CN110150287B - 芦丁在防治烟粉虱中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了芦丁在防治烟粉虱中的应用，所述芦丁通过抑制其胞内共生细菌的含量，从而降低烟粉虱的存活率。本发明还公开了一种防治烟粉虱的方法，所述方法包括：将芦丁混合于液体饲料中，得到混合液；用所述混合液饲喂烟粉虱。本发明还公开了一种用于防治烟粉虱的药物或饲料，所述药物或饲料中包括浓度为20mg/L～100mg/L的芦丁。本发明通过大量创新性实验发现芦丁处理烟粉虱后可显著抑制其胞内共生细菌的含量；可显著降低其在番茄上的存活率。该方法不会带来害虫对农药的抗药性以及农药残毒等问题，有效减少环境污染。

Description

芦丁在防治烟粉虱中的应用
技术领域
本发明涉及农业害虫防治技术领域，尤其涉及一种芦丁在防治烟粉虱中的应用。
背景技术
烟粉虱Bemisia tabaci(Gennadius)属半翅目，粉虱科，是世界性的危害蔬菜、花卉等经济作物的一种重要害虫，成虫通过直接取食植物韧皮部汁液、间接传播植物双生病毒、引起植物生理混乱、分泌蜜露诱发真菌病害为害作物，造成巨大的经济损失。烟粉虱被认为包含很多形态上无法区分的生物型，其中B型和Q型烟粉虱是两种入侵性最强、危害最为严重的两个生物型。在我国，烟粉虱始记载于20世纪40年代末期，一直以来不是主要的农业害虫。20世纪90年代，入侵性极强的B型烟粉虱入侵我国，给我国的作物生产造成了巨大的经济损失。2003年，Q型烟粉虱在我国首次发现，而后在我国迅速扩散，在很多地方甚至已经取代了B型烟粉虱成为主要危害型。
目前对烟粉虱的防治主要依赖化学防治，虽然化学农药对控制烟粉虱数量、降低农业经济损失的作用巨大，但大量使用农药引起的烟粉虱抗药性问题也日趋严重，因此如何安全控制烟粉虱成了近几年的研究重点。化学农药的频繁使用带来了害虫对农药的抗药性以及农药残毒等问题。
芦丁是植物体自身代谢产生的一种重要的天然类黄酮类物质。黄酮类化合物大量存在于高等植物中，比较著名的如芸香苷、槲皮素和异槲皮苷等。芦丁是黄酮醇化合物槲皮素的芸香糖苷，是一种从植物中提取的黄酮类化合物，广泛存在于芸香科植物柚中，具有抗氧化及抗自由基作用。目前，国内还没有将芦丁应用于烟粉虱防治的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了芦丁在防治烟粉虱中的应用，不会带来害虫对农药的抗药性以及农药残毒等问题，有效减少环境污染。
本发明是这样实现的：
本发明目的之一在于提供芦丁在防治烟粉虱中的应用。
具体地，所述芦丁通过抑制其胞内共生细菌的含量，从而降低烟粉虱的存活率。
优选地，所述芦丁的浓度为20mg/L～100mg/L。最为优选地，所述芦丁的浓度为60mg/L。
本发明的目的之二在于提供一种防治烟粉虱的方法，所述方法包括：将所述的芦丁混合于液体饲料中，得到混合液；用所述混合液饲喂烟粉虱。
优选地，所述液体饲料为30％蔗糖溶液。
优选地，所述芦丁混合于液体饲料前先将芦丁溶解于乙醇溶液。所述乙醇溶液为体积比为1％的乙醇的水溶液。
所述芦丁溶解于乙醇溶液后混合于液体饲料中使芦丁终浓度为20mg/L～100mg/L(最佳为60mg/L)，然后进行饲喂。
本发明的目的之三在于提供一种用于防治烟粉虱的药物或饲料，所述药物或饲料中包括浓度为20mg/L～100mg/L的芦丁。
本发明具有以下有益效果：
1、与常规的化学杀虫剂控制烟粉虱数量相比，本发明通过有效抑制烟粉虱胞内共生细菌的含量来控制烟粉虱，防控思路新且针对性强，且不会带来害虫对农药的抗药性以及农药残毒等问题；
2、与化学杀虫剂防治烟粉虱相比，本发明利用芦丁进行控制，大大提高了烟粉虱防治的无公害控制水平，有效减少环境污染，具有良好的应用前景及研究意义。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
采用营养液饲喂法对烟粉虱进行芦丁处理。将芦丁(标准品，Sigma公司产品)溶解于1％的乙醇(体积比)溶液中配成母液，然后再与30％蔗糖溶液混合，配置成60mg/L芦丁的营养液，用于饲喂烟粉虱，共饲喂72h。应用两头玻璃管进行试验，将200μL营养液加入两头通的玻璃管的一端封口膜夹层中，烟粉虱放入管内，另一端用纱布封口。每管200头烟粉虱，每处理4管。
实施例2
采用营养液饲喂法对烟粉虱进行芦丁处理。将芦丁(标准品，Sigma公司产品)溶解于1％的乙醇(体积比)溶液中配成母液，然后再与30％蔗糖溶液混合，配置成20mg/L芦丁的营养液，用于饲喂烟粉虱，共饲喂72h。应用两头玻璃管进行试验，将200μL营养液加入两头通的玻璃管的一端封口膜夹层中，烟粉虱放入管内，另一端用纱布封口。每管200头烟粉虱，每处理4管。
实施例3
采用营养液饲喂法对烟粉虱进行芦丁处理。将芦丁(标准品，Sigma公司产品)溶解于1％的乙醇(体积比)溶液中配成母液，然后再与30％蔗糖溶液混合，配置成100mg/L芦丁的营养液，用于饲喂烟粉虱，共饲喂72h。应用两头玻璃管进行试验，将200μL营养液加入两头通的玻璃管的一端封口膜夹层中，烟粉虱放入管内，另一端用纱布封口。每管200头烟粉虱，每处理4管。
对比例1
以不含芦丁但含与60mg/L芦丁营养液中相同量乙醇的营养液作对照，共饲喂72h。其他条件均同实施例1。
实验例
1、烟粉虱胞内共生细菌含量的检测
将实施例1-实施例3以及对比例1中的烟粉虱饲喂72h后各管内存活的烟粉虱取出，用于共生细菌含量的检测。随机抽取每处理后的20头烟粉虱成虫为一个重复，利用天根生化科技(北京)有限公司的DNA提取试剂盒进行DNA的提取。烟粉虱共生细菌含量的检测应用了qPCR的方法，利用天根生化科技(北京)有限公司的2×SYBR Green PCR mix试剂盒，在ABI 7500荧光定量PCR仪上完成。检测烟粉虱原生共生细菌Portiera和次生共生细菌Hamiltonella，烟粉虱内参基因β-actin的定量PCR引物序列如表1所示
表1
Figure GDA0002132977820000041
qPCR的反应体系为：5μL 2×SYBR Green PCR mix，上下游引物各0.5μl(10μM)，2μL DNA和2μL ddH2O。
qPCR反应扩增程序为：95℃变性5分钟，95℃变性30秒，55℃退火30秒,72℃延伸20秒，共40个循环。
应用2-ΔCt方法对烟粉虱胞内共生细菌的相对含量进行分析，每个实施例设置3个生物学重复，烟粉虱胞内共生细菌相对含量数据采用平均数±标准误来表示。应用SPSS软件并采用Tukey法对芦丁抑制烟粉虱胞内共生细菌的含量进行差异显著性统计分析，显著性检验水平P<0.05。
2、芦丁在降低烟粉虱存活率中的作用
将饲喂72h后各管内(实施例1-实施例3以及对比例1)存活的烟粉虱转移至番茄上进行生测。将夹叶笼夹在番茄叶片背面，每个夹叶笼放20头饲喂过芦丁的烟粉虱(10雌10雄)，每个夹叶笼作为一个重复，每处理10个生物学重复。统计烟粉虱在番茄上取食7天后的存活率。应用SPSS软件并采用Tukey法对芦丁降低烟粉虱存活率的效果进行差异显著性统计分析，显著性检验水平P<0.05。
3、烟粉虱胞内共生细菌含量以及烟粉虱存活率的结果如表2所示。
表2-芦丁处理对烟粉虱胞内共生细菌含量和存活率的影响
Figure GDA0002132977820000051
注：表中数据为平均值±标准误，同列不同小写字母表示经Tukey法检验后在0.05水平上差异显著。
(1)由表2可知，烟粉虱成虫在取食营养液前，其胞内原生共生细菌Portiera和次生共生细菌Hamiltonella的相对含量分别为22.3±2.8和3.8±0.3，经不含芦丁营养液取食72h后，其胞内原生共生细菌Portiera和次生共生细菌Hamiltonella的相对含量分别为20.6±2.2和3.6±0.2，两者差异不显著，而取食含60mg/L芦丁营养液(实施例1)后，烟粉虱胞内原生共生细菌Portiera和次生共生细菌Hamiltonella的相对含量分别为12.8±1.4和1.7±0.08，均极显著低于取食营养液前和取食不含芦丁营养液处理组烟粉虱的胞内共生细菌含量(P<0.001)。实施例1-实施例3均可显著抑制其胞内共生细菌的含量，其中实施例1为最佳实施例。
(2)由表2可知，烟粉虱成虫不取食和取食不含芦丁营养液72h后，转移至番茄上7天后的存活率分别为85％±3.6％和82.6％±3.2％，两者差异不显著，而取食含60mg/L芦丁营养液的烟粉虱转移至番茄上7天后的存活率为58.2％±2.4％，显著低于不取食和取食不含芦丁营养液处理组烟粉虱的存活率(P<0.05)。实施例1-实施例3可降低其在番茄上的存活率，其中实施例1为最佳实施例。
综上所述，研究发现芦丁处理烟粉虱后可显著抑制其胞内共生细菌的含量；可显著降低其在番茄上的存活率。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Figure GDA0002132977820000071
Figure GDA0002132977820000081
序列表
<110> 长江大学
<120> 芦丁在防治烟粉虱中的应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tagtccacgc tgtaaacg 18
<210> 2
<211> 16
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
aggcaccctt ccatct 16
<210> 3
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gcatcgagtg agcacagtt 19
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tatcctctca gacccgctaa 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
tcttccagcc atccttcttg 20
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
cggtgatttc cttctgcatt 20

Claims (2)

1.一种防治烟粉虱的方法，其特征在于，所述方法包括：
S1、将芦丁溶解于体积比为1% 的乙醇溶液中配成母液；
S2、将所述母液与所述30%蔗糖溶液混合，配置成20mg/L~100mg/L芦丁的营养液；
S3、将所述营养液饲喂烟粉虱。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述饲喂时间为72h。
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