CN110172021B

CN110172021B - 一种(r)-邻氯扁桃酸的分离提取方法

Info

Publication number: CN110172021B
Application number: CN201811415397.5A
Authority: CN
Inventors: 赵涛涛; 汪兆谱; 张伟; 王成; 韩瑞; 张琦; 谢国范; 吴鸣
Original assignee: WUHAN WUYAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: WUHAN WUYAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2018-11-26
Filing date: 2018-11-26
Publication date: 2022-04-22
Anticipated expiration: 2038-11-26
Also published as: CN110172021A

Abstract

本发明涉及到一种手性医药中间体的提取方法，具体讲，涉及一种(R)‑邻氯扁桃酸的分离提取方法，至少包括以下步骤：将强碱性阴离子树脂进行预处理，预处理包括依次进行碱洗和酸洗的步骤；强碱性阴离子树脂优选季胺盐强碱性阴离子树脂；采用处理后的强碱性阴离子树脂对(R)‑邻氯扁桃酸的待处理液进行吸附；采用洗脱剂进行洗脱，得到洗脱液，洗脱液经萃取、浓缩后得到(R)‑邻氯扁桃酸。本发明的分离提取方法分离效果好，收率高，并且使用的强碱性阴离子树脂使用寿命长久，分离的水相体系可继续为下一次的生物催化提供反应体系，降低了生产成本并减少了废水的排放。

Description

一种(R)-邻氯扁桃酸的分离提取方法

技术领域

本发明涉及到一种手性医药中间体的提取方法，具体讲，涉及一种(R)-邻氯扁桃酸的分离提取方法。

背景技术

手性药物的合成开发技术已经成为当今社会制药领域的研究热点和制高点，手性药物的开发与相关技术的提升也极大促进了相关药物的提取方法的探索。

邻氯扁桃酸，又名α-羟基邻氯苯乙酸，分子式为C₈H₇O₃Cl，其相对分子质量为186.5，具有R型和S型两种对映体构型，在医药生产，不对称合成，光学拆分等多个领域都有广泛的应用，而其中的(R)-邻氯扁桃酸可以合成新型的安全高效的抗血小板聚集药物氯吡格雷。氯吡格雷化学名为(+)-(s)-α-(2-氯苯基)-6,7-二氢噻吩并[3,2-c]吡啶-5(4H)-乙酸甲酯，是一种血小板聚集抑制剂，临床上用于预防和治疗因血小板高聚集状态引起的心脑及其他动脉的循环障碍疾病，抑制动脉粥样硬化的形成，与其他几种应用广发的血小板抑制剂(阿司匹林，噻氯匹定等)相比较，其作用强度与耐受性均高于噻氯匹定，而与阿司匹林的总体耐受性相当，副作用也较其他的几种抑制剂更小，更适宜和阿司匹林联合使用。氯吡格雷由法国的赛诺菲与美国的施宝贵与1996年研发，与次年获得FDA批准，至1998年三月正式在美国上市，其商品名为“波立维”，据2008年的有效数据统计，氯吡格雷的销售额为94亿美元，单药销售收益排名全球所有药品的第二位，随着氯吡格雷的成功，其需求量也断提升，的作为硫酸氢氯吡格雷的一个重要的中间体，随着氯吡格雷在中国仿制药领域的逐步扩大，邻氯扁桃酸的需求也在扩大，不仅如此，邻氯扁桃酸其他用途的进一步开发，其市场需求量也日益扩大，且市场价格高昂，市场需求无法得到满足，因此，对邻氯扁桃酸进一步研究开发将具有良好的经济效益和社会效益，特别是提取光学纯的邻氯扁桃酸的一系列技术就显得格外关键。

离子交换法是利用特定的有机高分子树脂直接分离有机物，具有设备简单，操作容易，工艺流程短，选择性高，树脂容易再生的优点，利用离子交换树脂对邻氯扁桃酸进行吸附分离，可以从催化反应体系中直接提取邻氯扁桃酸，其主要依据是离子交换树脂对扁桃酸和杂质的亲和力的不同，离子交换树脂对邻氯扁桃酸的亲和力取决于扁桃酸的理化性质，树脂的功能团特点以及溶液中的其他杂质和离子的影响，由于邻氯扁桃酸为弱酸性有机酸，根据离子交换理论，应该使用碱性树脂对其分离提取。离子交换树脂可分为阳离子交换树脂、阴离子交换树脂和两性离子交换树脂。它们原理如下：

阳离子交换树脂原理：

(1)强酸性阳离子树脂

这类树脂含有大量的强酸性基团，如磺酸基-SO₃H，容易在溶液中离解出H⁺，故呈强酸性。树脂离解后，本体所含的负电基团，如SO₃ ^-，能吸附结合溶液中的其他阳离子。这两个反应使树脂中的H⁺与溶液中的阳离子互相交换。强酸性树脂的离解能力很强，在酸性或碱性溶液中均能离解和产生离子交换作用。

树脂在使用一段时间后，要进行再生处理，即用化学药品使离子交换反应以相反方向进行，使树脂的官能基团回复原来状态，以供再次使用。如上述的阳离子树脂是用强酸进行再生处理，此时树脂放出被吸附的阳离子，再与H⁺结合而恢复原来的组成。

(2)弱酸性阳离子树脂

这类树脂含弱酸性基团，如羧基-COOH，能在水中离解出H⁺而呈酸性。树脂离解后余下的负电基团，如R-COO^-(R为碳氢基团)，能与溶液中的其他阳离子吸附结合，从而产生阳离子交换作用。这种树脂的酸性即离解性较弱，在低pH下难以离解和进行离子交换，只能在碱性、中性或微酸性溶液中(如pH 5～14)起作用。这类树脂亦是用酸进行再生(比强酸性树脂较易再生)。

阴离子交换树脂原理：

(1)强碱性阴离子树脂

这类树脂含有强碱性基团，如季胺基(亦称四级胺基)-NR₃OH(R为碳氢基团)，能在水中离解出OH^-而呈强碱性。这种树脂的正电基团能与溶液中的阴离子吸附结合，从而产生阴离子交换作用。这种树脂的离解性很强，在不同pH下都能正常工作。它用强碱(如NaOH)进行再生。

(2)弱碱性阴离子树脂

这类树脂含有弱碱性基团，如伯胺基(亦称一级胺基)-NH₂、仲胺基(二级胺基)-NHR、或叔胺基(三级胺基)-NR₂，它们在水中能离解出OH^－而呈弱碱性。这种树脂的正电基团能与溶液中的阴离子吸附结合，从而产生阴离子交换作用。这种树脂在多数情况下是将溶液中的整个其他酸分子吸附。它只能在中性或酸性条件(如pH 1～9)下工作。可用Na₂CO₃、NH₄OH对此类树脂进行再生。

(3)两性离子交换树脂原理

两性树脂是一类在同一树脂颗粒内存在着阳、阴两种基团的离子交换树脂。这类树脂中的两种基团彼此接近，可以相互结合，遇到溶液中的离子又可同时与阳、阴两种离子进行离子交换。与普通离子交换树脂相比，两性树脂在反应失效后，不需要用酸、碱等再生剂，只需用大量的水淋洗，即可使树脂得到再生，恢复原有的交换能力。

鉴于此，本发明提出一种利用离子交换法分离提取的(R)-邻氯扁桃酸的方法。

发明内容

本发明的发明目的在于提出一种(R)-邻氯扁桃酸的分离提取方法。

为了完成本发明的目的，采用的技术方案为：

本发明提出一种(R)-邻氯扁桃酸的分离提取方法，至少包括以下步骤：

(1)将强碱性阴离子树脂进行预处理，所述预处理包括依次进行碱洗和酸洗的步骤；所述强碱性阴离子树脂优选季胺盐强碱性阴离子树脂；

(2)采用步骤(1)处理后的强碱性阴离子树脂对(R)-邻氯扁桃酸的待处理液进行吸附；

(3)采用洗脱剂对步骤(2)的强碱性阴离子树脂进行洗脱，得到洗脱液，所述洗脱液经萃取、浓缩后得到所述(R)-邻氯扁桃酸。

可选的，在步骤(1)中，所述碱洗的步骤包括：先用浓度为0.5～5mol/L的碱液浸泡强碱性阴离子树脂10～60min，然后用所述碱液以1.0～5.0ml/min的速度进行洗涤；

优选的，浸泡时所述碱液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；

更优选的，所述碱选自一元碱。

可选的，在步骤(1)中，所述酸洗的步骤包括：先用浓度为0.5～5mol/L的酸液浸泡强碱性阴离子树脂15～30min，然后用所述酸液以1.0～5.0ml/min的速度进行洗涤；

优选的，浸泡时所述酸液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；

更优选的，所述酸选自一元酸。

可选的，在步骤(1)中，所述酸洗后还包括水洗至中性的步骤：优选的，所述碱洗前还包括水洗去机械杂质的步骤；

更优选的，所述水选自纯化水。

可选的，在步骤(2)中，所述吸附前还包括浸润的步骤，所述浸润的步骤包括：向所述强碱性阴离子树脂中加入缓冲液浸润10～30min，所述缓冲液的体积为强碱性阴离子树脂2～5倍；所述缓冲液的pH值优选为7～9。

可选的，将洗脱后的强碱性阴离子树脂水洗至中性后进入步骤(2)循环使用，当循环使用15～20次后，对所述强碱性阴离子树脂进行再生处理；所述再生处理包括以下方式中的至少一种：

方式1：用混合碱液先浸泡10～60min，再以1.0～5.0ml/min的速度洗涤；所述混合碱液中含有浓度为2～5mol/L的一元碱和质量百分比浓度为10％～30％的氯化钠；优选的，所述混合碱液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；

方式2：用混合酸液先浸泡10～60min，再以1.0～5.0ml/min的速度洗涤；所述混合酸液中含有2～5mol/L的一元酸和体积百分比浓度为10％～50％低级醇；优选的，所述低级醇选自碳原子为1～6的醇；更优选的，所述混合酸液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；

进一步优选的，所述再生处理还包括水洗至中性的步骤，所述水优选纯化水。

可选的，在步骤(2)中，所述吸附的温度为10～60℃；

在步骤(3)中，所述洗脱的温度为10～60℃；优选的，所述萃取采用的有机溶剂选自酯类有机溶剂、醚类有机溶剂、醇类有机溶剂中的至少一种；更优选碳原子数为4～8的酯类有机溶剂、碳原子数为2～6的醚类有机溶剂、碳原子数为1～8的醇类有机溶剂；更优选乙酸乙酯、乙醚、乙醇中的至少一种。

可选的，在步骤(2)中，所述吸附的流速为0.1～10ml/min；在步骤(3)中，所述洗脱的流速为0.1～10ml/min。

可选的，所述待提取液为水相反应液或包含与水互溶的有机相的水相反应液；

优选的，所述待提取液包括化学合成、生物催化合成、拆分合成所得的反应液；

更优选的，所述待提取液的pH值为2～8。

可选的，当所述待提取液为生物催化合成反应液时，步骤(2)吸附后的反应液作为生物催化反应体系的反应液循环使用。

本发明的技术方案至少具有以下有益的效果：

本发明的分离提取方法分离效果好，设备简单，操作简便，得到的产品收率较高；并且使用的强碱性阴离子树脂使用寿命长久(再生处理后可继续使用)，分离的水相体系可继续为下一次的生物催化提供反应体系，大大降低了生产成本以及减少了废水的排放。

下面结合具体实施例，进一步阐述本申请。应理解，这些实施例仅用于说明本申请而不用于限制本申请的范围。

具体实施方式

本发明实施例提出一种(R)-邻氯扁桃酸的分离提取方法，本发明实施例选择对(R)-邻氯扁桃酸亲和力较强、吸附能力较强的强碱性阴离子树脂对(R)-邻氯扁桃酸进行吸附，挂柱吸附后使得发酵液中的蛋白质分子和其他的无机离子(缓冲液体系)随着液体流出，强碱性阴离子树脂中只存在(R)-邻氯扁桃酸，再使用洗脱剂对强碱性阴离子树脂进行解吸操作，使得产物(R)-邻氯扁桃酸随着洗脱液一同被洗脱下来，最后进行有机相萃取、减压浓缩，干燥即得到(R)-邻氯扁桃酸。本发明实施例的方法具有分离效果好、产品收率较高的技术优势，并且使用的强碱性阴离子以及体系的反应液均可实现循环利用，大大降低了生产成本并减少了废水的排放。

具体的，本发明实施例的分离提取方法包括以下步骤：

(1)将强碱性阴离子树脂进行预处理，预处理包括水洗去机械杂质、碱洗、酸洗和水洗至中性的步骤，具体为：

碱洗的步骤为：先用浓度为0.5～5mol/L的碱液浸泡强碱性阴离子树脂10～60min，然后用碱液以1.0～5.0ml/min的速度进行洗涤至液体全部流下；碱选自一元碱，具体的，碱液选自NaOH溶液、KOH溶液；

如果所用碱液浓度过低，则树脂未能全部转化为OH型，若过高，则会造成成本的增加；同样地，若处理时间过短，则也会造成树脂未能全部转化，时间过久，则会增加工艺的时间，不适合工业生产。

酸洗的步骤包括：先用浓度为0.5～5mol/L的酸液浸泡强碱性阴离子树脂15～30min，然后用酸液以1.0～5.0ml/min的速度进行洗涤至液体全部流下；酸选自一元酸，具体的，酸液选自稀盐酸；

如果所用酸液浓度过低，则树脂未能全部转化为Cl型，若过高，则会造成成本的增加；同样地，若处理时间过短，则也会造成树脂未能全部转化，时间过久，则会增加工艺的时间，不适合工业生产。

(2)采用步骤(1)处理后的强碱性阴离子树脂采用动态吸附的方式对(R)-邻氯扁桃酸的待处理液进行吸附；

(3)采用洗脱剂对步骤(2)的强碱性阴离子树脂进行洗脱，得到洗脱液，洗脱液经萃取、浓缩后得到(R)-邻氯扁桃酸的粗品，最后对粗品精制后得到(R)-邻氯扁桃酸。

进一步可选的，强碱性阴离子树脂选自季胺盐强碱性阴离子树脂，并优选HZ-202型树脂。

可选的，浸泡时碱液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1，浸泡时酸液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1。碱液或酸液体积的单位为L，树脂质量的单位为Kg；或者碱液或酸液体积的单位为mL时，树脂质量的单位为g。如果所用碱液体积过小，则树脂未能全部转化为OH型，若过大，则会造成成本的增加。如果所用酸液体积过小，则树脂未能全部转化为Cl型，若过大，则会造成成本的增加。

可选的，水洗的步骤选用纯化水进行洗涤。

可选的，在步骤(2)中，吸附前还包括浸润的步骤，浸润的步骤包括：向强碱性阴离子树脂中加入缓冲液浸润10～30min，缓冲液的体积为强碱性阴离子树脂2～5倍。

进一步可选的，缓冲液的pH值为7～9。

进一步可选的，缓冲液与待处理液中缓冲液的pH值一致。当待提取液为生物催化合成反应液时，缓冲液可采用生物催化合成的缓冲液，例如KH₂PO₄/K₂HPO₄缓冲液、NaH₂PO₄/Na₂HPO₄。

可选的，将洗脱后的强碱性阴离子树脂水洗至中性后进入步骤(2)循环使用，从而可大大降低了生产成本。当循环使用15～20次后，强碱性离子交换树脂的吸附效率发生显著下降时，则应对树脂进行再生处理，再生处理包括以下方式中的至少一种：

方式1：用混合碱液先浸泡10～60min，再以1.0～5.0ml/min的速度洗涤至液体全部流下；混合碱液中含有浓度为2～5mol/L的一元碱和质量百分比浓度为10％～30％的氯化钠；优选的，混合碱液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；混合碱液体积的单位为L，树脂质量的单位为Kg，或者混合碱液体积的单位为mL时，树脂质量的单位为g。

方式2：用混合酸液先浸泡10～60min，再以1.0～5.0ml/min的速度洗涤至液体全部流下；混合酸液中含有2～5mol/L的一元酸和体积百分比浓度为10％～50％低级醇；优选的，低级醇选自碳原子为1～6的醇；更优选的，混合酸液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；混合酸液体积的单位为L时，树脂质量的单位为Kg；或者混合酸液体积的单位为mL时，树脂质量的单位为g。

进一步优选的，再生处理还包括水洗至中性的步骤，水优选为纯化水。

在再生处理中，可使用方式1和方式2中的任意一种，也可先采用方式1处理，再采用方式2处理。处理两次相当于再生了两次，洗去了树脂中残留的有机物杂质，更有利于提高树脂的性能。

可选的，在步骤(2)中，吸附的温度为10～60℃，优选15～50℃。

可选的，在步骤(3)中，洗脱的温度为10～60℃，优选15～50℃。

可选的，萃取采用的有机溶剂选自酯类有机溶剂、醚类有机溶剂、醇类有机溶剂中的至少一种；优选碳原子数为4～8的酯类有机溶剂、碳原子数为2～6的醚类有机溶剂、碳原子数为1～8的醇类有机溶剂；更优选乙酸乙酯、乙醚、乙醇中的至少一种。

可选的，在步骤(2)中，吸附的流速为0.1～10ml/min，优选为1～9ml/min，更优选2～8ml/min。

可选的，在步骤(3)中，洗脱的流速为0.1～10ml/min，优选为1～9ml/min，更优选2～8ml/min。

可选的，待提取液为水相反应液或包含与水互溶的有机相的水相反应液；具体的，待提取液可选自化学合成、生物催化合成、拆分合成所得的反应液，并不限于此。

优选的，待提取液可选自生物催化合成所得的反应液。当待提取液为生物催化合成反应液时，步骤(2)吸附后的反应液可作为生物催化反应体系的反应液循环使用，从而大大减少了废水的排放。

可选的，强碱性阴离子树脂的pH应与所使用树脂吸附(R)-邻氯扁桃酸最适宜的pH一致，强碱性阴离子树脂吸附(R)-邻氯扁桃酸最适宜的pH为2～8。因此，将待吸附液配制成pH为2～8的溶液再对其吸附可进一步提高吸附效率。

可选的，在步骤(3)中，浓缩的方式可为减压浓缩，具体条件为：45～55℃、0.09MPa；优选50℃、0.09MPa。

可选的，待提取液中(R)-邻氯扁桃酸的最大量应不大于强碱性阴离子树脂的最小交换容量，即所需的树脂应为过量。

可选的，待提取液中含有(R)-邻氯扁桃酸、(S)-邻氯扁桃酸、(R,S)-邻氯扁桃酸中的至少一种。

本发明实施例的分离提取方法的具体的操作步骤如下：

1、强碱性阴离子树脂进行预处理：取一定量的强碱性阴离子树脂(含水)于交换柱中，用纯化水洗去机械杂质，加入0.5～5M NaOH溶液浸泡15min，NaOH溶液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1，用0.5～5M NaOH溶液以1.0～5.0ml/min洗涤，再加入0.5～5M稀盐酸浸泡，稀盐酸液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1，用0.5～5M稀盐酸以1.0～5.0ml/min洗涤，最后用纯化水洗至中性待用。

2、吸附：取2～5倍强碱性阴离子树脂体积的缓冲液(pH＝7～9)加入强碱性阴离子树脂中浸泡至树脂的pH为7～8后将缓冲液流下，再将待处理液加入至强碱性阴离子树脂中，采用静态吸附或动态吸附的方式对产物(R)-邻氯扁桃酸进行提取，吸附的温度为10～60℃，静态吸附的时间为2～6小时，动态吸附的时间为10～20min；其中，静态吸附可以得到树脂的最大吸附量，测量最为准确，但是操作难度大，不能反复对树脂进行操作，不适合工业化生产；动态吸附增加了实验的可操作性，可重复操作，但是吸附的量会比静态吸附少。

吸附完全后，将吸附后的反应液以0.1～10ml/min从交换柱中流下；吸附后的反应液作为生物催化反应体系的反应液循环使用；

3、树脂解吸洗脱：用1M稀盐酸做洗脱剂，对树脂进行洗脱，洗脱的温度为10～60℃，用5倍强碱性阴离子树脂质量体积的洗脱液以0.1～10ml/min进行洗脱解吸，使产物(R)-邻氯扁桃酸被洗脱液解吸后进入洗脱液中；

4、对洗脱液用0.3～0.倍乙酸乙酯萃取，萃取后的有机相减压浓缩(50～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。

采用HPLC检测，即对单一构型(光学纯度)进行液相检测，具体检测条件为：Ultimate Cellu-J HPLC色谱柱，手性柱(4.6nm×250nm,5μm)(Welch Materials,Inc,USA)，流动相：正己烷：乙醇：甲醇：三氟乙酸＝90：8：2：0.1，检测波长：254nm，流速：0.8ml/min，并可通过对映体过量值(e.e.)来表示其提取的(R)-邻氯扁桃酸的光学纯度(e.e＝([R]-[S])/([R]+[S])×100％)

下面通过具体实施例和对比例进一步说明本发明实施例的内容。

实施例1

pH＝7.58，(R)-邻氯扁桃酸含量为143mmol/L的水相固定菌催化反应液为待处理液，采用HZ-202型树脂。

1、在25℃、220rpm摇床条件下预处理：先用1M的NaOH溶液浸润洗涤，NaOH溶液的体积(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为3：1，再用1M稀盐酸浸润洗涤，稀盐酸的体积(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为3：1，均浸润15min，再以2ml/min的速度洗涤；

2、用pH＝8的缓冲液浸泡处理后的树脂将此反应液采用静态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱一定时间(2～6h)后，将液体与树脂分离；

3、用5倍树脂质量体积的1M稀盐酸，以2.5ml/min的流速对该吸附后的树脂进行洗脱；

4、用0.3倍洗脱液体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相减压蒸馏(50～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。实验结果如表1所示。

实施例2

pH＝4.3，(R)-邻氯扁桃酸含量为140mmol/L的水相固定菌催化反应液为待处理液，采用HZ-202型树脂。

1、常温下预处理：先用1M的NaOH溶液浸润洗涤，NaOH溶液的体积(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为3：1，再用1M稀盐酸浸润洗涤，稀盐酸的体积(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为3：1，均浸润15min，以2ml/min的速度洗涤；

2、用pH＝8的缓冲液浸泡处理后的树脂将此反应液采用动态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱15min后，以2.5ml/min的速度将液体与树脂分离；

4、收集到的对洗脱液用0.3倍洗脱液体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相减压蒸馏(50～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。实验结果如表1所示。

实施例3

pH＝7.2，(R)-邻氯扁桃酸含量为156mmol/L的水相游离菌催化反应液为待处理液，采用HZ 202型树脂。

1、常温在交换柱中，采用循环使用1次后的树脂进行吸附，采用动态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱15min后以2.5ml/min的速度将液体与树脂分离；

2、用5倍树脂质量体积的1M稀盐酸，以2.5ml/min的流速对该吸附后的树脂进行洗脱；

3、收集到的对解吸液用0.3倍洗脱液体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相减压蒸馏(50℃～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。实验结果如表1所示。

实施例4

pH＝3.9，(R)-邻氯扁桃酸含量为205mmol/L的水相固定菌催化反应液为待处理液，采用HZ 202型树脂。

1、常温在交换柱中，采用循环使用2次后的树脂进行吸附，采用动态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱15min后，以2.5ml/min的速度将液体与树脂分离；

3、收集到的对洗脱液用0.3倍洗脱液体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相减压蒸馏(50℃～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。实验结果如表1所示。

实施例5

pH＝5.4，(R)-邻氯扁桃酸含量为143mmol/L的水相游离菌催化反应液为待处理液，采用HZ-202型树脂。

1、常温在交换柱中，采用循环使用3次后的树脂进行吸附，采用动态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱15min后，以2.5ml/min的速度将液体与树脂分离；

2、用8倍树脂质量体积的1M稀盐酸，以2.5ml/min的流速对该吸附后的树脂进行洗脱；

3、收集到的对解吸液用0.3倍解吸液体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相减压蒸馏(50℃～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。实验结果如表1所示。

实施例6

pH＝3.1，(R)-邻氯扁桃酸含量为143mmol/L的水相游离菌催化反应液为待处理液，采用HZ-202型树脂。

1、常温在交换柱中，采用循环使用4次后的树脂进行吸附，采用动态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱15min后，将液体与树脂以2.5ml/min的速度将其流下分离；

2、用10倍树脂质量体积的1M稀盐酸，以2.5ml/min的流速对该吸附后的树脂进行洗脱；

3、对洗脱液用0.3倍洗脱液体积的乙酸乙酯进行萃取，萃取后的有机相减压蒸馏(50℃～60℃，0.09MPa)，得到的固体经过真空干燥得到(R)-邻氯扁桃酸粗品。实验结果如表1所示。

实施例7

pH＝6.39，(R)-邻氯扁桃酸含量为425mmol/L的水相固定菌催化反应液为待处理液，采用HZ-202型树脂。

1、常温在交换柱中，采用循环使用4次后的树脂进行吸附，采用动态吸附的方式对产物邻氯扁桃酸进行提取，挂柱15min后，以2.5ml/min的速度将液体与树脂分离；

实施例8

pH＝5.2，(R)-邻氯扁桃酸的含量为143mmol/L的水相固定菌催化反应液为待处理液。

1、采用使用多次循环后的HZ-202型树脂，其前一次的吸附效率仅为66％，对该树脂进行再生操作：用浓度为2mol/L的NaOH溶液和质量百分比浓度为10％NaCl混合碱液按照先浸泡30min，混合碱液的体积(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为3：1；再以2.0ml/min的速度洗涤；再用浓度为2mol/L的HCl和浓度为30％的乙醇的混合酸液对该树脂浸润30min，混合酸液的体积(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为3：1；再以2.0ml/min的速度洗涤。再生处理后的树脂则按照吸附操作对(R)-邻氯扁桃酸待提取液进行提取。

实验结果如表1所示。

实施例9

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤为先用5M的NaOH溶液浸润洗涤，再用5M稀盐酸浸润洗涤，均浸润10min，再以1ml/min的速度洗涤。实验结果如表1所示。

实施例10

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤为先用0.5M的NaOH溶液浸润洗涤，再用0.5M稀盐酸浸润洗涤，均浸润60min，再以5ml/min的速度洗涤。实验结果如表1所示。

对比例1

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤仅采用NaOH溶液浸润洗涤。实验结果如表1所示。

对比例2

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤仅采用稀盐酸溶液浸润洗涤。实验结果如表1所示。

对比例3

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤中依次采用0.4mol/L NaOH溶液、0.4mol/L HCl溶液浸润洗涤。实验结果如表1所示。

对比例4

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤中依次采用6mol/L NaOH溶液、6mol/L HCl溶液浸润洗涤。实验结果如表1所示。

对比例5

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤中NaOH溶液(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为1.5：1进行浸泡，HCl(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为1.5：1进行浸泡。实验结果如表1所示。

对比例6

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤中NaOH溶液(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为6：1进行浸泡，HCl(单位为ml)与强碱性阴离子树脂的质量(单位为g)之比为6：1进行浸泡。实验结果如表1所示。

对比例7

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤中NaOH溶液洗涤的速度为0.5ml/min、HCl溶液洗涤的速度为0.5ml/min。实验结果如表1所示。

对比例8

按照实施例2进行分离提取，区别仅在于：预处理步骤中NaOH溶液洗涤的速度为5.5ml/min、HCl溶液洗涤的速度为5.5ml/min。实验结果如表1所示。

表1

由对比例1和对比例2的实验结果可知，如果预处理步骤仅采用酸或碱处理，(R)-邻氯扁桃酸粗品的收率显著降低，纯度也较差。由对比例3～对比例8的实验结果可知，如果预处理步骤的具体条件不在本发明实验例的优选范围内，(R)-邻氯扁桃酸粗品的收率和/或纯度均具有下降的趋势。

本申请虽然以较佳实施例公开如上，但并不是用来限定权利要求，任何本领域技术人员在不脱离本申请构思的前提下，都可以做出若干可能的变动和修改，因此本申请的保护范围应当以本申请权利要求所界定的范围为准。

Claims

1.一种(R)-邻氯扁桃酸的分离提取方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

(1)将强碱性阴离子树脂进行预处理，所述预处理包括依次进行碱洗和酸洗的步骤；所述强碱性阴离子树脂为HZ-202型树脂；

所述碱洗的步骤包括：先用浓度为0.5～5mol/L的碱液浸泡强碱性阴离子树脂10～60min，然后用所述碱液以1.0～5.0mL/min的速度进行洗涤；浸泡时所述碱液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；所述碱选自一元碱；

所述酸洗的步骤包括：先用浓度为0.5～5mol/L的酸液浸泡强碱性阴离子树脂15～30min，然后用所述酸液以1.0～5.0mL/min的速度进行洗涤；浸泡时所述酸液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1；所述酸液选自盐酸；

酸洗后还包括水洗至中性的步骤；

(2)采用步骤(1)处理后的强碱性阴离子树脂对(R)-邻氯扁桃酸的待提取液进行吸附；所述待提取液为生物催化合成所得的反应液；

所述吸附前还包括浸润的步骤，所述浸润的步骤包括：向所述强碱性阴离子树脂中加入缓冲液浸润10～30min，所述缓冲液的体积为强碱性阴离子树脂2～5倍；所述缓冲液的pH值为7～9；

2.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述水选自纯化水。

3.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述碱洗前还包括水洗去机械杂质的步骤。

4.根据权利要求3所述的分离提取方法，其特征在于，所述水选自纯化水。

5.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，将洗脱后的强碱性阴离子树脂水洗至中性后进入步骤(2)循环使用，当循环使用15～20次后，对所述强碱性阴离子树脂进行再生处理；所述再生处理的方式为：

用混合碱液先浸泡10～60min，再以1.0～5.0mL/min的速度洗涤；所述混合碱液中含有浓度为2～5mol/L的一元碱和质量百分比浓度为10％～30％的氯化钠。

6.根据权利要求5所述的分离提取方法，其特征在于，方式1中，所述混合碱液的体积与强碱性阴离子树脂的质量之比为2～5：1。

7.根据权利要求5所述的分离提取方法，其特征在于，所述再生处理还包括水洗至中性的步骤。

8.根据权利要求7所述的分离提取方法，其特征在于，所述水为纯化水。

9.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述吸附的温度为10～60℃；

在步骤(3)中，所述洗脱的温度为10～60℃。

10.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，所述萃取采用的有机溶剂选自酯类有机溶剂、醚类有机溶剂、醇类有机溶剂中的至少一种。

11.根据权利要求10所述的分离提取方法，其特征在于，所述有机溶剂选自碳原子数为4～8的酯类有机溶剂、碳原子数为2～6的醚类有机溶剂、碳原子数为1～8的醇类有机溶剂。

12.根据权利要求10所述的分离提取方法，其特征在于，所述有机溶剂选自酸乙酯、乙醚、乙醇中的至少一种。

13.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述吸附的流速为0.1～10mL/min；在步骤(3)中，所述洗脱的流速为0.1～10mL/min。

14.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，所述待提取液的pH值为2～8。

15.根据权利要求1所述的分离提取方法，其特征在于，步骤(2)吸附后的反应液作为生物催化反应体系的反应液循环使用。