CN110183376B - 用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用，本发明通过加入哌啶作为催化剂，促进2‑羟基‑4‑二乙基氨基苯甲醛和1‑乙基‑4‑甲基碘化吡啶之间的缩合反应，生成一种带有羟基的生色团DMHP作为人血清白蛋白(HSA)检测的指示剂。本发明通过一步反应合成的荧光探针DMHP能够特异性识别HSA，实现了水相中HSA的定量检测，避免了繁琐的有机合成及有机溶剂的使用。此外，在实际血清及活细胞成像实验研究表明，探针(E)‑4‑(4‑(二乙基氨基)‑2‑羟基苯乙烯基)‑1‑乙基吡啶‑1‑碘化物(DMHP)在灵敏度、抗干扰能力和成像方面具有良好的稳定性和广泛的应用前景。

Description

用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用
技术领域
本发明属于人血清白蛋白检测技术领域，涉及一种用于检测人血清白蛋白的方法策略。更具体地，本发明不仅涉及一种基于扭曲分子内电荷转移(TICT)过程的(E)-4-(4-(二乙基氨基)-2-羟基苯乙烯基)-1-乙基吡啶-1-碘化物荧光探针，还涉及上述荧光探针的合成方法及其在检测人血清白蛋白中的应用。
背景技术
在人体中人血清白蛋白(HSA)的含量占总血浆蛋白的50-60％，是人血液中含量最丰富的蛋白质。HSA具有特殊的心形三维结构，在调节人体的生理活动方面发挥着重要作用，例如HSA能够维持血浆渗透压、调节凝血系统和血管通透性。另外，HSA由大量水溶性氨基酸组成，具有优异的水溶性和稳定性，使其成为许多内源性生物分子(如脂肪酸，甲状腺素，铁矾和胆红素等)的主要载体。此外，许多治疗药物(如紫杉醇和全反式维甲酸)或探针也可以通过非共价吸附和疏水作用加载到HSA的疏水腔，这大大提高了摄取效率。
HSA主要由肝细胞合成，并在合成后参与血液循环。人血清中HSA的正常水平在35-50g/L范围内，由于肾脏具有透析功能，因此HSA在尿液中的正常含量低于30mg/L。在血清中HSA含量过低，表明可能存在肝硬化或慢性肝炎等疾病，而在尿液中HSA含量的异常可作为肾病和心血管疾病的生物标志物。因此，体液中HSA的浓度水平通常是健康评估的指标，开发一种有效的选择性识别和定量检测HSA的方法对于生物化学领域和临床诊断来说具有十分重要的意义。
现今，HSA的检测方法主要有蛋白质组学技术、放射免疫分析、电化学分析法和荧光分析法。其中蛋白质组学技术、放射免疫分析法操作困难，设备复杂昂贵，无法快速提供实时检测结果。对比之下，荧光分析法具有灵敏度高、实施简单、响应速度快、选择性好、设备操作简易等优点，在生物分子的检测分析等领域具有极大潜力。迄今为止，已报道的探针中大多数灵敏度较低，包括常用于临床诊断地染料探针溴甲酚绿(BCG)，仅适用于检测具有高水平HSA的生物样品，并且不适用于检测痕量HSA样品。因此，开发具有高灵敏度和选择性以监测复杂细胞环境中的HSA水平的荧光探针是很有必要的。
综上，如何提供一种高灵敏度、高选择性的荧光探针是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种哌啶促进2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶之间的缩合反应，生成一种带有羟基的生色团DMHP作为人血清白蛋白(HSA)检测的指示剂，并公开该新生色团DMHP的合成方法。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针，所述荧光探针是通过哌啶作为催化剂，促进2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶之间的缩合反应，生成的一种带有羟基的生色团(E)-4-(4-(二乙基氨基)-2-羟基苯乙烯基)-1-乙基吡啶-1-碘化物(DMHP)；
具体地，所述荧光探针的结构式为：
Figure GDA0003503080650000031
本发明通过一步反应合成的荧光探针DMHP能够特异性识别HSA，实现了水相中HSA的定量检测，避免了繁琐的有机合成及有机溶剂的使用。
上述公开的用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法，具体包括如下步骤：
步骤一：以乙醇作为反应介质，加入2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶；
步骤二：向步骤一得到的溶液中加入催化剂哌啶，并将2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶在60℃～80℃下回流反应4～5小时；
步骤三：将步骤二得到的反应溶液减压蒸馏，除去溶剂乙醇得到反应粗产物；
步骤四：将步骤三得到的反应粗产物经色谱柱提纯后，通过减压蒸馏除去溶剂，最终获得本发明公开的用于检测人血清白蛋白的荧光探针DMHP。
优选的，所述新生色团DMHP的合成方法具体包括如下步骤：
(1)在单口烧瓶中加入2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1.2当量的1-乙基-4-甲基碘化吡啶，加入适量乙醇作为溶剂，加入少量哌啶作为催化剂，60℃～80℃下回流反应4～5小时；
(2)将步骤(1)得到的反应溶液减压蒸馏，除去溶剂乙醇得到反应粗产物；
(3)向反应粗产物中加入二氯甲烷溶剂，经色谱柱提纯后，通过减压蒸馏除去溶剂，获得酒红色固体，即为本发明公开的用于检测人血清白蛋白的荧光探针DMHP。
需要说明的是，本发明通过一步反应合成了用于检测HSA的新型探针DMHP，DMHP由于TICT过程的存在引起的荧光猝灭过程，构建了一种具有低背景检测HSA的荧光探针。目前报道的TICT分子中需要具备“D-π-A”的结构模型，N，N-二乙基氨基是广泛使用的富电子基团，在本发明中用作强电子供体(D)。
其中，吡啶阳离子是一种具有良好生物相容性和膜渗透性的缺电子基团，在DMHP中作为强电子受体(A)部分。此外，吡啶阳离子带有正电荷，可以进一步促进DMHP和带有负电的HSA之间的相互结合。不仅双键与苯部分充当DMHP的桥接单元，使DMHP能够自由的分子内旋转具备TICT过程，还将羟基引入二乙基苯胺骨架能够增强给电子能力，以促进DMHP与HSA响应的荧光。
具体参见说明书附图1和附图2，本发明通过核磁共振氢谱、碳谱对所生成的荧光探针DMHP进行结构表征，以表明通过上述合成方法成功生成荧光探针DMHP。
优选的，所述2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶的摩尔比为1:(0.8～1.2)。
值得说明的是，在本发明中2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶的摩尔比为1:1.2时具有最好的发光效果，故本申请公开的荧光检测方法中均选用二者的摩尔比为1:1.2。
优选的，所述利用色谱柱提纯过程中，洗脱液是由二氯甲烷和甲醇组成，且二氯甲烷和甲醇的体积比为100：4。
本发明还有一个目的，就是提供一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针在溶剂体系中选择性识别人血清白蛋白(HSA)的应用。
具体地，荧光探针DMHP在PBS缓冲液(pH＝7.4)中选择性识别和定量检测HSA的具体应用，其技术方案如下：
在DMHP荧光探针的PBS缓冲液(pH＝7.4)体系中，加入HSA的水溶液，在相应的荧光光谱中，HSA的加入会使波长在580nm处的发射峰显著增强，而其他蛋白的加入对DMHP水溶液的荧光几乎没有影响，具体参见说明书附图4。
在一些应用场景中，还包括所述荧光探针DMHP在以人血清白蛋白(HSA)为标志物的实际样品检测及细胞成像中的应用。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开了一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用，具有如下优异特性：
首先，本发明通过简便的一步反应合成了用于检测HSA的新型探针DMHP，在TICT过程的存在下，探针DMHP的固有荧光基本上可忽略不计，当DMHP进入HSA的疏水腔时TICT过程受到抑制，因此加入HSA可引发DMHP的荧光增强；
其次，该低背景检测模式具有高灵敏度，检测限低至4.8nM，适用于实际样品和生物体内痕量HSA的检测；
然后，等摩尔连续变化法证实HSA和DMHP的结合比为1：1，根据药物竞争、温度依赖性和酶水解等实验的总体分析，探针DMHP与HSA的特异性响应与DMHP和HSA疏水腔的相互作用有关；
最后，本发明公开的传感检测分析成功地在实际样品中进行对HSA的检测，并且在活细胞成像中相当灵敏，进一步证明了其不受复杂环境的干扰的良好性能。
综上所述，本发明公开合成的荧光探针DMHP能够有效的特异性识别人血清白蛋白(HSA)，并对HSA具有很高的灵敏度；此外，本发明还提供了一种新的人血清白蛋白(HSA)的检测途径，具有制备简便和良好的生物相容性等优点，这对于临床诊断和生物领域等方面具有市场应用与推广价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1附图为本发明荧光探针DMHP在氘代DMSO中的核磁共振氢谱。
图2附图为本发明荧光探针DMHP在氘代DMSO中的核磁共振碳谱。
图3附图为本发明荧光探针DMHP与不同浓度HSA的荧光光谱图。
图4附图为本发明荧光探针中其他分析物的荧光光谱图(A)，以及含有荧光探针DMHP、HSA和其他分析物的荧光光谱图(B)。
图5附图为本发明荧光探针DMHP与HSA等摩尔连续变化实验的580nm处荧光对[HSA]/([DMHP]+[HSA])作图。
图6附图为本发明荧光探针DMHP和HSA溶液与药物相互作用的荧光光谱。
图7附图为温度破坏HSA(A)与酶水解HSA(B)后荧光探针DMHP的荧光光谱。
图8附图为本发明荧光探针DMHP实际血清样品中HSA的测定表。
图9附图为本发明分别用荧光探针DMHP处理后，HeLa细胞中HSA的共聚焦荧光图像。
图10附图为本发明荧光探针DMHP在Hela细胞的细胞毒性。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例公开了一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针及其合成方法与应用，通过一步反应合成的荧光探针DMHP能够特异性识别HSA，实现了水相中HSA的定量检测，避免了繁琐的有机合成及有机溶剂的使用；并且合成的荧光探针DMHP在灵敏度、抗干扰能力和成像方面具有良好的稳定性和广泛的应用前景。
为更好地理解本发明，下面通过以下实施例对本发明作进一步具体的阐述，但不可理解为对本发明的限定，对于本领域的技术人员根据上述发明内容所作的一些非本质的改进与调整，也视为落在本发明的保护范围内。
本发明公开了一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针，所述荧光探针是通过哌啶作为催化剂，促进2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶之间的缩合反应，生成的一种带有羟基的生色团(E)-4-(4-(二乙基氨基)-2-羟基苯乙烯基)-1-乙基吡啶-1-碘化物(DMHP)；
具体地，所述荧光探针的结构式为：
Figure GDA0003503080650000071
本发明还公开了一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法，具体包括如下步骤：
以乙醇为反应介质，2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶在60℃～80℃下回流反应4～5小时，减压蒸馏，除去溶剂乙醇得到反应粗产物；向反应粗产物中加入二氯甲烷溶剂，经色谱柱提纯后，通过减压蒸馏除去溶剂，得到目标纯产物，即为本发明公开合成的荧光探针DMHP。
为了进一步优化上述技术方案，2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶的摩尔比为1:(0.8～1.2)。
为了进一步优化上述技术方案，利用色谱柱提纯过程中，洗脱液的组成为二氯甲烷：甲醇＝100：4(体积比)。
下面，将结合具体实施例，对本发明的技术方案进行进一步的说明。
实施例1
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法，具体包括如下步骤：
以乙醇为反应介质，2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶按照1:0.8的摩尔比在60℃下回流反应4小时，减压蒸馏，除去溶剂乙醇得到反应粗产物；向反应粗产物中加入二氯甲烷溶剂，经色谱柱提纯后，通过减压蒸馏除去溶剂，得到目标纯产物，即为本发明公开合成的荧光探针DMHP。
实施例2
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法：
本实施方式与实施例1不同的是：将实施例1中的2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶按照1:0.8的摩尔比替换为2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶按照1:1.0的摩尔比，其余反应物及实验参数参见实施例1。
实施例3
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法：
本实施方式与实施例1不同的是：将实施例1中的2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶按照1:0.8的摩尔比替换为2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶按照1:1.2的摩尔比，其余反应物及实验参数参见实施例1。
实施例4
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法：
本实施方式与实施例1不同的是：将实施例1中的在60℃下回流反应4小时替换为在80℃下回流反应4小时，其余反应物及实验参数参见实施例1。
实施例5
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法：
本实施方式与实施例1不同的是：将实施例1中的在60℃下回流反应4小时替换为在60℃下回流反应5小时，其余反应物及实验参数参见实施例1。
实施例6
一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法：
本实施方式与实施例1不同的是：将实施例1中的在60℃下回流反应4小时替换为在80℃下回流反应5小时，其余反应物及实验参数参见实施例1。
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。
本发明内容不仅限于上述各实施例的内容，其中一个或几个实施例的组合同样也可以实现本发明目的。
为了进一步验证本发明的优异效果，发明人还进行了如下实验：
实验1：探针DMHP的合成及结构表征
1、DMHP的合成
将2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛(1mmol)与1-乙基-4-甲基碘化吡啶(1.2mmol)混合于乙醇(30mL)中，在80℃下回流反应4～5小时；反应结束后减压蒸馏除去溶剂乙醇，得到反应粗产物；向反应粗产物中加入二氯甲烷溶解，经色谱柱提纯(洗脱液组成为二氯甲烷：甲醇＝100：4)后，通过减压蒸馏除去溶剂，得到目标纯产物-荧光探针DMHP。
2、测试分析
图1为发光物质DMHP的1HNMR图谱，具体谱峰值为：
1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.11(s,1H),8.67(d,J＝6.9Hz,2H),7.97(dd,J＝11.6,6.5Hz,3H),7.47(d,J＝9.0Hz,1H),7.14(d,J＝16.0Hz,1H),6.32(dd,J＝9.0,2.4Hz,1H),6.20(d,J＝2.4Hz,1H),4.41(dd,J＝14.6,7.3Hz,2H),3.39–3.36(m,4H),1.49(t,J＝7.3Hz,3H),1.13(t,J＝7.0Hz,6H).
图2为发光物质DMHP的13C NMR图谱，具体谱峰值为:
13C NMR(151MHz,DMSO-d6)δ159.19,154.23,150.91,142.72,137.95,130.83,121.62,115.69,104.50,97.07,54.16,43.89,16.06,12.51.
通过本发明公开的合成方法制得的荧光物质DMHP的H谱图和C谱图得知，附图中的谱峰值与DMHP一一对应，即可证明荧光探针DMHP合成成功。
实验2：荧光探针DMHP在溶剂体系中检测HSA的具体应用
1、测试实验
称取2.1mg DMHP溶解于2mL DMSO中(5mM)，在一系列5mL比色管中分别加入2mL的PBS(pH＝7.4)溶液，再分别加入2μL溶液，再依次向每支比色管中分别加入HSA、三磷酸腺苷(ATP)、葡萄糖(Glu)、谷胱甘肽(GSH)、尿素(Urea)、端粒酶(Telomerase)、无机焦磷酸酶(IPPase)、蛋白激酶(PKA)、溶菌酶(LZM)、凝血酶(TB)、热敏性碱性磷酸酶(TAP)的水溶液(1×10-2mol·L-1)5μL，此时分析物浓度与荧光染料浓度比为1：5，混匀后测试其荧光光谱。参见附图4(A)。
对比的，在含有5.0μM DMHP和25μΜHSA的水溶液中，依次向每支比色管中分别加入三磷酸腺苷(ATP)、葡萄糖(Glu)、谷胱甘肽(GSH)、尿素(Urea)、端粒酶(Telomerase)、无机焦磷酸酶(IPPase)、蛋白激酶(PKA)、溶菌酶(LZM)、凝血酶(TB)、热敏性碱性磷酸酶(TAP)的水溶液(1×10-2mol·L-1)5μL，混匀后，测试其荧光光谱，参见附图4(B)。
2、测试分析
在荧光光谱中，HSA的加入使DMHP的纯水体系在580nm处的发射峰明显增强，而其他蛋白的加入对DMHP水溶液的荧光没有明显的影响。进一步的对比试验测定显示出干扰物的共存对DMHP对HSA的响应几乎没有影响。
因此，本发明制备的DMHP可实现在纯水体系中选择性识别人血清白蛋白。
实验3：荧光探针DMHP对HSA定量检测的最低检测限的测定
在25℃时，利用荧光发射光谱，根据HSA对DMHP溶液的滴定实验，通过3.29σ/k计算，得到DMHP对HSA的最低检测限达4.8×10-9mol·L-1，说明DMHP对HSA的检测灵敏度很高，表明该探针在纯水溶液中高效检测人血清白蛋白方面有潜在的应用价值。
实验4：等摩尔连续变化实验确定荧光探针DMHP与HSA的最佳结合比
1、测试实验
在PBS缓冲液(pH＝7.4)体系中，固定DMHP与HSA的总浓度，改变DMHP与HSA的比例，分别为0：10、1：9、2：8、3：7、4：6、5：5、6：4、7：3、8：2、9：1、10：0，测定其荧光光谱，具体参见附图5。
2、测试分析
取580nm处荧光强度的增加作为HSA的摩尔分数的函数，可以得出DMHP和HSA的结合比为1：1。
实验5：药物竞争实验
1、测试实验
在2mL PBS缓冲液(pH＝7.4)中，加入5.0μM DMHP和25μΜHSA，分别加入不同浓度的布洛芬和华法林溶液，测定其荧光光谱，参见附图6。
2、测试分析
DMHP的荧光降低只能由华法林引发，说明DMHP与HSA的位点1结合。而添加过量的华法林之后，药物竞争效果不明显，并且500μM(～100ep)华法林能猝灭DMHP 65％的荧光，表明DMHP和HSA在位点1具有强结合能力。
实验6：温度破坏和酶水解HSA以证明荧光探针DMHP与HSA相结合
1、测定实验
(1)温度破坏HSA实验
在2mL PBS缓冲液(pH＝7.4)中，加入25μΜHSA，在不同温度(40、50、60、70、80、90、100℃)下，孵育30min，加入5.0μM DMHP，分别测定其荧光光谱，。
(2)酶水解HSA实验
在2mL PBS缓冲液(pH＝7.4)中，加入25μΜHSA，加入不同浓度胰蛋白酶(0、0.05、0.1、0.15、0.4、0.5、1、2.5mg/mL)，孵育30min，加入5.0μM DMHP，分别测定其荧光光谱。
2、测试分析
温度升高破坏蛋白质的二级结构，保留一级结构，使HSA的疏水腔暴露，以致DMHP的荧光增强，参见附图7(A)。至于用胰蛋白酶处理的实验，荧光光谱显示随着酶浓度增加荧光强度逐渐降低。在此过程中，胰蛋白酶切割HSA一级结构并破坏DMHP的结合环境，包括特异性结合位点，恢复DMHP的TICT过程，从而削弱了发射强度，参见附图7(B)。
实验7：荧光探针DMHP在实际血清样本和活细胞中检测HSA的具体应用
(1)荧光探针DMHP在实际血清样本中检测HSA的具体应用
首先，将所提出的传感分析方法应用于人血清中的HSA含量的定量检测，测试结果如图8所示。为了适应该系统的线性，对这些血清样品进行了2000倍稀释，表明只需少量血清即可满足检测需要。根据检测报告，除1号样本外，其他血清样本的HSA水平均在正常范围内，而1号样本中HSA含量高于正常范围，这可能是肝病患者的血清样本。另外，检测结果与临床常用的HSA检测方法(BCG法)相比，其检测结果的比率近似为1。上述结果表明，探针DMHP可适用于实际样品的定量分析。
(2)荧光探针DMHP在活细胞中检测HSA的具体应用
首先，取三个培养皿，1号皿为不含胎牛血清的培养基预孵育24小时的HeLa细胞作为对照样品，其他两个皿正常培养，分别用5μM DMHP处理15分钟后，3号皿加入500μM华法林孵育20min，用PBS缓冲液洗涤这些细胞,如图9所示。
在20分钟内在红色发射窗口捕获到强烈的荧光信号，说明探针DMHP在细胞成像中对于血清白蛋白具有快速和高灵敏的响应。相反，血清的缺乏导致荧光响应强度显着下降。证实图9中的主要响应来自HSA的感知事件。此外，在加入用于竞争DMHP的华法林后，红色通道中的细胞荧光强度在观察期间显示出明显的降低，这说明HSA的位点1处由华法林替代了DMHP。这验证了DMHP也适用于细胞水平，具有很大的潜力。
实验8：荧光探针DMHP在Hela细胞的细胞毒性实验
将HeLa细胞接种于96孔板中，孵育24h，分别加入2、5、10、20、30μM探针分别孵育1、2、3、4、5、6小时后，用磷酸盐缓冲液冲洗细胞，采用CCK-8法检测细胞毒性。
附图10显示在在实验期间细胞存活率保持在80％以上，甚至对于用30mΜDMHP处理6小时的那些细胞也是如此。这证明了DMHP具有相对较低的细胞毒性，该结果显示了荧光探针DMHP对活细胞中HSA的生物成像研究具有良好的生物相容性。
综上所述，本发明通过一步法有机合成制得用于检测HSA的探针DMHP，其具有羟基以促进光学性质。该荧光探针DMHP在水性介质由于TICT过程猝灭其初始荧光，使其具有低的光学背景，将其与HSA结合后，通过限制TICT过程，使其荧光增强。并且荧光探针DMHP对HSA的检测具有4.8nM的低检测限，具有较高选择性。以及通过等摩尔变化法，药物竞争，温度破坏和酶水解的人工破坏HSA等实验，证明荧光探针DMHP与HSA之间的强结合是与特异性位点相关的。同时本发明也验证该荧光探针DMHP用于实际血清检测的可行性，这意味着该发明在临床诊断领域具有很大的潜力。此外，细胞成像实验显示探针DMHP有望在细胞水平上监测HSA生产过程。
对所公开的实施例及实验例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (5)

1.一种用于检测人血清白蛋白的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针是通过哌啶作为催化剂，促进2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶之间的缩合反应，生成的一种带有羟基的生色团(E)-4-(4-(二乙基氨基)-2-羟基苯乙烯基)-1-乙基吡啶-1-碘化物；
具体地，所述荧光探针的结构式为：
Figure FDA0003503080640000011
2.如权利要求1所述的用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：
步骤一：以乙醇作为反应介质，加入2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶；
步骤二：向步骤一得到的溶液中加入催化剂哌啶，并将2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛和1-乙基-4-甲基碘化吡啶在60℃～80℃下回流反应4～5小时；
步骤三：将步骤二得到的反应溶液减压蒸馏，除去溶剂乙醇得到反应粗产物；
步骤四：将步骤三得到的反应粗产物经色谱柱提纯后，通过减压蒸馏除去溶剂，最终获得所述用于检测人血清白蛋白的荧光探针。
3.根据权利要求2所述的用于检测人血清白蛋白的荧光探针的合成方法，其特征在于，所述2-羟基-4-二乙基氨基苯甲醛与1-乙基-4-甲基碘化吡啶的摩尔比为1:(0.8～1.2)。
4.如权利要求1所述的用于检测人血清白蛋白的荧光探针在溶剂体系中选择性识别人血清白蛋白的应用。
5.根据权利要求4所述的用于检测人血清白蛋白的荧光探针的应用，其特征在于，还包括所述荧光探针在以人血清白蛋白为标志物的检测及细胞成像中的应用。
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