CN110221001A - 一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法，其步骤为：取用蒸煮法制取的制川乌中粉或细粉1份，浓度为65％‑85％的乙醇溶液15‑35份，组成混合液；将混合液放入提取容器中，加热回流1‑2小时；过滤残渣后重复步骤加热回流1‑2小时；处理后的提取液通过液相色谱‑质谱联用分析检测单酯型生物碱含量达到预定值则输出合格提取液，检测单酯型生物碱含量未达到预定值则返回提取容器中。本发明能够高效率提取单酯型生物碱制剂，填补市面上仍无制川乌提取物的相关制剂的空白，对日后制川乌的深入开发以及单酯型生物碱新制剂的工业化生产具有一定的参考意义。

Description

一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法
技术领域
本发明属于中药原材料处理领域，具体为中药成分提取领域。
背景技术
川乌为毛茛科植物乌头的干燥母根，制川乌为川乌的炮制加工品，其味辛、苦，热，有毒，对心、肝、肾、脾经，具祛风除湿、温经止痛之功效，具极高的药用价值。用于风寒湿痹、关节疼痛、心腹冷痛寒疝作痛及麻醉止痛。
但川乌为大毒之物，经现代研究证实，川乌具有抗炎、抗肿瘤、调节免疫、镇痛等药理作用，但因其毒性，在加工过程中方法不当，均会导致成品不合格，因此川乌临床应用受极大限制。其主要化学成分为生物碱，通过炮制后可使川乌中毒性较大的双脂型生物碱转化为毒性较小的单脂型生物碱，毒性为双酯型生物碱0.002-0.005，在保持药理活性的同时安全性得到极大提升。
但目前川乌制作以蒸煮法为主，尚无制川乌提取物相关制剂，且对其单酯型生物碱的提取相关研究极为匮乏，在炮制川乌过程中仍有大量中毒现象发生，也很难做到工业化、自动化大生产。
传统的炮制方式费时费力，很容易造成川乌在浸泡过程中变质、霉变。传统的炮制方法费时费力，劳动效率低下，不适于规模化生产，并且只能产出川乌切片或粉末，不能制成更安全高效的制剂。基于以上原因，亟需寻求一种可以稳定、流程化提取制川乌中单酯型生物碱的方法。
发明内容
有鉴于此，本发明针对现有川乌炮制方法中存在的不足，提供一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法。
本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法如下：
(1)取用蒸煮法制取的制川乌中粉或细粉1份，浓度为65％-85％的乙醇溶液15-35份，组成混合液；
(2)将混合液放入提取容器中，加热回流1-2小时；
(3)过滤残渣后重复步骤(2)；
(4)通过步骤(2)和(3)处理后的提取液通过液相色谱-质谱联用分析检测单酯型生物碱含量达到预定值则输出合格提取液，检测单酯型生物碱含量未达到预定值则返回提取容器中。
进一步的，所述蒸煮制取的制川乌方法具体为：取川乌原药材清水冲洗清洁，置于水池中浸泡每日换水3次以上，反复3天，打开川乌看无白心，口尝轻微麻舌感，然后再放掉浸泡水，即在甘草、黑豆水中蒸煮2小时，然后再切片晾干后磨制成制川乌中粉或细粉。
进一步的，所述单酯型生物碱含量未达到预定值为10mg/10g。
进一步的，所述色谱分析的色谱柱温度40℃-50℃，流速： 0.4ml/min-0.5ml/min；所述质谱分析的电喷雾电离离子源，源电压5.5kV，毛细管温度为550℃，鞘气流速40arb，正离子检测，质量分析器为四级杆，采用MRM模式检测。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法按照本申请的物料比例范围，能够高效率提取单酯型生物碱制剂。
(2)本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法达到增效减毒的目的，使制川乌的临床使用安全性得到极大提升，但是针对制川乌单酯型生物碱的提取、药理及机制相关研究相对匮乏，以致市面上仍无制川乌提取物的相关制剂，因此未来制川乌新制剂的开发创制具有广阔的市场空间。
(3)本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法，该提取工艺简单、可靠，对日后制川乌的深入开发以及单酯型生物碱新制剂的工业化生产具有一定的参考意义。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
下面结合具体实施例，对本发明的内容做进一步的详细说明：
实施例1：
本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法步骤如下：
(1)取川乌原药材清水冲洗清洁，置于水池中浸泡每日换水3次以上，反复3天，打开川乌看无白心，口尝轻微麻舌感，然后再放掉浸泡水，即在甘草、黑豆水中蒸煮2小时，然后再切片晾干后磨制成制川乌中粉或细粉。
(2)取用蒸煮法制取的制川乌中粉或细粉1份，浓度为65％的乙醇溶液15 份，组成混合液；
(3)将混合液放入提取容器中，加热回流1小时；
(4)过滤残渣后重复步骤(3)；
(5)通过步骤(3)和(4)处理后的提取液通过液相色谱-质谱联用分析检测单酯型生物碱含量，所述色谱分析的色谱柱温度40℃-50℃，流速：0.4ml/min-0.5ml/min；所述质谱分析的电喷雾电离离子源，源电压5.5kV，毛细管温度为550℃，鞘气流速40arb，正离子检测，质量分析器为四级杆，采用MRM模式检测；检测单酯型生物碱含量未达到预定值则返回提取容器中。
实施例2：
本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法步骤如下：
(1)取川乌原药材清水冲洗清洁，置于水池中浸泡每日换水3次以上，反复3天，打开川乌看无白心，口尝轻微麻舌感，然后再放掉浸泡水，即在甘草、黑豆水中蒸煮2小时，然后再切片晾干后磨制成制川乌中粉或细粉。
(2)取用蒸煮法制取的制川乌中粉或细粉1份，浓度为75％的乙醇溶液25 份，组成混合液；
(3)将混合液放入提取容器中，加热回流1.5小时；
(4)过滤残渣后重复步骤(3)；
(5)通过步骤(3)和(4)处理后的提取液通过色谱分析及质谱分析检测单酯型生物碱含量，所述色谱分析的色谱柱温度40℃-50℃，流速： 0.4ml/min-0.5ml/min；所述质谱分析的电喷雾电离离子源，源电压 5.5kV，毛细管温度为550℃，鞘气流速40arb，正离子检测，质量分析器为四级杆，采用MRM模式检测；检测单酯型生物碱含量未达到预定值则返回提取容器中。
实施例3：
本发明的一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法步骤如下：
(1)取川乌原药材清水冲洗清洁，置于水池中浸泡每日换水3次以上，反复3天，打开川乌看无白心，口尝轻微麻舌感，然后再放掉浸泡水，即在甘草、黑豆水中蒸煮2小时，然后再切片晾干后磨制成制川乌中粉或细粉。
(2)取用蒸煮法制取的制川乌中粉或细粉1份，浓度为85％的乙醇溶液35 份，组成混合液；
(3)将混合液放入提取容器中，加热回流2小时；
(4)过滤残渣后重复步骤(3)；
(5)通过步骤(3)和(4)处理后的提取液通过色谱分析及质谱分析检测单酯型生物碱含量，所述色谱分析的色谱柱温度40℃-50℃，流速： 0.4ml/min-0.5ml/min；所述质谱分析的电喷雾电离离子源，源电压 5.5kV，毛细管温度为550℃，鞘气流速40arb，正离子检测，质量分析器为四级杆，采用MRM模式检测；检测单酯型生物碱含量未达到预定值则返回提取容器中。
通过单因素考察并结合实施例1-3优选出正交因素水平表，采用制川乌中粉或细粉、固定提取次数2次，进行正交试验，结果如下：
表1正交因素水平表
表2正交试验结果
注①：苯甲酰新乌头原碱(mg/10g药材)；②：苯甲酰次乌头原碱(mg/10g 药材)；③：苯甲酰乌头原碱(mg/10g药材)
表3方差分析表
由表2可知，极差RA＞RC＞RB，即影响因素主次顺序为：乙醇浓度＞提取时间＞乙醇倍量。从表3方差分析结果表明，对于目标成分的提取，乙醇浓度影响显著，提取时间和乙醇倍量有一定影响。根据k值进行分析，得到最优工艺为A2B2C3，但C3的单次提取时间为2h，时间偏长，且提取效果非显著优于 C2水平，综合考虑生产实际、环保等因素，确定A2B2C2为最佳工艺，即乙醇浓度75％，乙醇倍量25倍，每次提取1.5h，其他工艺参数为可选范围。

Claims (4)

1.一种提取制川乌中单酯型生物碱的方法，其特征在于：
(1)取用蒸煮法制取的制川乌中粉或细粉1份，浓度为65％-85％的乙醇溶液15-35份，组成混合液；
(2)将混合液放入提取容器中，加热回流1-2小时；
(3)过滤残渣后重复步骤(2)；
(4)通过步骤(2)和(3)处理后的提取液进入液相色谱通道，通过液相色谱-质谱联用分析检测单酯型生物碱含量达到预定值则输出合格提取液，检测单酯型生物碱含量未达到预定值则返回提取容器中。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述蒸煮制取的制川乌方法具体为：取川乌原药材清水冲洗清洁，置于水池中浸泡每日换水3次以上，反复3天，打开川乌看无白心，口尝轻微麻舌感，然后再放掉浸泡水，即在甘草、黑豆水中蒸煮2小时，然后再切片晾干后磨制成制川乌中粉或细粉。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述单酯型生物碱含量未达到预定值为10mg/10g。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述色谱分析的色谱柱温度40℃-50℃，流速：0.4ml/min-0.5ml/min；所述质谱分析的电喷雾电离离子源，源电压5.5kV，毛细管温度为550℃，鞘气流速40arb，正离子检测，质量分析器为四级杆，采用MRM模式检测。
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