CN110241040A - 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用 - Google Patents

一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110241040A
CN110241040A CN201910460622.5A CN201910460622A CN110241040A CN 110241040 A CN110241040 A CN 110241040A CN 201910460622 A CN201910460622 A CN 201910460622A CN 110241040 A CN110241040 A CN 110241040A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cys
thr
gly
ala
south korea
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910460622.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110241040B (zh
Inventor
赵晓燕
张新建
周方园
周红姿
吴晓青
张广志
谢雪迎
范素素
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences)
Original Assignee
Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences) filed Critical Ecology Institute Of Shandong Academy Of Sciences (the Sino-Japanese Friendship Biotechnology Research Center Shandong Academy Of Sciences)
Priority to CN201910460622.5A priority Critical patent/CN110241040B/zh
Publication of CN110241040A publication Critical patent/CN110241040A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110241040B publication Critical patent/CN110241040B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G7/00—Botany in general
    • A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas

Abstract

本发明提供了一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用，该韩国假单胞菌为韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12，于2018年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC NO.16845。该韩国假单胞菌对植物的根系、苗木生长具有促生作用，可提高作物的产量，另外，可对设施蔬菜土壤中的有机氮进行分解，提高作物对土壤中有机氮的利用率。

Description

一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和 促生长的应用
技术领域
本发明涉及生物利用技术领域，具体为一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用。
背景技术
设施农业是在环境相对可控条件下，采用工程技术手段，进行动植物高效生产的一种现代农业方式。随着设施农业的发展，设施农业土壤中化肥和农药的使用加剧，不仅导致土壤的生物环境退化严重，而且加重了土壤的氮磷污染，导致土壤中有机氮含量丰富但作物却不能利用。氨化细菌是能分解有机氮化物而产生氨的一类微生物，它们在自然界氮循环中起着重要作用，土壤中的有机氮化物如蛋白质、多肽、核酸、肽聚糖、几丁质等必须经过氨化细菌的分解，将氨释放出来，才能供植物利用，因此，土壤中氨化细菌的种群数量以及活性决定土壤中有机氮化物的利用效率。
近年来，随着人们对蔬菜内在品质和安全质量的重视，有机菜园得到快速发展，菜园中有机肥的施用量不断增加，而由于生物环境的退化，导致过量的有机肥并不能被有效吸收，造成了环境的污染、土壤性能退化。
目前关于氨化细菌的研究主要集中在水体，对土壤中氨化细菌的研究较少，缺少对土壤中氨化细菌种属的鉴定以及促进有机氮转化、提高利用率方面的系统研究。
发明内容
鉴于此，本发明提供了一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用，该菌株具有较高的氨化活性，可对设施蔬菜土壤中的有机氮进行分解，提高作物对土壤中有机氮的利用率。该韩国假单胞菌对设施蔬菜的根系、苗木生长具有促生作用，可显著提高作物的产量。
本发明的技术方案如下：
一株韩国假单胞菌，该韩国假单胞菌为韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12，于2018年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院，保藏编号为：CGMCC NO.16845。
上述韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12，其16S rDNA序列如下：
GACTAGCTACTTCTGGTGCAACCCACTCCCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGACATTCTGATTCGCGATTACTAGCGATTCCGACTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGGACTACGATCGGTTTTGTGGGATTAGCTCCACCTCGCGGCTTGGCAACCCTTTGTACCGACCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGCCGTAAGGGCCATGATGACTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCCTTAGAGTGCCCACCATTACGTGCTGGTAACTAAGGACAAGGGTTGCGCTCGTTACGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAGCCATGCAGCACCTGTCTCAATGTTCCCGAAGGCACCAATCCATCTCTGGAAAGTTCATTGGATGTCAAGGCCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCATTTGAGTTTTAACCTTGCGGCCGTACTCCCCAGGCGGTCAACTTAATGCGTTAGCTGCGCCACTAAGAGCTCAAGGCTCCCAACGGCTAGTTGACATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTTGCTCCCCACGCTTTCGCACCTCAGTGTCAGTATCAGTCCAGGTGGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTTCCTATATCTACGCATTTCACCGCTACACAGGAAATTCCACCACCCTCTACCATACTCTAGCTTGCCAGTTTTGGATGCAGTTCCCAGGTTGAGCCCGGGGATTTCACATCCAACTTAACAAACCACCTACGCGCGCTTTACGCCCAGTAATTCCGATTAACGCTTGCACCCTCTGTATTACCGCGGCTGCTGGCACAGAGTTAGCCGGTGCTTATTCTGTCGGTAACGTCAAAATTGCAGAGTATTAATCTACAACCCTTCCTCCCAACTTAAAGTGCTTTACAATCCGAAGACCTTCTTCACACACGCGGCATGGCTGGATCAGGCTTTCGCCCATTGTCCAATATTCCCCACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGACCGTGTCTCAGTTCCAGTGTGACTGATCATCCTCTCAGACCAGTTACGGATCGTCGCCTTGGTGAGCCATTACCTCACCAACTAGCTAATCCGACCTAGGCTCATCTGATAGCGCAAGGCCCGAAGGTCCCCTGCTTTCTCCCGTAGGACGTATGCGGTATTAGCGTTCCTTTCGAAACGTTGTCCCCCACTACCAGGCAGATTC。
经过16S rDNA序列鉴定，本发明的韩国假单胞菌分类命名为Pseudomonaskoreensis，短杆状，革兰氏阴性菌；在LB固体培养基上为隆起、波状、湿润的菌落；该氨化菌的生理生化特性为：能分解蔗糖、果糖、甘露醇、丙三醇、乙醇、葡萄糖、精氨酸、丙氨酸以及肌醇，但不分解乳糖、木糖和柠檬酸；能水解淀粉，能液化明胶；该菌株正常生长的pH范围为6-8。
上述韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用。
在上述应用中，具体为将韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12进行液体发酵，获得的发酵液在设施蔬菜土壤中应用，提高有机氮转化和利用效率。
进一步的，上述发酵液的制备过程中，使用的培养基为LB培养基。
进一步的，发酵液的制备方法，步骤如下：
(1)取保藏的韩国假单胞菌WB12菌株划线于LB固体培养基上，25-30℃倒置活化培养1d，制得活化后的菌株；
(2)取步骤(1)活化后的菌株接种于LB液体培养基中，在温度为25-30℃、转速为150-200rpm的条件下，摇床培养6-8h，制得种子液；
(3)取步骤(2)制得的种子液，接种量为5-10％，接种于LB液体培养基中，在温度为25-30℃、转速为150-200rpm的条件下，扩大培养2d，制得韩国假单胞菌WB12发酵液。
进一步的，在步骤(1)中，所述的LB固体培养基的组分，包括蛋白胨10g、氯化钠10g、酵母提取物5g、琼脂10g，溶解并混匀，调整pH至7.0-7.2，加水定容至1000mL，121℃灭菌15-20min，放冷至室温。
进一步的，在步骤(2)中，所述的LB液体培养基的组分，包括蛋白胨5g、氯化钠5g、酵母提取物2.5g、葡萄糖10g，溶解并混匀，调整pH至7.0-7.2，加水定容至1000mL，121℃灭菌15-20min，放冷至室温。
上述韩国假单胞菌在设施蔬菜促生方面的应用，通过盆栽实验可以看出，韩国假单胞菌发酵液可提高蔬菜根系长度和植株高度。
一种用于提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的氨化菌剂，包括韩国假单胞菌WB12的发酵液、防腐剂和悬浮助剂，所述防腐剂与WB12发酵液的重量体积比2-5:100，悬浮助剂与WB12发酵液的重量体积比0.05-0.15:100。
上述用于提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的氨化菌剂，制备方法为：先将悬浮助剂在搅拌条件下加入WB12菌的发酵液中,待硫酸铵全部溶解后,在搅拌的条件下加入防腐剂搅拌均匀即可。
对比现有技术，本发明的有益效果在于：
1、本发明提供的韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12具有良好有机氮分解能力，可应用于氮肥过量的设施蔬菜土壤中。
2、将本发明提供的韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12应用于设施蔬菜土壤中，可将土壤中的有机氮转化为蔬菜能够吸收利用的氨态氮，减少氮肥的施入量，促进蔬菜的生长、提高蔬菜产量6-9％，节约种植成本。
3、将本发明提供的韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12应用于氮肥过量的设施蔬菜土壤中，减轻了菜地土壤有机氮过多造成的土壤板结、氮肥过量等污染问题，对于改善农田生态环境具有重大意义。
4、将本发明提供的韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis WB12)应用于植物促生中，可提高蔬菜根系长度和植株高度。
附图说明
为更清楚地说明背景技术或本发明的技术方案，下面对现有技术或具体实施方式中结合使用的附图作简单地介绍；显而易见地，以下结合具体实施方式的附图仅是用于方便理解本发明实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图；
图1是将本发明提供的韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12应用于植物促生中的照片；
图2是采用纳氏试剂比色法测定土壤中氨态氮质量浓度的标准曲线图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明实施例及附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例1
韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12的分离培养、筛选纯化及鉴定：
(1)取样：样品为山东省兰陵县鸿强蔬菜产销专业合作社温室大棚根际土壤，将采集的土壤放入封口袋并记录。
(2)分离培养和筛选纯化：
S1，土壤样品带回实验室后，秤取10g，在无菌工作台上倒入一个盛有90mL无菌水并装有玻璃珠的三角瓶中，置于28℃、160rpm摇床振荡30min，从而使土壤中菌体、芽孢或孢子均匀分散，充分振荡后静置5min，将上清液作为10-1稀释度的土壤稀释液；
S2，以10-1稀释度的土壤稀释液为母液，采用梯度稀释法用无菌水将其逐级稀释，获得10-4、10-5、10-6三个梯度的稀释液；
S3，将S2提供的三个梯度稀释液，分别用0.1mL移液器装上无菌枪头，吸取0.1mL的稀释菌液，滴加在有氨化培养基的平板上，立即用无菌三角架将其涂布均匀，使培养基表面无水流，每个稀释度涂布三个平皿；接种后将平皿倒置，于28℃条件下恒温培养，48h后观察，记录观察菌落的生长情况；
S4，根据菌落数量、形态、颜色、表面状况等特征，选取有代表性的菌落用无菌接种环将单个菌落挑出，同时按照无菌操作要求在氨化分离培养基上划线培养直至纯化；
其中，氨化分离培养基：蛋白胨5g，氯化钠0.125g，硫酸亚铁0.10g，磷酸氢二钾0.5g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.5g，蒸馏水1000mL，pH7.0；
(3)产氨筛选
将上述分离纯化到的菌株，分别接种到装有液体培养基的试管中摇培，以不接菌的液体培养基试管为对照管，每个处理3次重复；然后，将试管于28℃、150rpm摇床振荡，每天观察，根据培养基的混浊度、菌膜、沉淀、气味、颜色等变化判断试管中是否有氨化细菌(与对照管比较)；3天后，用奈氏试剂定性测试有无氨的产生；
测定方法为：从培养试管中吸取培养液滴加于白瓷板孔中，然后向白瓷板孔中滴加奈氏试剂，当出现棕红色或浅褐色沉淀时，即表示培养基内有氨的产生，滴加纳氏试剂后菌株均呈现出不同程度的黄色，颜色程度越深活性越强；
(4)菌株鉴定：
将步骤(3)筛选的产氨菌株使用LB培养基培养12h后，取1mL菌液5000g离心10min收集菌体，使用DNA提取试剂盒提取菌株基因组DNA；
采用细菌16SrDNA通用引物1492R(5’-GGCTCGAGCGGCCGCCCGGGTTACCTTGTTACGACTT-3’)和8F(5’-GCGGATCCGCGGCCGCTGCAGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)以基因组DNA为模板对细菌16S rDNA序列进行扩增，扩增后PCR产物送上海生工生物有限公司测序，使用细菌模式种数据库EzBioCloud进行鉴定时，菌株WB12序列与韩国假单胞菌的相似性达99％，将该菌株鉴定为Pseudomonas koreensis.。该菌株已经保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：中国，北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2018年11月30日，保藏号：CGMCC No.16845。
实施例2
韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12发酵液，制备步骤如下：
(1)取保藏的韩国假单胞菌WB12菌株划线于LB固体培养基上，28℃倒置活化培养1d，制得活化后的菌株；其中，LB固体培养基的组分，包括蛋白胨10g、氯化钠10g、酵母提取物5g、琼脂10g，溶解并混匀，调整pH至7.1，加水定容至1000mL，121℃灭菌20min，放冷至室温；
(2)取步骤(1)活化后的菌株接种于LB液体培养基中，在温度为28℃、转速为180rpm的条件下，摇床培养8h，制得种子液；其中，LB液体培养基的组分，包括蛋白胨5g、氯化钠5g、酵母提取物2.5g、葡萄糖10g，溶解并混匀，调整pH至7.1，加水定容至1000mL，121℃灭菌17min，放冷至室温；
((3)取步骤(2)制得的种子液，接种量为8％，接种于LB液体培养基中，在温度为28℃、转速为175rpm的条件下，扩大培养2d，制得韩国假单胞菌WB12发酵液。
实施例3
实施例2获得的发酵液在设施蔬菜促生方面的应用。
取韩国假单胞菌WB12发酵液(实施例2获得)、2％碳酸氢铵(质量体积比)和LB液体培养基CK(实施例2中的LB液体培养基)各1mL置于容器中，分别浸泡辣椒种子24h，然后分别播种于无菌土盆钵(土取自田间普通土，121度灭菌2小时)，每盆播种30粒，每种处理播种5盆；出苗后每盆定植取10株苗，从播种到第42d后，对辣椒苗拍照(见附图1)，并对辣椒苗根的平均长度、苗的平均株高、苗的平均株重进行计算，见表1：
表1盆栽辣椒42d数据统计
处理 幼根长度(cm) 平均株重(g/棵) 平均株高(cm)
2％碳酸氢铵 5.30±0.19a 4.90±0.25a 25.20±0.91a
WB12发酵液 4.79±0.30ab 4.56±0.16ab 23.85±2.17ab
LB液体培养基CK 4.18±0.28b 3.68±0.20b 21.96±0.78b
注：同列数据后附相同字母者表示经Duncan’s新复极差法检验在0.05水平差异不显著。
从表1中可以看出，幼根长度、平均株重和平均株高的采用WB12和2％碳酸氢铵处理与采用CK处理结果之间差异均显著，但2％碳酸氢铵和韩国假单胞菌WB12两个处理之间的幼根长度、平均株重和平均株高差异均不显著，说明碳酸氢铵和韩国假单胞菌WB12两个处理对辣椒的促生长作用效果相当；
结合附图1，附图1中，左一为CK处理辣椒苗的生长状态，左二为WB12发酵液处理辣椒苗的生长状态，左三为2％碳酸氢铵处理辣椒苗的生长状态，可见，韩国假单胞菌WB12发酵液处理后辣椒植株的根系变长、植株高度增加，表明韩国假单胞菌WB12菌株对于辣椒苗的根系、株高、株重均具有促生效果。
实施例4
韩国假单胞菌WB12在提高设施蔬菜(温室黄瓜大棚)土壤有机氮利用率方面的应用。
一种用于提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的氨化菌剂，包括韩国假单胞菌WB12的发酵液(实施例2获得)、防腐剂和悬浮助剂，其中，防腐剂与WB12发酵液的重量体积比3.5:100，悬浮助剂与WB12发酵液的重量体积比0.10:100；防腐剂选用苯甲酸钠，悬浮助剂选用硫酸铵；
上述氨化菌剂的制备方法为：先将悬浮助剂在搅拌条件下加入WB12菌的发酵液中,待硫酸铵全部溶解后,在搅拌的条件下加入防腐剂搅拌均匀即可。
将上述氨化菌剂对温室栽培的黄瓜进行灌根处理，每棵黄瓜20mL；另外设立两个对照组，阴性对照使用清水处理，阳性对照正常使用碳酸氢铵施肥，每个处理150棵黄瓜；氨化菌剂处理组和清水对照组每周处理一次，连续处理三次，施肥组正常施肥。
在整个生长季结束后，采用奈氏试剂比色法测定土壤中氨态氮含量，比较三个处理间差异，氨态氮的含量见表3；
采用纳氏试剂比色法进行氨化活性测定，过程为：将各处理土样进行富集培养，至菌液浓度OD600＝0.5，向50mL容量瓶中加入1mL菌液和1mL浓度为500mg/mL酒石酸钾钠溶液，充分混匀，接着加入1.5mL纳氏试剂，用水定容至刻度线，混匀静置10min，在波长420nm处测定光密度值，以无氨水做参比(铵的测定方法参照国标GB7479-87)；
表2标准曲线原始数据
氯化铵标样浓度(μg/mL) OD<sub>600</sub>均值
0.1 0.006
0.4 0.024
1 0.06
1.5 0.089
2 0.118
以表2提供的氯化铵标样浓度梯度为横坐标，以OD600为纵坐标，绘制标准曲线图(见图2)，获得线性回归方程为y＝0.059x+0.0004，R2＝0.9999。
表3土壤中氨态氮含量测定结果
处理 NH4-N(mg/mL)
WB12氨化菌剂 0.436±0.12ab
碳酸氢铵 0.451±0.88a
清水 0.152±0.75b
注：同列数据后附相同字母者表示经Duncan’s新复极差法检验在0.05水平差异不显著。
结果表明，菌剂处理组与肥料处理组黄瓜产量相当，均高于清水处理组，说明两个处理对黄瓜的促生长作用相当；土壤氨态氮检测表明，肥料处理组和菌剂处理组氨态氮含量无显著差异，说明菌剂处理组与肥料处理组氨态氮含量相当。因此，韩国假单胞菌WB12土壤氨化菌剂显著提高了设施大棚菜地植物对土壤有机氮的利用率，使用氨化菌剂WB12可以达到少施氮肥的目标。
序列表
<120> 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1318
<212> PRT
<213> 2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum
<400> 1
Gly Ala Cys Thr Ala Gly Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Gly
1 5 10 15
Thr Gly Cys Ala Ala Cys Cys Cys Ala Cys Thr Cys Cys Cys Ala Thr
20 25 30
Gly Gly Thr Gly Thr Gly Ala Cys Gly Gly Gly Cys Gly Gly Thr Gly
35 40 45
Thr Gly Thr Ala Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Cys Gly Gly Gly Ala
50 55 60
Ala Cys Gly Thr Ala Thr Thr Cys Ala Cys Cys Gly Cys Gly Ala Cys
65 70 75 80
Ala Thr Thr Cys Thr Gly Ala Thr Thr Cys Gly Cys Gly Ala Thr Thr
85 90 95
Ala Cys Thr Ala Gly Cys Gly Ala Thr Thr Cys Cys Gly Ala Cys Thr
100 105 110
Thr Cys Ala Cys Gly Cys Ala Gly Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Gly
115 120 125
Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Cys Gly Ala Thr Cys Cys Gly Gly Ala
130 135 140
Cys Thr Ala Cys Gly Ala Thr Cys Gly Gly Thr Thr Thr Thr Gly Thr
145 150 155 160
Gly Gly Gly Ala Thr Thr Ala Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Cys Thr
165 170 175
Cys Gly Cys Gly Gly Cys Thr Thr Gly Gly Cys Ala Ala Cys Cys Cys
180 185 190
Thr Thr Thr Gly Thr Ala Cys Cys Gly Ala Cys Cys Ala Thr Thr Gly
195 200 205
Thr Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Gly Thr Gly Thr Ala Gly Cys Cys
210 215 220
Cys Ala Gly Gly Cys Cys Gly Thr Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala
225 230 235 240
Thr Gly Ala Thr Gly Ala Cys Thr Thr Gly Ala Cys Gly Thr Cys Ala
245 250 255
Thr Cys Cys Cys Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Gly
260 265 270
Gly Thr Thr Thr Gly Thr Cys Ala Cys Cys Gly Gly Cys Ala Gly Thr
275 280 285
Cys Thr Cys Cys Thr Thr Ala Gly Ala Gly Thr Gly Cys Cys Cys Ala
290 295 300
Cys Cys Ala Thr Thr Ala Cys Gly Thr Gly Cys Thr Gly Gly Thr Ala
305 310 315 320
Ala Cys Thr Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Gly Gly Thr Thr
325 330 335
Gly Cys Gly Cys Thr Cys Gly Thr Thr Ala Cys Gly Gly Gly Ala Cys
340 345 350
Thr Thr Ala Ala Cys Cys Cys Ala Ala Cys Ala Thr Cys Thr Cys Ala
355 360 365
Cys Gly Ala Cys Ala Cys Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Gly Ala
370 375 380
Cys Ala Gly Cys Cys Ala Thr Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys Cys Thr
385 390 395 400
Gly Thr Cys Thr Cys Ala Ala Thr Gly Thr Thr Cys Cys Cys Gly Ala
405 410 415
Ala Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Ala Thr Cys Cys Ala Thr Cys Thr
420 425 430
Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Thr Thr Cys Ala Thr Thr Gly Gly
435 440 445
Ala Thr Gly Thr Cys Ala Ala Gly Gly Cys Cys Thr Gly Gly Thr Ala
450 455 460
Ala Gly Gly Thr Thr Cys Thr Thr Cys Gly Cys Gly Thr Thr Gly Cys
465 470 475 480
Thr Thr Cys Gly Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Ala
485 490 495
Thr Gly Cys Thr Cys Cys Ala Cys Cys Gly Cys Thr Thr Gly Thr Gly
500 505 510
Cys Gly Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys Gly Thr Cys Ala Ala Thr Thr
515 520 525
Cys Ala Thr Thr Thr Gly Ala Gly Thr Thr Thr Thr Ala Ala Cys Cys
530 535 540
Thr Thr Gly Cys Gly Gly Cys Cys Gly Thr Ala Cys Thr Cys Cys Cys
545 550 555 560
Cys Ala Gly Gly Cys Gly Gly Thr Cys Ala Ala Cys Thr Thr Ala Ala
565 570 575
Thr Gly Cys Gly Thr Thr Ala Gly Cys Thr Gly Cys Gly Cys Cys Ala
580 585 590
Cys Thr Ala Ala Gly Ala Gly Cys Thr Cys Ala Ala Gly Gly Cys Thr
595 600 605
Cys Cys Cys Ala Ala Cys Gly Gly Cys Thr Ala Gly Thr Thr Gly Ala
610 615 620
Cys Ala Thr Cys Gly Thr Thr Thr Ala Cys Gly Gly Cys Gly Thr Gly
625 630 635 640
Gly Ala Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Gly Gly Thr Ala Thr Cys Thr
645 650 655
Ala Ala Thr Cys Cys Thr Gly Thr Thr Thr Gly Cys Thr Cys Cys Cys
660 665 670
Cys Ala Cys Gly Cys Thr Thr Thr Cys Gly Cys Ala Cys Cys Thr Cys
675 680 685
Ala Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Thr Ala Thr Cys Ala Gly Thr Cys
690 695 700
Cys Ala Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys Gly Cys Cys Thr Thr Cys Gly
705 710 715 720
Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr Cys
725 730 735
Cys Thr Ala Thr Ala Thr Cys Thr Ala Cys Gly Cys Ala Thr Thr Thr
740 745 750
Cys Ala Cys Cys Gly Cys Thr Ala Cys Ala Cys Ala Gly Gly Ala Ala
755 760 765
Ala Thr Thr Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr Ala
770 775 780
Cys Cys Ala Thr Ala Cys Thr Cys Thr Ala Gly Cys Thr Thr Gly Cys
785 790 795 800
Cys Ala Gly Thr Thr Thr Thr Gly Gly Ala Thr Gly Cys Ala Gly Thr
805 810 815
Thr Cys Cys Cys Ala Gly Gly Thr Thr Gly Ala Gly Cys Cys Cys Gly
820 825 830
Gly Gly Gly Ala Thr Thr Thr Cys Ala Cys Ala Thr Cys Cys Ala Ala
835 840 845
Cys Thr Thr Ala Ala Cys Ala Ala Ala Cys Cys Ala Cys Cys Thr Ala
850 855 860
Cys Gly Cys Gly Cys Gly Cys Thr Thr Thr Ala Cys Gly Cys Cys Cys
865 870 875 880
Ala Gly Thr Ala Ala Thr Thr Cys Cys Gly Ala Thr Thr Ala Ala Cys
885 890 895
Gly Cys Thr Thr Gly Cys Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr Gly Thr Ala
900 905 910
Thr Thr Ala Cys Cys Gly Cys Gly Gly Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly
915 920 925
Cys Ala Cys Ala Gly Ala Gly Thr Thr Ala Gly Cys Cys Gly Gly Thr
930 935 940
Gly Cys Thr Thr Ala Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Gly Gly Thr Ala
945 950 955 960
Ala Cys Gly Thr Cys Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Cys Ala Gly Ala
965 970 975
Gly Thr Ala Thr Thr Ala Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Ala Cys Cys
980 985 990
Cys Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Cys Ala Ala Cys Thr Thr Ala Ala
995 1000 1005
Ala Gly Thr Gly Cys Thr Thr Thr Ala Cys Ala Ala Thr Cys Cys Gly
1010 1015 1020
Ala Ala Gly Ala Cys Cys Thr Thr Cys Thr Thr Cys Ala Cys Ala Cys
1025 1030 1035 1040
Ala Cys Gly Cys Gly Gly Cys Ala Thr Gly Gly Cys Thr Gly Gly Ala
1045 1050 1055
Thr Cys Ala Gly Gly Cys Thr Thr Thr Cys Gly Cys Cys Cys Ala Thr
1060 1065 1070
Thr Gly Thr Cys Cys Ala Ala Thr Ala Thr Thr Cys Cys Cys Cys Ala
1075 1080 1085
Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Cys Gly Thr Ala Gly
1090 1095 1100
Gly Ala Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Cys Cys Gly Thr Gly Thr Cys
1105 1110 1115 1120
Thr Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Gly Ala Cys
1125 1130 1135
Thr Gly Ala Thr Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly Ala
1140 1145 1150
Cys Cys Ala Gly Thr Thr Ala Cys Gly Gly Ala Thr Cys Gly Thr Cys
1155 1160 1165
Gly Cys Cys Thr Thr Gly Gly Thr Gly Ala Gly Cys Cys Ala Thr Thr
1170 1175 1180
Ala Cys Cys Thr Cys Ala Cys Cys Ala Ala Cys Thr Ala Gly Cys Thr
1185 1190 1195 1200
Ala Ala Thr Cys Cys Gly Ala Cys Cys Thr Ala Gly Gly Cys Thr Cys
1205 1210 1215
Ala Thr Cys Thr Gly Ala Thr Ala Gly Cys Gly Cys Ala Ala Gly Gly
1220 1225 1230
Cys Cys Cys Gly Ala Ala Gly Gly Thr Cys Cys Cys Cys Thr Gly Cys
1235 1240 1245
Thr Thr Thr Cys Thr Cys Cys Cys Gly Thr Ala Gly Gly Ala Cys Gly
1250 1255 1260
Thr Ala Thr Gly Cys Gly Gly Thr Ala Thr Thr Ala Gly Cys Gly Thr
1265 1270 1275 1280
Thr Cys Cys Thr Thr Thr Cys Gly Ala Ala Ala Cys Gly Thr Thr Gly
1285 1290 1295
Thr Cys Cys Cys Cys Cys Ala Cys Thr Ala Cys Cys Ala Gly Gly Cys
1300 1305 1310
Ala Gly Ala Thr Thr Cys
1315

Claims (10)

1.一株韩国假单胞菌，其特征在于，该韩国假单胞菌为韩国假单胞菌(Pseudomonaskoreensis)WB12，于2018年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为：CGMCC NO.16845。
2.将权利要求1所述的韩国假单胞菌提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用。
3.如权利要求2所述的韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用，其特征在于，将韩国假单胞菌(Pseudomonas koreensis)WB12进行液体发酵，获得的发酵液在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用。
4.如权利要求3所述的韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用，其特征在于，在所述发酵液的制备过程中，使用的培养基为LB培养基。
5.如权利要求3或4所述的韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用，其特征在于，发酵液的制备方法，步骤如下：
(1)取保藏的韩国假单胞菌WB12菌株划线于LB固体培养基上，25-30℃倒置活化培养1d，制得活化后的菌株；
(2)取步骤(1)活化后的菌株接种于LB液体培养基中，在温度为25-30℃、转速为150-200rpm的条件下，摇床培养6-8h，制得种子液；
(3)取步骤(2)制得的种子液，接种量为5-10％，接种于LB液体培养基中，在温度为25-30℃、转速为150-200rpm的条件下，扩大培养2d，制得韩国假单胞菌WB12发酵液。
6.如权利要求5所述的韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用，其特征在于，在步骤(1)中，所述的LB固体培养基的组分，包括蛋白胨10g、氯化钠10g、酵母提取物5g、琼脂10g，溶解并混匀，调整pH至7.0-7.2，加水定容至1000mL，121℃灭菌15-20min，放冷至室温。
7.如权利要求5所述的韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用，其特征在于，在步骤(2)中，所述的LB液体培养基的组分，包括蛋白胨5g、氯化钠5g、酵母提取物2.5g、葡萄糖10g，溶解并混匀，调整pH至7.0-7.2，加水定容至1000mL，121℃灭菌15-20min，放冷至室温。
8.如权利要求3所述的韩国假单胞菌在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长中的应用，其特征在于，所述韩国假单胞菌WB12发酵液在设施蔬菜促生方面的应用。
9.一种用于提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的氨化菌剂，包括韩国假单胞菌WB12的发酵液、防腐剂和悬浮助剂，所述防腐剂与WB12发酵液的重量体积比2-5:100，悬浮助剂与WB12发酵液的重量体积比0.05-0.15:100。
10.如权利要求9所述的用于提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的氨化菌剂，其特征在于，制备方法为：先将悬浮助剂在搅拌条件下加入WB12菌的发酵液中,待硫酸铵全部溶解后,在搅拌的条件下加入防腐剂搅拌均匀即可。
CN201910460622.5A 2019-05-30 2019-05-30 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用 Active CN110241040B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910460622.5A CN110241040B (zh) 2019-05-30 2019-05-30 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910460622.5A CN110241040B (zh) 2019-05-30 2019-05-30 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110241040A true CN110241040A (zh) 2019-09-17
CN110241040B CN110241040B (zh) 2022-03-08

Family

ID=67885512

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910460622.5A Active CN110241040B (zh) 2019-05-30 2019-05-30 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110241040B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111057666A (zh) * 2019-12-20 2020-04-24 辽宁省微生物科学研究院 一株假单胞菌及其筛选方法与应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106916764A (zh) * 2017-02-15 2017-07-04 中国农业科学院烟草研究所 一株耐酸性的韩国假单胞菌clp‑7及其应用
CN109517770A (zh) * 2019-01-25 2019-03-26 黑龙江大学 一株好氧型兼性自养反硝化细菌及其应用
US20190124917A1 (en) * 2016-04-21 2019-05-02 Koch Agronomic Services, Llc Microbial inoculant compositions and uses thereof
RU2694565C1 (ru) * 2018-08-09 2019-07-16 Федеральное Государственное Бюджетное Научное Учреждение Уфимский Федеральный Исследовательский Центр Российской Академии Наук (Уфиц Ран) Средство для стимуляции роста и повышения устойчивости к болезням растений гороха

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20190124917A1 (en) * 2016-04-21 2019-05-02 Koch Agronomic Services, Llc Microbial inoculant compositions and uses thereof
CN106916764A (zh) * 2017-02-15 2017-07-04 中国农业科学院烟草研究所 一株耐酸性的韩国假单胞菌clp‑7及其应用
RU2694565C1 (ru) * 2018-08-09 2019-07-16 Федеральное Государственное Бюджетное Научное Учреждение Уфимский Федеральный Исследовательский Центр Российской Академии Наук (Уфиц Ран) Средство для стимуляции роста и повышения устойчивости к болезням растений гороха
CN109517770A (zh) * 2019-01-25 2019-03-26 黑龙江大学 一株好氧型兼性自养反硝化细菌及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SAHAR EL-NAHRAWY等: "Effectiveness of Co-inoculation with Pseudomonas koreensis and Rhizobia on Growth, Nodulation and Yield of Common Bean (Phaseolus vulgaris L.)", 《MICROBIOLOGY RESEARCH JOURNAL INTERNATIONAL》 *
王泽等: "菠菜内生固氮菌的分离及其功能特性研究", 《中国土壤与肥料》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111057666A (zh) * 2019-12-20 2020-04-24 辽宁省微生物科学研究院 一株假单胞菌及其筛选方法与应用
CN111057666B (zh) * 2019-12-20 2022-03-01 辽宁省微生物科学研究院 一株韩国假单胞菌及其筛选方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110241040B (zh) 2022-03-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110616179B (zh) 一株铜绿假单胞菌dgnk-jl2及其应用
CN103396971B (zh) 一株洋葱伯克霍尔德菌及其应用
CN106244504B (zh) 具有降解有机磷和抑菌作用的枯草芽孢杆菌及其菌剂
CN107586743B (zh) 一株林木根际高效溶磷巨大芽胞杆菌及应用
CN104726378B (zh) 采用强化耐盐微生物菌剂提高盐胁迫草坪草保护酶活性的方法
CN104630087B (zh) 一种玉米根际促生菌ym4及其应用
CN104630090A (zh) 一种玉米根际促生菌ym3及其应用
CN104630094A (zh) 一种花生根际促生菌hs10及其应用
CN104630092A (zh) 一种烟草根际促生菌yc9及其应用
CN107628894A (zh) 提高土壤肥力的复合生物菌剂及其制备方法和应用
CN104789494B (zh) 采用强化垃圾堆肥微生物菌剂提高草皮抗盐性的方法
CN109182194A (zh) 一株促进小冠花生长的杨凌根瘤菌及其培养方法与应用
CN105400717A (zh) 一株橡胶树根际促生菌株hbrm-16及其应用
CN110218677B (zh) 短小芽孢杆菌s1419及其在解钾上的应用
CN114958683B (zh) 一株芽孢杆菌及其应用
CN105154353B (zh) 一种枯草芽孢杆菌及其在温室大棚土壤修复中的应用
CN110241040A (zh) 一株韩国假单胞菌及其在提高设施蔬菜土壤有机氮利用率和促生长的应用
CN109112078B (zh) 一株短杆菌菌株及应用
CN106591173A (zh) 一种可活化土壤重金属镉的弯曲芽孢杆菌（Bacillus flexus）HL‑37及其应用
CN104611252A (zh) 一种烟草根际促生菌tc6及其应用
CN104630091A (zh) 一种烟草根际促生菌yc4及其应用
CN104726365A (zh) 道地黄芪固氮菌新菌株t21及发酵液的制备方法
CN108130303A (zh) 一株沃氏食酸菌tcp2011036及其应用
CN114231425A (zh) 一株溶磷解钾菌黑曲霉z8及应用
CN104498381B (zh) 一种惠州中慢生根瘤菌及其用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant