CN110208420A - 一种复方黄苦膏的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复方黄苦膏的质量检测方法。所述复方黄苦膏包括有黄芩80‑100份、苦参70‑90份、黄柏60‑80份、蛇床子60‑80份和马齿苋40‑60份及辅料按照下述方法制备而成：所述质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定。本发明提供了提供一种复方黄苦膏的质量检测方法，包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测；包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定；所述质量检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制复方黄苦膏的质量，既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方黄苦膏的质量检测，属于药品技术的领域。
背景技术
本品为软膏剂，由黄柏、苦参、黄芩、蛇床子、马齿苋组成，根据中医湿热证引起的湿疮辩证理论，针对基本病机为多因外感风、湿、热邪，或脾失健运，湿热内生，内外合邪，两相搏结，浸淫肌肤所致的湿疹。根据国家药典文员会根据国家药典委员会2006年9月21日发布的《中国药品通用名称命名原则》“(二)中药通用名称命名细则，第4条，第⑶项，第⑤款采用处方主要药材名称的缩写并结合剂型命名”之规定：本处方主要为黄柏及苦参，为复方软膏剂，故命“复方黄苦膏”。
复方黄苦膏为贵阳中医药大学沈冯君教授治疗湿疹外用验方，方中有黄柏、苦参、黄芩、马齿苋、蛇床子五味药材。本处方根据中医湿热证引起的湿疮辩证理论，针对基本病机为多因外感风、湿、热邪，或脾失健运，湿热内生，内外合邪，两相搏结，浸淫肌肤所致的湿疹，最终选药组方而成。为了更好控制复方黄苦膏的质量，确保临床药效，本发明提供了一种复方黄苦膏的质量检测方法。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种复方黄苦膏的质量检测方法。本发明具有准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制该产品的质量，确保药物临床药效的特点。
本发明的技术方案：一种复方黄苦膏的质量检测方法，所述复方黄苦膏按照重量份计，由黄芩80-100份、苦参70-90份、黄柏60-80份、蛇床子60-80份和马齿苋40-60份及辅料按照下述方法制备而成：根据配方称取各药物，加水浸泡，水煎煮两次，浓缩，以乙醇静置,回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与辅料混合，制成乳膏剂，即得；所述质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述复方黄苦膏按照重量份计，由黄芩90份、苦参80份、黄柏70份、蛇床子70份和马齿苋50份及辅料制备而成。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述是根据配方称取各药物，加水浸泡30分钟，8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，浓缩至60℃时的相对密度为1.10～1.30，以70％乙醇静置24小时分层，回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与配方量羟苯乙酯2-5份、白凡士林45-55份、单硬脂酸甘油酯120-130份、液体石蜡45-55份、硬脂酸40-50份混合，加热至75℃熔融得油相，将三乙醇胺4-6份、甘油70-80份、水加热至75℃得水相，将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌，并不断搅拌至冷却，制成乳膏剂，分装，即得。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述是根据配方称取各药物，加水浸泡30分钟，8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，浓缩至60℃时的相对密度为1.10～1.30，以70％乙醇静置24小时分层，回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与配方量羟苯乙酯3份、白凡士林50份、单硬脂酸甘油酯125份、液体石蜡50份、硬脂酸45份混合，加热至75℃熔融得油相，将三乙醇胺5份、甘油75份、水加热至75℃得水相，将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌，并不断搅拌至冷却，制成乳膏剂，分装，即得。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇3-10ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.7mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝2-5∶1-3∶0.5-2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝3∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇3-10ml，超声处理3-10分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5-1.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝1-5:1-5:1-4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝3:3:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05-1.5％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为25-35℃；流速0.5-1.5ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声40-70min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每1g含盐酸小檗碱不低于0.30mg，黄芩苷不低于2.0mg。
前述的复方黄苦膏的质量检测方法中，所述鉴别方法包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测，所述含量测定方法包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定，具体如下所示：
形状：本品为棕黄色软膏；
鉴别：(1)苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝3∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝3:3:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合软膏剂项下有关的各项规定；
含量测定：盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述检测方法的研究
实验例：检测方法研究
1复方黄苦膏中苦参碱TLC鉴别
1.1仪器及试剂
KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；
苦参碱对照品
甲醇(分析纯20150305，天津市富宇精细化工有限公司)；
复方黄苦膏(按照本发明所述方法自制三批)
1.2方法与结果
1.2.1供试品溶液的制备
取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液。
1.2.2对照品溶液的制备
取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。
1.2.3阴性对照品溶液的制备
按处方比例及制备工艺，配制缺少苦参药材的阴性样品，按“2.1”同法制备阴性对照品溶液。
1.2.4展开剂
以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
1.2.5薄层色谱条件的考察
1.2.5.1样品前处理方法的考察
a.取本品内容物1g，研细，加95％乙醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液a。
b.取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液b。
分别取上述两种溶液各2μl溶液点于硅胶G板上，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
结果显示供试品b斑点清晰，Rf值适中，故供试品b的处理方法可行。
见图1供试品试液a的苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；图2供试品试液b的苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3。
1.2.5.2最佳点样量的选择
分别吸取供试品及对照品溶液各2、4、6、8、10、12μl，分别点于不同硅胶G薄层板上，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
见图3供试品最佳点样量考察、图4对照品最佳点样量考察，由图可知，供试品最佳点样量为10μl、对照品溶液最佳点样量为2μl。
1.2.5.3展开剂选择
分别取上述两种溶液分别2μl、10μl溶液点于硅胶G板上，分别以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)、甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
见图5丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂的苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3及图6甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)为展开剂的苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；由图5及6可知，最佳展开剂为丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)。
1.2.6薄层方法的确定
取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液。另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版第四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图7苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3薄层方法确认。
1.2.7方法学考察
1.2.7.1专属性考察
用三个批次的样品，照上述方法进行专属性实验(阴性、对照三批次)见图图8苦参碱对照品-阴性-样品1-样品2-样品3。由图8可见，阴性对照无干扰，样品在与对照品及对照药材相应位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。说明该法专属性强。
1.2.7.2耐用性试验
用三个批次的样品，分别进行3个不同厂家薄层板对比，3种不同温度及湿度作为变动因素，照上述鉴别方法进行实验。
1.2.7.2.1不同厂家薄层板试验
见图9是不同厂家薄层板试验苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3、图10是不同厂家薄层板试验样品1-样品2-样品3-苦参碱对照品、图11是不同厂家薄层板试验苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
2.7.2.2不同温度及湿度试验
温度及相对湿度的设定见表5-1-1。见图12不同温度及湿度1试验、图13不同温度及湿度2试验、图14不同温度及湿度2试验。
表5-1-1不同温度及相对湿度的考察
1.2.8结果
取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液。另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版第四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
2蛇床子TLC鉴别
2.1仪器及试剂
KQ-250DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；
蛇床子素对照品
甲醇(分析纯20150305，天津市富宇精细化工有限公司)；
复方黄苦膏(自制三批)
2.2方法与结果
2.2.1供试品溶液的制备
取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。
2.2.2对照品溶液的制备
取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。2.2.3阴性对照品溶液的制备
按处方比例及制备工艺，配制缺少蛇床子药材的阴性样品，按“2.2.1”同法制备阴性对照品溶液。
2.2.4展开剂
以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
2.2.5薄层色谱条件的考察
2.2.5.1样品前处理方法的考察
a.取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。
b.取本品粉末0.3g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。
吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。结果显示供试品b斑点清晰，Rf值适中，故供试品b的处理方法可行，
见图15供试品溶液a的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3、图16供试品溶液b的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3。
2.2.5.2最佳点样量的选择
分别吸取供试品、对照品溶液及对照药材溶液各2、4、6、8、10、12μl，分别点于不同硅胶G薄层板上，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。
见图17供试品最佳点样量考察、图18对照品溶液最佳点样量考察、图19对照药材溶液最佳点样量考察；由图17、18、19可知，供试品最佳点样量为10μl、对照品溶液最佳点样量为2μl，对照药材最佳点样量为10μl。
2.2.5.3展开剂选择
分别取上述两种溶液各2μl溶液点于硅胶G板上，分别以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)、甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。见图20丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶
2∶1∶0.1)为展开剂的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3、图21甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)为展开剂的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3。
2.2.6薄层方法的确定
取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。见图22蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3薄层方法的确定。
2.2.7方法学考察
2.2.7.1专属性考察
用三个批次的样品，照上述方法进行专属性实验(阴性、对照三批次)见图23蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；由图23可见，阴性对照无干扰，样品在与对照品及对照药材相应位置上，显相同颜色清晰斑点，斑点圆整，分离效果好。说明该法专属性强。
2.7.2耐用性试验
用三个批次的样品，分别进行3个不同厂家薄层板对比，3种不同温度及湿度作为变动因素，照上述鉴别方法进行实验。
2.7.2.1不同厂家薄层板试验
见图24不同厂家薄层板试验蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3(青岛)；图25不同厂家薄层板试验蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3(自制1)；图26不同厂家薄层板试验蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3(自制2)。
2.2.7.2.2不同温度及湿度试验
温度及相对湿度的设定见表5-2-1。见图27不同温度及湿度试验1的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；图28不同温度及湿度试验2的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；图29不同温度及湿度试验3的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3。
表5-2-1不同温度及相对湿度的考察
2.2.8结果
取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液。再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3:3:2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】应符合软膏剂项下有关的各项规定(2015版《中国药典》第四部通则0109)。
1、均匀、细腻，涂于皮肤或黏膜上无刺激性，易涂布。
2、无腐败、异臭、变色、变硬等变质现象，不得有油水分离及胀气现象。
3、粒度检查
检查法取供试品适量，置于载玻片上涂成薄膜，薄层面积相当于盖玻片面积，共涂3片，照粒度和粒度分布测定法(通则0982第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
4、最低装量检查法(2015版《中国药典》第四部通则0942)，符合规定。
3含量测定
照高效液相色谱法(2015版《中国药典》第四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱(0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A)；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min。
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液。
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末2g，置100ml锥形瓶中，加入乙酸乙酯20ml，超声10min，弃去乙酸乙酯，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz)60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.1材料
3.1.1试药：黄芩、黄柏、苦参等药材购于贵州同济堂药房连锁有限公司(均符合2015版《中国药典》标准)。盐酸小檗碱(中国食品药品检定研究院110715-201117)、黄芩苷对照品(中国食品药品检定研究院110713-201212)。磷酸(AR，批号20180116)，甲醇(AR，批号20170302)，乙醇(AR，批号20170920)乙腈(色谱纯)，水为娃哈哈纯净水。
3.1.2仪器：安捷伦高效液相色谱仪1200；G13150DAD检测器；数据超声波清洗仪(KQ-250DB型昆山市超声仪器有限公司)；
3.2方法与结果
3.2.1色谱条件：AligentC18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱(0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A)；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min；进样体积10μl。
3.2.2对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液。
3.2.3供试品溶液的制备：精密称定本品2g，置100ml锥形瓶中，加入乙酸乙酯20ml，超声10min，弃去乙酸乙酯，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz)60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液25ml,浓缩至5ml即得。
3.2.4阴性样品溶液的制备：提取缺少黄柏和黄芩药材的浸膏，按“3.2.3”项下制备相应溶液，即得。
3.2.5专属性考察：精密吸取对照品、供试品、阴性样品溶液各10μl，在上述色谱条件下测定，结果见图30对照品黄芩苷、盐酸小檗碱HPLC色谱图(图30中的标记：1.黄芩苷2.盐酸小檗碱)、图31样品黄芩苷、盐酸小檗碱HPLC色谱图、图32阴性样品黄芩苷、盐酸小檗碱HPLC色谱图，盐酸小檗碱、黄芩苷分离度良好，专属性好。
3.2.6精密度试验：精密量取对照品溶液适量，在“3.2.1”项色谱条件下测定，结果见表5-3-1，测得峰面积RSD值盐酸小檗碱0.93％，黄芩苷为0.93％，表明仪器精密度良好。
表5-3-1精密度实验结果
3.2.7线性关系考察：按“2.2”项下制备对照品溶液，得到黄芩苷(c＝0.11286mg/ml)、盐酸小檗碱(c＝0.09787mg/ml)对照品溶液。进样体积依次为5、10、15、20、25、30μl，注入高效液相色谱仪，在“2.1”项色谱条件下测定。以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制对照品溶液标准曲线，计算回归方程，结果见表5-3-2，可知各成分在各自范围内线性关系良好。见图33黄芩苷的线性关系、图34盐酸小檗碱线性的线性关系。
表5-3-2线性范围实验结果
表5-3-3各成分线性关系
Tab.5-3-3Linearrelationshipsofvariousconstituents
3.2.8稳定性试验：对照品溶液分别在0、2、4、6、8、10、12小时内注入高效液相色谱仪10μl，记录色谱图，结果见表5-3-4，黄芩苷的峰面积RSD为0.77％，以盐酸小檗碱的峰面积计RSD为0.81％。表明供试品溶液在12小时内稳定。
表5-3-4稳定性试验结果
3.2.9重复性试验：按供试品溶液制备方法制备6份供试品溶液，在“3.2.1”项色谱条件下测定。结果见表5-3-5，测得含量RSD值分别为黄芩苷2.42％，盐酸小檗碱为2.97％，表明该方法重复性良好。
表5-3-5重复性实验结果
3.2.10准确度试验：精密称取同一批号供试品6份，精密加入黄芩苷、盐酸小檗碱对照品适量，挥干溶剂，照供试品制备方法处理样品，分别进样20μl，记录色谱图，计算回收率。结果见表5-3-6、表5-3-7，以黄芩苷百分含量计算平均回收率为97.44％，RSD为2.13％。以盐酸小檗碱百分含量计算平均回收率为101.10％，RSD为1.47％。表明该方法准确度良好。
表5-3-6黄芩苷回收率实验结果
表5-3-7小檗碱回收率实验结果
3.3.含量限度确定
照高效液相色谱法(2015版《中国药典》第四部通则0512)测定
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱(0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A)；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min。
对照品溶液的制备精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液。
供试品溶液的制备精密称定本品粉末2g，置100ml锥形瓶中，加入乙酸乙酯20ml，超声10min，弃去乙酸乙酯，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声(功率250W，频率40kHz)60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
表5-3-8三批复方黄苦膏中黄芩苷含量测定数据
表5-3-9三批复方黄苦膏中盐酸小檗碱含量测定数据
由以上含量测定结果可知，样品中黄芩苷、盐酸小檗碱的含量相对稳定，黄芩苷含量平均值为2.35mg/g，下浮15％，暂将黄芩苷的限度定为不少于2.0mg/g，盐酸小檗碱含量平均值为0.350mg/g，下浮15％，暂将盐酸小檗碱的含量限度定为不少于0.30mg/g，故将含量测定项列入正文。
本品每1g含盐酸小檗碱不低于0.30mg，黄芩苷不低于2.0mg。
综上所述：本发明的有益效果在于：本发明提供了提供一种复方黄苦膏的质量检测方法，包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测；包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定；所述质量检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制复方黄苦膏的质量，既更有利于生产厂家和监督管理部门对产品质量的监测，也可以为医疗部门和患者的治疗提供更好的保障。
附图说明
图1是本发明苦参碱薄层鉴别色谱图，图中依次为：供试品试液a的苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
图2是本发明苦参碱薄层鉴别色谱图，图中依次为：供试品试液b的苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
图3是本发明苦参碱薄层鉴别中，供试品最佳点样量考察色谱图；
图4是本发明苦参碱薄层鉴别中，对照品最佳点样量考察色谱图；
图5是本发明苦参碱薄层鉴别色谱图，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，图中依次为：苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
图6是本发明苦参碱薄层鉴别色谱图，以甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)为展开剂，图中依次为：苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
图7是本发明苦参碱薄层鉴别色谱图，图中依次为：苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3薄层方法确认；
图8是本发明苦参碱专属性考察的薄层鉴别色谱图，图中依次为：苦参碱对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；
图9是本发明苦参碱薄层鉴别中，不同厂家的薄层板试验色谱图，图中依次为：苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
图10是本发明苦参碱薄层鉴别中，不同厂家的薄层板试验色谱图，图中依次为：样品1-样品2-样品3-苦参碱对照品；
图11是本发明苦参碱薄层鉴别中，不同厂家的薄层板试验色谱图，图中依次为：验苦参碱对照品-样品1-样品2-样品3；
图12是本发明苦参碱薄层鉴别中，不同温度及湿度1试验色谱图；
图13是本发明苦参碱薄层鉴别中，不同温度及湿度2试验色谱图；
图14是本发明苦参碱薄层鉴别中，不同温度及湿度2试验色谱图；
图15是本发明蛇床子薄层C鉴别中，样品前处理方法的考察色谱图，图中依次为：供试品溶液a的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3；
图16是本发明蛇床子薄层鉴别中，样品前处理方法的考察色谱图，图中依次为：供试品溶液b的蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3；
图17是本发明蛇床子薄层鉴别中，供试品最佳点样量考察色谱图；
图18是本发明蛇床子薄层鉴别中，对照品溶液最佳点样量考察色谱图；
图19是本发明蛇床子TLC鉴别中，对照药材溶液最佳点样量考察色谱图；
图20是本发明蛇床子薄层鉴别色谱图，以丙酮-甲苯-醋酸乙酯-浓氨试液(3∶2∶1∶0.1)为展开剂，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3；
图21是本发明蛇床子薄层鉴别色谱图，以甲苯-丙酮-甲醇(8:3:0.5)为展开剂，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3；
图22是本发明蛇床子薄层鉴别色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-样品1-样品2-样品3薄层方法的确定；
图23是本发明蛇床子薄层鉴别专属性考察的色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；
图24是本发明蛇床子薄层鉴别中，不同厂家薄层板试验色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3(青岛)；
图25是本发明蛇床子薄层鉴别中，不同厂家薄层板试验色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3(自制1)；
图26是本发明蛇床子薄层鉴别中，不同厂家薄层板试验色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3(自制2)；
图27是本发明蛇床子薄层鉴别中，不同温度及湿度试验1色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；
图28是本发明蛇床子薄层鉴别中，不同温度及湿度试验2色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；
图29是本发明蛇床子薄层鉴别中，不同温度及湿度试验3色谱图，图中依次为：蛇床子对照药材-蛇床子素对照品-阴性-样品1-样品2-样品3；
图30是本发明黄芩苷、盐酸小檗碱含量测定中，专属性考察HPLC色谱图，其中1、黄芩苷，2、盐酸小檗碱；
图31是本发明黄芩苷、盐酸小檗碱含量测定中，专属性考察HPLC色谱图；
图32是本发明黄芩苷、盐酸小檗碱含量测定中，专属性考察HPLC色谱图；
图33是本发明黄芩苷、盐酸小檗碱含量测定中线性关系考察图谱，黄芩苷的线性关系；
图34是本发明黄芩苷、盐酸小檗碱含量测定中线性关系考察图谱，盐酸小檗碱线性的线性关系。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
实施例1。一种复方黄苦膏的质量检测方法；
配方：复方黄苦膏包括有黄芩80g、苦参70g、黄柏60g、蛇床子60g和马齿苋40g及辅料按照下述方法制备而成：
工艺：根据配方称取各药物，加水浸泡30分钟，8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，浓缩至60℃时的相对密度为1.10～1.30，以70％乙醇静置24小时分层，回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与配方量羟苯乙酯2g、白凡士林45g、单硬脂酸甘油酯120g、液体石蜡45g、硬脂酸40g混合，加热至75℃熔融得油相，将三乙醇胺4g、甘油70g、水加热至75℃得水相，将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌，并不断搅拌至冷却，制成乳膏剂，分装，即得。
质量检测方法；
性状：本品为棕黄色软膏；
鉴别：(1)苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇3ml，超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝2∶1∶0.5∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇3ml，超声处理3分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝1:1:1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：复方黄苦膏符合软膏剂项下有关的各项规定(2015版《中国药典》第四部通则0109)。
1、均匀、细腻，涂于皮肤或黏膜上无刺激性，易涂布。
2、无腐败、异臭、变色、变硬等变质现象，不得有油水分离及胀气现象。
3、粒度检查
检查法取供试品适量，置于载玻片上涂成薄膜，薄层面积相当于盖玻片面积，共涂3片，照粒度和粒度分布测定法(通则0982第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
4、最低装量检查法(2015版《中国药典》第四部通则0942)，符合规定。
含量测定：盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照高效液相色谱法(2015版《中国药典》第四部通则0512)测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为25℃；流速0.5ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇40ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声40min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的复方黄苦膏每1g含盐酸小檗碱不低于0.30mg，黄芩苷不低于2.0mg。
【功能主治】用于各种急慢性湿疹。
【用法与用量】外用，涂布于患处，一日2次。
【规格】
【贮藏】密封，置阴凉处。
实施例2。一种复方黄苦膏的质量检测方法；
配方：复方黄苦膏包括有黄芩90g、苦参80g、黄柏70g、蛇床子70g和马齿苋50g及辅料按照下述方法制备而成：
工艺：根据配方称取各药物，加水浸泡30分钟，8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，浓缩至60℃时的相对密度为1.10～1.30，以70％乙醇静置24小时分层，回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与配方量羟苯乙酯3g、白凡士林50g、单硬脂酸甘油酯125g、液体石蜡50g、硬脂酸45g混合，加热至75℃熔融得油相，将三乙醇胺5g、甘油75g、水加热至75℃得水相，将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌，并不断搅拌至冷却，制成乳膏剂，分装，即得。
质量检测方法；
性状：本品为棕黄色软膏；
鉴别：(1)所述苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝3∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝3:3:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：复方黄苦膏符合软膏剂项下有关的各项规定(2015版《中国药典》第四部通则0109)。
1、均匀、细腻，涂于皮肤或黏膜上无刺激性，易涂布。
2、无腐败、异臭、变色、变硬等变质现象，不得有油水分离及胀气现象。
3、粒度检查
检查法取供试品适量，置于载玻片上涂成薄膜，薄层面积相当于盖玻片面积，共涂3片，照粒度和粒度分布测定法(通则0982第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
4、最低装量检查法(2015版《中国药典》第四部通则0942)，符合规定。
含量测定：盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照高效液相色谱法(2015版《中国药典》第四部通则0512)测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的复方黄苦膏每1g含盐酸小檗碱不低于0.30mg，黄芩苷不低于2.0mg。
【功能主治】用于各种急慢性湿疹。
【用法与用量】外用，涂布于患处，一日2次。
【规格】
【贮藏】密封，置阴凉处。
实施例3。一种复方黄苦膏的质量检测方法；
配方：复方黄苦膏包括有黄芩80g、苦参90g、黄柏60g、蛇床子70g和马齿苋60g及辅料按照下述方法制备而成：
工艺：根据配方称取各药物，加水浸泡30分钟，8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，浓缩至60℃时的相对密度为1.10～1.30，以70％乙醇静置24小时分层，回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与配方量羟苯乙酯2g、白凡士林55g、单硬脂酸甘油酯120g、液体石蜡50g、硬脂酸50g混合，加热至75℃熔融得油相，将三乙醇胺4g、甘油80g、水加热至75℃得水相，将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌，并不断搅拌至冷却，制成乳膏剂，分装，即得。
质量检测方法；
性状：本品为棕黄色软膏；
鉴别：(1)苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇3-10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.6mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝4∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)所述蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇8ml，超声处理8分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1.2mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝4:3:3为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：复方黄苦膏符合软膏剂项下有关的各项规定(2015版《中国药典》第四部通则0109)。
1、均匀、细腻，涂于皮肤或黏膜上无刺激性，易涂布。
2、无腐败、异臭、变色、变硬等变质现象，不得有油水分离及胀气现象。
3、粒度检查
检查法取供试品适量，置于载玻片上涂成薄膜，薄层面积相当于盖玻片面积，共涂3片，照粒度和粒度分布测定法(通则0982第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
4、最低装量检查法(2015版《中国药典》第四部通则0942)，符合规定。
含量测定：盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照高效液相色谱法(2015版《中国药典》第四部通则0512)测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，1.2％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.3ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇60ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声40min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的复方黄苦膏每1g含盐酸小檗碱不低于0.30mg，黄芩苷不低于2.0mg。
【功能主治】用于各种急慢性湿疹。
【用法与用量】外用，涂布于患处，一日2次。
【规格】
【贮藏】密封，置阴凉处。
实施例4。一种复方黄苦膏的质量检测方法；
配方：复方黄苦膏包括有黄芩100g、苦参90g、黄柏80g、蛇床子80g和马齿苋60g及辅料按照下述方法制备而成：
工艺：根据配方称取各药物，加水浸泡30分钟，8倍量水煎煮两次，第一次1.5小时，第二次1小时，浓缩至60℃时的相对密度为1.10～1.30，以70％乙醇静置24小时分层，回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与配方量羟苯乙酯5g、白凡士林55g、单硬脂酸甘油酯130g、液体石蜡55g、硬脂酸50g混合，加热至75℃熔融得油相，将三乙醇胺6g、甘油80g、水加热至75℃得水相，将水相缓慢加入油相中，边加边搅拌，并不断搅拌至冷却，制成乳膏剂，分装，即得。
质量检测方法；
性状：本品为棕黄色软膏；
鉴别：(1)苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇3-10ml，超声处理40分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.7mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝5∶3∶2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
(2)蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇10ml，超声处理10分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝5:5:4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
检查：复方黄苦膏符合软膏剂项下有关的各项规定(2015版《中国药典》第四部通则0109)。
1、均匀、细腻，涂于皮肤或黏膜上无刺激性，易涂布。
2、无腐败、异臭、变色、变硬等变质现象，不得有油水分离及胀气现象。
3、粒度检查
检查法取供试品适量，置于载玻片上涂成薄膜，薄层面积相当于盖玻片面积，共涂3片，照粒度和粒度分布测定法(通则0982第一法)测定，均不得检出大于180μm的粒子。
4、最低装量检查法(2015版《中国药典》第四部通则0942)，符合规定。
含量测定：盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照高效液相色谱法(2015版《中国药典》第四部通则0512)测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，1.5％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为35℃；流速1.5ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇60ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声70min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明的复方黄苦膏每1g含盐酸小檗碱不低于0.30mg，黄芩苷不低于2.0mg。
【功能主治】用于各种急慢性湿疹。
【用法与用量】外用，涂布于患处，一日2次。
【规格】
【贮藏】密封，置阴凉处。
Claims (8)
1.一种复方黄苦膏的质量检测方法，所述复方黄苦膏按照重量份计，由黄芩80-100份、苦参70-90份、黄柏60-80份、蛇床子60-80份和马齿苋40-60份及辅料按照下述方法制备而成：根据配方称取各药物，加水浸泡，水煎煮两次，浓缩，以乙醇静置,回收乙醇并浓缩干燥得混合提取物，将混合提取物与辅料混合，制成乳膏剂，即得；其特征在于：所述质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定。
2.根据权利要求1所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇3-10ml，超声处理20-40分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.3-0.7mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝2-5∶1-3∶0.5-2∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
3.根据权利要求2所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝3∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
4.根据权利要求1所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇3-10ml，超声处理3-10分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含0.5-1.5mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝1-5:1-5:1-4为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
5.根据权利要求4所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝3:3:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
6.根据权利要求1所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.05-1.5％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为25-35℃；流速0.5-1.5ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇40-60ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声40-70min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
7.根据权利要求6所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
8.根据权利要求1所述的复方黄苦膏的质量检测方法，其特征在于：所述鉴别方法包括对苦参碱或蛇床子的薄层鉴别检测，所述含量测定方法包括对盐酸小檗碱或黄芩苷的含量测定，具体如下所示：
形状：本品为棕黄色软膏；
鉴别：(1)苦参碱的鉴别方法为：取本品内容物1g，研细，加甲醇5ml，超声处理30分钟，滤过，滤液作为供试品试液，另取苦参碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照中国药典薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液10μl、对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以丙酮∶甲苯∶醋酸乙酯∶浓氨试液＝3∶2∶1∶0.1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)蛇床子的鉴别方法为：取本品粉末0.3g，加乙醇5ml，超声处理5分钟，放置，取上清液作为供试品溶液；再取蛇床子素对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；吸取上述溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯:乙酸乙酯:正己烷＝3:3:2为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
检查：应符合软膏剂项下有关的各项规定；
含量测定：盐酸小檗碱或黄芩苷的含量检测方法为：照中国药典高效液相色谱法测定：
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，0.1％磷酸溶液为流动相B，梯度洗脱:0～9min，14％A；9～10min,14％→18％A；10～30min,18％→25％A；30～35min，25％→30％A，35～55min，30％→100％A；55～60min,100％A；检测波长为254nm；柱温为30℃；流速1.0ml/min；进样体积10μl；
对照品溶液的制备：精密称定小檗碱和黄芩苷对照品适量，加甲醇溶解，得到每1ml分别含0.1mg的混合溶液；
供试品溶液的制备：精密称定本品粉末0.2g，置100ml锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，在功率250W，频率40kHz条件下超声60min，放置至室温，称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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