例进一步示例本发明。
实施例1:红细胞组的制备
使用S-303的红细胞组
制备S-303处理的和对照试剂RBC以包括1)对照RBC，其中没有来自S-303的结合加合物，2)用S-303和谷胱甘肽(GSH)猝灭剂处理的RBC，在产生高水平的来自S-303的结合加合物的条件下，和3)用S-303和谷胱甘肽(GSH)猝灭剂处理的RBC，在产生低水平的来自S-303的结合加合物的条件下。更具体地，通过标准血液采集技术从人供体获得RBC单位，并且将每个RBC单位分成三个匹配的100mL的较小(亚)单位样品，然后将其用于在三种不同处理条件下制备试剂细胞组。为了产生高水平的结合加合物，将三种匹配的RBC单位之一在处理溶液(参见例如美国专利号7,655,392和8,900,805)中与约0.2mM S-303和约2mM GSH混合，在室温下孵育过夜，用0.9％NaCl洗涤，然后在-80℃下在Glycerolyte中冷冻。为了产生低水平的结合加合物，将三种匹配的RBC单位之一在具有约0.2mM S-303和约20mM GSH的处理溶液中混合，在室温下孵育过夜，用0.9％NaCl洗涤，然后在-80℃下在Glycerolyte中冷冻。对照RBC未经S-303/GSH处理，但用0.9％NaCl洗涤，然后在-80℃下在Glycerolyte中冷冻。
评估试剂组以确定与具有较低水平表面加合物的RBC试剂相比，具有较高水平表面加合物的RBC试剂是否在抗体检测中提供更高的灵敏度。对于该评估，滴定了先前表征的针对S-303的吖啶部分的单克隆抗体(由用KLH-缀合的S-197，一种S-303的非易碎类似物，免疫接种小鼠产生)，且各种mAb稀释液用于凝胶卡测定(例如，ID-MTS TM OrthoDiagnostics，Raritan，NJ)。针对低S-303加合物RBC测试的抗吖啶S-197mAb滴定导致中值滴度(最高稀释度的倒数)为8,000。相反，针对高S-303加合物RBC测试的抗吖啶S-197mAb稀释液导致中值滴度为32,000。这些数据表明高加合物RBC提供了针对S-303RBC的吖啶部分的抗体的更明确检测。
非易碎类似物化合物的结合稳定性
进行研究以评估化合物S-220与RBC基材的结合，化合物S-220是S-303的非易碎类似物。该研究还比较了S-220化合物的表面结合部分的稳定性与类似结合的易碎S-303的稳定性。更具体地，将谷胱甘肽(GSH)猝灭剂和S-220化合物分别以2.0mM和0.2mM的浓度加入人RBC基材中，然后在37℃或4℃孵育过夜。为了比较，分别以2.0mM和0.2mM的浓度将GSH猝灭剂和易碎的S-303化合物类似地加入到人RBC中，并在37℃或4℃孵育过夜。非易碎的S-220和易碎的S-303化合物均包含吖啶部分作为其结构的一部分。孵育后，将GSH/S-220和GSH/S-303处理的RBC用小鼠单克隆(mAb)或家兔多克隆(polyAb)抗吖啶抗体(也在4℃或37℃)染色，并使用标准方法、通过流式细胞术分析样品的抗体结合(定量为MFI)。使用化合物S-197产生mAb和多Ab抗吖啶抗体用于免疫接种。
如图1-6所示，非易碎的S-220和易碎的S-303处理的RBC都可以达到相似的结合水平。此外，在处理的RBC的单克隆抗体和多克隆抗体结合之间观察到一些差异，两种抗体的数据表明在37℃下S-303与RBC的结合不如S-220结合RBC时稳定，这启示在本文提供的方法和试剂盒中使用不易碎化合物的有益性。
红细胞组
通过标准血液采集技术从O型供体获得红细胞(RBC)。细胞表达抗原C，c，E，e，K，k，Fya，Fyb，Jka，Jkb，M，N，S，s，P1，Lea和Leb的一种或多种。将每单位RBC(约350mL)分成体积大致相等的3个匹配的较小单位(例如，亚单位)(指定为亚单位A，B和C)。亚单位A用S-303的不易碎类似物(例如，S-220，S-197)和2mM谷胱甘肽处理，然后用0.9％NaCl洗涤，产生“高”水平的表面结合的加合物。来自相同供体单位的亚单位B用相同的S-303的非易碎类似物和20mM谷胱甘肽处理，然后在0.9％NaCl中洗涤，产生“低”水平的表面结合的加合物。通过改变非易碎的类似物和/或谷胱甘肽浓度，可以得到其他水平的表面结合的加合物。亚单位C不用S-303的非易碎类似物或谷胱甘肽处理。亚单位C用0.9％NaCl洗涤。在本文所述的处理步骤之后，将每个亚单位悬浮在缓冲的悬浮介质中(例如3％RBC)并转移到一个或多个储存容器中。任选地，将Glycerolite加入每个亚单位A，B和C中，然后将亚单位储存在-80℃。亚单位A，B和C构成主要组(Primary Panel)。
按照与主要组类似方方式制备次级组(Secondary Panel)，不同之处在于亚单位A，B和C的RBC各自来自不同的O型供体。
实施例2:患者血清样品的测试
将实施例1的一个、两个或三个主面组解冻至室温。每个主要组包含来自单一O型供体的亚单位A，B和C。将来自患者的血清和抗人球蛋白添加到每个主要组的每个亚单位A，B和C中。监测每个主要组的亚单位的凝集并指定为0、1、2或3的评分数，其中0代表无凝集，而1、2和3代表逐渐增大的凝集量。
如果对于每个主要组的亚单位A，B和C的抗体评分为0(即，没有观察到凝集)，则该样品被视为“非反应性的”，并且可以对患者施用RBC输注，该RBC已经用S-303作为病原体灭活化合物处理。
如果在主要组中观察到任意RBC的抗体评分≥1，则如实施例1中所述，患者样品使用次要小组进行另外的测试。如果所有三个主要组的评分≥表面结合加合物(即亚单位A或亚单位B)的“高”或“低”水平，且相应的未处理对照RBC(即亚单位C)评分为0，则将样品分类为“初始反应性”。如果次级组评分显示与任意主要组相同的反应性模式，则将样品分类为“确认反应性”。根据需要给予患者未经S-303处理的RBC输注。
如果对于一个或两个但不是所有三个主要组的“高”或“低”水平的表面结合的加合物(即，亚单位A或亚单位B)的抗体评分≥1，并且相应的未处理试剂对照RBC在所有主要组中显示0评分，则该样品被分类为“不确定反应性”。如果次级组结果显示没有来自具有表面结合加合物的RBC的凝集，则样品被分类为“非反应性的”，并且可以给患者施用已经用S-303作为病原体灭活化合物处理的RBC的输注。
如果三个主要组的结果显示三个中的三个，三个中的两个，或三个中的一个与具有表面结合的加合物的RBC和相应的对照未处理的RBC的反应性，则该样品被视为具有针对内在红细胞抗原的“推定同种异体反应性”抗体。
Claims (93)
1.试剂盒，包含：
(a)包含第一基材的第一容器，其中部分(moiety)结合至第一基材的表面，并且其中所述部分选自任意式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体；和
(b)包含第二基材的第二容器，其中第二基材的表面不含结合部分。
2.权利要求1的试剂盒，其中所述部分选自任意式I、II、III、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
3.权利要求1的试剂盒，其中所述部分选自式VIII的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
4.权利要求3的试剂盒，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
5.权利要求3或4的试剂盒，其中R20为H。
6.权利要求3-5任一项的试剂盒，其中R21为-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。
7.权利要求1的试剂盒，其中所述部分选自任意式IV、V和VI的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
8.权利要求7的试剂盒，其中所述部分选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
9.权利要求1的试剂盒，其中所述部分为S-303、S-303的衍生物或任意上述者的盐。
10.权利要求1的试剂盒，其中所述部分为S-303的非易碎类似物或其盐。
11.权利要求10的试剂盒，其中S-303的非易碎类似物为S-197或S-220。
12.权利要求1-11任一项的试剂盒，其中结合至基材表面的部分以至少约10,000个部分/基材单位的负载水平存在。
13.权利要求1-11任一项的试剂盒，其中结合至基材表面的部分以至少约50个部分/μm2的负载水平存在。
14.权利要求1-13任一项的试剂盒，其中第一和第二基材各自包含聚合物颗粒、基质或测定板的一部分。
15.权利要求1-13任一项的试剂盒，其中第一基材包含红细胞，其中第二基材包含红细胞，并且其中第一和第二基材的红细胞得自一个或多个共同供体。
16.权利要求1-15任一项的试剂盒，还包含含有第三基材的第三容器，其中第一水平的所述部分结合至第一基材的表面，其中第二水平的所述部分结合至第三基材的表面，并且其中第二水平低于第一水平。
17.权利要求16的试剂盒，其中结合至第一基材的表面的部分的第一水平是结合至第三基材表面的部分的第二水平的至少3-倍高。
18.权利要求16或权利要求17的试剂盒，其中第三基材包含聚合物颗粒、基质或测定板的一部分。
19.权利要求16或权利要求17的试剂盒，其中第三基材包含红细胞，并且其中第一、第二和第三基材的红细胞得自一个或多个共同供体。
20.权利要求15或权利要求19的试剂盒，其中第一基材包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个样品，其中第一基材的每个样品包含得自不同血液供体的红细胞，并且其中第二基材包含相应的样品，该相应的样品包含来自每个不同血液供体的红细胞。
21.权利要求20的试剂盒，其中2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个样品代表多种血型。
22.制备一组红细胞的方法，该方法包含：
a)提供包含红细胞的第一和第二样品；和
b)用化合物处理第一样品的红细胞，其中用化合物的处理导致某部分(moiety)结合至第一样品的红细胞表面；
其中不用所述化合物处理第二样品，由此产生包含具有表面结合部分的红细胞的第一样品和不含表面结合部分的红细胞的第二样品的组；且
其中所述化合物选自任意式I、II、III、IV(a)-IV(h)、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
23.权利要求22的方法，其中所述化合物选自任意式I、II、III、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
24.权利要求22的方法，其中所述化合物选自式VIII的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
25.权利要求24的方法，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
26.权利要求24或25的方法，其中R20为H。
27.权利要求24-26任一项的方法，其中R21为-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。
28.权利要求22的方法，其中所述化合物选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
29.权利要求22的方法，其中所述化合物为S-303的衍生物或其盐。
30.权利要求22的方法，其中所述化合物为S-303的非易碎类似物或其盐。
31.权利要求22的方法，其中所述表面结合部分为S-303的衍生物或其盐。
32.权利要求22的方法，其中所述表面结合部分为S-303的非易碎类似物或其盐。
33.权利要求22-32任一项的方法，其中结合至红细胞的表面的部分以至少约10,000个部分/红细胞的负载水平存在。
34.权利要求22-32任一项的方法，其中结合至红细胞的表面的部分以至少约50个部分/μm2的负载水平存在。
35.权利要求22-34任一项的方法，其中第一和第二样品的红细胞得自相同的血液供体。
36.权利要求22-35任一项的方法，还包含，在步骤(b)之后：
洗涤第一和第二样品。
37.权利要求22-36任一项的方法，还包含，在步骤(b)之后：
向第一和第二样品中添加冷冻保存剂；和
冷冻第一和第二样品。
38.权利要求22-36任一项的方法，还包含，在步骤(b)之后，在冷藏温度下储存第一和第二样品。
39.权利要求22-37任一项的方法，包含在步骤(b)之后，在低于约-20℃下储存第一和第二样品。
40.权利要求22-39任一项的方法，还包含：
用所述化合物处理包含红细胞的第三样品，其中用所述化合物处理第三样品的红细胞导致第二水平的所述部分结合至第三样品的红细胞表面，其中第一水平的所述部分结合至第一样品的红细胞表面，并且其中第二水平低于第一水平。
41.权利要求40的方法，还包含在用所述化合物处理第三样品后：
洗涤第三样品。
42.权利要求40或权利要求41的方法，还包含在用所述化合物处理第三样品后：
将冷冻保存剂添加到第三样品中；和
冷冻第三样品。
43.权利要求40或权利要求41的方法，还包含在用所述化合物处理第三样品后，在冷冻温度下储存第三样品。
44.测试样品是否存在结合化合物的抗体的方法，该方法包含：
a)提供包含血清或血浆的样品；
b)使样品接触红细胞，其中某部分(moiety)结合至红细胞表面；并且其中所述部分选自任意式I、II、III、IV(a)-IV(h)、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体；
c)测定来自样品的抗体与红细胞的表面结合部分之间的结合量，其中抗体与表面结合部分之间的结合表明抗体结合该化合物。
45.权利要求44的方法，其中所述化合物选自任意式I、II、III、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
46.权利要求44的方法，其中所述化合物选自式VIII的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
47.权利要求46的方法，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
48.权利要求46或47的方法，其中R20为H。
49.权利要求46-48任一项的方法，其中R21为-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。
50.权利要求44的方法，其中所述化合物选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
51.权利要求44的方法，其中所述化合物为S-303的衍生物或其盐。
52.权利要求44的方法，其中所述化合物为S-303的非易碎类似物或其盐。
53.权利要求52的方法，其中S-303的非易碎类似物为S-197或S-220。
54.权利要求44的方法，其中所述表面结合部分为S-303的衍生物或其盐。
55.权利要求44的方法，其中所述表面结合部分为S-303的非易碎类似物或其盐。
56.权利要求44-55任一项的方法，其中结合至红细胞表面的部分以至少约10,000个部分/红细胞的负载水平存在。
57.权利要求44-55任一项的方法，其中结合至红细胞表面的部分以至少约50个部分/μm2的负载水平存在。
58.权利要求44-57任一项的方法，其中所述化合物和表面结合部分相同。
59.权利要求44-57任一项的方法，其中所述化合物和表面结合部分不同。
60.权利要求44-59任一项的方法，其中步骤(c)包含比较来自样品的抗体与表面结合部分之间的结合量与参比物，并且其中与参比物相比的结合量增加表明样品中存在抗体。
61.权利要求60的方法，其中步骤(c)包含测定来自样品的抗体与不含表面结合部分的红细胞之间的结合量。
62.权利要求60的方法，其中步骤(c)还包含测定来自样品的抗体与具有减少量的表面结合部分的红细胞之间的结合量。
63.权利要求44-62任一项的方法，其中步骤(b)包含使样品和红细胞接触抗人球蛋白，并且其中步骤(c)包含测定凝集量。
64.给患者提供红细胞输血的方法，其中红细胞输血包含用病原体灭活的化合物处理的红细胞，该方法包含：
a)提供包含来自患者的血清或血浆的样品；
b)使样品与第一基材接触，其中某部分(moiety)结合至基材表面；
c)测定与参比物相比来自样品的抗体与第一基材的表面结合部分之间的结合量，其中抗体与表面结合部分之间的结合表明该抗体结合用病原体灭活的化合物处理的红细胞；
d)确定结合量是否高于参比物；和
f)根据结合量不高于参比物的测定结果，给患者提供输血。
65.权利要求64的方法，其中所述表面结合部分选自任意式I、II、III、IV、V、VI、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
66.权利要求64的方法，其中所述表面结合部分选自任意式I、II、III、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
67.权利要求64的方法，其中所述表面结合部分选自式VIII的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
68.权利要求67的方法，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
69.权利要求67或68的方法，其中R20为H。
70.权利要求67-69任一项的方法，其中R21为-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。
71.权利要求64的方法，其中所述表面结合部分选自任意式IV、V和VI的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
72.权利要求71的方法，其中所述表面结合部分选自任意式IV(a)-IV(h)的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
73.权利要求64的方法，其中所述表面结合部分为S-303、S-303的衍生物或任意上述者的盐。
74.权利要求64的方法，其中所述表面结合部分为S-303的非易碎类似物或其盐。
75.权利要求74的方法，其中S-303的非易碎类似物为S-197或S-220。
76.权利要求64-75任一项的方法，其中所述化合物和表面结合部分相同。
77.权利要求64-75任一项的方法，其中所述化合物和表面结合部分不同。
78.权利要求64-77任一项的方法，其中第一基材包含聚合物颗粒、基质或测定板的一部分。
79.权利要求64-77任一项的方法，其中第一基材包含红细胞。
80.权利要求64-79任一项的方法，其中步骤(c)包含测定来自样品的抗体与不含表面结合部分的第二基材之间的结合量。
81.权利要求80的方法，其中第二基材与第一基材相同。
82.权利要求64-80任一项的方法，其中步骤(c)还包含测定来自样品的抗体与和第一基材相比具有较少量的表面结合部分的第三基材之间的结合量。
83.权利要求82的方法，其中第三基材与第一基材相同。
84.权利要求64-83任一项的方法，其中步骤(b)包含使样品和基材与抗人球蛋白接触，并且其中步骤(c)包含测定凝集量。
85.权利要求64-84任一项的方法，其中结合至基材表面的部分与病原体灭活的化合物不同。
86.组合物，包含人红细胞，其中选自任意式I、II、III、IV(a)-IV(h)、VI、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体的部分结合至人红细胞表面。
87.权利要求86的组合物，其中所述部分选自任意式I、II、III、VII、VIII和IX的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
88.权利要求86的组合物，其中所述部分选自式VIII的化合物及其衍生物或任意上述者的盐或立体异构体。
89.权利要求88的组合物，其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8各自为氢。
90.权利要求88或89的组合物，其中R20为H。
91.权利要求88-90任一项的组合物，其中R21为-C1-8烷基-N(CH2CH2Cl)2。
92.权利要求86的组合物，其中所述部分是S-303或其盐的非易碎类似物。
93.权利要求92的组合物，其中S-303的非易碎类似物为S-197或S-220。
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