CN110193093A - 一种新型软组织填充修复材料及其制备方法和用途 - Google Patents

一种新型软组织填充修复材料及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

发明公开了一种新型软组织填充修复材料及其制备方法和用途。所述材料通过下述成分制备而得：0－100％未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；0－100％经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；和0－100％聚乳酸微粒。

Description

一种新型软组织填充修复材料及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及创面修复和美容整形领域。更具体地涉及一种新型软组织填充修复材料及其制备方法和用途。
背景技术
现有的填充修复材料，在使用性能、制备方法等方面存在欠缺，需要进一步改进。脱细胞真皮基质填充修复材料如果单纯使用交联的脱细胞真皮基质微粒，则注射困难，不容易跟溶液形成均匀混悬液。如果单纯使用不交联的脱细胞真皮基质微粒，则注射困难，降解太快，不容易跟溶液均匀混悬液。
因此，本领域迫切需要提供一种注射容易、降解时间恰当、容易跟溶液均匀混悬的软组织填充修复材料。
发明内容
本发明旨在提供一种便于使用、降解速度适当的软组织填充修复材料。
在本发明的第一方面，提供了一种新型软组织填充修复材料，以成分的总重量计，所述材料由至少一种下述成分制备而得：
0－100wt％未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；
0－100wt％经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；
0－100wt％聚乳酸微粒。
在另一优选例中，所使用的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒的重量比为0.3-3:0.3-3:1；更优选为0.3-2:0.7-3:1；最优选为0.5-2:1-3:1。
在另一优选例中，所述未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒粒径为30-750微米；所述经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒粒径为30-750微米；所述聚乳酸微粒粒径为25-270微米。
在另一优选例中，所述经交联处理或未经交联处理的脱细胞真皮基质微粒不含生长因子或含微量的生长因子。
在本发明的第二方面，提供了一种如上所述的本发明提供的软组织填充修复材料的制备方法，所述方法包括步骤：将未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、聚乳酸微粒和水混合为凝胶状物质后经灭菌而得到如上所述的本发明提供的软组织填充修复材料。
在另一优选例中，所述异种脱细胞真皮基质为猪皮经脱脂脱细胞同时进行去α-gal抗原处理而得。
在另一优选例中，所述猪皮经脱脂脱细胞同时进行去α-gal抗原处理的步骤包括：
(1)将猪皮经脱脂脱细胞得到脱细胞真皮基质；
(2)将脱细胞真皮基质与半乳糖苷酶接触，经酶解去α-gal抗原得到异种脱细胞真皮基质。
在另一优选例中，还包括步骤：将异种脱细胞真皮基质进行冻干超细粉碎，制备成直径30-750微米的微粒。
在另一优选例中，酶解温度为30-37℃；脱细胞真皮基质和酶解液的用量比为250-500cm2/L。
在本发明的第三方面，提供了一种如上所述的本发明提供的软组织填充修复材料的用途，用于创面修复或美容整形；用于制备创面修复或美容整形的注射用软组织填充物；和/或作为打印原料用于3D打印。
据此，本发明提供了一种配方合理，制备方便，治疗效果好的软组织填充修复材料。
具体实施方式
发明人经过深入研究，发现将通过一定方法获得的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、以及聚乳酸微粒以一定的重量比混合而得的组织修复材料，更容易与溶液形成均匀混悬液，且容易注射，降解缓慢。在此基础上，完成了本发明。
软组织填充修复材料
本发明提供的软组织填充修复材料通过下述成分制备而得：
0－100％未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；
0－100％经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；和
0－100％聚乳酸微粒；
在本发明的一种实施方式中，未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒为10－35％，优选为20-25％；经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒为10－35％，优选为20-25％；聚乳酸微粒为30－80％，优选为40-60％。
本发明提供的软组织填充修复材料中所使用的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒的重量比为0.3-3:0.3-3:1，优选为0.3-2:0.7-3:1，更优选为0.5-2:1-3:1。
本发明提供的软组织填充修复材料具有三维网状结构。
制备方法
本发明提供的软组织填充修复材料中所使用的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质是将猪皮经脱脂脱细胞同时进行去α-gal抗原处理而得。所述方法包括步骤：
第一步，将猪皮进行脱脂脱细胞处理得到脱细胞真皮基质；
第二步，将洗净的脱细胞真皮基质和含有半乳糖苷酶的酶解液在水中混合，进行酶解；
第三步，将酶解好的脱细胞真皮基质在纯化水中平衡，得到未经交联处理的异种脱细胞真皮基质。
上述第一步中可以使用本领域常规的方法进行脱脂，例如但不限于，取新鲜的猪皮，削去皮下脂肪，浸入脱脂液脱脂。可以使用本领域常规的方法进行脱细胞，例如但不限于，利用SDS进行脱细胞处理，利用Triton-X-100，PEG(聚乙二醇)进行脱细胞处理等。脱细胞处理的结果是以得到的脱细胞组织的细胞核染色计，其中所含有的细胞为0－10％，较佳地为1－5％，更佳地为0％。
上述第二步中的洗净的脱细胞基质是用纯化水对第一步获得的脱细胞真皮基质进行反复清洗而得。
在本发明的一种实施方式中，上述第二步中将洗净的脱细胞真皮基质和含有半乳糖苷酶的酶解液在水中混合后，其中半乳糖苷酶的终浓度为15-20mg/L。
在本发明的一种实施方式中，上述第二步中进行酶解时洗净的脱细胞真皮基质和酶解液的用量比为250-500cm2/L。
上述第二步中的酶解温度为30-37℃，酶解时间为24小时。
在本发明的一种实施方式中，将酶解好的脱细胞真皮基质放入4℃纯化水中平衡2小时。
在本发明的一种实施方式中，所述未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒通过下述步骤得到：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1-2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1％-2.0％的过氧乙酸和质量浓度1.0％-5.0％的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30-60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:4-7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0％-4.0％碳酸钠、质量浓度1.0％-4.0％烧碱和质量浓度0.1％-1.0％表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂30-60分钟，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:4-7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1％-0.5％胰酶、质量浓度0.1％-0.3％激活剂、质量浓度0.2％-0.5％脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞30-60分钟，所述激活剂为质量浓度0.1％-0.3％硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2％-0.5％平平加，质量浓度0.2％-0.5％十二烷基硫酸钠中的一种，皮片与脱细胞液的质量比为1:4-7；
e、将未经交联处理的异种脱细胞真皮基质冻干、超细粉碎，制备成直径30-750微米的微粒。
本发明提供的软组织填充修复材料中所使用的经交联处理的异种脱细胞真皮基质的制备方法是将通过本发明提供的方法获得的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质与交联剂混合后而得。
在本发明的一种实施方式中，使未经交联的脱细胞真皮基质pH为3-4后加入交联剂；较佳地，加入相当于脱细胞基质重量0.1-10％的交联剂。
在本发明的一种实施方式中，所述经交联处理的异种脱细胞真皮基质通过下述步骤得到：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1-2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1％-2.0％的过氧乙酸和质量浓度1.0％-5.0％的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30-60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:4-7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0％-4.0％碳酸钠、质量浓度1.0％-4.0％烧碱和质量浓度0.1％-1.0％表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂30-60分钟，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:4-7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1％-0.5％胰酶、质量浓度0.1％-0.3％激活剂、质量浓度0.2％-0.5％脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞30-60分钟，所述激活剂为质量浓度0.1％-0.3％硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2％-0.5％平平加，质量浓度0.2％-0.5％十二烷基硫酸钠中的一种，皮片与脱细胞液的质量比为1:4-7；
e、将未经交联的新型脱细胞真皮基质加酸，调pH为3-4，加入相当于脱细胞基质重量0.1-10％的交联剂甲醛、戊二醛、环氧化物交联剂、碳化二亚胺、京尼平；
f、将经交联处理的异种脱细胞真皮基质冻干、超细粉碎，制备成直径30-750微米的微粒。
如本发明所用，“聚乳酸(polylactic acid,PLA)”是指多个乳酸分子通过相邻分子间羟基(-OH)羧基(-COOH)脱水缩合而形成的聚合物。分子量为50000-300000。
如本发明所用，“平平加”是指天然脂肪醇与环氧乙烷加成物。
如本发明所用，“京尼平(Genipin)”是指栀子苷经β-葡萄糖苷酶水解后的产物；CAS登录号6902-77-8。
在本发明的一种实施方式中，所述经交联处理或未经交联处理的脱细胞真皮基质微粒不含生长因子或含微量的生长因子。含微量生产因子的经交联处理或未经交联处理的脱细胞真皮基质微粒制作步骤如下：将通过本发明方法获得的所述经交联处理或未经交联处理的脱细胞真皮基质浸入浓度为0.01％-1％的生长因子溶液中，搅拌1-8小时，再经微粒化工艺处理而成；所述生长因子为成纤维细胞、VEGF(血管化因子)等中一种或两种以上。
本发明提供的软组织填充修复材料中所使用的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒或经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒可将获得的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质或经交联处理的异种脱细胞真皮基质分别进行冷冻干燥后粉碎成粒径为30-750微米的微粒。可以使用本领域常规的方法进行冷冻干燥，例如但不限于冻干机；可以使用本领域常规的方法进行粉碎，例如但不限于粉碎机。
本发明提供的软组织填充修复材料中所使用的聚乳酸微粒可以通过购买方法获得。
本发明提供的软组织填充修复材料是将处方量的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒与水混合为凝胶状物质后经灭菌而得到软组织填充修复材料。
可以使用本领域常规的方法进行灭菌，例如但不限于环氧乙烷、Co60射线辐照或电子束辐照等灭菌消毒方式。
用途
本发明提供的软组织填充修复材料作为创面修复或一种软组织填充，用于美容整形外科，如面部皱纹去除、凹陷填充等或各种原因引起的真皮及真皮下组织缺损或薄弱的修复治疗、各种原因引起的创面的覆盖治疗；和/或作为打印原料用于3D打印。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
本发明的主要优点在于：脱细胞真皮基质从动物皮肤中制取,来源广。猪皮质地与人相似,获取容易,价格低廉。脱细胞真皮基质微粒在填充凹陷畸形的同时,也减少了注射区周围表浅的皱纹。且脱细胞真皮基质微粒,诱导作用强，安全性好，吸收率低，能延长填充时间，使用方便，微创。明显优于普通填充修复材料产品。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
实施例1-7
制备软组织填充修复材料
异种脱细胞真皮基质由猪皮经脱脂脱细胞同时进行去α-gal抗原处理，工艺如下：
①猪皮经脱脂脱细胞工艺制成脱细胞真皮基质；
②脱细胞真皮基质用纯化水反复清洗干净；
③洗净脱细胞真皮基质放入酶解容器中，每升水中可以放置50片5*10cm脱细胞真皮基质，按终浓度为20mg/L加入含半乳糖苷酶的酶解液，将密闭容器置于摇床上孵育(200rpm/min),脱细胞真皮基质和酶解液的用量比为250-500cm2/L。温度为30℃-37℃，酶解24h，后弃去液体；
④纯化水反复清洗3次，摇床中洗涤(30℃-37℃，200rpm/min)，每次2-10分钟，弃去液体；
⑤用pH10.0的水溶液清洗残留酶，摇床中洗涤(30℃-37℃，200rpm/min)，反复清洗6次，清洗时间过夜共计20h，弃去液体；
⑥纯化水清洗两次，每次半小时，30℃-37℃，摇床摇晃，弃去液体；
⑦将酶解好猪皮放入纯化水中平衡,4℃,2小时；得到未经交联的异种脱细胞真皮基质。
未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒由下列步骤完成：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1-2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1％-2.0％的过氧乙酸和质量浓度1.0％-5.0％的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30-60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:4-7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0％-4.0％碳酸钠、质量浓度1.0％-4.0％烧碱和质量浓度0.1％-1.0％表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂30-60分钟，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:4-7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1％-0.5％胰酶、质量浓度0.1％-0.3％激活剂、质量浓度0.2％-0.5％脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞30-60分钟，所述激活剂为质量浓度0.1％-0.3％硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2％-0.5％平平加，质量浓度0.2％-0.5％十二烷基硫酸钠中的一种，皮片与脱细胞液的质量比为1:4-7；
e、将未经交联处理的异种脱细胞真皮基质冻干、超细粉碎，制备成直径30-750微米的微粒；
经交联处理的异种脱细胞真皮基质由下列步骤完成：
a、制备断层皮片工艺：用取皮机将动物皮肤制成厚度为0.1-2.0mm的断层皮片，用打孔器将断层皮片制成不同形状的断层皮片；
b、病毒灭活工艺：将断层皮片用质量浓度0.1％-2.0％的过氧乙酸和质量浓度1.0％-5.0％的氯化钠组成的病毒灭活溶液进行灭活30-60分钟，皮片与病毒灭活溶液的质量比为1:4-7；
c、脱脂工艺：采用质量浓度1.0％-4.0％碳酸钠、质量浓度1.0％-4.0％烧碱和质量浓度0.1％-1.0％表面活性剂组成的混合脱脂剂进行脱脂30-60分钟，所述表面活性剂为平平加、十二烷基氨基丙酸钠、脂肪醇聚氧乙烯醚、曲拉酮中的一种，皮片与混合脱脂剂的质量比为1:4-7；
d、脱细胞工艺：采用质量浓度0.1％-0.5％胰酶、质量浓度0.1％-0.3％激活剂、质量浓度0.2％-0.5％脱脂剂组成的脱细胞液进行脱细胞30-60分钟，所述激活剂为质量浓度0.1％-0.3％硫酸铵，所述脱脂剂为质量浓度0.2％-0.5％平平加，质量浓度0.2％-0.5％十二烷基硫酸钠中的一种，皮片与脱细胞液的质量比为1:4-7；
e、将未经交联的脱细胞真皮基质加酸，调pH为3-4，加入相当于脱细胞基质重量0.1-10％的交联剂甲醛、戊二醛、环氧化物交联剂、碳化二亚胺、京尼平；
f、将经交联处理的异种脱细胞真皮基质冻干、超细粉碎，制备成直径30-750微米的微粒；
购得聚乳酸微粒，粒径为25-270微米。
将交联异种脱细胞真皮基质微粒20-25％、未交联异种脱细胞真皮基质微粒20-25％、聚乳酸微粒40-60％，装在注射器中，并经辐照灭菌得到软组织填充修复材料，其中交联异种脱细胞真皮基质微粒、未交联异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒的重量比如表1所示。
表1 实施例1-7制备得到的软组织填充修复材料中交联异种脱细胞真皮基质微粒、未交联异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒的重量比
实施例8
软组织填充修复材料注射动物体内后降解试验
实验方法：动物用3％的戊巴比妥腹腔注射(40mg/kg)麻醉后，背部皮肤碘酒、乙醇消毒，于每只兔背、腹部做6个1cm长的切口(相距3cm以上)，钝性分离皮下，植入实施例1制得的软组织填充修复材料，植入后分别于1,2,4,12,24,48周于每只兔随机取一植入部位切开观察，取出实验材料，用排水法测量体积。取出材料的2/3用10％甲醛溶液固定后，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，HE染色，光镜观察。另1/3用4％多聚甲醛固定后，制成超薄切片，进行透射电镜观察。
实验结果：动物均存活，切口均愈合良好，无红肿、皮肤破溃、感染、移植物外露等情况。大体观察实验组材料手感柔软，4周开始略硬，中央部仍柔软，至12周以后稳定，硬度未再有增加，质地较柔软。实验组移植物2周时有极薄的透明包膜产生，且易与移植物分离，4周时包膜与移植物不易分离，仍菲薄、透明，至48周包膜柔软，无明显增厚及挛缩。移植物周围无水肿、充血。测量实验组体积并计算各时期吸收率结果见表2。
表2 实验组植入后体积及吸收率
1周时实验组移植物中发现少量成纤维细胞及中性粒细胞、单核细胞，未见明显血管结构。2周开始在实验组移植物中发现完整毛细血管结构，血管中可见红细胞。实验组移植物中成纤维细胞数目较前增加，有少量的中性粒细胞、单核细胞及淋巴细胞浸润。4周时实验组炎性细胞数目较前减少。植入后实验组植入物为兔皮下疏松结缔组织包绕，2周时有包膜产生，包膜结构主要为胶原，其中有成纤维细胞、中性粒细胞及单核细胞。4周开始稳定，包膜菲薄，约3～6层细胞厚度，成纤维细胞及炎性细胞均减少。
当经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒的重量比为1:1:1、0.5:1.5:1、0.5:1:1.5、1.5:0.5:1、1:0.5:1.5、1.5:1:0.5、1:1.5:0.5时，在动物体内代谢降解时间分别如表3
表3 三种组份重量比与注射后在动物体内降解时间
结果表明，当未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、聚乳酸微粒的重量比在本发明设计的范围内时，更容易跟溶液形成均匀混悬液，且容易注射，降解缓慢。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims (10)

1.一种新型软组织填充修复材料，其特征在于，以成分的总重量计，所述材料由至少一种下述成分制备而得：
0－100wt％未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；
0－100wt％经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒；
0－100wt％聚乳酸微粒。
2.如权利要求1所述的软组织填充修复材料，其特征在于，所使用的未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒和聚乳酸微粒的重量比为0.3-3:0.3-3:1；优选0.3-2:0.7-3:1；更优选0.5-2:1-3:1。
3.如权利要求1所述的软组织填充修复材料，其特征在于，所述未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒粒径为30-750微米；所述经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒粒径为30-750微米；所述聚乳酸微粒粒径为25-270微米。
4.如权利要求1所述的软组织填充修复材料，其特征在于，所述经交联处理或未经交联处理的脱细胞真皮基质微粒不含生长因子或含微量的生长因子。
5.一种如权利要求1所述的软组织填充修复材料的制备方法，其特征在于，所述方法包括步骤：将未经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、经交联处理的异种脱细胞真皮基质微粒、聚乳酸微粒和水混合为凝胶状物质后经灭菌而得到如权利要求1所述的软组织填充修复材料。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述异种脱细胞真皮基质为猪皮经脱脂脱细胞同时进行去α-gal抗原处理而得。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述猪皮经脱脂脱细胞同时进行去α-gal抗原处理的步骤包括：
(1)将猪皮经脱脂脱细胞得到脱细胞真皮基质；
(2)将脱细胞真皮基质与半乳糖苷酶接触，经酶解去α-gal抗原得到异种脱细胞真皮基质。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，还包括步骤：将异种脱细胞真皮基质进行冻干超细粉碎，制备成直径30-750微米的微粒。
9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，酶解温度为30-37℃；脱细胞真皮基质和酶解液的用量比为250-500cm2/L。
10.一种如权利要求1-4任一项所述的软组织填充修复材料的用途，其特征在于，用于创面修复或美容整形；用于制备创面修复或美容整形的注射用软组织填充物；和/或作为打印原料用于3D打印。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050181016A1 (en) * 2003-07-17 2005-08-18 Toby Freyman Decullularized extracellular matrix of conditioned body tissues and uses thereof
CN101172165A (zh) * 2007-11-16 2008-05-07 广东冠昊生物科技有限公司 生物型骨修复材料
CN101366978A (zh) * 2008-09-03 2009-02-18 陕西瑞盛生物科技有限公司 可注射用的微粒组织充填材料及其制备方法
CN102580153A (zh) * 2012-03-09 2012-07-18 潘银根 一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法
CN103127551A (zh) * 2013-03-13 2013-06-05 潘华倩 异种脱细胞真皮基质微粒软组织填充剂及其制备方法
CN103432627A (zh) * 2013-08-26 2013-12-11 北京瑞健高科生物科技有限公司 一种制备动物脱细胞组织基质材料的方法及其制备的组织基质材料

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050181016A1 (en) * 2003-07-17 2005-08-18 Toby Freyman Decullularized extracellular matrix of conditioned body tissues and uses thereof
CN101172165A (zh) * 2007-11-16 2008-05-07 广东冠昊生物科技有限公司 生物型骨修复材料
CN101366978A (zh) * 2008-09-03 2009-02-18 陕西瑞盛生物科技有限公司 可注射用的微粒组织充填材料及其制备方法
CN102580153A (zh) * 2012-03-09 2012-07-18 潘银根 一种制备脱细胞真皮基质医用组织补片的方法
CN103127551A (zh) * 2013-03-13 2013-06-05 潘华倩 异种脱细胞真皮基质微粒软组织填充剂及其制备方法
CN103432627A (zh) * 2013-08-26 2013-12-11 北京瑞健高科生物科技有限公司 一种制备动物脱细胞组织基质材料的方法及其制备的组织基质材料

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
武天佑等: "《关节软骨脱细胞支架材料的制备》", 《中国组织工程研究与临床康复》 *

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