CN110191717A - 向中枢神经系统递送神经保护性多肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本公开提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括通过提供神经保护性多肽的持续释放的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，该神经保护性多肽包括选自GLP‑1、毒蜥外泌肽‑4、或治疗有效性GLP‑1或毒蜥外泌肽‑4类似物的至少一种神经保护性多肽；该神经保护性多肽结合并激活与GLP‑1、毒蜥外泌肽‑4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且控释神经保护性制剂或神经保护性多肽的持续释放相对于神经保护性多肽的速释制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分CNS的递送。还公开了治疗患有CNS相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。

Description

向中枢神经系统递送神经保护性多肽的方法
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年10月20日提交的美国临时申请第62/410,748号的优先权，通过引用将其内容以其整体并入本文。
政府资金
支持本申请的研究由Secretary,Department ofHealth andHuman Services(美国卫生与公众服务部)代表美利坚合众国进行。政府在本发明中享有一定权利。
通过引用并入
遵照37C.F.R.§1.52(e)(5)，名称为1568390_100WO2_Sequence_Listing_ST25.txt；大小为24.4KB；使用Patent-In 3.5和Checker 4.4.0在2017年9月3日生成的电子文件中包含的序列信息通过引用以其整体并入本文。
背景
领域
本公开涉及包含神经保护治疗性多肽，例如胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、毒蜥外泌肽-4(exendin-4)和/或其肽类似物的组合物。特别地，本公开涉及保持神经保护治疗性多肽的稳态血浆水平以促进穿过血脑屏障(BBB)递送至脑，用以治疗神经变性病症的方法。
背景技术
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)(通常由肠神经内分泌细胞响应食物而分泌的激素)已被建议作为2型糖尿病的新治疗(Gutniak等人,1992；Nauck等人,1993)。即使在患有长期2型糖尿病的对象中，它增加通过β细胞的胰岛素释放(Nauck等人,1993)。GLP-1治疗具有胜过胰岛素疗法的优点，因为GLP-1刺激内源性胰岛素分泌，当血糖水平降低时该分泌关闭(Nauck等人,1993；Elahi等人,1994)。GLP-1通过增加胰岛素释放和合成、抑制胰高血糖素释放和减少胃排空来促进血糖正常(Nauck等人,1993；Elahi等人,1994；Wills等人,1996；Nathan等人,1992；De Ore等人,1997)。GLP-1是胰高血糖素原的翻译后修饰的产物。GLP-1及其活性片段GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺的序列在本领域中是已知的(Fehmann等人,1995)。虽然已经提议GLP-1作为治疗糖尿病的治疗剂，但是其具有短的生物半衰期(De Ore等人,1997)，即使在通过大丸剂皮下提供时也如此(Ritzel等人,1995)。GLP-1降解(和GLP-1(7-36)酰胺)部分归因于酶二肽酰肽酶(DPP 1V)，其在氨基酸8和9(丙氨酸和谷氨酸)之间切割该多肽。
毒蜥外泌肽-4是在吉拉毒蜥(Gila monster lizard)的唾液腺中产生的多肽(Goke等人,1993)。毒蜥外泌肽-4的氨基酸序列在本领域中是已知的(Fehmann等人1995)。虽然它是独特的非哺乳动物基因的产物并似乎仅在唾液腺中表达(Chen和Drucker,1997)，但是毒蜥外泌肽-4与GLP-1共享52％的氨基酸序列同源性，并在哺乳动物中与GLP-1受体相互作用(Goke等人,1993；Thorens等人,1993)。在体外，毒蜥外泌肽-4已经显示促进了由产胰岛素细胞分泌胰岛素，并且假定在等摩尔量的情况下，在引起胰岛素从产胰岛素细胞中释放时比GLP-1更有效。此外，毒蜥外泌肽-4有效地刺激胰岛素释放。以在啮齿动物和人中降低血浆葡萄糖水平，并且比GLP-1更长效。但是，由于其并非天然存在于哺乳动物中，因此毒蜥外泌肽-4在缺乏GLP-1的哺乳动物中具有某些潜在的抗原性质。
除了减少糖尿病中发生的胰岛素产生之外，周围神经病通常与糖尿病相关。所有糖尿病对象的20％～30％最终发展出周围神经病。此外，有报道称患有心脏病、中风、高血压和糖尿病的阿尔茨海默氏病的风险提高(Moceri等人,2000；Ott等人,1999)。因此，糖尿病是一种也与神经变性疾病相关的疾病。
GLP-1受体存在于啮齿类动物(Jin等人1988,Shughrue等人1996,Jia等人2015)和人类(Wei和Mojsov 1995,Satoh等人2000)的脑中。该分布的化学筑构学似乎主要局限于下丘脑、丘脑、脑干、侧间隔、穹窿下器官和极后区，所有脑室周围区域通常存在大量肽受体。但是，也遍及尾壳核、大脑皮质和小脑中检测到GLP-1的特异性结合位点(Campos等人1994,Calvo等人1995,和Goke等人1995)，尽管密度较低。例如Lu等人2014证明GLP-1受体在雪貂(Mustelaputoriusfuro，Ferrets)的杏仁核、小脑、额叶皮质、海马、下丘脑、中脑、髓质、脑桥、纹状体、丘脑和颞叶皮质中表达。GLP-1受体在脑中的表达水平不受衰老影响。
此外，已经显示GLP-1与认知和行为有关(During等人2003)。事实上，许多研究已经建议GLP-1受体激动剂作为神经变性疾病的新治疗，所述疾病包括帕金森病、阿尔茨海默氏病、亨廷顿病、创伤性脑损伤、中风和周围神经病。但是，药物穿过血脑屏障(BBB)递送至中枢神经系统(CNS)是治疗CNS相关疾病的重大障碍。例如，GLP-1具有1-2分钟的短半衰期，并且GLP-1-转铁蛋白融合蛋白(GLP-1-Tf)(产生该蛋白以抵抗失活并因此将GLP-1的半衰期提高至大约2天)不能穿过BBB(Kim等人2010和Martin等人2012)。
另外，虽然与GLP-1-Tf相比，已经显示毒蜥外泌肽-4改善了RotaRod性能(Martin等人2012)，并已知从血液进入脑，但是进入率是有限的(Kastin AJ和Akeerstrom V,International Journal ofObesity(2003)27,313–318)。此外，艾塞那肽已经显示在提供每日一次持续七天的后处理时在用于帕金森病的MPTP小鼠模型中提供神经保护方面无效(Liu等人2015)。
因此，在本领域中对治疗神经变性病症的方法，以及保持神经保护性GLP-1受体激动剂的稳态血浆水平，由此促进和驱动药物穿过BBB向中枢神经系统的递送的方法存在着需要。
发明概述
在本公开的一个方面，提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括：通过提供神经保护性多肽的持续释放或递送的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，该神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性肽的速释制，控释神经保护性制剂或神经保护性多肽的持续释放剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
在本公开的另一方面，提供了治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括：通过提供神经保护性多肽的持续释放或递送的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一种结合的受体；并且其中相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或装置增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在本公开的一个方面，提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括向对象的全身血液循环施用控释神经保护性制剂。在一个实施方案中，控释神经保护性制剂包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物(例如毒蜥外泌肽-4类似物)的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽(如毒蜥外泌肽-4)、或其组合中的至少一种结合的受体，并且相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在某些实施方案中，控释制剂是神经保护性多肽的长效制剂。
在其它实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的贮库制剂。
在特定实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的组合物。
在额外的实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物和包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽。
在特定实施方案中，控释神经保护性制剂包含：包括具有神经保护性多肽的核和可生物降解的聚合物的控释微球；以及包覆该核的包衣层。
在一个实施方案中，施用控释神经保护性制剂减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
在进一步的实施方案中，CNS相关病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病(CTE)、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在某一实施方案中，施用控释神经保护性制剂包括注射该控释神经保护性制剂。
在额外的实施方案中，注射控释神经保护性制剂是皮下注射。例如，施用控释神经保护性制剂可以包括皮下注射该控释神经保护性制剂。
在另一个实施方案中，施用控释神经保护性制剂导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在其它实施方案中，施用控释神经保护性制剂导致累积提高在对象中在脑脊液(CSF)、脑或其组合中的神经保护性多肽浓度。
在特定实施方案中，CSF中的神经保护性多肽浓度在大约5～大约400pg/mL(例如大约10～大约400pg/mL)的范围内。
在额外的方面，提供了治疗患有CNS相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括向对象的全身血液循环施用治疗有效量的控释神经保护性制剂。该控释神经保护性制剂包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽(如毒蜥外泌肽-4)、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽(如毒蜥外泌肽-4)类似物的至少一种神经保护性多肽；神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)或其组合中的至少一种结合的受体；并且相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的BBB向至少一部分CNS的递送。
在某些实施方案中，控释制剂是神经保护性多肽的长效制剂。
在其它实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的贮库制剂。
在额外的实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的组合物。
在额外的实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物和包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽。
在特定实施方案中，控释神经保护性制剂包含：包括具有神经保护性多肽的核和可生物降解的聚合物的控释微球；以及包覆该核的包衣层。
在特定实施方案中，施用控释神经保护性制剂减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
在一个实施方案中，CNS病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在进一步的实施方案中，施用控释神经保护性制剂包括向对象注射该控释神经保护性制剂。
在某些实施方案中，向对象注射控释神经保护性制剂是皮下注射。
在额外的实施方案中，施用控释制剂导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在一些实施方案中，施用控释制剂导致累积提高在脑脊液(CSF)、脑或其组合的至少一种中的神经保护性多肽浓度。
在进一步的方面，提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括：向对象的全身血液循环提供选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽的持续递送，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
在又一方面，提供了治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括：向对象的全身血液循环提供选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽的持续递送，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一种结合的受体；并且其中相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在一个实施方案中，提供一种或更多种神经保护性多肽的持续释放包括经由装置(例如泵、微型泵、渗透泵、渗透递送装置、输液泵、静脉内施用装置、蠕动泵、微型输液泵等等)施用多肽。
在某些实施方案中，以大约1pM/kg/min～大约30pM/kg/min(例如大约3pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min)的速率施用一种或更多种神经保护性多肽。
在其它实施方案中，施用控释神经保护性制剂或提供神经保护性多肽的持续递送减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
在特定实施方案中，CNS相关病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在一个实施方案中，施用控释制剂或提供神经保护性多肽的持续释放导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在某些实施方案中，施用控释制剂或提供神经保护性多肽的持续释放导致累积提高在脑脊液(CSF)、脑或其组合中的至少一者中的神经保护性多肽浓度。
在又一个实施方案中，CSF中的神经保护性多肽浓度在大约5～大约400pg/mL的范围内。
在一些实施方案中，CFS中的稳态多肽浓度与血浆中的稳态多肽浓度的比率在大约0.1％～大约5％的范围内。
在进一步的实施方案中，神经保护性多肽选自SEQ ID NOS:1-55。例如，神经保护性多肽可以包含选自SEQ ID NOS:1-55的氨基酸序列。
在其它实施方案中，毒蜥外泌肽-4类似物由化学式I或其药学上可接受的盐表示：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26Xaa27 Xaa28 -Z1,
(化学式I)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基；
Xaa22是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
Xaa27是Ala或Lys；
Xaa28是Ala或Asn；且
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser SerGly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2，
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸或N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Ty(例如Ser)，且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中的不超过三个是Ala；且
当Xaa1是His、Arg或Tyr时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
在其它实施方案中，毒蜥外泌肽-4类似物由化学式II或其药学上可接受的盐表示：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26X1-Z1,
(化学式II)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R(其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基、或环烷基-烷酰基)；
Xaa22是Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
X1是Lys Asn、Asn Lys、Lys-NHε-R Asn、Asn Lys-NHε-R、Lys-NHε-R Ala、AlaLys-NHε-R，其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基，或环烷基烷酰基；
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser SerGly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸和N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr；且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25和Xaa26中的不超过三个是Ala；且
当Xaa1是His、Arg、Tyr或4-咪唑丙酰基时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
附图简述
并入本说明书中并构成其一部分的附图阐述了本公开的(一个)数个实施方案，并与说明书一起用来解释本公开的原理。
图1A.阐述来自对成年(9周龄)雄性Sprague-Dawley大鼠单次皮下施用2mg/kg持续释放艾塞那肽(PT302)的时间依赖性艾塞那肽(毒蜥外泌肽-4)血浆水平的图。
图1B.阐述来自对成年(9周龄)雄性Sprague-Dawley大鼠单次皮下施用2.4mg/kg、4.8mg/kg或9.6mg/kg持续释放艾塞那肽(PT302)的时间依赖性艾塞那肽(毒蜥外泌肽-4)血浆水平的图。
图2.阐述来自以4.0mg/kg的量对成年(9周龄)雄性Sprague-Dawley大鼠单次皮下注射持续释放艾塞那肽(PT304)的时间依赖性毒蜥外泌肽-4血浆水平的图。
图3.阐述经10周时间段在以所示量和时间施用PT302或PT304的雄性Sprague-Dawley大鼠中的时间依赖性毒蜥外泌肽-4血浆水平的图。
图4A.实施例2的研究设计的概述，其中Sprague-Dawley大鼠在前脑内侧束的6-OHDA单侧损害之前施用PT302。
图4B.阐述经PT302预处理的6-OHDA大鼠的甲基苯丙胺诱导的(meth诱导的)旋转行为的图。
图4C.阐述经PT302预处理的6-OHDA大鼠中毒蜥外泌肽-4的血浆水平的图。
图5A.实施例3的研究设计的概述，其中Sprague-Dawley大鼠在前脑内侧束的6-OHDA单侧损害之后施用PT302。
图5B.阐述接受使用PT302的后处理的6-OHDA大鼠的甲基苯丙胺诱导的旋转行为的图。
图5C.对患有前脑内侧束的6-OHDA单侧损害的大鼠实施的纹状体的酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学的代表性显微图像，所述大鼠接受载体(对照；大鼠#866、#883和#886)和PT302(大鼠#881、#875、#882)。对每只动物备注毒蜥外泌肽-4血浆浓度(ng/ml)。
图5D.阐述在图5C中描述的以及与图5C相关的免疫组织化学中观察到的定量TH免疫反应性的图。
图5E.对患有前脑内侧束的6-OHDA单侧损害的大鼠实施的黑质的TH免疫组织化学的代表性显微图像，所述大鼠接受载体(对照；大鼠#866、#883和#886)和PT302(大鼠#881、#875和#882)。对每只动物备注毒蜥外泌肽-4血浆浓度(ng/ml)。
图5F.阐述在图5E中描述的以及与图5E相关的免疫组织化学中观察到的定量TH免疫反应性的图。
图5G和5H.在来自大鼠的脑的未受损害侧上观察的TH+神经元的代表性显微图像。
图5I.来自患有前脑内侧束的6-OHDA单侧损害的大鼠的脑的损害侧上黑质中不存在TH+神经元的代表性显微图像。
图5J、5K和5L.PT302处理的6-OHDA大鼠的脑的代表性图像。
图5M.阐述在纹状体中在归一化TH免疫反应性与毒蜥外泌肽-4血浆水平之间观察到的显著相关性的图。
图5N.阐述在黑质中在毒蜥外泌肽-4血浆水平与TH免疫反应性之间观察到的显著相关性的图。
图6A.概述了实施例4的研究设计。
图6B.毒蜥外泌肽-4和PT302处理减少了患有前脑内侧束的6-OHDA单侧损害的大鼠的旋转。
图6C.来自对照(空白)大鼠、6-OHDA大鼠、毒蜥外泌肽-4处理的6-OHDA大鼠和PT302处理的6-OHDA大鼠的黑质的代表性显微图像。
图6D.阐述图6C的定量数据的图。
图7A.实施例5的研究设计的概述。
图7B.PT302显著减少了单侧6-OHDA-损害的大鼠的旋转行为，而毒蜥外泌肽-4不减少单侧6-OHDA-损害的大鼠的旋转行为。
图8A.实施例6的研究设计的概述。
图8B.阐述PT302显著增加了经MPTP-处理的小鼠中从金属丝坠落的时间，而毒蜥外泌肽-4不增加从金属丝坠落的时间的图。
图9A.实施例8的研究设计的概述。
图9B.阐述持续释放艾塞那肽在受轻度创伤性脑损伤(mTBI)攻击的小鼠中显著提高了新物体识别的图。
图10A.阐述毒蜥外泌肽-4血浆水平在PT302施用后持续七天并额外地为剂量依赖性的图。
图10B.阐述在正常/对照小鼠与受mTBI攻击的小鼠之间没有观察到源自PT302施用的毒蜥外泌肽-4血浆水平的显著差异的图。
图10C.阐述能够在血浆中累积并时间依赖性地维持三种不同剂量的持续释放艾塞那肽(PT302：0.024、0.12和0.6mg/kg)的图。
图11A.阐述如通过新物体识别范式在mTBI后7天评估的那样，与未经处理的受mTBI攻击的小鼠相比，持续释放艾塞那肽(PT302：0.024、0.12和0.6mg/kg)在受mTBI攻击的小鼠中导致对新物体的高度偏爱的图，所述未经处理的受mTBI攻击的小鼠遭受视觉记忆缺陷，并在新物体附近花费较少时间。
图11B.阐述如在mTBI后7天通过Y迷宫评估的那样，持续释放艾塞那肽(PT302：0.024、0.12和0.6mg/kg)改善了未经处理的mTBI攻击小鼠中观察到的mTBI-空间记忆缺陷的图。
图11C.阐述图11A和11B的结果并非焦虑样行为的结果的图。
图12A.阐述如通过新物体识别范式在mTBI后30天评估的那样，与未经处理的mTBI诱导的小鼠相比，持续释放艾塞那肽(PT302：0.12和0.6mg/kg)在mTBI诱导的小鼠中导致对新物体的高度偏爱的图，所述未经处理的mTBI诱导的小鼠遭受视觉记忆缺陷，并在新物体附近花费较少时间。
图12B.阐述如在mTBI后30天通过Y迷宫评估的那样，持续释放艾塞那肽(PT302：0.12和0.6mg/kg)改善了未经处理的mTBI诱导的小鼠中观察到的mTBI-空间记忆缺陷的图。
图12C.阐述图12A和12B的结果并非焦虑样行为的结果的图。
图13A.阐述持续释放艾塞那肽(PT302：0.6mg/kg)能够防止在mTBI诱导的小鼠的皮质、CA3和齿状回中观察到的神经元减少的代表性图像。
图13B.阐述与图13A中的代表性图像相关的大脑皮质数据的定量的图，其证明持续释放艾塞那肽(PT302：0.6mg/kg)能够防止在mTBI诱导的小鼠的大脑皮质中观察到的神经元减少。
图13C.阐述与图13A中的代表性图像相关的CA3数据的定量的图，其证明持续释放艾塞那肽(PT302：0.6mg/kg)能够防止在mTBI诱导的小鼠的海马的CA3区中观察到的神经元减少。
图13D.阐述与图13A中的代表性图像相关的齿状回数据的定量的图，其证明持续释放艾塞那肽能够防止在mTBI诱导的小鼠的海马的齿状回区中观察到的神经元减少。
图14A.在对照(CTRL)小鼠与提供载体或0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)的mTBI攻击的小鼠中，作为归因于脑损伤的神经元损失的标志物的C染色的代表性图像。
图14B.阐述以下内容的图：与图14A的代表性图像相关的海马CA1区数据的定量以及在未经处理的mTBI诱导的小鼠的CA1中归因于创伤性脑损伤的神经元损失的强势提高(其随着施用0.6mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图14C.阐述以下内容的图：与图14A的代表性图像相关的海马CA3区数据的定量以及在未经处理的mTBI诱导的小鼠的CA3中归因于创伤性脑损伤的神经元损失的强势提高(其随着施用0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图14D.阐述以下内容的图：与图14A的代表性图像相关的齿状回数据的定量以及在未经处理的mTBI诱导的小鼠的齿状回中归因于创伤性脑损伤的神经元损失的强势提高(其随着施用0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图14E.阐述以下内容的图：与图14A的代表性图像相关的大脑皮质数据的定量以及在未经处理的mTBI诱导的小鼠的皮质中归因于创伤性脑损伤的神经元损失的强势提高(其随着施用0.6mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图15A.在对照小鼠与提供载体或0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)的mTBI诱导的小鼠中作为归因于创伤性脑损伤的小胶质细胞激活和神经炎症的标志物的离子化钙结合适配分子1(IBA1)染色的代表性图像。
图15B.阐述以下内容的图：与图15A的代表性图像相关的CA1数据的定量以及促炎细胞因子TNF-α在未处理的mTBI诱导小鼠的CA1中的IBA1阳性细胞中显著提高(其随着施用0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图15C.阐述以下内容的图：与图15A的代表性图像相关的CA3数据的定量以及促炎细胞因子TNF-α在未经处理的mTBI诱导的小鼠的CA3中的IBA1阳性细胞中显著提高(其随着施用0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图15D.阐述以下内容的图：与图15A的代表性图像相关的齿状回数据的定量以及促炎细胞因子TNF-α在未经处理的mTBI诱导的小鼠的齿状回中的IBA1阳性细胞中显著提高(其随着施用0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽(PT302)而显著降低)。
图15E.阐述以下内容的图：与图15A的代表性图像相关的大脑皮质数据的定量以及促炎细胞因子TNF-α在未经处理的mTBI诱导的小鼠的皮质中的IBA1阳性细胞中显著提高(其随着施用0.6mg/kg或0.12mg/kg的持续释放艾塞那肽而显著降低)。
发明详述
本公开基于本文中所描述的活性成分(例如GLP-1、毒蜥外泌肽和GLP-1及毒蜥外泌肽的生物活性类似物或衍生物)令人惊讶和意想不到地增强的递送。参照本公开的优选实施方案的以下详述和本文中包括的实施例并参照附图及其之前和之后的描述，可以更容易地理解本说明书。
在公开和描述本发明的化合物、组合物、制品、装置和/或方法之前，应理解，本公开不限于具体的合成方法、具体的治疗方案、或特定的提纯程序，因此当然可以变化。还应理解，本文中所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的而非意在是限制性的。
通过引用将本文中提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献以其整体并入本文，包括通过引用将例如美国专利第8,853,160号、美国专利第8,278,272号、美国专利第7,576,050号、美国专利第9,155,702号、国际专利公开WO/2003/011892、和Gu等人(Clinical Therapeutics.36(1):101-114(2014))出于所有目的以其整体并入本文。
除非上下文另行明确，规定本说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指示物。因此，例如提及“一种多肽”包括多肽的混合物，提及“一种药物载体”包括两种或更多种此类载体的混合物，等等。
范围在本文中可以表达为从“大约”一个特定值和/或至“大约”另一个特定值。当表达此类范围时，另一个实施方案包括从一个特定值和/或至另一个特定值。类似地，在通过使用先行词“大约”将值表达为近似值时，应理解，该特定值构成另一个实施方案。还应理解，各个范围的端点相对于另一个端点均是有意义的，并且独立于另一个端点。本文中所用的“大约”指给定值±10％。
在本说明书中和在下面的权利要求书中，将提及许多术语，这些术语应被定义为具有以下含义：
“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或情况可以发生或可以不发生，并且该描述包括所述事件或情况发生的实例和不发生的实例。
如通篇中所用的“对象”表示个体。在某些实施方案中，对象是哺乳动物，例如灵长类动物。在一个特定实施方案中，对象是人。因此，“对象”可以包括驯养动物，例如猫、狗等等；家畜(例如牛、马、猪、绵羊、山羊等等)和实验室动物(例如小鼠、兔子、大鼠、豚鼠等等)。
除非上下文另行说明，术语“多肽”和“肽”通常可互换使用。除非另行说明，“多肽”和“肽”均可指天然存在或非天然存在的通过肽键连接的氨基酸。
术语“稳态”以其在药代动力学中的普通含义使用。简而言之，稳态浓度(例如在血浆或脑脊液(CSF)中)是当神经保护性多肽的施用速率等于该神经保护性多肽被对象身体消除的速率时，在血浆和CSF中的浓度。确定本公开的神经保护性多肽的稳态浓度对本领域普通技术人员而言是常规的。
“分离的多肽”或“纯化的多肽”表示基本不含在自然界中或在培养中通常与多肽相关的材料的多肽。本公开的多肽可以例如通过提取自可得的天然来源(例如哺乳动物细胞)、通过表达编码该多肽的重组核酸(例如在细胞中或在无细胞的翻译系统中)、或通过化学合成该多肽来获得。此外，多肽可以通过裂解全长多肽来获得。当多肽是较大的天然存在的多肽的片段时，分离的多肽比全长的天然存在的多肽(分离的多肽是其片段)更短且排除该全长多肽。
本公开涉及向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括向对象的全身血液循环施用控释神经保护性制剂，其中：控释神经保护性制剂包括选自以下的至少一种神经保护性多肽：GLP-1、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物(例如毒蜥外泌肽-4类似物)；该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)或其组合中的至少一种结合的受体；并且相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
如图1A、1B、2和3中所显示，控释神经保护性制剂导致在动物模型中更大程度地维持艾塞那肽的血浆水平。此外，图7B和8B证明，艾塞那肽的控释制剂是比单独的艾塞那肽更有效的神经保护性制剂/治疗剂和更有效的神经修性复制剂/治疗剂。
本公开涉及向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法可以包括：通过提供神经保护性多肽的持续释放或递送的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，该神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或神经保护性多肽的持续释放增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
本公开还涉及治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法可以包括：通过提供神经保护性多肽的持续释放或递送的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，该神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一种结合的受体；并且其中相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或装置增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在某些实施方案中，控释制剂是神经保护性多肽的长效制剂。该长效制剂可以包含用于持续释放神经保护性多肽的贮库制剂。例如，该长效制剂可以包含用于持续释放神经保护性多肽的组合物(在下文中更详细地描述)。在额外的实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物和包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽。在额外的实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物和包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽，而没有活性成分的初始突释(例如没有活性成分的初始突释，例如有害的初始突释)。在特定实施方案中，控释神经保护性制剂包含：包括具有该神经保护性多肽的核和可生物降解的聚合物的控释微球；以及包覆该核的包衣层。
在一个实施方案中，施用控释神经保护性制剂减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。例如，CNS相关病症可以选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
施用控释神经保护性制剂可以包括注射控释神经保护性制剂。例如可以皮下注射控释神经保护性制剂。
在另一个实施方案中，施用控释神经保护性制剂导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。例如神经保护性多肽的稳态血浆浓度可以在以下范围内：大约50～大约4500pg/mL、大约50～大约4250pg/mL、大约50～大约4000pg/mL、大约50～大约3750pg/mL、大约50～大约3500pg/mL、大约50～大约3250pg/mL、大约50～大约3000pg/mL、大约50～大约2750pg/mL、大约50～大约2500pg/mL、大约50～大约2250pg/mL、大约50～大约2000pg/mL、大约50～大约1750pg/mL、大约50～大约1500pg/mL、大约50～大约1250pg/mL、大约50～大约1000pg/mL、大约50～大约750pg/mL、大约50～大约500pg/mL、大约50～大约250pg/mL、大约250～大约4500pg/mL、大约250～大约4250pg/mL、大约250～大约4000pg/mL、大约250～大约3750pg/mL、大约250～大约3500pg/mL、大约250～大约3250pg/mL、大约250～大约3000pg/mL、大约250～大约2750pg/mL、大约250～大约2500pg/mL、大约250～大约2250pg/mL、大约250～大约2000pg/mL、大约250～大约1750pg/mL、大约250～大约1500pg/mL、大约250～大约1250pg/mL、大约250～大约1000pg/mL、大约250～大约750pg/mL、大约250～大约500pg/mL、大约500～大约4500pg/mL、大约500～大约4250pg/mL、大约500～大约4000pg/mL、大约500～大约3750pg/mL、大约500～大约3500pg/mL、大约500～大约3250pg/mL、大约500～大约3000pg/mL、大约500～大约2750pg/mL、大约500～大约2500pg/mL、大约500～大约2250pg/mL、大约500～大约2000pg/mL、大约500～大约1750pg/mL、大约500～大约1500pg/mL、大约500～大约1250pg/mL、大约500～大约1000pg/mL、大约500～大约750pg/mL、大约750～大约4500pg/mL、大约750～大约4250pg/mL、大约750～大约4000pg/mL、大约750～大约3750pg/mL、大约750～大约3500pg/mL、大约750～大约3250pg/mL、大约750～大约3000pg/mL、大约750～大约2750pg/mL、大约750～大约2500pg/mL、大约750～大约2250pg/mL、大约750～大约2000pg/mL、大约750～大约1750pg/mL、大约750～大约1500pg/mL、大约750～大约1250pg/mL、大约750～大约1000pg/mL、大约1000～大约4500pg/mL、大约1000～大约4250pg/mL、大约1000～大约4000pg/mL、大约1000～大约3750pg/mL、大约1000～大约3500pg/mL、大约1000～大约3250pg/mL、大约1000～大约3000pg/mL、大约1000～大约2750pg/mL、大约1000～大约2500pg/mL、大约1000～大约2250pg/mL、大约1000～大约2000pg/mL、大约1000～大约1750pg/mL、大约1000～大约1500pg/mL、大约1000～大约1250pg/mL、大约1250～大约4500pg/mL、大约1250～大约4250pg/mL、大约1250～大约4000pg/mL、大约1250～大约3750pg/mL、大约1250～大约3500pg/mL、大约1250～大约3250pg/mL、大约1250～大约3000pg/mL、大约1250～大约2750pg/mL、大约1250～大约2500pg/mL、大约1250～大约2250pg/mL、大约1250～大约2000pg/mL、大约1250～大约1750pg/mL、大约1250～大约1500pg/mL、大约1500～大约4500pg/mL、大约1500～大约4250pg/mL、大约1500～大约4000pg/mL、大约1500～大约3750pg/mL、大约1500～大约3500pg/mL、大约1500～大约3250pg/mL、大约1500～大约3000pg/mL、大约1500～大约2750pg/mL、大约1500～大约2500pg/mL、大约1500～大约2250pg/mL、大约1500～大约2000pg/mL、大约1500～大约1750pg/mL、大约1750～大约4500pg/mL、大约1750～大约4250pg/mL、大约1750～大约4000pg/mL、大约1750～大约3750pg/mL、大约1750～大约3500pg/mL、大约1750～大约3250pg/mL、大约1750～大约3000pg/mL、大约1750～大约2750pg/mL、大约1750～大约2500pg/mL、大约1750～大约2250pg/mL、大约1750～大约2000pg/mL、大约2000～大约4500pg/mL、大约2000～大约4250pg/mL、大约2000～大约4000pg/mL、大约2000～大约3750pg/mL、大约2000～大约3500pg/mL、大约2000～大约3250pg/mL、大约2000～大约3000pg/mL、大约2000～大约2750pg/mL、大约2000～大约2500pg/mL、大约2000～大约2250pg/mL、大约2250～大约4500pg/mL、大约2250～大约4250pg/mL、大约2250～大约4000pg/mL、大约2250～大约3750pg/mL、大约2250～大约3500pg/mL、大约2250～大约3250pg/mL、大约2250～大约3000pg/mL、大约2250～大约2750pg/mL、大约2250～大约2500pg/mL、大约2500～大约4500pg/mL、大约2500～大约4250pg/mL、大约2500～大约4000pg/mL、大约2500～大约3750pg/mL、大约2500～大约3500pg/mL、大约2500～大约3250pg/mL、大约2500～大约3000pg/mL、大约2500～大约2750pg/mL、大约2750～大约4500pg/mL、大约2750～大约4250pg/mL、大约2750～大约4000pg/mL、大约2750～大约3750pg/mL、大约2750～大约3500pg/mL、大约2750～大约3250pg/mL、大约2750～大约3000pg/mL、大约3000～大约4500pg/mL、大约3000～大约4250pg/mL、大约3000～大约4000pg/mL、大约3000～大约3750pg/mL、大约3000～大约3500pg/mL、大约3000～大约3250pg/mL、大约3250～大约4500pg/mL、大约3250～大约4250pg/mL、大约3250～大约4000pg/mL、大约3250～大约3750pg/mL、大约3250～大约3500pg/mL、大约3500～大约4500pg/mL、大约3500～大约4250pg/mL、大约3500～大约4000pg/mL、或大约3500～大约3750pg/mL。
如上所述，神经保护性多肽的持续稳态血浆浓度导致累积提高在对象中在脑脊液(CSF)、脑或其组合中的神经保护性多肽浓度。例如，CSF中的神经保护性多肽浓度可以在大约5～大约400pg/mL或大约10～大约400pg/mL范围内。即，CSF中的神经保护性多肽浓度可以在以下范围内：大约10～大约350pg/mL、大约10～大约300pg/mL、大约10～大约250pg/mL、大约10～大约200pg/mL、大约10～大约150pg/mL、大约10～大约100pg/mL、大约10～大约50pg/mL、大约50～大约400pg/mL、大约50～大约350pg/mL、大约50～大约300pg/mL、大约50～大约250pg/mL、大约50～大约200pg/mL、大约50～大约150pg/mL、大约50～大约100pg/mL、大约100～大约400pg/mL、大约100～大约350pg/mL、大约100～大约300pg/mL、大约100～大约250pg/mL、大约100～大约200pg/mL、大约100～大约150pg/mL、大约150～大约400pg/mL、大约150～大约350pg/mL、大约150～大约300pg/mL、大约150～大约250pg/mL、大约150～大约200pg/mL、大约200～大约400pg/mL、大约200～大约350pg/mL、大约200～大约300pg/mL、大约200～大约250pg/mL、大约250～大约400pg/mL、大约250～大约350pg/mL、大约250～大约300pg/mL、大约300～大约400pg/mL、大约300～大约350pg/mL、或大约350～大约400pg/mL。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，CFS中的稳态多肽浓度与血浆中的稳态多肽浓度之比可以在大约0.1％～大约5％的范围内。例如在本文中描述的任何方面或实施方案中，CFS中的稳态浓度与多肽在血浆中的稳态浓度之比可以为至少大约0.1％、至少大约0.3％、至少大约0.5％、至少大约0.7％、至少大约0.9％、至少大约1％、至少大约1.1％、至少大约1.2％、至少大约1.5％、至少大约2.0％、大约0.1％～大约5％、大约0.1％～大约4％、大约0.1％～大约3％、大约0.1％～大约2％、大约0.5％～大约5％、大约0.5％～大约4％、大约0.5％～大约3％、大约0.5％～大约2％、大约1％～大约5％、大约1％～大约4％、大约1％～大约3％、大约1％～大约2％、大约2％～大约5％、大约2％～大约4％、大约2％～大约3％、大约3％～大约5％、大约3％～大约4％、或大约4％～大约5％。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，血浆中神经保护性多肽浓度的稳态水平的百分比变化(即，一旦实现稳态的百分比变化)可以不大于大约80％(例如不大于大约50％)。例如，在实现稳态血浆水平/浓度之后重新施用时(例如在首次施用的大约2周、大约3周、大约4周、大约5周或大约6周之后血浆中的神经保护性多肽浓度可以处于稳态)，血浆中神经保护性多肽浓度的百分比变化可以不大于大约80％(例如不大于大约50％)。例如，在先前的神经保护性多肽施用的大约28天内(例如在大约7天、14天或大约21天内)重新施用神经保护性多肽时(例如在先前的神经保护性多肽施用后大约1天、大约2天、大约3天、大约4天、大约5天、大约6天、大约7天、大约8天、大约9天、大约10天、大约11天、大约12天、大约13天、大约14天、大约15天、大约16天、大约17天、大约18天、大约19天、大约20天、大约21天、大约22天、大约23天、大约24天、大约25天、大约26天、大约27天或大约28天施用)，在实现稳态之后神经保护性多肽的稳态血浆浓度的百分比变化为不大于：大约80％、大约79％、大约78％、大约77％、大约76％、大约75％、大约74％、大约73％、大约72％、大约71％、大约70％、大约69％、大约68％、大约67％、大约66％、大约65％、大约64％、大约63％、大约62％、大约61％、大约60％、大约59％、大约58％、大约57％、大约56％、大约55％、大约54％、大约53％、大约52％、大约51％、大约50％、大约49％、大约48％、大约47％、大约46％、大约45％、大约44％、大约43％、大约42％、大约41％、大约40％、大约39％、大约39％、大约37％、大约36％、大约35％、大约34％、大约33％、大约32％、大约31％,大约30％、大约29％、大约28％、大约27％、大约26％、大约25％、大约24％、大约23％、大约22％、大约21％、大约20％、大约19％、大约18％、大约17％、大约16％、大约15％、大约14％、大约13％、大约12％、大约11％、大约10％、大约9％、大约8％、大约7％、大约6％、或大约5％。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，每大约7天～大约28天(例如大约7天～大约21天或大约7天～大约14天)施用一次制剂。例如，可以多次施用制剂，其中每次施用间隔大约7～大约28天(例如每大约7天、大约8天、大约9天、大约10天、大约11天、大约12天、大约13天、大约14天、大约15天、大约16天、大约17天、大约18天、大约19天、大约20天、大约21天、大约22天、大约23天、大约24天、大约25天、大约26天、大约27天、或大约28天一次)(例如后续施用为先前施用之后的大约7天～大约28天)。在本文中的任何方面或实施方案中，可以多次施用制剂，其中该制剂以大约7天～大约28天的间隔施用(例如大约7天、大约8天、大约9天、大约10天、大约11天、大约12天、大约13天、大约14天、大约15天、大约16天、大约17天、大约18天、大约19天、大约20天、或大约21天间隔，即，每间隔大约7天、大约8天、大约9天、大约10天、大约11天、大约12天、大约13天、大约14天、大约15天、大约16天、大约17天、大约18天、大约19天、大约20天、大约21天、大约22天、大约23天、大约24天、大约26天、大约27天、或大约28天一次)。
在额外的方面，提供了治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括向对象的全身血液循环施用治疗有效量的控释神经保护性制剂，其中：控释神经保护性制剂包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)类似物的至少一种神经保护性多肽；该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)或其组合中的至少一种结合的受体；并且相对于单独的神经保护性多肽，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在特定实施方案中，施用控释神经保护性制剂减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。例如，CNS病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在进一步的实施方案中，施用控释神经保护性制剂包括向对象注射该控释神经保护性制剂。例如，施用控释神经保护性制剂包括向对象皮下注射该控释神经保护性制剂。在额外的实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物和包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽。在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释制剂持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽，而不具有活性成分的初始突释(例如有害的初始突释)。在特定实施方案中，控释神经保护性制剂包含：包括具有神经保护性多肽的核和可生物降解的聚合物的控释微球；以及包覆该核的包衣层。
在额外的实施方案中，施用控释制剂导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在如以上所描述的范围内，例如大约50～大约4500pg/mL。
在一些实施方案中，施用控释制剂导致累积提高在脑脊液(CSF)、脑或其组合中的至少一者中的神经保护性多肽浓度。
在进一步的方面，本公开提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括提供选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽向对象的全身血液循环的持续递送，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分CNS的递送和/或摄取。
在又一方面，本公开提供了治疗患有CNS相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括提供选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽向对象的全身血液循环的持续递送，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一种结合的受体；并且其中相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的BBB向至少一部分CNS的递送。在本文中描述的任何方面或实施方案中，提供一种或更多种神经保护性多肽的持续释放包括用装置(例如泵、微型泵、渗透泵、渗透递送装置、输液泵、静脉内施用装置、蠕动泵、微型输液泵等等)施用一种或更多种神经保护性多肽。
可以按大约0.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min(例如大约3pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min)的速率来施用一种或更多种神经保护性多肽(例如在控释神经保护性制剂中)。例如，可以按以下速率来施用一种或更多种神经保护性多肽：大约0.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约30pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约27.5pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约25pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约22.5pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约20pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约15pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约12.5pM/kg/min、大约0.5pM/kg/min～大约10pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约30pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约27.5pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约25pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约22.5pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约20pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约15pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约12.5pM/kg/min、大约1.5pM/kg/min～大约10pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约30pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约27.5pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约25pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约22.5pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约20pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约15pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约12.5pM/kg/min、大约2.5pM/kg/min～大约10pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约30pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约27.5pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约25pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约22.5pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约20pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约15pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约12.5pM/kg/min、大约5pM/kg/min～大约10pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约30pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约27.5pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约25pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约22.5pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约20pM/kg/min、大约10pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min、大约15pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约15pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约15pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约15pM/kg/min～大约30pM/kg/min、大约15pM/kg/min～大约27.5pM/kg/min、大约15pM/kg/min～大约25pM/kg/min、大约20pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约20pM/kg/min～大约35pM/kg/min、大约20pM/kg/min～大约32.5pM/kg/min、大约20pM/kg/min～大约30pM/kg/min、或大约25pM/kg/min～大约35pM/kg/min。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，可以经由装置施用控释制剂或一种或更多种神经保护性多肽。例如，该装置可以是容纳并递送控释制剂或一种或更多种神经保护性多肽的可植入装置。该装置可以是泵、微型泵、渗透泵、渗透递送装置、输液泵、静脉内施用装置、蠕动泵、微型输液泵等等。在本文中描述的任何方面或实施方案中，该装置可以是可植入装置，其可以提供控释制剂或一种或更多种神经保护性多肽的恒定流动、可调节流动或可编程流动。例如，如美国专利第8,298,561B2号或美国专利第8,940,316B2号中所描述的渗透递送装置，通过引用将所述专利均以其整体并入本文。
本文中所用的术语“渗透递送装置”指用于向对象递送一种或更多种有益药剂(例如一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂)的装置，其中该装置包含例如储器(例如由钛合金制备)，该储器具有容纳混悬制剂(例如包含一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂)和渗透剂制剂的内腔。位于内腔中的活塞组件将混悬制剂与渗透剂制剂分离。半渗透膜位于与渗透剂制剂相邻的储器的第一远端，并且流动调节器(其限定混悬制剂经此离开装置的递送孔)位于与混悬制剂相邻的储器的第二远端。可将渗透递送装置或渗透泵植入对象体内，例如以皮下方式(例如在上臂内侧、外侧或后侧；或在腹部区域中)。
可以经由装置施用本文中描述的一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂，以提供一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂经一段延长的时间，例如经数周、数月或至多大约一年的持续递送。此类装置(其可以是可植入装置)能够以所需流速经所需时间段递送一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂。可以通过常规技术将一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂装载到可植入药物递送装置中。
可以例如使用渗透驱动、机械驱动、电机械驱动或化学驱动的装置来递送一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂。在本文中描述的任何方面或实施方案中，以治疗有效的流速将一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂递送至需要用神经保护性多肽治疗的对象。
可以经超过大约一周至大约余年或更久(例如大约一个月至大约一年或更久，或大约三个月至大约一年或更久)的时间段递送一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂。该装置可以包括储器，其具有至少一个经此递送一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂的孔。一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂可以储存在储器内。在本文中描述的任何方面或实施方案中，该装置是渗透递送装置，其可以是可植入装置，其中一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂的递送是渗透驱动的。已经描述了一些渗透递送装置或渗透泵以及其组件，例如递送装置或类似装置(参见例如美国专利号5,609,885；5,728,396；5,985,305；5,997,527；6,113,938；6,132,420；6,156,331；6,217,906；6,261,584；6,270,787；6,287,295；6,375,978；6,395,292；6,508,808；6,544,252；6,635,268；6,682,522；6,923,800；6,939,556；6,976,981；6,997,922；7,014,636；7,207,982；7,112,335；7,163,688；美国专利申请公开号2005-0175701、2007-0281024和2008-0091176，所有专利通过引用以其整体并入本文)。
递送装置通常由圆柱形储器组成，其含有渗透引擎、活塞和药物制剂。该储器一端用控制速率的透水膜加盖，另一端用扩调节器加盖，药物制剂通过扩散调节器从药物储器中释放。活塞分隔药物制剂与渗透引擎，并利用密封来防止渗透引擎隔室内的水进入药物储器。结合药物制剂(例如一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂)来设计扩散调节器，以防止体液通过该孔进入药物储器。
装置基于渗透原理以预定速率释放治疗剂。细胞外液进入装置，通过半透膜直接进入盐引擎，该盐引擎膨胀，以按缓慢和均匀的递送速率驱动活塞。活塞的移动迫使药物制剂(例如一种或更多种神经保护性多肽或控释制剂)通过孔或出口以预定的剪切速率释放。在本发明的任何方面或实施方案中，装置的储器装载有神经保护性多肽或控释制剂，其中该装置能够经延长的时间段(例如大约1个月、大约2个月、大约3个月、大约4个月、大约5个月、大约6个月、大约7个月、大约8个月、大约9个月、大约10个月、大约11个月或大约12个月)以预定的、治疗有效的递送速率向对象递送神经保护性多肽或控释制剂。
任何可植入装置可用于本公开的实践，并可以包括调节型可植入泵，其提供化合物的恒定流动、可调节流动或可编程流动。
本公开的递送装置中使用的神经保护性多肽或控释制剂的量是递送治疗有效量的药剂以实现所需治疗结果所必需的量。在实践中，这将取决于诸如以下的变量而改变：例如特定药剂、递送位点、病症的严重性以及所需的治疗效果。通常，对渗透递送装置而言，包含神经保护性多肽或控释制剂的有益药剂腔室的体积为大约100μl～大约1000μl(例如大约120μl～大约500μl，或大约150μl～大约200μl)。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，将渗透递送装置植入对象体内，例如以皮下方式。可以将装置插入任一臂或双臂(例如在上臂内侧、外侧或后侧)，或插入腹部。例如，可以在肋骨下方和腰线(belt line)上方延伸的区域中将装置植入到腹部皮肤下。为了在腹部内提供多个用于插入一个或更多个渗透递送装置的位置，腹壁可以如下分为4个象限：在右肋下方延伸5-8厘米和向中线右侧延伸大约5-8厘米的右上象限，在腰线上方延伸5-8厘米和向中线右侧延伸大约5-8厘米的右下象限，在左肋下方延伸5-8厘米和向中线左侧延伸大约5-8厘米的左上象限，以及在腰线上方延伸5-8厘米和向中线左侧延伸大约5-8厘米的左下象限。这提供了用于在一个或更多个场合植入一个或更多个装置的多个可用位置。
在其它实施方案中，施用控释神经保护性制剂或提供神经保护性多肽的持续递送减少了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状，所述CNS相关病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释制剂或提供神经保护性多肽的持续释放导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释制剂或提供神经保护性多肽的持续释放导致累积提高在脑脊液(CSF)、脑或其组合的至少一者中的神经保护性多肽浓度。
神经保护性多肽
神经保护性多肽可以具有选自以下的氨基酸：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ IDNO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ IDNO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ IDNO:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:39、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:45、SEQ ID NO:46、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:50、SEQ IDNO:51、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:55。神经保护性多肽可以包含选自SEQ ID NOS:1-55的氨基酸序列。此外，神经保护性多肽可以由选自SEQ ID NOS:1-55的氨基酸序列组成。
“GLP-1或毒蜥外泌肽-4的类似物”表示显示激动剂性质(即，显示GLP-1或毒蜥外泌肽-4的一种或更多种生物活性)的修饰的GLP-1和/或毒蜥外泌肽氨基酸序列。此类修饰包括嵌合多肽，其包括一个或更多个存在于GLP-1中的氨基酸残基和一个或更多个存在于毒蜥外泌肽-4中的氨基酸残基。该修饰还包括GLP-1或毒蜥外泌肽-4或嵌合多肽的截短。例如，截短的嵌合多肽是毒蜥外泌肽-47-36，其中在位置36处的G被GLP-1的位置36中的R置换。在与GLP-1或毒蜥外泌肽-4相比没有官能活性的明显丧失的情况下，本公开的多肽包括一个或更多个附加氨基酸(即，插入或添加)、氨基酸的缺失、或在GLP-1或毒蜥外泌肽-4的氨基酸序列中的置换。例如，缺失可以由对目前定义的区别性活性而言并非必需的氨基酸组成，并且置换可以是保守的(即，置换相同的碱性、亲水性或疏水性的氨基酸)或非保守的。保守置换是其中置换的氨基酸具有与参考序列中相应的氨基酸相似的结构或化学性质的置换。举例而言，保守氨基酸置换牵涉一个脂族或疏水性氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸)被另一个脂族或疏水性氨基酸置换；一个含羟基氨基酸(例如丝氨酸和苏氨酸)被另一含羟基氨基酸置换；一个酸性残基(例如谷氨酸或天冬氨酸)被另一个酸性残基置换；一个含酰胺残基(例如天冬酰胺和谷氨酰胺)用另一个含酰胺残基置换；一个芳族残基(例如苯丙氨酸和酪氨酸)被另一个芳族残基置换；一个碱性残基(例如赖氨酸、精氨酸和组氨酸)被另一个碱性残基置换；以及一个小氨基酸(例如丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸和甘氨酸)被另一个小氨基酸置换。因此应理解，在需要时，可以在GLP-1和毒蜥外泌肽-4的氨基酸序列中进行修饰和改变，并且仍获得具有类似特性的蛋白质。可以在GLP-1或毒蜥外泌肽-4氨基酸序列(或基础核酸序列)的氨基酸序列中进行各种改变，而不明显丧失生物学效用或活性，并可能提高此类效用或活性。
本文中关于GLP-1或毒蜥外泌肽-4或具有基本与之同源的氨基酸序列的多肽所使用的术语“片段”或“截短”表示GLP-1、毒蜥外泌肽-4或具有基本与之同源的氨基酸序列的多肽的至少5个连续氨基酸的多肽序列，其中该多肽序列具有促胰岛素功能。
其它修饰包括D-对映体，其中氨基酸残基的至少一种天然存在的L-构型被该氨基酸残基的D-构型代替。
本公开设想使用间隔物，例如侧间隔物(lateral spacer)。术语“侧间隔物”定义为通过化学键并入氨基酸序列中的化合物，由此该化合物增加两个或更多个氨基酸残基之间的距离，以便减少或消除在该位置处的氨基酸序列或该位置附近的氨基酸序列的裂解(例如通过DPP1V)。例如在其中A和B是氨基酸残基，X是侧间隔物的序列A-X-B中，与不存在侧间隔物的序列(A-B)比较时，减少或消除了酶造成的序列裂解。例如可以将1～4个化合物作为侧间隔物并入氨基酸序列中。因此，在各种实施方案中插入1、2、3或4个化合物。
通常，侧间隔物是可以与氨基酸形成肽键的任何化合物，即，含有至少一个氨基基团和至少一个羧基基团(CO2)，其中羧基基团可以是羧酸或其酯或盐。在一个实施方案中，侧间隔物具有式H2N-R1-CO2H(I)，其中R1包含取代或未取代的、支链或直链的C1～C20烷基、烯基或炔基；取代或未取代的C3～C8环烷基；取代或未取代的C6～C20芳基；或取代或未取代的C4～C20杂芳基。在另一个实施方案中，R1可以由式(CH2)n表示，其中n为1～10。在一个实施方案中，R1是(CH2)3(3-氨基丙酸)或(CH2)5(6-氨基己酸)。
本公开提供了包括施用包含至少一种神经保护性多肽的控释制剂的方法。该多肽可以包含修饰的GLP-1或毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)序列、或其类似物或衍生物，在与GLP-1的残基7和8(在具有Aha间隔物的GLP-1的情况下指称为例如“GLP-1 Aha8”)或残基8和9(在具有Aha间隔物的GLP-1的情况下指称为例如“GLP-1 Aha9”)相当的氨基酸残基之间存在间隔物。在一个实施方案中，侧间隔物是一个或更多个氨基丙酸残基。在一个实施方案中，该间隔物是6-氨基己酸间隔物，且该6-氨基己酸间隔物包含少于四个6-氨基己酸残基。该多肽例如可以包含在残基7和8之间具有一个或更多个6-氨基己酸残基(即，GLP-1 Aha8)的GLP-1 7-36，或者可以包含在残基8和9之间具有一个或更多个6-氨基己酸残基的GLP-17-36。该多肽可以包含在残基7和8之间具有两个或更多个6-氨基己酸残基(即，GLP-1Aha8)的GLP-1 7-36，或者可以包含在残基8和9之间具有两个或更多个6-氨基己酸残基的GLP-1 7-36。该多肽例如可以包含在残基7和8之间具有三个或更多个6-氨基己酸残基(即，GLP-1 Aha8)的GLP-1 7-36，或者可以包含在残基8和9之间具有三个或更多个6-氨基己酸残基的GLP-1 7-36。
在其它实施方案中，本公开的多肽具有与等摩尔量的GLP-1的效果相当的促胰岛素效果，或在一个实施方案中具有与等摩尔量的毒蜥外泌肽-4的效果相当的促胰岛素效果。“与效果相当”表示在GLP-1或毒蜥外泌肽-4的效果的大约10-15％之内的效果。在另一个实施方案中，该多肽具有超过GLP-1或毒蜥外泌肽-4的促胰岛素效果的促胰岛素效果。“超过”GLP-1或毒蜥外泌肽-4“的效果”表示与GLP-1或毒蜥外泌肽-4相比，增加促胰岛素效果，例如高于GLP-1或毒蜥外泌肽-4的效果的大约10％的增加。因此在一个实施方案中，本公开的多肽与GLP-1或毒蜥外泌肽-4一样有效，在另一个实施方案中，本公开的多肽比GLP-1更有效，并任选地，比毒蜥外泌肽-4更有效。在其它实施方案中，本公开的多肽比GLP-1更长效。在进一步的实施方案中，该多肽至少与毒蜥外泌肽-4一样长效。在其它实施方案中，该多肽比毒蜥外泌肽-4更长效。“长效”表示该多肽比GLP-1或毒蜥外泌肽-4更耐受至少一种降解酶。例如，本公开的多肽比GLP-1更耐受酶(二肽酰肽酶-4(DPPIV))的降解，并且任选比毒蜥外泌肽-4耐受性更高。可以通过检测降解产物的量(例如N端降接产物的量)或未裂解的多肽的量来直接评价对一种或更多种降解酶的此类耐受性。或者，可以通过施用本公开的多肽之后评价促胰岛素效果的经时降低来间接检测对一种或更多种降解酶的耐受性。例如，当降解酶裂解本公开的多肽时，血浆胰岛素水平在单次施用后应下降。在额外的实施方案中，这种下降将比GLP-1更慢和/或也许甚至比毒蜥外泌肽-4更慢。
可以使用本领域普通技术人员熟知的多种化学多肽合成技术的任一种来制备本公开的多肽，所述技术包括溶液方法和固相方法。固相合成是制备该多肽的一种合成方法，其中多肽序列的C端氨基酸附着到不溶性载体上，随后按序添加序列中的剩余氨基酸。Merrifield等人描述了固相合成的技术(J.Am.Chem.Soc.85:2149-2156(1963))。许多用于实施固相肽合成的自动化系统是市售的。
通过将受保护的氨基酸经由其羧基偶联到合适的固体载体上，从多肽的羧基末端(即，C端)开始固相合成。所用的固体载体不是关键特征，只要其能够结合羧基，同时对肽合成程序中使用的试剂保持基本惰性。例如，可以通过将氨基受保护的氨基酸经由苄基酯键连接到氯甲基化树脂或羟甲基树脂上，或经由酰胺键连接到二苯甲胺(BHA)树脂或对甲基二苯甲胺(MBHA)树脂上来制备起始材料。适合用作固体载体的材料是本领域技术人员熟知的，包括但不限于以下：卤代甲基树脂，例如氯甲基树脂或溴甲基树脂；羟甲基树脂；酚树脂，例如4-(α-[2,4-二甲氧基苯基]-Fmoc-氨基甲基)苯氧基树脂；叔烷氧基羰基-酰肼化树脂；等等。此类树脂是市售的，并且它们的制备方法是本领域普通技术人员已知的。
可以通过使用苄基酯树脂作为固体载体的固相肽合成程序来制备肽的酸形式。可以通过使用二苯甲胺或甲基二苯甲胺树脂作为固体载体来制备相应的酰胺。本领域技术人员将认识到，当使用BHA或MBHA树脂时，用无水氢氟酸进行处理来从固体载体上切割肽，这产生了具有末端酰胺基团的肽。
在合成中使用的各氨基酸的α-氨基基团应在偶联反应过程中受保护，以防止牵涉反应性α-氨基官能团的副反应。某些氨基酸还含有反应性侧链官能团(例如巯基、氨基、羧基、羟基等等)，其也必须受到适当的保护基团保护，以防止在肽合成过程中在那些位点发生化学反应。保护基团是本领域技术人员熟知的。参见例如ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology,第3卷:Protection of Functional Groups in Peptide Synthesis(Gross和Meienhofer(编辑),Academic Press,N.Y.(1981))。
恰当选择的α-氨基保护基团将使α-官能团在偶联反应过程中呈惰性，将在偶联后在不除去侧链保护基团的条件下被容易地除去，将不改变肽片段的结构，并将在紧邻偶联前激活时防止外消旋化。类似地，必须选择侧链保护基团，以使侧链官能团在合成过程中呈惰性，必须在用于去除α-氨基保护基团的条件下稳定，并且必需在肽合成完成后在不改变肽的结构的条件下可被除去。
可以通过多种本领域技术人员已知的技术来实现氨基酸的偶联。典型的方法包括将氨基酸转化为使羧基基团更易于与肽片段的游离N端氨基基团反应的衍生物，或使用合适的偶联剂，例如N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)或N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)。通常，在这些偶联反应中采用羟基苯并三唑(HOBt)作为催化剂。
通常，通过首先将C端氨基酸偶联到固体载体上来开始肽的合成，所述C端氨基酸在N-氨基位置处被诸如芴基甲基氧基羰基(Fmoc)之类的保护基团保护。在Fmoc-Asn的偶联之前，必须从聚合物中除去Fmoc残基。例如可以使用N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)和羟基苯并三唑(HOBt)在搅拌下于大约25℃使Fmoc-Asn与4-(α-[2,4-二甲氧基苯基]-Fmoc-氨基-甲基)苯氧基树脂偶联大约2小时。在将Fmoc-保护的氨基酸偶联到树脂载体上之后，使用在DMF中的20％哌啶在室温下除去α-氨基保护基团。
在除去α-氨基保护基团后，按所需顺序逐步偶联剩余的Fmoc-保护的氨基酸。适当保护的氨基酸可商购自许多供应商(例如Novartis(瑞士)或Bachem(Torrance,CA))。作为逐步添加个体氨基酸的替代方案，由超过一个氨基酸组成的适当保护的肽片段也可以与“生长”肽偶联。如上所解释的，适当的偶联剂的选择是本领域技术人员熟知的。
将各个受保护的氨基酸或氨基酸序列过量引入到固相反应器中，并在介质二甲基甲酰胺(DMF)、二氯甲烷(CH2Cl2)或其混合物中进行偶联。如果偶联不完全，则可以在N-氨基脱保护以及加入下一个氨基酸之前重复该偶联反应。可以通过本领域技术人员熟知的许多方法来监控偶联效率。监控偶联效率的一种方法可以是通过茚三酮反应。可以使用许多市售的肽合成仪自动实施肽合成反应，例如Biosearch 9500TM合成仪(Biosearch,SanRaphael,CA)。
可以通过以下方式来裂解肽并除去保护基团：在大约0℃下，在苯甲醚和二甲硫醚的存在下，在无水液态氟化氢(HF)中搅拌不溶性载体或固体载体大约20～90分钟，例如60分钟；在大约室温下，使溴化氢(HBr)连续鼓泡通过树脂在三氟乙酸(TFA)中的1毫克/10毫升悬浮液60～360分钟(取决于所选择的保护基团)；或在用于固相合成的反应柱内，用90％三氟乙酸、5％水和5％三乙基硅烷温育固体载体大约30～60分钟。也可以使用本领域技术人员熟知的其它脱保护方法。
可以通过本领域技术人员熟知的肽纯化从反应混合物中分离并纯化肽。例如，可以使用已知的诸如反相HPLC、凝胶渗透、离子交换、尺寸排阻、亲和力、分配或逆流分布之类的色谱程序来纯化肽。
还可以通过其它方法制备神经保护性多肽，所述方法包括例如重组技术。适当的克隆和测序技术的实例，以及足以通过许多克隆练习指导本领域技术人员的说明书可以在Sambrook等人(1989)Molecular Cloning–A Laboratory Manual(第2版)第1-3卷,ColdSpring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor Press,NY(Sambrook)中找到。
例如，在控释制剂中使用的一种或更多种毒蜥外泌肽衍生物可以是由化学式I代表的化合物、或其药学上可接受的盐：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26Xaa27 Xaa28 -Z1,
(化学式I)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基；
Xaa22是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
Xaa27是Ala或Lys；
Xaa28是Ala或Asn；且
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser SerGly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37Xaa38 Xaa39-Z2，
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸或N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr(例如Ser)，且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中的不超过三个是Ala；且
当Xaa1是His、Arg或Tyr时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
在一些实施方案中，N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸和N-烷基丙氨酸的N-烷基基团可以包括低级烷基，例如具有1～大约6个碳原子或1～4个碳原子。由化学式I代表的化合物可以包括1998年11月13日提交的题为“Novel Exendin Agonist Compounds”的PCT申请系列号PCT/US98/24273中的实施例1～89中鉴定的化合物(分别为化合物1～89)，以及在实施例104和105中鉴定的相应化合物，通过引用将所述申请的出于所有目的全文并入本文。
在一个特定实施方案中，化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以包括其中化学式I的Xaa1是His、Ala、Norval或4-咪唑丙酰基的那些。在另一个实施方案中，化学式I的Xaa1是His、Ala或4-咪唑丙酰基。在一个额外实施方案中，化学式I的Xaa1是His或4-咪唑丙酰基。
化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa2是Gly的那些。
化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa3是Ala的那些。
化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa4是Ala的那些。
化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa9是Ala的那些。
化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa14是Leu、戊基甘氨酸或Met的那些。
化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa21是Lys-NHε-R的那些，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基。
在一个实施方案中，化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa25是Trp或Phe的那些。
在另一个实施方案中，化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa6是Ala、Phe或萘基丙氨酸，Xaa22是Phe或萘基丙氨酸，且Xaa23是Ile或Val的那些。此外，化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、硫代脯氨酸和N-烷基丙氨酸；Z1可以是–NH2；并且Z2可以是–NH2的那些。
在其它实施方案中，化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa1是Ala、His或Tyr(例如Ala或His)；Xaa2是Ala或Gly；Xaa6是Phe或萘基丙氨酸；Xaa14是Ala、Leu、戊基甘氨酸或Met；Xaa22是Phe或萘基丙氨酸；Xaa23是Ile或Val；Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、硫代脯氨酸和N-烷基丙氨酸；Xaa39是Ser或Tyr(例如Ser)；且Z1可以是–NH2的那些。
根据一个实施方案，化学式I的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa1是His或Ala；Xaa2是Gly或Ala；Xaa3是Ala、Asp或Glu；Xaa4是Ala或Gly；Xaa5是Ala或Thr；Xaa6是Phe或萘基丙氨酸；Xaa7是Thr或Ser；Xaa8是Ala、Ser或Thr；Xaa9是Ala、Asp或Glu；Xaa10是Ala、Leu或戊基甘氨酸；Xaa11是Ala或Ser；Xaa12是Ala或Lys；Xaa13是Ala或Gln；Xaa14是Ala、Leu、Met或戊基甘氨酸；Xaa15是Ala或Glu；Xaa16是Ala或Glu；Xaa17是Ala或Glu；Xaa19是Ala或Val；Xaa20是Ala或Arg；Xaa21是Ala或Leu；Xaa22是Phe或萘基丙氨酸；Xaa23是Ile、Val或叔丁基甘氨酸；Xaa24是Ala、Glu或Asp；Xaa25是Ala、Trp或Phe；Xaa26是Ala或Leu；Xaa27是Ala或Lys；Xaa28是Ala或Asn；Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly GlyXaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37Xaa38-Z2或Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地为Pro、高脯氨酸、硫代脯氨酸或N-甲基丙氨酸；Xaa39是Ser或Tyr(例如Ser)；且Z2是-OH或–NH2的那些，条件是Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中的不超过三个是Ala，且当Xaa1是His、Arg或Tyr时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个可以是Ala。
在进一步的实施方案中，化学式I的化合物可以包括具有PCT申请系列号PCT/US98/25728中所阐述的SEQ ID NOS:5～93的氨基酸序列的那些，或美国临时申请60/066,029中所阐述的那些，通过引用将所述申请并入本文。
根据一个实施方案，提供了化合物，其中Xaa14是Leu、Ile、Val或戊基甘氨酸(例如Leu或戊基甘氨酸)；且Xaa25是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸(例如Phe或萘基丙氨酸)。这些化合物在体外和体内以及在该化合物的合成过程中均较不易发生氧化降解。
在另一方面，毒蜥外泌肽衍生物可以包括由化学式II代表的化合物、或其药学上可接受的盐：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26X1-Z1,
(化学式II)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R(其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基、或环烷基-烷酰基)；
Xaa22是Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
X1是Lys Asn、Asn Lys、Lys-NHε-R Asn、Asn Lys-NHε-R、Lys-NHε-R Ala、AlaLys-NHε-R，其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基，或环烷基烷酰基；
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser SerGly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸和N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr；且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25和Xaa26中的不超过三个是Ala；且
当Xaa1是His、Arg、Tyr或4-咪唑丙酰基时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
在某些实施方案中，化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以包括其中Xaa1是His、Ala、Norval或4-咪唑丙酰基(例如Xaa1包括His、4-咪唑丙酰基或Ala，或Xaa1包括His或4-咪唑丙酰基)的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa2是Gly的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa4是Ala的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa9是Ala的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa14是Leu、戊基甘氨酸或Met的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa25是Trp或Phe的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa6是Ala、Phe或萘基丙氨酸，Xaa22是Phe或萘基丙氨酸，且Xaa23是Ile或Val的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Z1是-NH2的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、硫代脯氨酸和N-烷基丙氨酸的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa39是Ser或Tyr(例如Ser)的那些。化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Z2是-NH2的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Z1是-NH2的那些。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中Xaa21是Lys-NHε-R的那些，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基。
化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以是其中X1是Lys Asn、Lys-NHε-RAsn或Lys-NHε-RAla的那些，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基。
在进一步的实施方案中，化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以包括具有识别为WO99/025728中所阐述的SEQ ID Nos:95-110的氨基酸序列的化合物。化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以包括具有识别为如1998年11月13日提交的题为“Novel Exendin AgonistCompounds”的PCT申请PCT/US98/24210中描述的SEQ ID Nos:5-93的氨基酸序列的化合物。在另一方面，化学式II的毒蜥外泌肽衍生物可以包括具有识别为WO99/007404中所阐述的SEQ ID Nos:37-40的氨基酸序列的化合物。通过引用将上述文献并入本文。
化学式I和II中使用的缩写代表以下含义。
“ACN”和“CH3CN”指乙腈。
“Boc”、“tBoc”和“Tboc”指叔丁氧基羰基。
“DCC”指N,N'-二环己基碳二亚胺。
“Fmoc”指芴基甲氧基羰基。
“HBTU”指2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3,-四甲基脲鎓六氟磷酸盐。
“HOBt”指1-羟基苯并三唑一水合物。
“homoP”和“hPro”指高脯氨酸。
“MeAla”和“Nme”指N-甲基丙氨酸。
“naph”指萘基丙氨酸。
“pG”和“pGly”指戊基甘氨酸。
“tBuG”指叔丁基甘氨酸。
“ThioP”和“tPro”指硫代脯氨酸。
“3Hyp”指3-羟基脯氨酸。
“4Hyp”指4-羟基脯氨酸。
“NAG”指N-烷基甘氨酸。
“NAPG”指N-烷基戊基甘氨酸。
“Norval”指正缬氨酸。
在一个实施方案中，毒蜥外泌肽片段或衍生物可以具有被酰胺基团取代或未被酰胺基团取代的C端，并可以选自毒蜥外泌肽-4(1-28)(SEQ ID NO:15)、毒蜥外泌肽-4(1-28)酰胺、毒蜥外泌肽-4(1-30)(SEQ ID NO:7)、毒蜥外泌肽-4(1-30)酰胺、毒蜥外泌肽-4(1-31)(SEQ ID NO:54)、毒蜥外泌肽-4(1-31)酰胺、14Leu25Phe毒蜥外泌肽-4(SEQ ID NO:55)、14Leu25Phe毒蜥外泌肽-4酰胺、及其药学上可接受的盐。
控释制剂
根据其它实施方案，基于100重量份的包含毒蜥外泌肽(例如毒蜥外泌肽-4)、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物(例如毒蜥外泌肽-4类似物)；可生物降解的聚合物；和包衣材料的组合物或微球计，控释组合物或微球可以含有以下量的毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物作为活性成分：大约0.1～大约10重量份(例如大约0.8～大约6重量份)。例如基于100重量份的包含毒蜥外泌肽、GLP-1、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物；可生物降解的聚合物；和包衣材料的组合物或微球计，控释组合物或微球按重量计可以包括以下量的毒蜥外泌肽或其治疗有效性类似物和/或GLP-1或其治疗有效性类似物：大约0.1～大约10份、大约0.1～大约9份、大约0.1～大约8份、大约0.1～大约7份、大约0.1～大约6份、大约0.1～大约6份、大约0.1～大约5份、大约0.1～大约4份、大约0.1～大约3份、大约0.5～大约10份、大约0.5～大约9份、大约0.5～大约8份、大约0.5～大约7份、大约0.5～大约6份、大约0.5～大约6份、大约0.5～大约5份、大约0.5～大约4份、大约0.5～大约3份、大约1～大约10份、大约1～大约9份、大约1～大约8份、大约1～大约7份、大约1～大约6份、大约1～大约6份、大约1～大约5份、大约1～大约4份、大约1～大约3份、大约2～大约10份、大约2～大约9份、大约2～大约8份、大约2～大约7份、大约2～大约6份、大约2～大约6份、大约2～大约5份、大约2～大约4份、大约3～大约10份、大约3～大约9份、大约3～大约8份、大约3～大约7份、大约3～大约6份、大约4～大约10份、大约4～大约9份、大约4～大约8份、大约4～大约7份、大约5～大约10份、大约5～大约9份、大约5～大约8份、大约6～大约10份、大约6～大约9份、或大约7～大约10份。当根据本公开的组合物或微球中所含的毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的量低于以上范围时，不能获得毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的有效作用，且当毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的量高于以上范围时，提高了毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的初始突释，由此引起归因于初始突释(initial burst)的副作用，因此优选的是，毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的量在以上范围内。
可生物降解的聚合物指对人类无害的所有聚合物，因为将其施用入体内时，其可以缓慢降解并排出。可生物降解的聚合物可以包括选自以下的一种或更多种(例如一种、两种、三种、四种、五种、六种或更多种)：聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-乙交酯)共聚物(PLGA)、聚原酸酯、聚酐、聚羟基丁酸、聚己内酯和聚烷基碳酸酯，以及一种或更多种聚合物与聚乙二醇(PEG)的共聚物，其中一种或更多种聚合物可以为共聚物或简单混合物的形式。
例如，可生物降解的聚合物可以是选自以下的一种或更多种：由丙交酯:乙交酯比率为1:1的RG502H(IV＝0.16～0.24dL/g)、RG503H(IV＝0.32～0.44dL/g)和RG504H(IV＝0.45～0.60dL/g)，以及丙交酯:乙交酯比率为75:25的RG752H(IV＝0.14～0.22dL/g)、聚丙交酯(PLA)、R202H(IV＝0.16～0.24dL/g)和R203H(IV＝0.25～0.35dL/g)组成的聚(丙交酯-乙交酯)共聚物(PLGA)，其由德国Evnik提供；聚(丙交酯-乙交酯)共聚物5050DL 2A(IV＝0.15～0.25dL/g)、5050DL 3A(IV＝0.25～0.43dL/g)和5050DL 4A(IV＝0.38～0.48dL/g)，其是由Evonik(Parsippany,NJ),USA提供的共聚物，具有1:1的丙交酯:乙交酯比率；等等，但是可以由任何适当的来源提供/获取等同的聚合物。
在进一步的实施方案中，可生物降解的聚合物可以是聚合物-糖复合物，其中糖与以下聚合物偶联：(1)选自由聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-乙交酯)共聚物(PLGA)、聚原酸酯、聚酐、聚羟基丁酸、聚己内酯和聚烷基碳酸酯的组成的组的聚合物；(2)该聚合物组中的至少两种的共聚物；或(3)聚乙二醇(PEG)与该聚合物组中的一种的共聚物。
在本公开的其它实施方案中，聚合物-糖复合物可以指其中聚合物取代糖的羟基的复合物。糖可包括单糖和多糖(其包括1～8个糖单元，其中每个糖单元包括3～6个羟基)以及包括3～6个羟基且分子量为20,000或更低的直链糖醇。该糖醇可以包括甘露糖醇、季戊四醇、山梨糖醇、核糖醇和木糖醇。聚合物与糖在存在于该糖中的三个或多个羟基处偶联。
根据以上提及的实施方案的聚合物-糖复合物具有类似于与糖偶联的聚合物的体内性质，取决于所用的聚合物种类具有各种的降解速度，并在体内降解为无害的聚合物和糖，因此其可适用于可生物降解的聚合物。在一个实施方案中，聚合物-糖复合物可以是PLA-葡萄糖复合物、PGA-葡萄糖复合物或PLGA-葡萄糖复合物，其中PLGA-葡萄糖复合物可以是具有下列结构的那种：
在根据本公开的控释微球中，在其表面上形成的包衣层允许有效控制毒蜥外泌肽或GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的初始突释，由此防止由过度的初始突释所导致的副作用。可以使用可生物降解的聚合物而没有任何粘度限制。
在根据本公开的控释组合物/制剂中，可生物降解的聚合物发挥作为用于保护活性成分(毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物)的基质的作用，其中该聚合物的不充分的低粘度无法有效保护活性成分，从而增加初始突释，且该聚合物的过高粘度导致降低活性成分的总释放量，从而降低其生物利用度。在本公开中，不仅可生物降解的聚合物而且该组合物中所含的包衣材料均发挥控制药物释放的作用，因此可以使用具有相对低粘度的可生物降解的聚合物。因此，为了有效控制药物的初始突释并改善生物利用度，可生物降解的聚合物的固有粘度(IV)可以为大约0.1～大约0.6dL/g(例如大约0..15～大约0..31dL/g或大约0.16～大约0.24dL/g)，使用Ubbelohde粘度计对以1％(W/V)的浓度在25℃±0..1℃下溶于氯仿的可生物降解的聚合物测量该固有粘度。
在本公开的组合物、制剂或微球中，可生物降解的聚合物发挥作为用于在释放期间保护活性成分并控制释放速率的基质的作用，其中基于100重量份的含有活性成分(毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物)、可生物降解的聚合物和包衣材料的组合物/制剂或微球计，可生物降解的聚合物在组合物或微球中的含量可以为大约85～大约99..89重量份(例如大约91～大约99重量份)。
包衣材料用于防止活性成分的过度初始突释并提高其生物利用度，在本公开的微球中，包衣材料可以为微球表面上的包衣层形式。包衣材料可以是选自碱性氨基酸、多肽和有机氮化合物中的一种或更多种(例如一种、两种或三种)。碱性氨基酸可包括精氨酸、赖氨酸、组氨酸及其衍生物。多肽可以包括2～10个氨基酸(例如2～5个氨基酸)，所述氨基酸包括选自精氨酸、赖氨酸和组氨酸中的一种或更多种(例如一种、两种或三种)。多肽可以包含多于酸性氨基酸的碱性氨基酸，从而展现碱性。例如，多肽可以是L-Ala-L-His-L-Lys、L-Arg-L-Phe、Gly-L-His、Gly-L-His-Gly、Gly-L-His-L-Lys、L-His-Gly、L-His-Leu、L-Lys-L-Tyr-L-Lys、L-His-L-Val、L-Lys-L-Lys、L-Lys-L-Lys-L-Lys、L-Lys-L-Thr-L-Thr-L-Lys-L-Ser等等。此外，有机氮化合物可以是肌酸、肌酸酐、尿素等等。
基于100重量份的包含毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物、可生物降解的聚合物和包衣材料的组合物或微球计，本公开的组合物中含有的或包覆在微球上的包衣材料的含量可以为大约0.01～大约5重量份(例如大约0.015～大约3重量份、大约0.01～大约4、大约0.01～大约3、大约0.01～大约2、大约0.01～大约4、大约0.01～大约2、大约0.015～大约5、大约0.015～大约4、大约0.015～大约2、大约0.05～大约5、大约0.05～大约4、大约0.05～大约3、大约0.05～大约2、大约0.1～大约5、大约0.1～大约4、大约0.1～大约3、大约0.1～大约2、大约0.5～大约5、大约0.05～大约4、大约0.05～大约3、大约0.05～大约2、大约1～大约5、大约1～大约4、大约1～大约3、大约1.5～大约5、大约1.5～大约4、大约1.5～大约3、大约2～大约5、大约2～大约4、大约3～大约5、大约3～大约4、或大约4～大约5重量份)。如果包衣材料的含量低于以上范围，则不能获得对药物释放的有效控制，然而即使将包衣材料的含量提高至高于以上范围，也不额外提高控制初始突释的效果。
根据本公开的各个控释微球可以具有包覆有包衣材料的光滑表面，以及以下的平均尺寸：大约1～大约50μm(例如大约5～大约30μm、大约1～大约40μm、大约1～大约30μm、大约1～大约20μm、大约1～大约10μm、大约5～大约50μm、大约5～大约40μm、大约5～大约30μm、大约5～大约20μm、大约5～大约10μm、大约10～大约50μm、大约10～大约40μm、大约10～大约30μm、大约10～大约20μm、大约20～大约50μm、大约20～大约40μm、大约20～大约30μm、大约30～大约50μm、大约30～大约40μm、或大约40～大约50μm)。微球的光滑表面允许实现有效的初始突释控制和优异的生物利用度。
不同于常规形式，控释微球或由本公开的组合物/制剂制备的微球包覆有包衣材料，使得能够防止过度/有害的初始突释并提高生物利用度，这不能在常规的含毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的微球中获得。尤其，毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的过度/有害的初始突释导致各种副作用，例如呕吐、恶心和头痛等等，因此将初始突释量降低至5％或更低是非常重要的。该控释微球或由本公开的组合物(或制剂)制备的微球将初始24小时的释放量降低至5％或以下。为了减小归因于施用含有毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的控释微球的副作用，针对初始一小时的初始突释量可以为大约5％或以下(例如大约4％或以下、大约3％或以下、大约2％或以下、或大约1％或以下)。本公开的微球在其表面上包含包衣材料的包衣层，这允许有效控制初始突释，以去除归因于过度/有害的初始突释的副作用，并获得药物的持久且充分的释放以实现优异的生物利用度。
在本公开的一个实施方案中，制剂或微球可以进一步包含赋形剂，例如保护性胶体和/或稳定剂。
组合物或微球可以进一步包含一种或更多种保护性胶体，其选自聚乙烯醇、白蛋白、聚乙烯基吡咯烷酮、明胶等等。虽然保护性胶体对防止微球中所含的活性成分的过度/有害的初始突释没有特殊效果，但是其发挥防止微球之间的聚集和改善分散性的作用。考虑到此类作用，基于含有毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物、可生物降解的聚合物和包衣材料的组合物、制剂或微球的重量计，保护性胶体的含量可以为大约0.02％(W/W)～大约1.0％(W/W)(例如大约0.02％～大约0.8％、大约0.02％～大约0.6％、大约0.02％～大约0.4％、大约0.05％～大约1.0％、大约0.04％～大约0.8％、大约0.05％～大约0.5％、大约0.05％～大约0.4％、大约0.05％～大约0.3％、大约0.05％～大约0.2％、大约0.1％～大约1.0％、大约0.1％～大约0.8％、大约0.1％～大约0.6％、大约0.1％～大约0.4％、大约0.1％～大约0.3％、大约0.1％～大约0.2％、大约0.2％～大约1.0％、大约0.2％～大约0.8％、大约0.2％～大约0.6％、大约0.2％～大约0.4％、大约0.4％～大约1.0％、大约0.4％～大约0.8％、大约0.4％～大约0.6％、大约0.6％～大约1.0％、大约0.6％～大约0.8％、或大约0.8％～大约1.0％)。
另外，为了改善微球在冷冻干燥期间的稳定性，本公开的组合物/制剂或微球可以进一步包含以下量的选自甘露糖醇、海藻糖、蔗糖、羧甲基纤维素钠等等的赋形剂：基于包含毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物、可生物降解的聚合物和包衣材料的组合物或微球的重量计，大约5％(W/W)～大约30％(W/W)，例如大约10％(W/W)～大约20％(W/W)。
此外，本公开的组合物、制剂或微球可以进一步包含常规用于药物制剂的任何添加剂和赋形剂，可以由相关领域技术人员容易地确定其种类和含量。
在本公开的方法中利用的包含毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的控释微球可以通过各种方法来制备，例如在制备微球期间或之后通过将微球悬浮在包衣材料溶液中来包覆微球的表面，以制备控释微球。制备微球的方法可以通过双乳液法(W/O/W法)、单乳液法(O/W法)、相分离法、喷雾干燥法等等来实施。
具体而言，制备含有毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽类似物的控释微球的方法可以包括以下步骤：将活性剂与可生物降解的聚合物混合，以制备W/O型乳液或均相混合物；以及通过将该乳液或均相混合物添加到包衣材料的水溶液中来进行乳化，以形成包衣层。
更具体而言，在采用双乳液法的情况下，该方法可以包括以下步骤：通过将活性成分水溶液与溶解在有机溶剂中的可生物降解的聚合物混合来进行乳化，以形成初级乳液(W/O型)；在包衣材料的水溶液中悬浮该乳液，以形成W/O/W型乳液；加热该W/O/W型乳液以除去溶剂并硬化所获得的微球；收集并洗涤硬化的微球；以及冷冻干燥微球。有机溶剂可以是能够通过将可生物降解的聚合物溶解并然后与水溶液混合来形成乳液的任何有机溶剂，例如它可以是选自氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲乙酮的一种或更多种(例如二氯甲烷)。在这种情况下，在第二水相(W/O/W乳液的外水相)中含有包衣材料，以在除去有机溶剂时在包含至少一种活性成分(例如毒蜥外泌肽、GLP-1或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物，或其组合)和可生物降解的聚合物的微球的外面形成包衣层。
或者，如果使用单乳液法，则该方法可以包括以下步骤：将活性成分和可生物降解的聚合物溶解在有机溶剂中以，形成均相混合物；将含有包衣材料的水溶液添加到所获得的混合物中以形成乳液；加热该乳液以除去溶剂并硬化所获得的微球；收集并洗涤硬化的微球；以及冷冻干燥微球。有机溶剂可以是能够将活性成分与可生物降解的聚合物完全混合以形成均相混合物，并能够与水溶液混合以形成乳液的任何有机溶剂。例如，有机溶剂可以是混合溶剂，其中将选自具有1～5个碳原子的醇、冰乙酸、甲酸、二甲亚砜和N-甲基吡咯烷酮的一种或更多种(溶剂)与选自氯仿、乙酸乙酯、甲乙酮和二氯甲烷的一种或更多种(溶剂)混合，例如其中将甲醇与二氯甲烷混合。在这种情况下，通过以下方式使最终获得的微球表面具有在其上的包衣层：乳化可生物降解的聚合物与活性成分的均相混合物，并向水溶液中加入包衣材料，用以除去有机溶剂。
制备控释微球的方法可以包括以下步骤：将活性成分与可生物降解的聚合物混合，以形成乳液或均相混合物；固化所获得的乳液或均相混合物，以制备初级微球；以及将所获得的初级微球悬浮在包衣材料的水溶液中，以在每个微球上形成包衣层。
固化方法没有限制，并可以是相关领域中常规使用的任何固化方法，例如相分离法或喷雾干燥法。更具体而言，如果在固化步骤中采用相分离法，则该方法可以包括以下步骤：将活性成分的水溶液与溶解在有机溶剂中的可生物降解的聚合物混合，以形成乳液；或者将活性成分与可生物降解的聚合物在混合溶剂中混合，以形成均相混合物溶液；将油(例如硅油)添加到所获得的乳液或溶液中，以制备初级微球；添加对可生物降解的聚合物而言的非溶剂，例如具有1～5个碳原子的醇与具有1～12个碳原子的烷烃的混合溶剂(例如乙醇与庚烷的混合溶剂)，以从微球中除去有机溶剂并硬化该微球；将所获得的微球悬浮在包衣材料的水溶液中，以在每个微球上形成包衣层；以及收集、洗涤并冷冻干燥形成包衣层的微球。
有机溶剂可以是选自以下的一种或更多种(例如一种、两种、三种或四种)：氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲乙酮(例如二氯甲烷)。混合溶剂可以是其中选自至少一种具有1～5个碳原子的醇、冰乙酸、甲酸、二甲亚砜和N-甲基吡咯烷酮的一种或更多种(例如一种、两种、三种、四种、五种或更多种)(溶剂)与选自氯仿、乙酸乙酯、甲乙酮和二氯甲烷的一种或更多种(例如一种、两种、三种或四种)(溶剂)混合的混合溶剂(例如甲醇与二氯甲烷的混合溶剂)。
或者，如果使用喷雾干燥法，则该方法可以包括以下步骤：将活性成分的水溶液与溶解在有机溶剂中的可生物降解的聚合物混合，以形成乳液，或将活性成分与可生物降解的聚合物在单一溶剂或混合溶剂中混合，以形成均相混合物溶液；将所获得的乳液或溶液喷雾干燥，以制备初级微球；将所获得的初级微球悬浮在包衣材料的水溶液中，以在每个微球上形成包衣层；以及洗涤并冷冻干燥形成包衣层的微球。
有机溶剂可以是选自以下的一种或更多种(例如一种、两种、三种或四种)：氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷和甲乙酮(例如二氯甲烷)。单一溶剂可以是选自冰乙酸和甲酸的一种或更多种(例如一种、两种、三种、四种或五种)，且混合溶剂可以是其中选自至少一种具有1～5个碳原子的醇、冰乙酸、甲酸、二甲亚砜和N-甲基吡咯烷酮的一种或更多种(例如一种、两种、三种、四种或更多种)(溶剂)与选自氯仿、乙酸乙酯、甲乙酮和二氯甲烷的一种或更多种(溶剂)混合的混合溶剂(例如甲醇与二氯甲烷的混合溶剂)。
该方法可以进一步包括通过任意常规方法添加保护性胶体材料的步骤，例如可以在用包衣材料包覆微球的步骤期间加入保护性胶体材料。
溶解在水相中或水溶液中的包衣材料的浓度可以为大约0.01M～大约1M(例如大约0.1M～大约0.5M、大约0.01M～大约0.8M、大约0.01M～大约0.6M、大约0.01M～大约0.4M、大约0.1～大约1M、大约0.1M～大约0.8M、大约0.1M～大约0.6M、大约0.1M～大约0.4M、大约0.2～大约1M、大约0.2M～大约0.8M、大约0.2M～大约0.6M、大约0.2M～大约0.4M、大约0.4～大约1M、大约0.4M～大约0.8M、大约0.4M～大约0.6M、大约0.6～大约1M、大约0.6M～大约0.8M、或大约0.8M～大约1M)。低于以上范围的包衣材料浓度无法用包衣材料完全包覆微球表面。而高于以上范围的包衣材料浓度产生过饱和的包衣材料溶液，这不能获得对控制初始突释的改善效果，因此包衣材料的浓度可以在以上范围内。
施用
本公开的控释组合物可以通过口服或胃肠外途径(例如胃肠外途径)施用，如静脉内途径、皮下途径、肌肉内途径、腹膜内途径等等。因此，在本公开的一个实施方案中，控释组合物或制剂可以以分散溶液的形式作为注射溶液施加。组合物的有效量可以根据对象的年龄、疾病的种类和严重程度、以及对象的状况合适地调节，并且组合物中活性成分的剂量可以为大约0.01～大约100μg/kg/天(例如大约0.1～大约10μg/kg/天)，其可以一次施用，或分几次施用。所需的确切量将根据对象的物种、年龄和一般状况、受治疗的疾病的严重程度、所用的特定多肽、其施用方式等等而在各多肽之间和在各对象之间变化。因此，不可能指定确切的“促胰岛素量”或可用于治疗神经元疾病或损伤的量。但是，可由本领域普通技术人员仅使用常规实验来确定适当的量。
本领域技术人员将认识到如何监控治疗的有效性以及如何相应地调整治疗。例如可以监控血糖水平，血糖正常是治疗的最佳效果。如果血糖水平高于优选水平，则应该增加施用的多肽的量，如果血糖水平低于优选水平，则要减少施用的多肽的量。
可以口服、静脉内、肌肉内、腹膜内、局部、透皮、外用、全身、心室内、脑内、硬膜下或鞘内施用化合物。本领域技术人员将知晓改变施用方式、药理学载体或其它参数以最优化促胰岛素效果。当然，施用的活性化合物的量取决于受治疗的对象、对象的体重、施用方式和处方医师的判断。
取决于预期的施用方式，药物组合物可以呈以下形式：固体、半固体或液体剂型，例如片剂、栓剂、丸剂、胶囊剂、散剂、液体、混悬剂、洗剂、乳膏剂、凝胶等等，例如以适用于精确剂量的单次施用的单位剂量形式。如上所述，组合物将包括与药学上可接受的载体组合的有效量的所选药物，此外可以包括其它药物、药剂、载体、佐剂、稀释剂等等。参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,最新版,E.W.Martin Mack Pub.Co.,Easton,PA，其公开了典型的载体和制备药物组合物的常规方法，其可以结合多肽制剂的制备使用，并且通过引用将其并入本文。对于固体组合物，常规的无毒固体载体包括例如药物级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等等。药学上可施用的液体组合物可以例如通过将如本文中所描述的活性化合物和任选的药物佐剂溶解、分散在赋形剂中来制备，所述赋形剂例如为水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等等，由此形成溶液或悬浮液。如果需要的话，待施用的药物组合物还可以含有少量无毒辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂等等，例如乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺、乙酸钠、三乙醇胺油酸盐等等。对于本领域技术人员来说，制备此类剂型的实际方法是已知的或将是显而易见的；例如参见上文提及的Remington's Pharmaceutical Sciences。
对于口服施用，微细粉末或颗粒可含有稀释、分散和/或表面活性试剂，并且可存在于以下形式中：水或糖浆、干燥状态的胶囊或小袋，或非水性溶液或悬浮液(其中可以包括悬浮剂)、片剂(其中可以包括粘合剂和润滑剂)、或在水中或糖浆中的悬浮液。在需要或必要时，可以包含矫味剂、防腐剂、悬浮剂、增稠剂或乳化剂。在某些实施方案中，口服施用形式是片剂或颗粒剂，其可以被包覆。如果使用，胃肠外施用通常以注射为特征。
注射剂可按常规形式，作为液体溶液或悬浮液、适合在注射前溶解或悬浮在液体中的固体形式、或者作为乳液来制备。最近修订的用于肠胃外施用的方法牵涉使用缓释或持续释放系统，从而维持恒定的剂量水平。参见例如美国专利第3,710,795号，通过引用将其并入本文。
对于局部施用，可以使用液体、混悬剂、洗剂、乳膏剂、凝胶等等，只要能将活性化合物递送到皮肤表面。
实施例
提出以下实施例以便向本领域普通技术人员提供如何制备和评估本文中要求保护的化合物、组合物、制品、装置和/或方法的完全公开和描述，并且意欲纯粹例示本公开，且无意限制发明人视为其公开内容的范围。已经努力确保关于数字(例如量、温度等等)的准确性，但是也应考虑某些误差和偏差。
统计学：值表示为平均值±S.E.M。柯尔莫哥洛夫-斯米尔诺夫(Kolmogorov-Smirnov)检验用于确定分布的正态性。如结果中所指示，学生t检验、曼-惠特尼(Mann-Whitney)检验、费舍尔精确检验或单因素方差分析和两因素方差分析用于统计分析。当违反正态假设时，采用秩方差分析。事后纽曼-科伊尔斯(Newman-Keuls)检验或邓恩(Dunn)检验用于所有成对多重比较。统计学上显著的差异定义为p<0.05。
实施例1.毒蜥外泌肽-4的药代动力学和在血浆中的持续释放
PT302(毒蜥外泌肽-4的持续释放制剂)含有聚合物(98％)和毒蜥外泌肽-4(2％)的混合物。在用毒蜥外泌肽-4的持续释放制剂(PT302)注射后，分析艾塞那肽的血浆水平。特别地，使用6只成年(9周龄)雄性Sprague-Dawley大鼠来检查单剂PT302的药代动力学。将PT302新鲜溶解在稀释剂中，并皮下施用2mg/kg。在注射之后0小时、0.5小时和1小时，以及注射后第1、3、5、7、9、11、14、18、21和26天收集血液。通过Peptron Exenatide EIA试剂盒(Peptron,Daejeon，南韩)来对毒蜥外泌肽-4的血浆水平进行定量。数据显示在图1A中，其中Cmax为1.85ng/ml，Tmax为12.5天，且AUC为18.55ng*d/ml(由所有6只动物的个体数据计算的值)。如图1A中所见，持续释放制剂PT302由对一至两周的给药方案而言可接受的单次皮下注射提供了延长的毒蜥外泌肽-4血浆水平。
使用每组6只成年(9周龄)雄性Sprague-Dawley大鼠来检查不同剂量(2.4mg/kg、4.8mg/kg和9.6mg/kg)下的单剂PT302的药代动力学。将PT302新鲜溶解在稀释剂中并如所指示的那样进行皮下施用。在注射之后0小时、0.5小时和1小时，以及注射后第1、3、7、10、14、17、21、24、28和31天收集血液。如以上所讨论地对毒蜥外泌肽-4的血浆水平进行定量。数据显示在图1B中，其中针对2.4mg/kg剂量的Cmax为2.23ng/ml，Tmax为14.83天，且AUC为21.13ng*d/ml；针对4.8mg/kg剂量的Cmax为5.21ng/ml，Tmax为16.17天，且AUC为49.46ng*d/ml；并且针对9.6mg/kg剂量的Cmax为9.42ng/ml，Tmax为17.17天，且AUC of 87.14ng*d/ml。图1B证明，持续释放制剂PT302由单次皮下注射提供了延长的毒蜥外泌肽-4血浆水平，这与施用的PT302的剂量水平直接相关。
PT304(毒蜥外泌肽-4的持续释放制剂)含有聚合物(96％)和毒蜥外泌肽-4(4％)的混合物。在用毒蜥外泌肽-4的持续释放制剂(PT304)注射6只成年(9周龄)雄性Sprague-Dawley大鼠后，分析艾塞那肽的血浆水平。将PT304新鲜溶解在稀释剂中，并皮下施用4mg/kg。在注射之后1小时和3小时，以及注射后第1、4、7、11、14、18、21、25、28、32、35、39和42天收集血液。通过Peptron Exenatide EIA试剂盒来对毒蜥外泌肽-4的血浆水平进行定量。数据显示在图2中，其中Cmax为3.82ng/ml，Tmax为14.17天，且AUC为48.34ng*d/ml(由所有6只动物的个体数据计算的值)。如图2中所见，持续释放制剂PT304由对二至四周的给药方案而言可接受的单次皮下注射提供了延长的毒蜥外泌肽-4血浆水平。
在每组10只成年(9周龄)Sprague-Dawley大鼠中检查PT302的药代动力学，持续10周时期。用每周2mg/kg的PT302或每隔一周4mg/kg的PT304的剂量对大鼠进行皮下注射。如以上所讨论地制备PT302和PT304，并在首次注射之后1小时和3小时，以及首次注射之后第1、3、5、7、10、14、21、28、35、42、49、56、63、70、77、84和91天收集血液。如以上所讨论地对毒蜥外泌肽-4的血清水平进行定量，并显示在图3中。每周注射的大鼠具有5.27ng/ml的Cmax，51.60天的Tmax，以及236.42ng*d/mL的AUC，而隔周注射的大鼠具有5.08ng/ml的Cmax，47.89天的Tmax，以及211.51ng*d/mL的AUC。
实施例2.使用PT302的预处理减少了6-OHDA大鼠帕金森病模型中甲基苯丙胺介导 的旋转
在图4A中规定的天数(即，前脑内侧束的6-OHDA单侧损害之前的第16天和第2天，以及损害之后的第12、26和40天)用载体(9只大鼠)、0.4mg/kgPT302(低剂量；9只大鼠)或2mg/kg PT302(高剂量；10只大鼠)处理动物。如图4A和4B中所显示，在损害后第20、30和45天使大鼠经受甲基苯丙胺介导的旋转，并在第47天处以安乐死。关于损害，大鼠用水合氯醛(400mg/kg，腹膜内)麻醉，并放置在立体定位框架中。通过由立体定位臂固定的Hamilton微量注射器将6-OHDA(2.76μg/μl×5μl(在含0.2mg/ml抗坏血酸的0.9％NaCl中))经4分钟单侧注射入前脑内侧束中(相对于前囟为-4.4mm AP，1.2mm ML，并在颅骨下8.4mm)。使用连接到立体定位框架上的显微操作器将微量注射器降低至脑中的所需目标位点。通过注射泵(Micro 4,WPI,Sarasota,FL)控制注射速度(0.5μl/分钟)。在注射后5分钟移除针头。将一片骨蜡放置在钻孔上，以防止流体泄漏。缝合或夹住伤口。用热敏电阻器探针监控体温并在麻醉期间用加热垫保持在37℃。从麻醉中恢复之后，使用温控培养箱将体温进一步保持在37℃下3小时。
使用8通道旋转流量计系统(RotoMax,AccuScan Instruments,Inc)来评估甲基苯丙胺诱导的旋转行为[LiuDM、Lin SZ、Wang SD、Wu MI、Wang Y，Xenografting human T2sympathetic ganglion from hyperhidrotic patients partially restorescatecholaminergic functions in hemi-Parkinsonian athymic rats.Cell Transplant1999；8:563-91；和Luo Y、Hoffer BJ、Wang Y.Rotation，Drug-induced.In:Kompoliti K、Verhagen Metman L编辑，Encyclopedia of Movement Disorders.Oxford:AcademicPress,2010，第49-51页]。在如先前所描述的6-OHDA损害之后6天用甲基苯丙胺(2.5mg/kg)攻击动物[Yin LH、Shen H、Diaz-Ruiz O、Backman CM、Bae E、Yu SJ、Wang Y，Early post-treatment with 9-cis retinoic acid reduces neurodegeneration of dopaminergicneurons in a rat model of Parkinson's disease.BMC Neurosci 2012；13:120]。甲基苯丙胺是诱导释放脑中多巴胺的间接激动剂。在黑质纹状体多巴胺能系统中接受单侧注射6-OHDA的大鼠用作PD的模型。这些动物在施用间接多巴胺激动剂(例如甲基苯丙胺)之后展现出同侧旋转，在施用直接多巴胺激动剂(例如阿朴吗啡)之后展现出对侧旋转。这些行为与纹状体多巴胺能标志物的表达的单侧变化有关。
如图4B中所显示，相对于载体，使用PT302的处理显著降低了高剂量PT302处理组和低剂量PT302处理组中的旋转(p＝0.018,F2,87＝4.309,在低剂量组中两因素方差分析)。事后纽曼-科伊尔斯检验表明，高剂量的PT302显著减弱了甲基苯丙胺介导的旋转(p＝0.037)。因此，以PT302形式持续稳态施用毒蜥外泌肽-4显著减轻了由大鼠中前脑内侧束的单侧6-OHDA损害诱导的行为效应(充分表征的PD动物模型)，提供了神经保护活性。
如以上所讨论地对毒蜥外泌肽-4的血浆水平进行定量。如图4C中所显示，平均毒蜥外泌肽-4血浆水平在高剂量大鼠中为30.845pg/ml(n＝10)，在低剂量大鼠中为8,990pg/ml(n＝9)。但是，当去除异常大鼠/测量(大鼠1、10和12)后，平均毒蜥外泌肽-4血浆水平在高剂量大鼠中为5,596pg/ml(n＝8)，在低剂量大鼠中为574pg/ml(n＝9)。
实施例3.使用PT302的后处理减少了经6-OHDA损害的大鼠中甲基苯丙胺诱导的旋 转行为
如图5A的方案中所显示，实施例2中描述的对PD啮齿动物模型的前脑内侧束的单侧6-OHDA损害的使用可以与潜在药物的后处理相结合。在这种情况下，啮齿动物受单侧6-OHDA损害攻击(第0天)，并在此后6天开始处理。这是更难以治疗的PD啮齿动物模型，因为多巴胺能细胞已经开始死亡，并在处理之前正在进行死亡。如上所述对十九只大鼠进行损害。如以上所讨论地检查甲基苯丙胺诱导的旋转，将旋转超过300转/小时的动物分成两组，以在开始处理之前使载体组或PT302组的组旋转行为均衡。如图5A中所概述的，在损害之后第6、20、30和45天检查甲基苯丙胺诱导的旋转，并在6-OHDA损害之后第6、20和34天用载体(皮下注射，n＝11)或PT302(100mg/kg，含有2.0mg/kg的毒蜥外泌肽-4，皮下注射，n＝8)处理动物(成年雄性Sprague-Dawley大鼠—到达时为2月龄)。如上所述制备PT302。在损害之后第47天对动物处以安乐死。收集血液和脑样品，并分离和储存血浆(-80℃)。在收集的血浆中测量毒蜥外泌肽-4。
如图5B中所显示，与载体对照物相比，PT302在单侧受6-OHDA-损害的大鼠中显著减少了甲基苯丙胺诱导的旋转行为(p＝0.032，两因素方差分析)。
通过免疫组织化学检查TH。具体而言，以25μm厚度切割整个脑的连续恒冷切片(serial cryostat sections)。对来自每第6个切片的一个系列进行染色用于TH。为了控制染色变异性，在每一批中包括来自所有实验组的试样，并在相同条件下在net well托盘中一起反应。在0.1M磷酸盐缓冲液(PB)中冲洗切片，用4％牛血清白蛋白(BSA)和0.3％Tritonx-100(在0.1M PB中)封闭。随后在一抗(4％BSA和0.3％Tritonx-100(在0.1M PB中)中稀释的小鼠单克隆抗-TH，浓度1:100；Chemicon,Temecula,CA)中在4℃下温育切片17-19小时。随后在0.1MPB中冲洗切片，并在二抗中温育1小时，接着与亲和素-生物素-辣根过氧化物酶复合物一起温育1小时。将切片安装在载玻片上，并覆盖盖玻片。在没有一抗的情况下温育对照物切片。
通过ImageJ测量纹状体中的TH免疫反应性并从所选的3个脑切片中取平均值，以致可以看到前连合。遍及中脑(从前囟–4.2mm至-6.0mm)每360μm测量黑质中的TH免疫反应性。使用来自每只动物的总计5个脑切片。使用Cavalieri方法分析黑质的体积。
PT302在纹状体中降低了6-OHDA-介导的多巴胺能神经变性。图5C中显示了来自接受载体的3只大鼠(#866、883、886)和接受PT302的3只大鼠(#881、875、882)的代表性纹状体TH免疫染色和血浆毒蜥外泌肽-4水平(对这些相同动物中的毒蜥外泌肽-4血浆浓度进行定量并也备注在图5C中)。如图5D中所显示，注射6-OHDA在接受载体的动物中显著降低了纹状体TH免疫反应性，而PT302在受损害的纹状体中显著提高了TH免疫反应性(*p<0.001，两因素方差分析)。L＝受损害侧；non-L＝未受损害侧；veh＝接受载体的动物；PT＝PT302。
通过ImageJ测量黑质中的TH免疫反应性并从所选的3个脑切片中取平均值，以致可以看到前连合。图5E中显示了来自接受载体(#866、#883、#886)或PT302(#881、#875、#882)的动物的代表性TH免疫染色(还显示了相同动物中毒蜥外泌肽-4的血浆水平)。从前囟-4.2mm至-6.0mm每360μm将黑质中的TH免疫反应性定量，并显示在图5F中。注射6-OHDA在接受载体的动物中显著降低了黑质TH免疫反应性，而PT302在受损害的黑质中显著减轻了TH免疫反应性的损失(*p<0.001，两因素方差分析)。L＝受损害侧；non-L＝未受损害侧；veh＝接受载体的动物；PT＝PT302。
PT302后处理在受损害的黑质中保护了TH阳性神经元。如上所述对脑进行切片并实施免疫组织化学。在脑的未受损害侧上发现TH阳性神经元(图5G和5H)。在脑的受损害侧上在黑质中几乎没有发现TH阳性神经元或纤维(大鼠#886；图5I)。使用PT302的处理部分保护了TH阳性神经元(图5J、5K和5L)。
TH神经元中毒蜥外泌肽-4介导的保护与血浆毒蜥外泌肽4水平相关。图5M显示了在归一化纹状体TH(即，受损害/未受损害侧)免疫反应性与相同动物中的血浆毒蜥外泌肽-4水平之间发现的显著相关性(p＝0.002，R＝0.663)。图5L显示了在血浆毒蜥外泌肽-4水平与受损害侧上的黑质中TH免疫反应性之间观察到的显著相关性(p<0.001，R＝0.842)。
实施例4.使用PT302的预处理减少了6-OHDA大鼠帕金森病模型中甲基苯丙胺介导 的旋转
如图6A中所显示，如上所述，在6-OHDA损害之前7天和之后7天用Ex-4(5μg/kg,BID)或PT302(0.4mg/kg)皮下处理动物。本研究中使用的毒蜥外泌肽-4的5μg/kg BID剂量高于可在人中实现的剂量(参见下表1)，并且大约1μg/kg BID的较低剂量相当于人的剂量和研究中使用的PT302剂量。Ex-4(5μg/kgBID)和PT302(0.4mg/kg)处理均显著减少了经6-OHDA损害的大鼠中的旋转(在Ex-4中p＝0.005，在PT302组中p＝0.002)(图6B)。
使用毒蜥外泌肽-4或PT302的预处理在黑质中防止了6-OHDA-介导的多巴胺能神 经变性。来自空白动物以及接受载体、Ex-4(5μg/kg，BID)或PT302(0.4mg/kg)的经6-OHDA-损害的动物的代表性TH免疫反应性显示在图6C中。注射6-OHDA显著降低了损害侧(在图6C中备注为ipsi)上的TH免疫反应性。对黑质中的代表性TH免疫反应性进行定量并显示在图6D中。使用PT302和Ex-4的处理显著减少了受6-OHDA损害侧上的TH免疫反应性的损失(通过将TH免疫反应性表达为受损害侧(ipsi)上存在的免疫反应性的比率(以对照未受损害侧(contra)上存在于相同动物中的免疫反应性的百分比形式)来评估)。
实施例5.使用PT302的后处理减少了6-OHDA大鼠帕金森病模型中甲基苯丙胺介导 的旋转
在6-OHDA损害之后用Ex-4(1μg/kg，从第2天BID)或PT302(0.4mg/kg，在第2天一次)处理动物，并如上所述在损害后第9天检查甲基苯丙胺介导的旋转行为(图7A)。如图7B中所显示，PT302显著减少了单侧经6-OHDA损害的大鼠的旋转行为(p＝0.0075)。相比之下，毒蜥外泌肽-4不减少单侧经6-OHDA损害的大鼠的旋转行为。因此，按人的等效剂量使用毒蜥外泌肽-4(在大鼠中1μg/kg BID)证明了不能有效减轻甲基苯丙胺诱导的旋转，然而人的可转化剂量的PT302证明在6-OHDA大鼠PD模型中有效。将毒蜥外泌肽-4剂量逐步提高至高于人的可实现剂量的等效剂量(5μg/kg BID，如在实施例4中)时，毒蜥外泌肽-4可以减轻6-OHDA诱导的损害。相比之下，等效临床可转化剂量的PT302在实施例4和5中都提供了有利的作用。
实施例6.使用PT302的后处理改善了MPTP-小鼠PD模型中毒素诱导的行为缺陷
如上所述(图8A)，在通过MPTP诱导帕金森病之后，用Ex-4(16.7μg/kg，从第6天BID)或PT302(0.6mg/kg，在第6、20和34天)处理动物。具体而言，通过每天全身施用30mg/kgMPTP 5天来诱导帕金森病。参见例如FilichiaE、HofferB、Qi X、Luo Y，Inhibition ofDrp1mitochondrial translocation provides neural protection in dopaminergicsystem in a Parkinson's disease model inducedby MPTP.Sci Rep.2016；6:32656。在首次MOPTP剂量给药后一天开始用Ex-4或PT302处理，并持续18天。Ex-4(16.7μg/kg BID皮下)和PT302(0.4mg/kg，皮下单剂给药)的所选剂量与递送的Ex-4量相当，并在18天处理中分别提供了601.2μg/kg和少于600μg/kg。在第18天，利用金属丝握力试验(wire griptest)来评估所有动物组的运动协调。金属丝握力试验(也称为爪握力耐久性(PaGE)方法和握力记录试验)经常用作运动强度的量度。PaGE设计为评价小鼠的握力，这可以指示运动技能的降低，并在这里按JessicaAL等人(JessicaA.L.Hutter-Saunders、HowardE.Gendelman、R.Lee Mosley，Murine Motor and Behavior Functional Evaluations forAcute 1-Methyl-4-Phenyl-1,2,3,6-Tetrahydropyridine(MPTP)Intoxication.JNeuroimmune Pharmacol，2012；7(1):279–288)所描述的那样来实施。简而言之，将每只小鼠放置在来自常规啮齿动物圈养笼的金属丝盖子上；轻轻摇动该盖子以诱导紧握并倒置(180°)。测量直到小鼠释放两个后肢的潜伏期(按秒计)。每只小鼠测试三次，其中随机最大值为240秒，并记录坠落或释放两个后肢的最长潜伏期(Jessica等人2012)。
如图8B中所显示，施用多巴胺能细胞毒素MPTP导致显著减少了握力试验中的潜伏时间(MPTP：94.5秒vs.无MPTP的组合对照组：148.3秒；p＝0.02)。PT302显着增加了经MPTP处理的小鼠从金属丝上坠落的时间(118.3秒，与合并的对照组值没有统计学上的差异)，而毒蜥外泌肽-4(每日施用两次，按类似于人使用Byetta(即，立即释放Ex-4)的方式)并未减轻经MPTP处理的小鼠中的毒素诱导的行为缺陷(72.9秒，p+0.01vs.合并的对照组值)(图8B：在所有组中，小鼠的数量为7～10只)。
实施例7.通过持续释放毒蜥外泌肽-4将Ex-4递送至中枢神经系统在脑脊液中有 效实现了毒蜥外泌肽-4的治疗量
如表1中所描述，将毒蜥外泌肽-4(注射和微型泵)和毒蜥外泌肽-4的持续释放制剂(PT302)施用至成年雄性Sprague-Dawley大鼠(9周龄)，用于本研究。在首次注射施用毒蜥外泌肽-4之后第14天收集血液和脑脊液(CSF)，用于测量毒蜥外泌肽-4水平。如上所述对毒蜥外泌肽-4的血浆和CSF水平进行定量。如表2中所显示，在持续释放制剂组和微型泵施用毒蜥外泌肽-4组的血浆和CSF中检测毒蜥外泌肽-4，而在每日两次(BID，立即释放)毒蜥外泌肽-4组中，CSF中的毒蜥外泌肽-4低于可检出限。这与该毒蜥外泌肽-4组在血浆中检测到的毒蜥外泌肽-4的高水平形成对照。在按3.5-15pM/kg/min的剂量用泵施用毒蜥外泌肽-4(的动物)中观察到CSF/血浆水平比率为0.0081(或0.81％)至大约0.0412(或4.12％)，其中平均值为0.018(或1.8％)。同样地，在以0.46-2.0mg/kg/14天施用PT302的动物中，CSF/血浆水平比率为0.0117(或1.17％)至大约0.016(或1.6％)。该数据证明了毒蜥外泌肽-4的持续释放向CNS中提供了更高水平的毒蜥外泌肽-4。
表1实验程序
表2.经由微型泵、PT302和毒蜥外泌肽-4，用毒蜥外泌肽-4处理的大鼠中的血浆和脑脊液水平
实施例8.对轻度创伤性脑损伤(mTBI)小鼠的持续释放艾塞那肽处理改善了新物 体识别
如先前所描述的，使用重物坠落创伤装置实施头部损伤(Tweedie等人2007)。该装置由金属管(90厘米长，1.3厘米内径)和在管下方用以支撑小鼠头部的海绵组成。通过吸入异氟烷使小鼠轻度麻醉，并放在该装置之下。金属重物(30克)从管的顶部坠落，以在眼角和耳朵之间在颞侧撞击小鼠的头部。在受伤后立即将小鼠放回其原始笼中以供恢复。这种头部损伤程序被小鼠充分忍受，并导致在损伤侧的海马和大脑皮质中的弥漫性神经元损失，并伴随着视觉和空间记忆测试中的认知损害(Deselms H、Maggio N、Rubovitch V、ChapmanJ、Schreiber S、Tweedie D、Kim DS、Greig NH、Pick CG，Novel pharmaceuticaltreatments for minimal traumatic brain injury and evaluation ofanimal modelsandmethodologies supporting their development，JNeurosci Methods.2016；272:69-76)。
如上所述(图9A)，在头部损伤后1小时施用持续释放PT302(0.6mg/kg,皮下)。在损伤后7天对小鼠测试新物体识别范式，该范式常规用于评估啮齿动物中的识别记忆。未受损伤的啮齿动物显示出在其直接位置探索新物体的固有倾向。小鼠行为的这种特征允许评价视觉识别记忆功能。或许更重要地，其还允许评价不同刺激物对这种固有活动的影响。该测试利用两次试验。在第一次试验中，允许动物持续规定量的时间(5分钟)检查两个物体。第二次试验发生在第一次试验之后24小时，其中用两个物体挑战动物，其中一个与第一次试验中的相同，另一个对动物而言是新的。在第二次试验中，还允许小鼠探索物体5分钟。计算辨别偏好指数并用来评估动物的识别记忆。通过以下方式来计算该指数：动物在新物体附近花费的时间减去在熟悉物体附近花费的时间，除以新物体和熟悉物体附近(花费)的时间之和(Dix SL、Aggleton JP，Extending the spontaneous preference test ofrecognition:evidence of object-location and object-context recognition，Behav.Brain Res.1999；99:191–200)。如图9B中所显示，与未经处理的mTBI小鼠(n＝7)相比，施用艾塞那肽在mTBI小鼠(n＝5)中显著提高了新物体识别，由此证明经PT302处理的小鼠减轻了由mTBI诱导的视觉识别损害。
实施例9.正常ICR小鼠中血浆毒蜥外泌肽-4水平的检查
在皮下施用PT302(0.1mg/kg、0.3mg/kg、0.6mg/kg、1.0mg/kg和2.0mg/kg)之后7天在正常ICR小鼠中测量毒蜥外泌肽-4血浆浓度。如上所述对毒蜥外泌肽-4的血浆水平进行定量。直到注射之后7天，血浆毒蜥外泌肽-4水平持续并且剂量依赖性地累积直至大约4000pg/ml(图10A)。
实施例10.正常小鼠和创伤性脑损伤小鼠中血浆毒蜥外泌肽-4水平的检查
在皮下施用PT302(0.6mg/kg)之后7天在正常小鼠和TBI模型小鼠中测量毒蜥外泌肽-4血浆水平。如上所述对毒蜥外泌肽-4的血浆水平进行定量。在正常小鼠和TBI-诱导的小鼠之间没有观察到毒蜥外泌肽-4血浆水平方面的差异(图10B)。
实施例11.持续释放艾塞那肽持续延长时期保持毒蜥外泌肽-4血浆水平
正常ICR小鼠以三种不同剂量接受PT302的单次皮下注射：0.024mg/kg、0.12mg/kg和0.6mg/kg。在首次注射之后0小时、0.5小时和1小时，以及在第1、3、7、14和21天收集血液用于血浆测量。如上所述对毒蜥外泌肽-4的血浆浓度进行定量。如图10C中所显示，单剂PT302保持毒蜥外泌肽-4血浆水平超过20天。
实施例12.持续释放艾塞那肽显著提高了在创伤性脑损伤之后7天的新物体和迷 宫新臂的识别
如上所述实施头部损伤，并立即将小鼠放置在其原始笼中以供恢复。在TBI诱导之后1小时，以单次注射形式将PT302(0.024mg/kg、0.12mg/kg和0.6mg/kg)皮下施用于小鼠。在mTBI后7天进行行为评价(新物体识别和Y-迷宫测试)。Y-迷宫范式通常用来评估对新环境的自发探索和响应以及空间工作记忆功能(Deselms等人,2016)。测试设备由相同的黑色有机玻璃臂(8×30×15厘米)构建而成，其中所述臂从中心点以120°角自中心延伸。在每条臂内部是设计为向该小鼠提供视觉记忆锚的不同的空间线索。通常，间隔几分钟进行两次试验；在本文中间隔5分钟进行试验。对每个第一试验，随机选择起始臂。将每只动物放入Y迷宫环境的中心点；在最初的5分钟试验期间，随机关闭两个臂中的一个，在第二个2分钟试验过程中，打开所有三个臂用于探索。记录在第二次试验期间小鼠在每只手臂中探索的总时间量。为了避免任何可能的混淆，在试验之间彻底清洁T迷宫。在先前未探索的新臂中所花费的超出先前探索过的熟悉臂的时间用于评价各动物处理组之间的任何行为差异，即，(在新臂中花费的时间减去在熟悉臂中花费的时间)/(在新臂中花费的时间加上在熟悉臂中花费的时间)。
与对照小鼠相比，经载体处理的mTBI小鼠遭受视觉记忆缺陷，并在新物体附近花费更少的时间(p<0.001)(图11A)。与未经处理的mTBI小鼠相比，在mTBI诱导后1小时经单次皮下注射0.12mg/kg(p<0.05)和0.6mg/kg(p<0.01)剂量的PT302处理的小鼠中观察到对新物体的高度偏好(图11A)。
与空白(对照)动物相比，受mTBI攻击的小鼠显示显著的空间记忆损害，并在Y迷宫的新臂中花费较少时间(p<0.001)(图11B)。与未经处理的mTBI小鼠相比，在mTBI诱导后1小时单次皮下注射0.12mg/kg和0.6mg/kg剂量的PT302改善了mTBI-空间记忆缺陷(p<0.01)(图11B)。[F(4,50)＝4.83，p＝0.002，费希尔LSD事后]。
所有组在高架十字迷宫的开放臂中花费大致相等的时间，并且无法在它们的焦虑样行为方面来区分彼此(图11C)；重要的是，这表明焦虑样行为并非先前新物体识别和Y迷宫范式中的混淆因素(p>0.05)。[F(4,36)＝0.28,p＝0.89]
实施例13.持续释放艾塞那肽显著提高了在创伤性脑损伤之后30天对新物体和迷 宫新臂的识别
如上所述实施头部损伤，并立即将小鼠放置在其原始笼中以供恢复。在TBI诱导之后1小时，以单次注射形式将PT302(0.6mg/kg)皮下施用于小鼠。在mTBI后30天进行行为评价(新物体识别和Y-迷宫测试)。
与对照小鼠相比，经载体处理的mTBI小鼠遭受视觉记忆缺陷，并在新物体附近花费更少的时间(p<0.001；图12A)。与mTBI小鼠相比，在mTBI诱导后1小时经单次皮下注射0.12mg/kg或0.6mg/kg剂量的PT302处理的小鼠中观察到对新物体的高度偏好(分别地，p<0.05和p<0.01；图12A)。
与空白/对照动物相比，受mTBI攻击的小鼠显示显著的空间记忆损害，并在迷宫的新臂中花费较少时间(p<0.001；图12B)。与单独的mTBI相比，在mTBI诱导后1小时单次皮下注射0.6mg/kg剂量的PT302改善了mTBI-空间记忆缺陷(p<0.01；图12B)。
所有组在迷宫的开放臂中花费大致相等的时间，并且无法在它们的焦虑样行为方面来区分彼此(图12C)，这表明焦虑样行为并非先前新物体识别和Y迷宫范式中的因素(p>0.05)。
实施例14.施用PT302防止了小鼠颞叶皮质和海马区中的创伤性脑损伤之后的 NeuN免疫反应性的下降
NeuN是一种成熟的神经元标记物，其可用于评价归因于创伤性脑损伤的神经元损失。为了评估规定脑区域中的NeuN细胞，通过施用过量氯胺酮+赛拉嗪来麻醉小鼠，并立即用生理缓冲盐水进行经心脏灌注(perfused transcardially)，接着用4％多聚甲醛((PFA)在0.1M磷酸盐缓冲液中，pH 7.4)进行经心脏灌注。取出它们的脑，固定过夜(0.1M磷酸盐缓冲液中的4％PFA，pH 7.4)，然后放置在30％蔗糖中48小时。在恒冷切片机上切割冠状切片(30μm)，放置在冷冻保护剂中并在-20℃下储存直到使用。随后，通过与磷酸盐缓冲盐水(PBST)中的0.1％TritonX-100、以及10％正常马血清在25℃下温育1小时来封闭5个皮质切片和5个海马切片。然后将一抗(小鼠抗神经元细胞核)(NeuN；1:50,Millipore,Danvers,MA,USA,Cat#MAB3377)溶解在PBST和2％正常马血清中，并与切片一起在4℃下温育48小时。在PBST中冲洗后，切片与DyLightTM594-缀合的亲和纯化驴(AffinityPure Donkey)抗兔IgG和DyLightTM488-缀合的亲和纯化驴抗小鼠IgG一起在25℃下温育1小时(1:300；JacksonLaboratories,Bar Harbor,ME,USA)。在PBST中冲洗后，将切片安装在涂有干明胶的载玻片上，并用具有20倍和63倍透镜的Zeiss LSM 510共聚焦显微镜(Carl Zeiss,Jena,德国)对荧光进行评估。对于每个脑，取三到五个切片，并且在1402或4402μM的规定区域内计算海马和颞叶皮质中细胞的平均数。以盲试方式进行用于免疫荧光的免疫组织化学载玻片的评估，并且在阴性对照切片的传代(generation)中常规地进行一抗的省略。通过Imaris程序来实施颜色定量分析(Bitplane AG,苏黎世，瑞士)。
图13A显示了在mTBI后30天在对照小鼠、未经处理的mTBI小鼠和经PT302处理的mTBI小鼠(mTBI后1小时0.6mg/kg)的皮质、CA3和齿状回中的NeuN(红色(当按颜色评估时))阳性神经元的代表性图像。图13B、13C和13D的柱形图分别显示了皮质、CA3和齿状回中神经元存活的量化，如通过在空白对照物、mTBI和mTBI+PT3020.6mg/kg组中用抗NeuN阳性染色的神经元的数量所测量的那样(**p<0.01，***p<0.001)。值是平均值±SEM。施用呈PT302形式的持续释放毒蜥外泌肽-4防止了归因于创伤性脑损伤而观察到的神经元损失。
实施例15.PT302施用减少了mTBI小鼠中退化神经元的数量
C是一种标记受损伤的退化脑神经元的荧光染色，可利用其来评价归因于创伤性脑损伤的神经元损失。离子化钙结合适配分子1(IBA1)在小胶质细胞中特异性表达并在活化的小胶质细胞中向上调节，其可用作神经炎症的标志物。将小鼠处以安乐死，并如上所述制备其脑，用于免疫组织化学分析。在恒冷切片机上切割来自海马和顶叶皮质的冠状切片(40μm)并收集在冷冻保护剂溶液中。除了顶叶皮质之外，还分析了来自海马的CA1、CA3和齿状回。
对于FluoroJade C染色，首先将脑切片浸没在80％的乙醇中含有1％NaOH的溶液中5分钟。将它们在70％的乙醇中冲洗2分钟，在蒸馏水中洗涤,然后在0.06％的高锰酸钾溶液中温育10分钟。水洗之后，将载玻片在FJC染色溶液(通过将4毫升FJC在蒸馏水中的0.01％储备溶液添加到96毫升0.1％乙酸中来获得)中温育并染色10分钟。用蒸馏水洗涤3次后，将载玻片在载玻片温热器上完全风干，在二甲苯中澄清并用DPX盖玻片覆盖。通过FV1000MPE Olympus共聚焦显微镜对两个半球中的每个区域计数Fluorojade C阳性细胞。
对于IBA1/TNF-α双重标记，将切片与IBA1抗体(多克隆山羊抗IBA1 1:200,Abcam,USA)和TNF-α抗体(TNF-α多克隆兔抗TNF-α1:800,Abbiotec,USA)一起温育48小时。在PBS洗涤之后，将切片与针对IBA1的二抗一起温育，同时使用三步检测，通过生物素缀合的IgG(IgG(H+L)生物素-山羊抗兔1:500,Invitrogen,USA)和链霉抗生物素蛋白-荧光素(1:200,Vector,UK)来提高TNF-α的信号。
使用FV 1000MPE,Olympus共聚焦激光扫描显微镜来实施针对IBA1和TNFα的定性和定量分析。通过ImageJ 1.47v处理Z系列图像，并且通过Imaris 7.4.2如下测量共定位元件的体积：对于每个数据集，通过软件自动组成共定位通道。在最终的堆叠中，针对每只动物的每个半球的各个脑部区域(CA1、CA3、DG和皮质)的选择感兴趣的区域，并且计算感兴趣的元件的体积，求和并表示为体积/μm3。
如图14A中所显示，在mTBI损伤之后，与对照物相比在所有检查的区域(海马的CA1、CA3、DG，以及侧皮质)中均观察到Fluoro-Jade C阳性神经元数量的强烈增加(针对CA1：p<0.05；针对CA3、DG和CTX：p<0.001；分别(见)图14A，以及图14B、14C和14D，和14E)。用0.6mg/kg剂量的PT302处理在所有检查的区域中抵消了mTBI诱导的神经变性(在CA3和DG中p<0.01，图14C和14D；在CTX和CA1中p<0.05，图14E和14B)，而0.12mg/kg的PT302剂量在CA3区域中显示出显著的影响(p<0.05)。
如图15A中所显示，在所有分析的区域中，在mTBI损伤之后，IBA1免疫反应性与载体对照物相比提高(针对CA1：p<0.05；针对CA3、DG和CTX：p<0.001)。在对照组中，小神经胶质细胞展示出具有小的胞体、长而薄的突起(processes)的静息形态(图15A)。在mTBI损伤之后，小胶质细胞显示活化形态，其特征在于具有更短和更厚的突起的更大的胞体(图15A)。两种剂量下的PT302均抑制小胶质细胞活化：PT302 0.6mg/kg在所有脑部区域中均起作用(在CTX中p<0.001；在CA1和CA3中p<0.001；在DG中p<0.05)。
在所有分析的区域中，促炎细胞因子TNF-α的免疫反应性在受mTBI损害的组中在IBA1阳性细胞中提高(在DG中p<0.05；在CA1中p<0.01；在CA3和皮质中p<0.001；分别(见)图15D、15B、15C和15E)。按0.6mg/kg和0.12mg/kg的剂量施用PT302降低了海马和皮质两者中的IBA1/TNF-αIR共定位体积的水平。
具体实施方案
本公开的一个方面提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括通过提供神经保护性多肽的持续释放或递送的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，其中神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或神经保护性多肽的持续释放增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
本公开的另一方面提供了治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括通过提供神经保护性多肽的持续释放或递送的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的神经保护性多肽，其中神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或装置增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
本公开的一个方面提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括向对象的全身血液循环施用控释制剂，所述控释制剂包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体，并且相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释制剂是神经保护性多肽的长效制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物、以及包衣材料，以致实现持续足够时期的生物利用度和有效量的神经保护性多肽的持续释放(例如没有活性成分的初始突释，例如有害的初始突释)。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释神经保护性制剂包含：包括具有神经保护性多肽的核、以及可生物降解的聚合物的控释微球；和包覆该核的包衣层。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的贮库制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的组合物。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，CNS相关病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂包括注射该控释神经保护性制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，注射控释神经保护性制剂是皮下注射。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂导致累积提高对象中的脑脊液(CSF)、脑或其组合中的神经保护性多肽浓度。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，CSF中的神经保护性多肽浓度在大约5～大约400pg/mL的范围内。
本公开的进一步方面提供了治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或在有需要的对象中减少CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括向对象的全身血液循环施用治疗有效量的控释神经保护性制剂，该控释神经保护性制剂包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一者结合的受体，并且相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释制剂是神经保护性多肽的长效制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物以及包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放神经保护性多肽(例如没有活性成分的初始突释，例如有害的初始突释)。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，控释神经保护性制剂包含包括具有神经保护性多肽的核、以及可生物降解的聚合物的控释微球；和包覆该核的包衣层。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的贮库制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，长效制剂包含用于持续释放神经保护性多肽的组合物。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，CNS相关病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂包括向对象注射该控释神经保护性制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，向对象注射控释神经保护性制剂是皮下注射。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释制剂导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释制剂导致累积提高在脑脊液(CSF)、脑或其组合中的至少一者中的神经保护性多肽浓度。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，每7～21天施用一次(例如每7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天一次)该制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，在前一次施用之后大约7～大约21天(例如每大约7天、大约8天、大约9天、大约10天、大约11天、大约12天、大约13天、大约14天、大约15天、大约16天、大约17天、大约18天、大约19天、大约20天或大约21天一次)再次施用该制剂。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，当在前一次制剂施用的大约28天内(例如在大约21天或大约14天内)再次施用该制剂时，血浆中神经保护性多肽浓度的百分比变化不大于大约30％。
本公开的额外方面提供了向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法。该方法包括向对象的全身血液循环提供选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽的持续递送，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
本公开的进一步方面提供了治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或减少有需要的对象中CNS相关疾病的至少一种症状的方法。该方法包括向对象的全身血液循环提供选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽的持续递送，其中该神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或其组合中的至少一者结合的受体；并且其中相对于神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂增强了神经保护性多肽穿过对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，提供一种或更多种神经保护性多肽的持续释放，经由装置(例如泵、微型泵、渗透泵、渗透递送装置、输液泵、静脉内施用装置、蠕动泵、微型输液泵等等)施用该一种或更多种神经保护性多肽。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，当施用该制剂时(例如当每7～28天施用一次，或每7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27或28天施用一次时)，在实现稳态之后血浆中的稳态神经保护性多肽浓度的百分比变化不大于大约80％(例如不大于大约50％或不大于大约40％)。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，经由装置(例如泵、微型泵、渗透泵、渗透递送装置、输液泵、静脉内施用装置、蠕动泵、微型输液泵等等)施用一种或更多种神经保护性多肽。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，以大约1pM/kg/min～大约30pM/kg/min(例如大约3pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min)的速率施用一种或更多种神经保护性多肽。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释神经保护性制剂或提供神经保护性多肽的持续递送减轻了对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释制剂或提供神经保护性多肽的持续释放导致神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，施用控释制剂或提供神经保护性多肽的持续释放导致累积提高脑脊液(CSF)、脑或其组合中的至少一者中的神经保护性多肽浓度。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，CSF中的神经保护性多肽浓度在大约10～大约400pg/mL的范围内。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，CFS中的稳态多肽浓度与血浆中的稳态多肽浓度之比在大约0.1％～大约5％的范围内。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，毒蜥外泌肽-4类似物由化学式I或其药学上可接受的盐表示：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26Xaa27 Xaa28-Z1，
(化学式I)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基；
Xaa22是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
Xaa27是Ala或Lys；
Xaa28是Ala或Asn；且
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser SerGly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37Xaa38 Xaa39-Z2，
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸或N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr(例如Ser)，且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中的不超过三个是Ala；和
当Xaa1是His、Arg或Tyr时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，毒蜥外泌肽-4类似物由化学式II或其药学上可接受的盐表示：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26X1-Z1，
(化学式II)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基、或环烷基-烷酰基；
Xaa22是Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
X1is Lys Asn、Asn Lys、Lys-NHε-R Asn、Asn Lys-NHε-R、Lys-NHε-R Ala、AlaLys-NHε-R，其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基，或环烷基烷酰基；
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser SerGly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla Xaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37Xaa38 Xaa39-Z2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸和N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr；且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25和Xaa26中的不超过三个是Ala；和
当Xaa1是His、Arg、Tyr或4-咪唑丙酰基时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
在本文中描述的任何方面或实施方案中，神经保护性多肽选自SEQ IDNOS:1-55。
通过引用将本文中提及的每篇文献并入本文。除了在实施例中或另外明确指出之处，本说明书中规定材料的量等等的所有数值量均应理解为被词语“大约”修饰。应理解，本文中所阐述的上限和下限量、范围和比率限制可以独立地组合。类似地，本公开的各要素的范围和量可以与任何其它要素的范围或量一起使用。
本领域技术人员将认识到或能够仅仅使用常规实验来确定本文中所描述的具体实施方案和方法的许多等同物。此类等同物意欲被以下权利要求书的范围所涵盖。
应理解，本文中描述的详细的实施例和实施方案仅出于说明目的通过举例而给出，并且决不应视为对本公开的限制。据此将为本领域技术人员建议各种修改或变化，并且所述修改或变化包括在本申请的精神和范围内，且被认为在所附权利要求书的范围内。例如，可以改变成分的相对量，以最优化所需效果；可以添加额外的成分、且/或可以用类似的成分来替代一种或更多种所描述的成分。从所附权利要求书，与本公开的系统、方法和过程相关的额外的有利特征和功能将显而易见。此外，本领域技术人员将认识到或者能够仅仅使用常规实验来确定本文中所描述的公开内容的具体实施方案的许多等同物。此类等同物意欲被以下权利要求书所涵盖。
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序列表
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<120> 向中枢神经系统递送神经保护性多肽的方法和治疗枢神经系统疾病的方法
<130> 1568390.100US0
<140> TBD
<141> 2017-10-20
<150> 62/410,748
<151> 2016-10-20
<160> 55
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 1
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 2
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 3
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 3
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 4
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 4
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 5
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 5
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 6
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 6
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 7
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
20 25 30
<210> 8
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 8
His Xaa Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 9
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 30
<223> Xaa=任何氨基酸
<400> 9
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Xaa Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 10
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 10
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 11
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 11
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
20 25 30
<210> 12
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 12
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro
35
<210> 13
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 13
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala
35
<210> 14
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 14
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser
<210> 15
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 15
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
20 25
<210> 16
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 16
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu
20 25
<210> 17
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 17
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile
20
<210> 18
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 18
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg
20
<210> 19
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 19
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu
<210> 20
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 20
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met
1 5 10
<210> 21
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 21
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser
1 5 10
<210> 22
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 3,4,5,6
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 22
His Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser
1 5 10 15
Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys
20 25 30
Gly Arg
<210> 23
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 3,4,5,6,7,8,9,10
<223> Xaa=氨基己酸
<400> 23
His Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser
1 5 10 15
Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala
20 25 30
Trp Leu Val Lys Gly Arg
35
<210> 24
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 24
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 25
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 26
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 26
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 27
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 27
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 28
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 28
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 29
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 29
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Val Lys Gly Gly
20 25 30
<210> 30
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 30
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 31
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 31
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Arg
20 25 30
<210> 32
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 32
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Trp Leu Lys Asn Gly Arg
20 25 30
<210> 33
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 33
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Glu Phe Ile Ala Trp Leu Lys Asn Gly Arg
20 25 30
<210> 34
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 34
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 35
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 35
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 36
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 36
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg
20 25 30
<210> 37
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 37
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Arg
20 25 30
<210> 38
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 38
Tyr Gly Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp Lys
1 5 10 15
Ile His Gln Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly Lys
20 25 30
Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr Gln
35 40
<210> 39
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 39
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 40
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 40
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Pro
35 40
<210> 41
<211> 45
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 41
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Pro Pro Ser Ser
35 40 45
<210> 42
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 42
His Xaa Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35 40
<210> 43
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 43
His Xaa Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Pro
35 40
<210> 44
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 44
His Xaa Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Pro Pro Ser Ser
35 40 45
<210> 45
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 45
His Ala Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35 40
<210> 46
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 46
His Ala Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Pro
35 40
<210> 47
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 3
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 47
His Ala Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu
1 5 10 15
Gly Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro
20 25 30
Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Gly Ala Pro Pro Ser Ser
35 40 45
<210> 48
<211> 43
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<220>
<221> 变体
<222> 2
<223> Xaa= 氨基己酸
<400> 48
Tyr Xaa Ala Glu Gly Thr Phe Ile Ser Asp Tyr Ser Ile Ala Met Asp
1 5 10 15
Lys Ile His Gln Gln Asp Phe Val Asn Trp Leu Leu Ala Gln Lys Gly
20 25 30
Lys Lys Asn Asp Trp Lys His Asn Ile Thr Gln
35 40
<210> 49
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 49
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro
35
<210> 50
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 50
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 51
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 51
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro
35
<210> 52
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列说明: Note =
合成构建体
<400> 52
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Pro Ser
20 25 30
Ser
<210> 53
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 毒蜥外泌肽-3的氨基酸序列
<400> 53
His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35
<210> 54
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 毒蜥外泌肽-4 变体的氨基酸序列
<400> 54
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro
20 25 30
<210> 55
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 14Leu25Phe 毒蜥外泌肽-4 变体的氨基酸序列
<400> 55
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1 5 10 15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
20 25 30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
35

Claims (28)

1.向对象的至少一部分中枢神经系统(CNS)递送神经保护性多肽的方法，所述方法包括：
通过提供所述神经保护性多肽的持续释放的控释制剂或装置向所述对象的全身血液循环施用治疗有效量的所述神经保护性多肽，其中所述神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，
其中所述神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一者结合的受体；并且
其中相对于所述神经保护性肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或所述神经保护性多肽的持续释放增强了所述神经保护性多肽穿过所述对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送和/或摄取。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述控释制剂是神经保护性多肽的长效制剂。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物、和包衣材料，以致实现持续足够时期的生物利用度和有效量的所述神经保护性多肽的持续释放。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述控释神经保护性制剂包含：
控释微球，其包括具有所述神经保护性多肽的核以及可生物降解的聚合物；和
包覆所述核的包衣层。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述长效制剂包含用于持续释放所述神经保护性多肽的贮库制剂。
6.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述长效制剂包含用于持续释放所述神经保护性多肽的组合物。
7.治疗患有中枢神经系统(CNS)相关疾病的对象或减少有需要的对象中CNS相关疾病的至少一种症状的方法，所述方法包括：
通过提供神经保护性多肽的持续释放的控释制剂或装置向对象的全身血液循环施用治疗有效量的所述神经保护性多肽，其中所述神经保护性多肽包括选自GLP-1、毒蜥外泌肽-4、或治疗有效性GLP-1或毒蜥外泌肽-4类似物的至少一种神经保护性多肽，
其中所述神经保护性多肽结合并激活与GLP-1、毒蜥外泌肽-4或其组合中的至少一者结合的受体；并且
其中相对于所述神经保护性多肽的速释制剂，控释神经保护性制剂或所述神经保护性多肽的持续释放增强了所述神经保护性多肽穿过所述对象的血脑屏障(BBB)向至少一部分中枢神经系统(CNS)的递送。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述控释制剂是所述神经保护性多肽的长效制剂。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中所述控释制剂进一步包含具有特定粘度的可生物降解的聚合物、和包衣材料，持续一定时期具有生物利用度并以有效浓度持续释放所述神经保护性多肽。
10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法，其中所述控释神经保护性制剂包含：
控释微球，其包括具有所述神经保护性多肽的核以及可生物降解的聚合物；和
包覆所述核的包衣层。
11.根据权利要求8所述的方法，其中所述长效制剂包含用于持续释放所述神经保护性多肽的贮库制剂。
12.根据权利要求8所述的方法，其中所述长效制剂包含用于持续释放所述神经保护性多肽的组合物。
13.根据权利要求3、4、9或10中任一项所述的方法，其中所述可生物降解的聚合物选自由聚丙交酯(PLA)、聚乙交酯(PGA)、聚(丙交酯-乙交酯)共聚物(PLGA)、聚原酸酯、聚酐、聚羟基丁酸、聚己内酯和聚烷基碳酸酯组成的组；选自所述聚合物组中的两种或更多种的共聚物或简单混合物；所述聚合物与聚乙二醇(PEG)的共聚物；或聚合物-糖复合物，其中糖与所述聚合物或所述共聚物偶联。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中施用所述控释神经保护性制剂包括向所述对象注射所述控释神经保护性制剂。
15.根据权利要求14所述的方法，其中向所述对象注射所述控释制剂是皮下注射。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中在前一次施用之后大约7～大约21天的后续时间施用所述控释制剂(例如每大约7天、大约8天、大约9天、大约10天、大约11天、大约12天、大约13天、大约14天、大约15天、大约16天、大约17天、大约18天、大约19天、大约20天或大约21天一次)。
17.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中所述装置提供所述控释制剂的持续释放。
18.根据权利要求1、8或17中任一项所述的方法，其中所述装置是泵(例如泵、微型泵、渗透泵、渗透递送装置、输液泵、静脉内施用装置、蠕动泵、微型输液泵等等)。
19.根据权利要求1、8、17或18中任一项所述的方法，其中通过所述装置以大约1pM/kg/min～大约30pM/kg/min(例如大约3pM/kg/min～大约17.5pM/kg/min)的速率施用所述神经保护性多肽。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的方法，其中向全身血液循环施用所述神经保护性多肽减轻了所述对象中至少一种CNS相关病症的至少一种症状。
21.根据权利要求20所述的方法，其中所述CNS相关病症选自帕金森病(PD)、创伤性脑损伤(TBI)、多发性硬化、药物成瘾、酒精成瘾、神经变性病症、脑部炎症、阿尔茨海默氏病(AD)、多系统萎缩症、亨廷顿病、慢性创伤性脑病(CTE)、运动神经元疾病(例如肌萎缩侧索硬化、脊髓损伤、脊髓小脑性共济失调(SCA)、脊髓性肌萎缩(SMA))、血管性痴呆、路易体痴呆(DLB)、混合性痴呆、额颞痴呆、克-雅病、正常压力脑积水或其组合。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中施用所述控释制剂或通过装置提供所述神经保护性多肽的持续释放导致所述神经保护性多肽的稳态血浆浓度在大约50～大约4500pg/mL的范围内。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中施用所述控释制剂或通过装置提供所述神经保护性多肽的持续释放导致累积提高脑脊液(CSF)、脑或其组合中的至少一者中的神经保护性多肽浓度。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中CSF中的神经保护性多肽浓度在大约10～大约400pg/mL的范围内。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中CFS中的稳态多肽浓度与血浆中的稳态多肽浓度之比在大约0.1％～大约5％的范围内。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述毒蜥外泌肽-4类似物由化学式I或其药学上可接受的盐表示：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26Xaa27 Xaa28-Z1，
(化学式I)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg或C1-C10直链或支链烷酰基；
Xaa22是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
Xaa27是Ala或Lys；
Xaa28是Ala或Asn；且
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、GlyGly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser GlyAla-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly AlaXaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2，
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸或N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr(例如Ser)，且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中的不超过三个是Ala；以及
当Xaa1是His、Arg或Tyr时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
27.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述毒蜥外泌肽-4类似物由化学式II或其药学上可接受的盐表示：
Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 AlaXaa19 Xaa20 Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26X1-Z1，
(化学式II)
其中：
Xaa1是His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val、Norleu或4-咪唑丙酰基；
Xaa2是Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3是Ala、Asp或Glu；
Xaa4是Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5是Ala或Thr；
Xaa6是Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7是Thr或Ser；
Xaa8是Ala、Ser或Thr；
Xaa9是Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10是Ala、Leu、Ile、Val、戊基甘氨酸或Met；
Xaa11是Ala或Ser；
Xaa12是Ala或Lys；
Xaa13是Ala或Gln；
Xaa14是Ala、Leu、Ile、戊基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15是Ala或Glu；
Xaa16是Ala或Glu；
Xaa17是Ala或Glu；
Xaa19是Ala或Val；
Xaa20是Ala或Arg；
Xaa21是Ala、Leu或Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基、或环烷基-烷酰基；
Xaa22是Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23是Ile、Val、Leu、戊基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24是Ala、Glu或Asp；
Xaa25是Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26是Ala或Leu；
X1 is Lys Asn、Asn Lys、Lys-NHε-R Asn、Asn Lys-NHε-R、Lys-NHε-R Ala、Ala Lys-NHε-R，其中R是Lys、Arg、C1-C10直链或支链烷酰基，或环烷基烷酰基；
Z1是-OH、–NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、GlyGlyXaa31 Ser Ser-Z2、Gly GlyXaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly GlyXaa31 Ser Ser GlyAla-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或Gly Gly Xaa31 SerSer Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立地选自Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫代脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基戊基甘氨酸和N-烷基丙氨酸，Xaa39是Ser或Tyr；且
Z2是-OH或–NH2，
条件是：
Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25和Xaa26中的不超过三个是Ala；以及
当Xaa1是His、Arg、Tyr或4-咪唑丙酰基时，Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个是Ala。
28.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述神经保护性多肽选自SEQ IDNOS:1-55。
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