CN110157699B - β-内酰胺酶及其编码基因以及它们的应用 - Google Patents

β-内酰胺酶及其编码基因以及它们的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，具体涉及β‑内酰胺酶及其编码基因以及它们的应用。所示β‑内酰胺酶的氨基酸序列选自SEQ ID No：6、SEQ ID No：7、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9和SEQ ID No：10。还提供了一种编码β‑内酰胺酶的基因，以及含有该基因的重组载体和转基因细胞，β‑内酰胺酶、基因、重组载体和转基因细胞在水解β‑内酰胺类抗生素中的应用，同时还提供了含有β‑内酰胺酶和/或转基因细胞的组合物以及水解β‑内酰胺类抗生素的方法。所述β‑内酰胺酶能够高效水解β‑内酰胺类抗生素，特别是碳青霉烯类抗生素，从而可以将他们应用到相应的抗生素的污染环境中，达到清除对应抗生素污染的目的。

Description

β-内酰胺酶及其编码基因以及它们的应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种β-内酰胺酶，还涉及一种编码该β-内酰胺酶的基因，含有编码该β-内酰胺酶的基因的重组载体和细胞，β-内酰胺酶、编码该β-内酰胺酶的基因以及含有该基因的重组载体及细胞在水解β-内酰胺类抗生素中的应用，以及一种组合物和水解β-内酰胺类抗生素的方法。
背景技术
碳青霉烯类抗生素(Carbapenemas)是新型的β-内酰胺类抗生素。碳青霉烯类抗生素从结构上与青霉素类抗生素相比，最大的不同之处在于噻唑环上的硫原子为碳所替代，且碳青霉烯类抗生素的C2与C3之间存在不饱和双键。正是因为结构上差异，使得碳青霉烯表现出更广抗菌谱以及更强抗菌活性等特点。这类新型的β-内酰胺类抗生素主要是通过抑制细菌细胞壁合成的青霉素结合蛋白，阻断了细胞壁的合成，导致细胞壁的不完整，从而造成细胞膨胀死亡达到抑菌的效果。碳青霉烯类抗生素具有抗菌谱广、抗菌活性强、毒性较低、不易产生耐药性等一系列的优点，是目前临床用于治疗多种多重耐药病原菌的最后一道防线，因此，在医院得到大规模应用。
由于人体不能完全将碳青霉烯类抗生素代谢，因此，最后会随着排泄排出到环境中，从而导致环境中碳青霉烯类抗生素的污染。另外，一些碳青霉烯类抗生素发酵工厂，也会排出一些含有该类抗生素的废水，从而导致环境中碳青霉烯类抗生素的污染。但是，针对这些环境中污染的碳青霉烯类抗生素，目前还未有行之有效的去除方法。
发明内容
本发明的发明人基于对β-内酰胺酶的分子生物学研究，意外地到了五种β-内酰胺酶及其编码基因。并构建了含有此类β-内酰胺酶基因的重组载体和细胞，并将该β-内酰胺酶、其编码基因、含有该基因的重组载体及细胞应用到了水解β-内酰胺类抗生素的方面上，取得了良好的效果。
基于以上发现，一方面，本发明提供了一种β-内酰胺酶，其中，该β-内酰胺酶的氨基酸序列选自由SEQ ID No：6、SEQ ID No：7、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9和SEQ ID No：10所组成的组中。
第二方面，本发明提供了一种编码β-内酰胺酶的基因，其中，该基因的核苷酸序列为能够编码SEQ ID No：6、SEQ ID No：7、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9和SEQ ID No：10所组成的组中的氨基酸序列的核苷酸序列。
第三方面，本发明提供了一种重组载体，其中，该重组载体含有本发明提供的编码β-内酰胺酶的基因。
第四方面，本发明提供了一种转基因细胞，其中，该转基因细胞含有本发明提供的基因或本发明提供的重组载体。
第五方面，本发明还提供了如上所述的β-内酰胺酶、如上所述的基因、如上所述的重组载体或如上所述的转基因细胞在水解β-内酰胺类抗生素中的应用。
第六方面，本发明还提供了一种组合物，该组合物含有如上所述的β-内酰胺酶和/或如上所述的转基因细胞。
第七方面，本发明还提供了一种水解β-内酰胺类抗生素的方法，该方法包括，将如上所述的组合物与含有β-内酰胺类抗生素的环境接触，以对环境中的β-内酰胺类抗生素进行水解。
本发明提供的β-内酰胺酶能够高效的水解β-内酰胺类抗生素，特别是碳青霉烯类抗生素，从而可以将他们应用到相应的抗生素的污染环境中，达到清除对应抗生素污染的目的。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
第一方面，本发明提供了一种β-内酰胺酶，其中，该β-内酰胺酶的氨基酸序列选自由SEQ ID No：6(OXA-Tm)、SEQ ID No：7(OXA-Bo)、SEQ ID No：8(OXA-Ru)、SEQ ID No：9(OXA-Gu)和SEQ ID No：10(OXA-Gy)所组成的组中。
第二方面，本发明提供了一种编码β-内酰胺酶的基因，其中，该基因的核苷酸序列为能够编码SEQ ID No：6、SEQ ID No：7、SEQ ID No：8、SEQ ID No：9和SEQ ID No：10所组成的组中的氨基酸序列的核苷酸序列。
根据本发明，需要指出的是，在β-内酰胺酶的氨基酸序列确定的情况下，本领域技术人员能够根据编码氨基酸的相应密码子确定β-内酰胺酶的序列。且公知的，编码氨基酸的密码子具有简并性，因此，同一β-内酰胺酶相应的编码序列不止一条，这些均应该在本发明的保护范围之内。
优选的，该基因的核苷酸序列选自由SEQ ID No：1(编码OXA-Tm)、SEQ ID No：2(编码OXA-Bo)、SEQ ID No：3(编码OXA-Ru)、SEQ ID No：4(编码OXA-Gu)和SEQ ID No：5(编码OXA-Gy)所组成的组中。
本发明提供的β-内酰胺酶基因是从鲍曼不动杆菌(Acinetobacter Baumannii)中克隆得到的。
第三方面，本发明提供了一种重组载体，其中，该重组载体含有本发明提供编码β-内酰胺酶的基因。
在本发明中，所述“载体”可选用本领域技术人员公知的各种载体，如市售的各种质粒，粘粒，噬菌体及反转录病毒等。本发明优选大肠杆菌pET28a质粒。
本发明中，制备上述重组载体的方法为本领域技术人员所公知，例如，可以使用Fast clone Kit(PUEX公司)按照其说明书进行上述重组载体的制备。
第四方面，本发明提供了一种转基因细胞，其中，该转基因细胞含有本发明提供的基因或本发明提供的重组载体。
本发明中，所述转基因细胞可以为原核细胞，也可以为真核细胞，优选大肠杆菌或酵母。其中，将本发明提供的基因或本发明提供的重组载体导入受体细胞的方法为本领域技术人员所公知，例如，可以参照《分子克隆实验指南》进行转基因细胞的制备。
第五方面，本发明还提供了所述的β-内酰胺酶、编码该β-内酰胺酶的所述基因、含有该基因的重组载体或者含有该基因或该载体的转基因细胞在水解β-内酰胺类抗生素中的应用。
其中，所述β-内酰胺类抗生素可以包括本领域公知的任意的β-内酰胺类抗生素，例如，可以选自由青霉素、头孢菌素、单环β-内酰胺类、碳青霉烯类、头霉素类、拉氧头孢以及他们的衍生物所组成的组中。具体的，例如，可以选自青霉素G、青霉素V、甲氧西林、氯唑西林、氟氯西林、氨苄西林、阿莫西林、羧苄西林、哌拉西林、美西林、匹美西林、头孢拉定、头孢氨苄、头孢呋辛、头孢克洛、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢克肟、头孢匹罗、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、氨曲南和阿莫西林所组成的组中。
第六方面，本发明还公开了一种组合物，该组合物含有如上所述的β-内酰胺酶和/或如上所述的转基因细胞。
根据本发明，所述组合物中根据需要还可以含有常规的各种稳定剂、分散剂等成分。
第七方面，本发明还公开了一种水解β-内酰胺类抗生素的方法，该方法包括，将如上所述的组合物与含有β-内酰胺类抗生素的环境接触，以对环境中的β-内酰胺类抗生素进行水解。
其中，所述组合物的用量可以根据环境中所含有的β-内酰胺类抗生素的量进行确定。
所述接触的条件可以为含有β-内酰胺类抗生素的环境所处的温度、压力等环境。
实施例
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例和对比例中：
Escherichia coli BL21(DE3)，购自天根生化科技有限公司，作为表达宿主。上述菌株可用LB液体培养基或LB固体培养基进行培养，最适培养温度为37℃；
所用质为pET-28a(+)，表达载体，本实验中作为目的基因克隆载体，携带卡那霉素抗性。
pUC19，作为验证大肠杆菌感受态细胞转化效率的质粒，携带有氨苄青霉素抗性；
SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：3、SEQ ID No：4和SEQ ID No：5委托北京靖瑞百康生物技术有限公司直接合成，并连接于pET-28a(+)质粒的NdeI和Hind III酶切位点之间，得到重组质粒。
头孢噻肟、头孢曲松、头孢呋辛、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、氨苄西林、阿莫西林、CLA均购自大连美仑生物技术有限公司。
实施例1
本实施例用于说明转化有本发明提供的β-内酰胺酶编码基因的大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的抗性
(1)感受态E.coli BL21细胞的制备
1)在LB固体培养基上划线培养感受态的大肠杆菌BL21，37℃，培养12～16h。
2)挑取新鲜的单克隆菌落，接种到4ml LB液体培养基中，37℃，震荡培养12～16h。
3)第三天，以1：100比例将1ml菌液加入到100ml LB液体培养基中，37℃，220rpm，振摇约2小时，每半小时测一次OD600，当OD600达到0.5时，停止培养。
4)冰浴菌液30min后，将菌液分装到50ml预冷的离心管中，4℃，4500rpm离心10min。
5)弃上清，向离心管中加入少量预冷的ddH2O，使沉淀悬浮后，4℃，4500rpm离心10min。
6)弃上清，再加入少量预冷的ddH2O，重悬菌体，4℃，4500rpm，离心10min。
7)弃上清，向离心杯中加入少量预冷10％甘油，重悬菌体，4℃，4500rpm，离心10min。
8)重复第七步操作。
9)弃上清，向离心管中加入1ml 10％的甘油，使沉淀悬浮后，得到感受态E.coliBL21细胞，将菌液以100μl/管分装于预冷的1.5ml离心管中，-80℃冰箱中保存。同时，取100μl感受态加0.01ng pUC19质粒直接电击转化，检测转化效率。
10)次日观察转化子生长情况，并记录计算转化效率，转化效率为108cfu/μg DNA。
(2)重组质粒(pET28a-OXA)转化E.coli BL21
将1μl含有SEQ ID No：1、SEQ ID No：2、SEQ ID No：3、SEQ ID No：4和SEQ ID No：5的重组质粒(50ng/μl)电转化至E.coli BL21感受态细胞中，用含终浓度为100μg/ml的卡那霉素平板筛选转化子。
转化操作步骤如下：
1)取感受态细胞置于冰中融化，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰中。
2)待融化后，向感受态细胞悬液中加入1μl连接产物，轻轻旋转离心管以混匀，在冰浴中静置30min，同时，将2mm电击杯置于冰中。
3)电击杯擦干后，再将感受态细胞混合液转移至电击杯中，电击(2.0kv，200欧，25微法，3.5～5.5毫秒)。
4)向电击杯中加入1ml无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床振荡培养60min(200rpm)，使细胞复苏。
5)根据实验要求，吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB琼脂培养基上，将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收，倒置平板，37℃过夜培养。
(3)重组质粒(pET28a-OXA系列)的验证
从上述平板中挑取单克隆，于4ml含有50μg/ml卡那霉素的LB液体中，37℃过夜培养。取1ml液体进行保菌，其余进行构建的重组质粒的验证，提取质粒后，将质粒送往北京博迈德生物技术有限公司进行测序，测序结果表明，插入片段与目的序列完全吻合。
(4)目的基因的耐药表型测定
培养基为调节过阳离子的肉汤(Cation-adjusted Mueller Hinton broth，M-H培养基)，具体调节浓度所用试剂配制如下：
1)将4.18g MgCl2.6H2O溶解于50ml去离子水中，Mg2+的终浓度为10mg/ml，高温高压灭菌。
2)将1.84g CaCl2.2H2O溶解于50ml去离子水中，Ca2+的终浓度为10mg/ml，高温高压灭菌。
3)将2g IPTG溶于8ml水中，待IPTG完全溶解后，用水定容至10ml。用0.22μm的一次性滤器将溶液过滤除菌，并分装成1ml小份，储存于-20℃保存。
4)将上述MgCl2和CaCl2溶液加入至Mueller Hinton broth中，震荡混匀，至Ca2+的终浓度为20mg/L，Mg2+的终浓度为10mg/L以及终浓度为0.1mM的IPTG。(根据配制培养基的体积计算加入的离子溶液的量，且在无菌条件下进行操作)。
96孔板的制备
以氨苄西林为例，配制检测氨苄西林抗性的96孔板，具体制备过程具体如下：
1)向96孔板中A～G的1～12每孔加入200μl M-H培养基(含20mg/L的Ca2+，10mg/L的Mg2+以及0.1mM的IPTG，以下所有M-H培养基均为调节过阳离子浓度的培养基)；
2)向A～F的第1列加入40.96μl 10mg/ml氨苄青霉素以及159.04ul MH培养基，吹打混匀后使得A～F的第1列中每孔终浓度均为2048μg/ml；
3)使用八连排排枪吸取200μl A～F的第1列中终浓度为1024μg/ml的培养基，继续在A～F的第2列中吹打混匀(至少吹打30次)；
4)重复上述步骤，从第2列每孔中吸出200μl移至第3列，吸打混匀，依次类推；直至稀释至最低浓度1μg/ml(第12列)，此时第12列中有培养基400μl，吸出200μl液体弃之，以保持所有孔中体积为200μl。
对于其他的抗生素的96孔板的制备，根据实际情况，可以在初始浓度以及最小浓度之间进行调整，例如，可以从1024μg/ml稀释到0.5μg/ml；还可以从512μg/ml稀释到0.25μg/ml，等等。
耐药表型的测定
1)第一天，在LB平板上划线培养细菌，过夜培养；
2)第二天，从LB平板上刮取菌落到2ml M-H培养基中(无抗生素)，调节菌液浓度，使得OD600nm＝0.13～0.17，取出1ml菌悬液加入至3ml M-H中稀释；
3)每200μl不同浓度抗生素的培养基中(每孔)接种4μl上述调整好浓度的菌悬液，每种抗生素的每个浓度设置3个平行；
4)同时设置3个阴性对照(即培养基不加抗生素且不接菌体)，和3个阳性对照(即培养基不加抗生素，只接种菌体)；
5)将96孔板放于适宜温度中培养18～24h。利用酶标仪测定OD600nm，并与阴性和阳性对照对比，确定是否生长；
6)抑制细菌不生长的最低的抗生素浓度，即为菌株的MIC，结果见表1。
对比例1
本对比例用于说明转化有SEQ ID No：11的大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素的抗性。
按照实施例1的方法进行抗生素耐性的验证，不同的是，所使用的核苷酸序列如SEQ ID No：11所示，其编码的蛋白命名为OXA-Ta，结果见表1。
表1
pET-28a OXA-Ta
头孢噻肟 0.0078125 0.0078125
头孢曲松 0.0078125 0.0078125
头孢呋辛 1 1
头孢吡肟 0.03125 <0.015625
亚胺培南 0.25 0.25
美罗培南 0.125 0.125
氨苄西林 2 2
阿莫西林 2 2
阿莫西林+CLA 2 2
注：1)该结果至少独立重复3次以上；
2)“CLA”为克拉维酸，是β-内酰胺酶的抑制剂；
3)单位μg/ml。
通过表1可以看出：OXA-Ta与对照pET-28a(+)相比，耐药表型没有明显变化。
此外，抗生素耐性结果还表明，与对照pET-28a(+)相比，
1)OXA-Tm对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的耐药性提升了4倍(MIC＝1)，对碳青霉烯类抗生素美罗培南的耐药提升了8倍(MIC＝1)，对青霉素类抗生素氨苄西林的耐药提升了512倍(MIC＝1024)，对青霉素类抗生素阿莫西林的耐药提升了1024倍(MIC＝2048)，β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸能够抑制OXA-Tm对阿莫西林的表型，但无法完全抑制，仍处于高耐药水平，耐药性仍提高了32倍(MIC＝32)；
2)OXA-Bo对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的耐药性提升了8倍(MIC＝2)，对碳青霉烯类抗生素美罗培南的耐药提升了32倍(MIC＝4)，对青霉素类抗生素氨苄西林的耐药提升了32倍(MIC＝64)，对青霉素类抗生素阿莫西林的耐药提升了128倍(MIC＝256)，β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸能够抑制OXA-Tm对阿莫西林的表型，但无法完全抑制，仍处于高耐药水平，耐药性仍提高了64倍(MIC＝128)；对于头孢类抗生素，对头孢噻肟(三代头孢)的耐药提升了2倍(MIC＝0.015625)，对头孢曲松(三代头孢)的耐药提升了32倍(MIC＝0.25)。
3)OXA-Ru对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的耐药性提升了8倍(MIC＝2)，对碳青霉烯类抗生素美罗培南的耐药提升了8倍(MIC＝1)，对青霉素类抗生素氨苄西林的耐药提升了1024倍以上(MIC>2048)，对青霉素类抗生素阿莫西林的耐药提升了512倍(MIC＝1024)，β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸能够抑制OXA-Tm对阿莫西林的表型，但无法完全抑制，仍处于高耐药水平，耐药性仍提高了128倍(MIC＝256)；对于头孢类抗生素，对头孢噻肟(三代头孢)的耐药提升了64倍(MIC＝0.5)，对头孢曲松(三代头孢)的耐药提升了32倍(MIC＝0.25)，对头孢呋辛(二代头孢)的耐药性提升了4倍(MIC＝4)，对头孢吡肟(四代头孢)的耐药性提升了64倍(MIC＝2)。
4)OXA-Gu对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的耐药性提升了4倍(MIC＝1)，对碳青霉烯类抗生素美罗培南的耐药提升了8倍(MIC＝1)，对青霉素类抗生素氨苄西林的耐药提升了512倍(MIC＝1024)，对青霉素类抗生素阿莫西林的耐药提升了1024倍(MIC＝2048)，β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸能够抑制OXA-Tm对阿莫西林的表型，但无法完全抑制，仍处于高耐药水平，耐药性仍提高了128倍(MIC＝256)。
5)对碳青霉烯类抗生素亚胺培南的耐药性提升了8倍(MIC＝2)，对碳青霉烯类抗生素美罗培南的耐药提升了64倍(MIC＝8)，对青霉素类抗生素氨苄西林的耐药提升了1024倍(MIC＝2048)，对青霉素类抗生素阿莫西林的耐药提升了1024倍(MIC＝2048)，β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸能够抑制OXA-Tm对阿莫西林的表型，但无法完全抑制，仍处于高耐药水平，耐药性仍提高了256倍(MIC＝512)；对于头孢类抗生素，对头孢噻肟(三代头孢)的耐药提升了8倍(MIC＝0.0625)，对头孢曲松(三代头孢)的耐药提升了2倍(MIC＝0.015625)。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。
SEQUENCE LISTING
<110> 中国科学院微生物研究所
<120> β-内酰胺酶及其编码基因以及它们的应用
<130> I50109ZKW
<160> 11
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 840
<212> DNA
<213> Artificial
<400> 1
atgtggatgt taaaaacgat atcttgttca gttttaagct ggatgttgtt aagtgcatgc 60
agtcagcaaa ctctgaaaga tcaaatgcaa cagccattga tgatgcaaca accacggtta 120
gcagagttga atcatatgtt tcaagcagtg gatagcgccg tggtctttgt gacttatgat 180
ggggaaaaat tacagcgttt tggcaatgat ttgcatcgtg ccgaaactgc ctatatacca 240
gcttcaactt ttaaaatact aaatgcttta attggtttgc agcagcataa aaccacgacc 300
actgaagtat ttgtatggga tggaaaagca cgtgcattga aaagttggga acgggatatg 360
actttggcag aggcgatgca agtctcggca gttcccgtct atcaaacctt agcgcgacga 420
attggtctac cactgatgca aaaagagctt catcgtgtcg attatggaaa tgctcagatt 480
gggacacagg ttgatcggtt ttggttagat ggacccttaa aaatcacacc acaacaagaa 540
gctgaatttg cttacagact tgcgactcag actttacctt ttgatataca tgtgcaacaa 600
gaggtaaagg aaatgcttta tgtggagcga cgcggtgttg ctaaattgta tgctaagtca 660
ggatggggag ccgatgtaaa acctcaggtg ggttggtatg tgggatgggt ggaacagccc 720
aatggcaaaa ttttggcctt tgctttaaat atgcagatac agaatgagca gcaattggca 780
atgcgtaaac agctcaccct agatgcttta gataaacttg gtatctttcc ttatttataa 840
<210> 2
<211> 792
<212> DNA
<213> Artificial
<400> 2
atgaacaggg cgcagacgtc taatcaatcc gtgcaaaaag ctgttttgca ggcaccctct 60
gaacgcccag aagagattaa gcaattgttt aattctgcac acacatcagc cgtttttatc 120
acctatgacg gtcggcagtt taatcgttat ggtaatgctt tggctcgtgc ccaaaatgcc 180
tatattccag cttcaacgtt taaaatatta aatgcattga ttggtcttca gcatcataaa 240
gtcagtacgt ctgaagtgtt taaatggaag ggtgaaaagc gttcatttcc tgcgtgggaa 300
aaagatatga acttggcgca agccatgcag ctttcagccg ttccagtgta tcagcagctt 360
gctcgacgta taggcttaga actcatgcag aaagaaattt ctcggcttgg ttttggcaat 420
caaaagattg gtcaacaggt ggataatttt tggttggttg gccctttaaa aataacccca 480
gaacaagaag cacaatttgt ctatcaactg gcaacagagc aattaccttt tgatgtaaaa 540
gtacaaaaac aggtcaaaga gatgctttat attgagcgtc gtggtgatac aaaattatat 600
gcaaaaagtg gttggggaat ggatgttaag cctcaagtgg ggtggtatac agggtgggtt 660
gaacaagcaa atggacagat caccgctttt gttttaaatt tggaaatgca tgatggcgat 720
gatgtgggcg aacgtaagca gctcactttg gatgcattgg ataagctggg attattcttt 780
tatttacact aa 792
<210> 3
<211> 822
<212> DNA
<213> Artificial
<400> 3
atgaaaaaaa atctgtttgc gtgtttagta ctatctacag cattaactca agttgcttgc 60
tctacactgc aaacaaccgc tgatccttct acgcaagcat ctactgcgca gcagtcaatc 120
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aaagtcgctt tttcattaaa tatggaaatg aaaccaaaga tgtctggttc aattcgtaat 780
gaaatcactc taaaagcact tgaaaatcta ggagttattt ag 822
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<212> DNA
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gctgaacgta agcaactgac attaagtatc ttagataaat taggcttatt cttttatttg 840
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<212> DNA
<213> Artificial
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<212> PRT
<213> Artificial
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Met Trp Met Leu Lys Thr Ile Ser Cys Ser Val Leu Ser Trp Met Leu
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Leu Ser Ala Cys Ser Gln Gln Thr Leu Lys Asp Gln Met Gln Gln Pro
20 25 30
Leu Met Met Gln Gln Pro Arg Leu Ala Glu Leu Asn His Met Phe Gln
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Ala Val Asp Ser Ala Val Val Phe Val Thr Tyr Asp Gly Glu Lys Leu
50 55 60
Gln Arg Phe Gly Asn Asp Leu His Arg Ala Glu Thr Ala Tyr Ile Pro
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Ala Ser Thr Phe Lys Ile Leu Asn Ala Leu Ile Gly Leu Gln Gln His
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Lys Thr Thr Thr Thr Glu Val Phe Val Trp Asp Gly Lys Ala Arg Ala
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Leu Lys Ser Trp Glu Arg Asp Met Thr Leu Ala Glu Ala Met Gln Val
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Ser Ala Val Pro Val Tyr Gln Thr Leu Ala Arg Arg Ile Gly Leu Pro
130 135 140
Leu Met Gln Lys Glu Leu His Arg Val Asp Tyr Gly Asn Ala Gln Ile
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Gly Thr Gln Val Asp Arg Phe Trp Leu Asp Gly Pro Leu Lys Ile Thr
165 170 175
Pro Gln Gln Glu Ala Glu Phe Ala Tyr Arg Leu Ala Thr Gln Thr Leu
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Pro Phe Asp Ile His Val Gln Gln Glu Val Lys Glu Met Leu Tyr Val
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Glu Arg Arg Gly Val Ala Lys Leu Tyr Ala Lys Ser Gly Trp Gly Ala
210 215 220
Asp Val Lys Pro Gln Val Gly Trp Tyr Val Gly Trp Val Glu Gln Pro
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245 250 255
Gln Gln Leu Ala Met Arg Lys Gln Leu Thr Leu Asp Ala Leu Asp Lys
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Leu Gly Ile Phe Pro Tyr Leu
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<212> PRT
<213> Artificial
<400> 7
Met Asn Arg Ala Gln Thr Ser Asn Gln Ser Val Gln Lys Ala Val Leu
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Gln Ala Pro Ser Glu Arg Pro Glu Glu Ile Lys Gln Leu Phe Asn Ser
20 25 30
Ala His Thr Ser Ala Val Phe Ile Thr Tyr Asp Gly Arg Gln Phe Asn
35 40 45
Arg Tyr Gly Asn Ala Leu Ala Arg Ala Gln Asn Ala Tyr Ile Pro Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Val Ser Thr Ser Glu Val Phe Lys Trp Lys Gly Glu Lys Arg Ser Phe
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Pro Ala Trp Glu Lys Asp Met Asn Leu Ala Gln Ala Met Gln Leu Ser
100 105 110
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115 120 125
Met Gln Lys Glu Ile Ser Arg Leu Gly Phe Gly Asn Gln Lys Ile Gly
130 135 140
Gln Gln Val Asp Asn Phe Trp Leu Val Gly Pro Leu Lys Ile Thr Pro
145 150 155 160
Glu Gln Glu Ala Gln Phe Val Tyr Gln Leu Ala Thr Glu Gln Leu Pro
165 170 175
Phe Asp Val Lys Val Gln Lys Gln Val Lys Glu Met Leu Tyr Ile Glu
180 185 190
Arg Arg Gly Asp Thr Lys Leu Tyr Ala Lys Ser Gly Trp Gly Met Asp
195 200 205
Val Lys Pro Gln Val Gly Trp Tyr Thr Gly Trp Val Glu Gln Ala Asn
210 215 220
Gly Gln Ile Thr Ala Phe Val Leu Asn Leu Glu Met His Asp Gly Asp
225 230 235 240
Asp Val Gly Glu Arg Lys Gln Leu Thr Leu Asp Ala Leu Asp Lys Leu
245 250 255
Gly Leu Phe Phe Tyr Leu His
260
<210> 8
<211> 273
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 8
Met Lys Lys Asn Leu Phe Ala Cys Leu Val Leu Ser Thr Ala Leu Thr
1 5 10 15
Gln Val Ala Cys Ser Thr Leu Gln Thr Thr Ala Asp Pro Ser Thr Gln
20 25 30
Ala Ser Thr Ala Gln Gln Ser Ile Lys Ser Tyr Phe Asp Glu Val Gln
35 40 45
Thr Lys Gly Val Ile Val Ile Lys Gln Asp Gly Gln Leu Gln Thr Tyr
50 55 60
Gly Asn Asp Leu Ser Arg Ala Asn Thr Glu Tyr Val Pro Ala Ser Thr
65 70 75 80
Phe Lys Ile Leu Asn Ala Leu Ile Gly Leu Glu Asn His Lys Val Thr
85 90 95
Leu Asn Glu Val Phe Lys Trp Asp Gly Gln Lys Arg Ser Phe Pro Thr
100 105 110
Trp Glu Lys Asp Met Asn Leu Ala Glu Ala Met Lys Leu Ser Ala Val
115 120 125
Pro Val Tyr Gln Glu Leu Ala Arg Arg Ile Gly Val Asp Leu Met Ala
130 135 140
Gln Glu Val Lys Arg Leu Asn Phe Gly Asn Ala Gln Ile Gly Thr Gln
145 150 155 160
Val Asp Asn Phe Trp Leu Val Gly Pro Leu Lys Val Thr Pro Val Gln
165 170 175
Glu Val Glu Phe Val Glu Gln Leu Ala His Lys Gln Leu Pro Phe Lys
180 185 190
Pro Glu Val Gln Glu Thr Val Gln Gln Met Ile Leu Leu Gln Glu Val
195 200 205
Lys Gly Asn Lys Ile Tyr Ala Lys Ser Gly Trp Gly Met Asp Leu Asp
210 215 220
Pro Gln Val Gly Trp Leu Thr Gly Trp Val Glu Gln Pro Asn Gly Lys
225 230 235 240
Lys Val Ala Phe Ser Leu Asn Met Glu Met Lys Pro Lys Met Ser Gly
245 250 255
Ser Ile Arg Asn Glu Ile Thr Leu Lys Ala Leu Glu Asn Leu Gly Val
260 265 270
Ile
<210> 9
<211> 281
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 9
Met Ser Asn Asn Leu Phe Lys Phe Lys Ile Lys Ser Ser Val Leu Ile
1 5 10 15
Ile Leu Ser Ser Val Ala Phe Ser Gly Cys Val Ser Asn Ala Asn Leu
20 25 30
His Asp Pro Ala Ser Ser Gln Arg Thr Ser Glu Ile Pro Leu Leu Phe
35 40 45
Asn Tyr Ala Gln Thr Gln Ala Val Phe Val Thr Tyr Asp Gly Thr Gln
50 55 60
Phe Lys Arg Tyr Gly Asn Asp Leu Asn Arg Ala Lys Thr Ala Tyr Ile
65 70 75 80
Pro Ala Ser Thr Phe Lys Met Leu Asn Ala Leu Ile Gly Leu Gln His
85 90 95
Ala Lys Ala Thr Asn Thr Glu Val Phe Lys Trp Asn Gly Glu Lys Arg
100 105 110
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115 120 125
Ala Ser Ala Val Pro Val Tyr Gln Glu Leu Ala Arg Arg Ile Gly Leu
130 135 140
Asp Leu Met Ser Gln Glu Val Lys Arg Val Gly Phe Gly Asn Thr Gln
145 150 155 160
Ile Gly Gln Gln Val Asp Asn Phe Trp Leu Val Gly Pro Leu Lys Ile
165 170 175
Thr Pro Glu Gln Glu Ala Lys Phe Ala Tyr Gln Leu Ala Lys Lys Thr
180 185 190
Leu Pro Phe Asp Asp Ala Val Gln Gln Gln Val Lys Asp Met Leu Tyr
195 200 205
Val Glu Arg Arg Gly Asp Ser Lys Leu Tyr Ala Lys Ser Gly Trp Gly
210 215 220
Met Asp Val Glu Pro Gln Val Gly Trp Tyr Thr Gly Trp Ile Glu Gln
225 230 235 240
Pro Asn Gly Gln Ile Thr Ala Phe Ala Leu Asn Met His Met Gln Thr
245 250 255
Gly Asp Asp Pro Ala Glu Arg Lys Gln Leu Thr Leu Ser Ile Leu Asp
260 265 270
Lys Leu Gly Leu Phe Phe Tyr Leu Arg
275 280
<210> 10
<211> 278
<212> PRT
<213> Artificial
<400> 10
Met Ser Lys Lys Leu Lys Cys Leu Thr Leu Phe Thr Ala Ile Phe Phe
1 5 10 15
Ala Ile Pro Met Ala Ala Cys Gln Ser Leu Ser Gln Gln Lys Gln Gln
20 25 30
Leu Thr Thr Glu Lys Asn Asp Gln Gln Gln Ile Ser Ser Leu Phe Gln
35 40 45
Ser Ala Gln Thr Ser Gly Val Leu Val Ile Tyr Asp Gly Lys Lys Ile
50 55 60
Gln Ser Tyr Gly Asn Ala Leu Asp Arg Ala Glu Gln Arg Tyr Ile Pro
65 70 75 80
Ala Ser Thr Phe Lys Met Leu Asn Ala Leu Ile Gly Ile Gln His His
85 90 95
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100 105 110
Phe Ser Ser Trp Glu Lys Asp Leu Thr Leu Ala Glu Ala Met Gln Ala
115 120 125
Ser Ala Val Pro Val Tyr Gln Glu Leu Ala Arg Arg Ile Gly Leu Glu
130 135 140
Leu Met Thr Arg Glu Val Lys Arg Val Gly Tyr Gly Asn Lys Asn Ile
145 150 155 160
Gly Thr Gln Val Asp Asn Phe Trp Leu Val Gly Pro Leu Lys Ile Thr
165 170 175
Pro Val Glu Glu Val Arg Phe Ala Tyr Ala Leu Ala Lys Gln Lys Leu
180 185 190
Pro Phe Asp Gln Pro Thr Gln Gln Gln Val Lys Ala Met Leu Leu Val
195 200 205
Asp Gln Ile Gln Asp Thr Lys Ile Tyr Ala Lys Ser Gly Trp Gly Met
210 215 220
Asp Val Ser Pro Gln Val Gly Trp Trp Thr Gly Trp Ile Glu Gln Pro
225 230 235 240
Asn Gly Lys Val Ile Ala Phe Ser Leu Asn Met Gln Met Ser Gln Pro
245 250 255
Glu His Ala Asp Ala Arg Lys Ala Ile Val Tyr Gln Ala Leu Gln Gln
260 265 270
Leu Gly Leu Leu Ala Thr
275
<210> 11
<211> 1042
<212> DNA
<213> Artificial
<400> 11
atgtggatgt taaaaacgat atcttgttca gttttaagct ggatgttgtt aagtgcatgc 60
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actttggcag aggcgatgca agtctcggca gttcccgtct atcaaacctt agcgcgacga 420
attggtctac cactgatgca aaaagagctt catcgtgtcg attatggaaa tgctcagatt 480
gggacacagg ttgatcggtt ttggttagat ggacccttaa aaatcacacc acaacaagaa 540
gctgaatttg cttacagact tgcgactcag actttacctt ttgatataca tgtgcaacaa 600
gaggtaaagg aaatgcttta tgtggagcga cgcggtgttg ctaaattgta tgctaagtca 660
ggatggggag ccgatgtaaa acctcaggtg ggttagtatg tgggatgggt ggaacagccc 720
aatggcaaaa ttttggcctt tgctttaaat atgcagatac agaatgagca gcaattggca 780
atgcgtaaac agctcaccct agatgcttta gataaacttg gtatctttcc ttatttataa 840
aaataaaaga catacaatag acgaggtaat gagatgaaag cagcctaagt ttgtttacga 900
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aatatcattt gcagagttgc atcttttata aaggttgtgg tttaactata aagacgcaac 1020
gtagagaaat ttaatcatat tc 1042

Claims (5)

1.如SEQ ID No：10所示的β-内酰胺酶在体外提高菌体对碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素、头孢类抗生素的耐药性，以及对β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的耐药性中的应用。
2.能够编码SEQ ID No：10的氨基酸序列的基因在体外提高菌体对碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素、头孢类抗生素的耐药性，以及对β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的耐药性中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其中，该基因的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示。
4.含有权利要求2或3所述的基因的重组载体在体外提高菌体对碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素、头孢类抗生素的耐药性，以及对β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的耐药性中的应用。
5.一种体外提高菌体对碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素、头孢类抗生素的耐药性，以及对β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的耐药性的方法，其特征在于，该方法包括，将编码SEQID No：10的氨基酸序列的基因导入受体菌体中，从而提高菌体对碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素、头孢类抗生素的耐药性，以及对β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的耐药性。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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-.GenBank登录号：EPF93312.1.《GenBank》.2013,参见序列及其相关信息. *
GenBank登录号：EPF93312.1;-;《GenBank》;20130621;参见序列及其相关信息 *

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