CN110150337A - 一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属土传病原菌防治技术领域，为解决辣椒疫霉菌的传染问题，提供一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法。用具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物抑制辣椒疫霉菌的生长，中草药为：紫菀、冬花、陈皮、银花、连翘、鱼腥草、地骨皮、白芨、白薇、杏仁、郁金、桔梗、川牛膝、川贝、甘草按比例混合。药渣用乙醇提取，无菌水溶解，药渣醇提物在辣椒移栽时，从根部均匀浇入8‑12 mL。避免化学农药残留，减轻化学农药在土壤中的蓄积量，防止化学农药对土壤污染。克服生防菌在土壤中的定殖能力、适应能力，对其他生物的危害小，保证生态平衡；中草药药渣作为一种医用废弃物进行生物农药的研究，实现中草药药渣的二次利用，节约资源。

Description

一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法

技术领域

本发明属于土传病原菌防治技术领域，具体涉及一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法。

背景技术

辣椒疫霉菌是危害广泛的一种土传病原菌，主要感染辣椒的茎基部，引起辣椒疫病。辣椒疫霉菌的扩散速度非常快，只要少数植物染病，便会形成扩散中心，从而扩大染病植物面积。辣椒疫病对辣椒的产量、品质影响极大，严重时减产50%以上。辣椒疫霉菌是危害广泛的一种土传病原菌，目前在世界各大洲均已发现，并且寄主范围不断扩大，目前可危害18科的78种植物，威胁了各种植物的大量生产。辣椒疫霉菌能够产生卵孢子，由于卵孢子具有抗逆性、能够忍耐极端的环境条件，辣椒疫霉菌成为最难防治的病害之一。因而，关于辣椒疫霉菌的防治的研究，有着重要的现实意义。

目前，在农业生产中，对辣椒疫病的防治最主要的方法仍然还是喷洒化学农药，这虽然在一定程度上能够保证辣椒的产量，提高经济效益，但是却在食品安全、环境保护以及投资等方面带来了一系列问题，其次，农药的大量使用，也会使许多生物产生抗药性，从而带来更大的危害和损失。针对这些问题，研发药效持久、健康、环保的生物药剂成为辣椒疫病防治研究工作的主流，而具有抑菌作用的诸多植物则成为研究的首选材料。已研究发现，肉桂精油对辣椒疫霉菌的生长存在明显的抑制作用［王海娇等中国生物防治学报2018,(03): 1-7］，在对辣椒疫病的防治方面的应用潜力很大。

近年来，我国的中医药产业发展迅速，药渣的废弃量也逐渐增多，但是对中草药药渣的处理方式还没有成熟的体系，主要还是以堆积和焚烧为主，而在药渣中还具有许多药物活性物质，这就造成极大的资源浪费与经济损失。因而研究中草药药渣对辣椒疫霉菌的防治具有极大的经济意义。

发明内容

本发明为解决土传性病原菌——辣椒疫霉菌的传染问题，提供了一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法。

本发明由如下技术方案实现的：一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法，采用具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物抑制辣椒疫霉菌的生长，所述清热解毒中草药为：紫菀12克、冬花12克、陈皮12克、银花20克、连翘20克、鱼腥草20克、地骨皮12克、白芨12克、白薇12克、杏仁9克、郁金12克、桔梗12克、川牛膝15克、川贝9克、甘草6克；

所述具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物具体为：上述中草药药渣沥干水分，阳光下晒干后用浓度为80%的乙醇浸提，过滤取上清液，上清液浓缩后用无菌水定容使最终的药渣提取液浓度为2g/mL，细菌过滤器过滤即为中草药药渣醇提物；

所述中草药药渣的醇提物抑制辣椒疫霉菌的具体方法为：浓度为2 g/mL的中草药药渣醇提物在辣椒移栽时，从根部均匀浇入8-12 mL。

本发明所述方法有效避免了作物、蔬菜使用化学农药导致的化学农药残留，保证了作物、蔬菜的食用安全性，也减轻了化学农药在土壤中的蓄积量，防止了化学农药对土壤的污染。同时，使用药渣提取物防治土传性病原菌，克服了生防菌在土壤中的定殖能力、适应能力等问题，对其他生物的危害小，保证了生态平衡；最后，中草药药渣作为一种医用废弃物，利用其进行生物农药的研究，有利于实现中草药废弃药渣的二次利用，节约资源。

附图说明

图1为实施例2中所制备的中草药药渣醇提物进行打孔法抑菌实验结果示意图；图中：A为1号中草药渣醇提物试验结果；B为2号中草药渣醇提物试验结果。

具体实施方式

实施例1：具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物的制备：从太原中心医院带回的具有清热解毒作用的同一剂中草药药渣，该中草药具体为：紫菀12克、冬花12克、陈皮12克、银花20克、连翘20克、鱼腥草20克、地骨皮12克、白芨12克、白薇12克、杏仁9克、郁金12克、桔梗12克、川牛膝15克、川贝9克、甘草6克。

所带回的药渣编号为1、2，沥干水分，阳光下晒干，每种药渣称取10 g，放入锥形瓶内，每个锥形瓶中加入80%的乙醇100 mL，在恒温振荡仪中浸提2-3 d，过滤、离心后取上清液，将每种药渣的上清液经减压蒸馏浓缩至干，用无菌水定容至10 mL，使得最终的中草药药渣的醇提物的浓度为2 g/mL。细菌过滤器过滤后，4℃保存。

实施例2：所制备的清热解毒中草药药渣醇提物抑制辣椒疫霉菌的平板实验：

1、辣椒疫霉菌悬液的制备：在超净工作台上将扩大培养的辣椒疫霉菌试管斜面，用无菌生理盐水洗脱菌体，将菌悬液浓度稀释至含菌体约10⁶ CFU/mL。保存于冰箱备用。

2、所制备的中草药药渣的醇提物对辣椒疫霉菌抑菌实验：使用穿孔器均匀的在培养基上打孔4个，然后用移液枪将液体注入孔。首先是0.2 mL的中草药药渣的醇提物，做3次重复对照。再用移液枪往第四个孔内注射0.2 mL的无菌水，做空白对照，并贴好标签。将所有的培养皿放置37℃的恒温箱中培养3-5 d。

所述培养基下层为黑麦培养基，上层为马铃薯葡萄糖琼脂培养基。

用所制备的中草药药渣的醇提物测定辣椒疫霉菌的抑菌圈直径大小，以80%乙醇为对照，重复3次，结果显示，1号药渣提取物抑菌圈直径为15.50 mm，2号药渣提取物抑菌圈直径为14.33 mm，对照组无明显抑菌圈。1号、2号药渣醇提液均对辣椒疫霉菌存在抑制作用，1号药渣醇提物的抑制作用与2号无显著差异。1号和2号药渣可以做为防治辣椒疫病的新型环保药剂。

实施例3：中草药药渣的醇提物对辣椒疫霉菌的大田防治效果：

采用大田试验检测中草药药渣对辣椒疫霉病的防治效果。移栽4叶期健壮辣椒苗3棵。设置为：①对照1：土壤不接种任何微生物；②对照2：土壤接种辣椒疫霉菌；③处理实验：土壤同时加入1号中草药药渣醇提取液(浓度为2 g/mL)和辣椒疫霉菌。辣椒疫霉菌接种量为1g风干土500～800个孢子囊；中草药药渣醇提物(浓度为2 g/mL)在辣椒栽好时，从根部均匀浇入8-12 mL。每个处理6株，试验重复三次。所有对照及处理在移栽后7、14 d调查、统计发病情况，计算发病率，计算公式：发病率=发病株树/调查总株数×100%。

结果显示：辣椒苗移栽后7 d，未做任何处理对照1的辣椒苗无一株发病；接种病原菌孢子囊对照2的发病率达90%；处理的发病率为16%。移栽后12 d，所有处理植株发病率开始增加，但处理实验发病率增加最少，为19%，与其他处理差异达显著水平。可能此时处理中中草药药渣醇提取液中的拮抗物质已经被植株或土壤中的微生物代谢利用或者失活。中草药药渣醇提取液在移栽后的5～7 d内可以抑制病菌的侵入，由此可见，中草药药渣醇提取液的拮抗物质在病害的防治初期起重要作用。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (2)

1.一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法，其特征在于：采用具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物抑制辣椒疫霉菌的生长，所述清热解毒中草药为：紫菀12克、冬花12克、陈皮12克、银花20克、连翘20克、鱼腥草20克、地骨皮12克、白芨12克、白薇12克、杏仁9克、郁金12克、桔梗12克、川牛膝15克、川贝9克、甘草6克；

所述具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物具体为：上述中草药药渣沥干水分，阳光下晒干后用浓度为80%的乙醇浸提，过滤取上清液，上清液浓缩后用无菌水定容使最终的药渣提取液浓度为2g/mL，细菌过滤器过滤即为中草药药渣醇提物；

所述中草药药渣的醇提物抑制辣椒疫霉菌的具体方法为：浓度为2 g/mL的中草药药渣醇提物在辣椒移栽时，从根部均匀浇入8-12 mL。

2.根据权利要求1所述的一种利用清热解毒中草药药渣抑制辣椒疫霉菌的方法，其特征在于：所述具有清热解毒作用的中草药药渣的醇提物的具体制备方法为：药渣分别沥干水分，阳光下晒干，药渣称取10g，加入浓度为80%的乙醇100 mL，在恒温振荡仪中浸提2-3d，过滤、离心后取上清液，上清液经减压蒸馏浓缩至干，用无菌水定容至10 mL，使得最终的药渣提取液的浓度为2 g/mL；细菌过滤器过滤后即为中草药药渣的醇提物，4℃保存。