CN110231391A

CN110231391A - 一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法

Info

Publication number: CN110231391A
Application number: CN201910427761.8A
Authority: CN
Inventors: 张庆; 于晓章; 林钰涓; 杨丽; 雷生煜; 楚云鹏; 黄丽丽
Original assignee: Guilin University of Technology
Current assignee: Guilin University of Technology
Priority date: 2019-05-22
Filing date: 2019-05-22
Publication date: 2019-09-13

Abstract

本发明公开了一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，所述抗胆碱药至少包括阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱，所述检测方法采用CE‑ESI‑MS，检测过程中分离电压、缓冲液、鞘流液种类及鞘流液流速参数设置如下：分离电压：10～21kV；缓冲液：pH值为9.4的乙酸铵缓冲液；鞘流液种类：添加有乙酸的异丙醇‑水溶液；鞘流液流速：2.0～4.0μL/min。该方案采用CE‑MS联用技术，可实现高效、快速的分离分析，减少了有机溶剂的消耗，相较于现有技术中HPLC‑MS技术，还具有样品量少等优点；本发明方案结合了毛细管电泳的高效分离与质谱的精确定性功能，使得检测结果更为精准。

Description

一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法

技术领域

本发明涉及医药检测技术领域，具体涉及一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法。

背景技术

托烷类生物碱是一类具有M受体阻断作用的抗胆碱药，已知的天然托烷类生物碱有200多种，它们主要存在于茄科、旋花科和红树科等植物中。具有药理活性的托烷类生物碱主要有阿托品、山莨菪碱和东莨菪碱衍生物等，其中，阿托品具有兴奋中枢神经、散瞳、解痉和抑制腺体分泌等广泛的药理作用，副作用较多，临床上主要用于各种内脏绞痛(如胃痛、肠绞痛、肾绞痛)和散瞳，可以缓解急性有机磷酸酯中毒。山莨菪碱的药理作用与阿托品类似，对乙酰胆碱引起的平滑肌痉挛有松弛作用，也能解除血管痉挛，改善微循环，并有镇痛作用。东莨菪碱衍生物包括甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱，甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱分别是东莨菪碱与溴甲烷和溴丁烷合成的季铵盐，前者用于溃疡和胃肠道痉挛等，后者除具有平滑肌解痉作用，还有神经肌肉接头和神经节阻滞作用，可作胃肠道内窥镜检查的术前用药。虽然具有药用价值，但由于自身具有毒性，因此，对阿托品、山莨菪碱及东莨菪碱衍生物进行检测分析具有重要意义。

目前，关于托烷类生物碱的检测分析，文献报道的主要有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳技术以及联用技术(如气相色谱-质谱联用仪(GasChromatography-Mass Spectrometer，GC-MS)法和液相色谱-质谱联用仪(HighPerformance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，HPLC-MS)法)等。其中，薄层色谱法操作繁琐，分析时间较长，且多数情况下只能测定单一成分或某类化合物的含量；气相色谱法在分析前，样品通常需要进行衍生化处理；而高效液相色谱法的分析时间长，分离效率低，色谱柱容易污染，分析成本较高。毛细管电泳(capillary electrophoresis，CE)由于高效、快速、分离模式多等优点在生物碱分析方面具有巨大的潜力，已有多种分离模式被用于分离检测植物提取物和药物制剂中托烷类生物碱，例如毛细管区带电泳(capillaryzone electrophoresis，CZE)、非水毛细管电泳(Nonaqueous capillaryelectrophoresis，NACE)及胶束电动毛细管色谱(Micellar electrokinetic capillarychromatography，MEK)等。上述各种方法虽然都能用于托烷类生物碱的检测，但能够同时检测多种托烷类生物碱的方法并不多，尤其是生物样品中的多种托烷类生物碱。然而，由于在实际使用过程中，通常会同时使用多种托烷类生物碱。中国发明专利申请文件CN201810833435.2公开了一种莨菪碱和东莨菪碱的检测方法，具体公开了通过高效液相色谱法同时检测莨菪碱和东莨菪碱。该方法虽然能够实现东莨菪与莨菪碱的分离分析，但检测时间长达50min且仅能实现两种托烷类生物碱的分离。

综上所述，开发新的检测方法对于实现多种托烷类生物碱的检测分析具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：一种能够简便且快速地实现多种抗胆碱药检测的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，所述抗胆碱药至少包括阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱，所述检测方法采用毛细管电泳-电喷雾质谱(Capillary Electrophoresis-Electrospraymass spectrometry，CE-ESI-MS)，检测过程中分离电压、缓冲液、鞘流液种类及鞘流液流速参数设置如下：

分离电压：10～21kV；

缓冲液：pH值为9.4的乙酸铵缓冲液；

鞘流液种类：添加有乙酸的异丙醇-水溶液；

鞘流液流速：2.0～4.0μL/min。

优选地，所述乙酸铵缓冲液中乙酸铵的浓度为20～50mmol/L；更优选为35～50mmol/L；最优选地，所述乙酸铵缓冲液中乙酸铵的浓度为40mmol/L。

优选地，所述分离电压为15～20kV；最优选为20kV。

进一步地，所述鞘流液中异丙醇与水的体积比为X:(100-X)，所述X为30～70间的任一数值；优选地，所述X为50。

优选地，所述鞘流液为添加有7.5mmol/L乙酸的异丙醇-水溶液。

优选地，所述鞘流液流速为3.0μL/min。

进一步地，检测过程中使用的毛细管为熔融石英毛细管。

进一步地，检测过程中使用的毛细管总长度为50～100cm，内径为50μm。

进一步地，所述CE-ESI-MS通过垂直鞘流电喷雾离子源接口进行耦联。

进一步地，检测过程中，毛细管电泳仪内部的毛细管长度为总长度的0.6～0.7倍；优选为2/3倍。

进一步地，毛细管电泳仪内部的毛细管温度为25℃，毛细管电泳仪与质谱仪之间的温度为室温。

进一步地，所述检测方法利用场放大进样法，具体为：采用电动进样且进样前利用压力注入水柱。

进一步地，进样电压为10kV，进样时间为10s～40s；优选地，进样时间为30s。

进一步地，水柱进样压力为50mbar，水柱进样时间为3s。

进一步地，检测过程中，质谱条件如下：

离子模式：正离子模式；

电喷雾电压：3.5kV；

扫描方式：同时进行全扫描和选择离子扫描，其中，全扫描模式下，质量扫描范围为200～500Da；监测的选择离子包括：318.0Da、360.0Da、290.0Da和306.0Da；

干燥气和雾化气均为高纯氮气；

雾化气压力：0.69bar；

干燥气流速：6.0 L/min；

干燥气温度：150℃；

质谱的碎裂电压(fragmentor voltage)：150 V；

步长(step size)：0.15amu；

增益(gain)：1.0。

进一步地，检测方法的检测样本为含有阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱的尿液；优选地，所述尿液通过以下步骤进行预处理：取尿液加入甲醇后，离心取上清液，再将得到的上清液稀释后过有机微孔滤膜。

本发明的有益效果在于：本发明方案可用于检测分析同时含有阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱的样品，该方案采用CE-MS联用技术，可实现高效、快速的分离分析(10min内完成分析)，减少了有机溶剂的消耗，相较于现有技术中HPLC-MS技术，还具有样品量少等优点，同时检测只需要廉价的乙酸铵配制成的缓冲液，大幅度降低了检测成本；本发明方案首次将CE-MS联用技术应用于多种托烷类生物碱的检测，结合了毛细管电泳的高效分离与质谱的精确定性功能，使得检测结果更为精准；本发明方案可直接用于生物样本的分析，只需经过简单的处理即可实现生物样本中多种托烷类生物碱的检测，对托烷类生物碱类药物开发及其代谢组学研究具有重要应用价值。

附图说明

图1为本发明实施例1中不同pH值缓冲液下获得的样品色谱图；

图2为本发明实施例1中不同浓度缓冲液下获得的样品色谱图；

图3为本发明实施例1中不同运行电压下获得的样品色谱图；

图4为本发明实施例1中不同异丙醇含量下获得的样品色谱图；

图5为本发明实施例1中最佳实验条件下获得的样品色谱图；

图6为本发明实施例2中不同进样方式获得的样品色谱图；

图7为本发明实施例5中测得的口服山莨菪碱片尿样色谱图与质谱图；

图8为本发明实施例5中测得的12h内口服山莨菪碱片尿样中药物浓度与时间的关系曲线图。

标号说明：

1、甲溴东莨菪碱；2、丁溴东莨菪碱；3、阿托品，4、山莨菪碱。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明的实施例一为：一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，检测的样品为含有阿托品、甲溴东莨菪碱、山莨菪碱和丁溴东莨菪碱的甲醇溶液。其中，阿托品、甲溴东莨菪碱、山莨菪碱和丁溴东莨菪碱的结构式依次如下式中的A、B、C和D所示：

使用的仪器信息如下：毛细管电泳电喷雾电离质谱为Agilent^3DCE和Agilent 1100系列单重四极杆质谱(Agilent Technologies Inc.)。毛细管电泳与质谱通过AgilentG1607A的垂直鞘流电喷雾离子源接口(Agilent Technologies Inc.)进行耦联。鞘流液由Agilent 1100系列恒流液相色谱泵传送(Agilent Technologies Inc.,1:100分流)，鞘流液由异丙醇、水和乙酸组成，其中异丙醇和水的体积比是1:1，醋酸浓度是为7.5mmol/L。色谱柱温度通过调节毛细管卡盒内的温度来保持恒定。Agilent CE/MSD ChemStation用来进行CE-ESI-MS仪器的控制、数据获取及数据分析。在CE-ESI-MS系统分析中，所用熔融石英毛细管(50μm i.d.；375μm o.d.)的总长度为90cm(Polymicro Technologies)。毛细管电泳仪内部的毛细管温度设为25℃(约60cm)，而毛细管电泳仪与质谱仪之间的部分为室温(约30cm)。

实验过程中试剂信息如下：阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱均购买于中国药品生物制品鉴定所(北京，中国)。甲醇，异丙醇均为色谱纯，由国药集团化学试剂有限公司提供(上海，中国)。冰醋酸，乙酸铵，氨水均为分析纯，购买于国药集团化学试剂有限公司。石英毛细管：内径50μm，外径365μm，购买于Polymicro科技(Phoenix,AZ,USA)。所有实验用水均为Milli-Q(Millipore,Bedford,MA,USA)水净化系统制得的超纯水。

所述方法，包括以下步骤：

S1、样品的制备及缓冲液的配制：分别将阿托品，山莨菪碱，甲溴东莨菪碱，丁溴东莨菪碱标准品溶解到甲醇溶剂中，配制成浓度为1.0mg/mL的储备液，保存于冰箱中备用。标准样品使用时用超纯水稀释到所需浓度。所有缓冲溶液均按照经典方法制备。缓冲溶液在用之前经过孔径为0.22μm滤膜过滤。标准溶液和缓冲溶液在使用之前均经过5.0min的超声处理以除去溶液中的气泡。

S2、进样分析：取配好的样品溶液在毛细管电泳仪中进样，采用电动进样样品的进样条件为10kV，5s(为了保证进样的重现性，在进样时质谱的雾化气压力设为0bar)。分离电压：10～21kV；缓冲液：pH值大于9.0的乙酸铵缓冲液；鞘流液种类：添加有乙酸的异丙醇-水溶液；鞘流液流速：2.0～4.0μL/min。

质谱条件设置：ESI-MS检测均在正离子模式下进行，电喷雾电压设定为3.5kV。质谱的扫描方式设定为同时进行全扫描(SCAN)和选择离子扫描(SIM)两种模式。在全扫描模式下，质量扫描范围为200-500 Da。监测的选择离子为：318.0(甲溴东莨菪碱)，360.0(丁溴东莨菪碱)，290.0(阿托品)，306.0(山莨菪碱)。干燥气和雾化气为高纯氮气，雾化气压力设定为0.69bar，干燥气流速及温度分别设定为6.0 L/min和150℃。质谱的碎裂电压(fragmentor voltage)设定为150 V，步长(step size)设定为0.15amu，增益(gain)设为1.0。

S3、对检测得到的色谱图和质谱图进行分析。

试验参数的优化：

为了获得四种抗胆碱药分离的最佳条件，首先对影响分离效率的相关因素，包括缓冲溶液的组成、pH值、缓冲溶液的浓度、分离电压等参数进行了详细的研究。

一、缓冲液pH值的优化：

在毛细管电泳中，运行缓冲溶液的pH值会影响熔融石英毛细管表面硅羟基的解离平衡。因此，运行缓冲溶液的pH值不仅影响到电渗流的大小，而且影响到被分析物的电离情况，从而影响到被分析物的分离效率和迁移时间。

配制7.0到14.0间不同pH值下的乙酸铵缓冲体系进行4种抗胆碱药的分离分析，结果表明，在pH值小于9.0的情况下，4种被分析物的色谱峰叠加在了一起，只能观察到2个色谱峰。

在pH9.0和10.0范围内的分离效果最佳，pH为9.2、9.4、9.6和9.8的色谱图依次如图1中的A、B、C和D所示，从图1中我们可以看出，在pH值为9.4时，4种抗胆碱药被分析物分离效果最佳。

二、缓冲液浓度的优化：

在毛细管电泳中，缓冲液浓度会影响电渗流的大小，缓冲容量和分辨率。配制pH值为9.4浓度分别为20、30、40和50mmol/L的乙酸铵溶液，色谱图依次如图2中A、B、C和D所示。从图2中可以看出，较高浓度的缓冲溶液能够获得较好的分离效果，但分析时间也随之延长。此外，当缓冲液浓度为50mmol/L的时候，由于较大的离子强度使得系统的电流增大，进而导致色谱柱内焦耳热增加，使得CE-MS分析系统的重现性变差。因此，缓冲溶液浓度为40mmol/L时，可以得到较高的分离效果和较好的峰型。

三、运行电压的优化

运行电压是影响电渗流的另一个重要因素。为了在短时间内获得最佳的分离效果，选取浓度为40mmol/L乙酸铵(pH＝9.4)溶液作为缓冲液，运行电压分别为15kV、18kV、20kV、22kV时，色谱图依次如图3中A、B、C和D所示。从图3中可以看出，分离电压对四种抗胆碱药分离效率和迁移时间具有影响。随着分离电压的增大，分析时间逐渐缩短，但分离效果却随之变差。当分离电压增加到22kV时，甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱无法达到基线分离。因此，20kV的电压为最佳运行电压。

四、鞘流液的优化

对CE-ESI-MS鞘流接口而言，鞘流液的组成和流速会影响质谱信号的强度和电喷雾的稳定性。鞘流液中的异丙醇可降低鞘流液的表面张力，促进气相离子的形成。故鞘流液中异丙醇的比例对分析物的灵敏度和分离度具有重要影响。配制体积含量分别为30％，40％，50％，60％，70％的异丙醇鞘流液，采用上述体积含量的鞘流液进行分析时，体积含量与质谱信号强度的关系如图4中所示。从图4中可以看出，当鞘流液中所含异丙醇含量为50％时，四种被分析物质谱信号最强。

此外，还对鞘流液流速在2.0-4.0μL/min范围内时对质谱信号强度的影响进行了实验。结果表明，当鞘流液流速为3.0μL/min，质谱信号的强度达到最大，电喷雾也相对较为稳定。这主要是由于随着鞘流液流速的增大，被分析物被充分电离，当鞘流液流速为3.0μL/min，质谱信号强度达到最大。随着鞘流液流速的进一步增加，鞘流液的稀释作用稀释了被分析物的浓度，质谱信号强度开始下降。因此，鞘流液的最佳组成为：含7.5mmol/L乙酸的异丙醇/水(1:1,v/v)，鞘流液流速为3.0μL/min。

综上所述，最佳的CE-ESI-MS条件为：40mmol/L乙酸铵缓冲(pH9.4)；分离电压为20kV；进样方式为电动进样(10kV,5s)；鞘流液为50％的异丙醇中添加7.5mmol/L乙酸，鞘流液流速为3.0μL/min。在最佳的实验条件下，四种抗胆碱药在6.6min内得到基线分离(如图5所示)，相比于专利申请文件CN201810833435.2中的HPLC-MS至少需要30多分钟，可提升4倍以上。图5(A)为四种被分析物在最佳实验条件下得到的CE-ESI-MS选择离子流图(SIE)，图5(B)为四种被分析物在最佳实验条件下得到的[M+H]⁺提取离子流图(EIE)。

本发明实施例二为：一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，在上述实施例一优化得到的最佳实现条件下利用场放大富集技术进行样品分析。

场放大富集是一种最简单且有效的在线富集技术。在场放大进样中，样品溶解在低电导的溶液中，电动进样进入充满高电导运行缓冲液的毛细管中，样品进入毛细管后在低电场强度下放慢迁移速度，实现柱上浓缩。通常，在场放大进样前利用压力注入一段水柱，可以使样品溶液和背景电解质溶液的界面更加清晰，提高富集效果。实验中测试不同水柱长度对富集效果的影响，结果发现当以50mbar压力进3s水柱时，灵敏度最好。

场放大进样的进样量取决于进样时间和进样电压。当固定水区带为50mbar3s，进样电压为10kV，验证进样时间对峰面积的影响。结果发现，进样时间从10s增加到40s的过程中，被分析物的峰高仅在20-40s的范围内是随着进样时间的增加而增高。当进样时间超过30s时，峰形展宽，分离效率下降，故以10kV，30s作为最佳进样条件。

配制阿托品、甲溴东莨菪碱、山莨菪碱和丁溴东莨菪碱浓度均为10μg/mL的甲醇溶液和阿托品、甲溴东莨菪碱、山莨菪碱和丁溴东莨菪碱浓度均为1μg/mL的甲醇溶液验证传统压力进样和场放大进样对检测效果的影响，结果如图6所示，图6中A曲线为传统流体动力注射进样下的10μg/mL浓度样品，50mbar，5s进样后得到的提取离子谱图；B曲线为1μg/mL浓度样品，进样条件为：场放大进样，50mbar，3s水柱，10kv电动进样，得到的提取离子谱图。从图中可以看出，与传统压力进样相比，场放大进样明显提高了检测灵敏度，灵敏度提高了1-2个数量级。

本发明实施例三为：一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，在上述实施例一优化得到的最佳实现条件下利用场放大富集技术进行样品分析，以获得检测方法的线性范围及检测限。

为了确定所建立的分析方法测定四种抗胆碱药的线性范围和检测限，配制了一系列不同浓度的四种标准物质的混合溶液，并在最佳实验条件下进行分析。以峰面积分别对被分析物的浓度进行回归分析，所得线性回归方程、线性相关系数、线性范围及检测限(S/N＝3)如下表2所示：

表2不同抗胆碱药的回归方程、相关系数、线性范围和检测限表

表2中，y为峰面积，x为浓度(ng/mL)。

从表中可以看出，四种抗胆碱药的线性相关系数在0.9956-0.9997之间，方法的检测限介于0.02ng/L和0.05ng/L之间，线性范围有3个数量级。因此，本发明方案的检测方法线性相关度良好、检测限低且线性范围宽，能够用于样品中多种抗胆碱药的定量分析，具有良好的应用前景。

本发明实施例四为：一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，在上述实施例一优化得到的最佳实现条件下利用场放大富集技术进行样品分析，以验证方法的重现性。

将一定浓度的四种抗胆碱药的混合标准溶液在一天内重复进样5次，每次间隔一小时，结果发现四种被分析物的迁移时间和峰面积的相对标准偏差(relative standarddeviation，RSD)分别为0.4％-1.5％和3.4％-5.8％。

为了进一步考察方法的可靠性，进行了模拟样品的加标回收率实验，将两个不同浓度水平的标准样品溶液加入到尿样中，每个样品连续测定三次，根据回归方程算得各分析物的浓度，并计算出测定结果的RSD。所得回收率在79.4-96.8％之间，RSD均小于3.5％，结果如下表3所示：

表3模拟样品回收率表

本发明实施例五为：上述方法在实际样品中的应用，检测样品为：口服山莨菪碱片后收集的尿样，在上述实施例一优化得到的最佳实现条件下利用场放大富集技术进行样品分析。

样品预处理步骤如下：

山莨菪碱片服用剂量遵照中国公共卫生健康管理局制定的标准(成人，一次5-10毫克，一日3次)。空白尿样在服药前收集，服药后尿样按照预先设定好的时间(每2h收集一次)进行收集，所有尿样收集后均保存在-20℃冰箱中。分析前，室温下解冻样品。为了除去尿样中的蛋白质和其它固体小颗粒，加三倍体积的甲醇，4500r/min离心15min。取上层清液，稀释20倍后经0.22μm有机微孔滤膜过滤，直接进行CE-ESI-MS分析测定。结果如图7所示，图7A为空白尿样总离子流图，7B为服药4h后尿样的总离子流图，7C为图7B中峰P1的质谱图。通过质谱的分子量进行定性，可知峰P1(m/z＝306.0)为山莨菪碱的色谱峰。并且由于尿液中其它基质的干扰峰迁移时间较短，不会对被分析物的色谱峰干扰。图8为服药12h内每隔2个小时收集尿样，得到的药物浓度随时间的变化曲线。因此，本发明的检测方法具有在阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱的代谢组学中的应用前景。

综上所述，本发明实施例方案的不仅能同时检测至少四种抗胆碱药，而且检测灵敏度高，线性范围广，且能够实现生物样品中多种抗胆碱药的检测，具有良好的应用前景。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims

1.一种能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述抗胆碱药至少包括阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱，所述检测方法采用CE-ESI-MS，检测过程中分离电压、缓冲液、鞘流液种类及鞘流液流速参数设置如下：

分离电压：10～21kV；

缓冲液：pH值为9.4的乙酸铵缓冲液；

鞘流液种类：添加有乙酸的异丙醇-水溶液；

鞘流液流速：2.0～4.0μL/min。

2.根据权利要求1所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述乙酸铵缓冲液中乙酸铵的浓度为20～50mmol/L；更优选为35～50mmol/L；最优选地，所述乙酸铵缓冲液中乙酸铵的浓度为40mmol/L。

3.根据权利要求1所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述分离电压为15～20kV；最优选为20kV。

4.根据权利要求1所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述鞘流液中异丙醇与水的体积比为X:(100-X)，所述X为30～70间的任一数值；优选地，所述X为50。

5.根据权利要求1所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述鞘流液为添加有7.5mmol/L乙酸的异丙醇-水溶液。

6.根据权利要求1-5任一项所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：检测过程中使用的毛细管为熔融石英毛细管，检测过程中使用的毛细管总长度为50～100cm，内径为50μm。

7.根据权利要求1-5任一项所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述CE-ESI-MS通过垂直鞘流电喷雾离子源接口进行耦联。

8.根据权利要求1-5任一项所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：所述检测方法利用场放大进样法，具体为：采用电动进样且进样前利用压力注入水柱。

9.根据权利要求8所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：水柱进样压力为50mbar，水柱进样时间为3s。

10.根据权利要求1-5任一项所述的能够同时检测多种抗胆碱药的方法，其特征在于：检测方法的检测样本为含有阿托品、山莨菪碱、甲溴东莨菪碱和丁溴东莨菪碱的尿液；优选地，所述尿液通过以下步骤进行预处理：取尿液加入甲醇后，离心取上清液，再将得到的上清液稀释后过有机微孔滤膜。