CN110146476A - 一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法和检测试纸 - Google Patents

一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法和检测试纸 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法,包括步骤一、制备浓度为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;步骤二、获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;步骤三、测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入浓度为100.0μM的四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度;本发明还公开了检测高氯酸根离子的检测试纸;该发明利用四苯基高氯酸钾的超高量子产率的微晶瞬态磷光,快捷、灵敏且定量的检测水溶液和固体基质中高氯酸根离子浓度。

Description

一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法和 检测试纸
技术领域
本发明涉及化学物质的理化分析领域,特别是涉及一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法和检测试纸。
背景技术
高氯酸根是来自高氯酸盐的工业和商业应用的重要的污染物,其对水质的污染也日益得到广泛关注。它是一种易溶于水、易迁移且持久性的有毒污染物,极易污染地下水等饮用水源,若长期饮用高氯酸根离子污染后的水则会妨碍甲状腺吸收碘的功能,阻碍人体、尤其是大脑组织的正常生长与发育,从而危害人体健康。同时,作为一种危害性污染物,高氯酸根离子经常会在植物体内富集,导致植物生长缓慢、死亡。因此对于环境和生物样品中高氯酸根离子检测的问题就显得尤为重要,迫切需要发展有效灵敏的检测方法来定量检测环境及生物体内的高氯酸根离子。目前,常用的检测高氯酸根离子的方法主要有离子色谱法和离子色谱一质谱联用法等,该类检测方法费力耗时。传统的荧光技术检测阴离子,通常基于荧光“关闭”而不是“打开”,重金属离子竞争荧光猝灭使其灵敏度降低,在实际应用及快速检验试纸条的构建中有很大的局限性。
专利号为ZL2014100403869的发明专利中公开了一种检测食品中高氯酸根离子的试剂盒及其测定方法,该发明中采用固相萃取的净化方法来分离食品中的高氯酸根离子,再配合质谱法计算获得高氯酸根离子的浓度,虽然精确度较高,但是成本高,需要投入较多的设备,使用不够快捷方便。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法,该发明利用四苯基高氯酸钾(以下简称TPPClO4)的超高量子产率的微晶瞬态磷光,快捷、灵敏且定量的检测水溶液和固体基质中高氯酸根离子浓度。
为解决此技术问题,本发明的技术方案是:一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法,包括以下步骤:
步骤一、制备浓度为0.1M的四苯基氯化鏻(以下简称四苯基氯化鏻)测试溶液;
首先在pH值为7.4的HEPES缓冲液加入中四苯基氯化鏻,制备四苯基氯化鏻为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
步骤二、获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
将浓度分布在0.0至100.0μM范围内多种高氯酸根离子加入至四苯基氯化鏻测试溶液中,测试溶液中生成沉淀微晶四苯基高氯酸钾;
用氙弧灯在330nm激发下记录每一高氯酸根离子浓度对应的测试液混合物的磷光发光光谱获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
步骤三、测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入浓度为100.0μM的四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度。
优选待测浓度高氯酸根离子溶液的分布范围为3.3~60.0μM。本发明在3.3~60.0μM范围内,所测得的磷光发光强度与ClO4–浓度之间具有良好的线性关系,定量测量获得的高氯酸根离子浓度更加准确。
本发明的目的在于提供一种固体基质室温磷光的高氯酸离子检测试纸,该发明对高氯酸离子的检测有很高的选择性,不会受到其它常见阴离子干扰,对高氯酸离子的高特异性保证了在实际样品中的应用。
该试纸条基于四苯基高氯酸钾的超高量子产率的微晶瞬态磷光,建立了水溶液和固体基质中高氯酸根离子的超灵敏检测方法,该试纸条对高氯酸离子的检测不仅有高度特异性,而且可以实现以发光开启方式来进行高氯酸离子的时间门控测定。
为解决此技术问题,本发明的技术方案是:一种固体基质室温磷光的高氯酸离子检测试纸,用滤纸制成的试纸条在浓度为0.2M四苯基氯化鏻溶液中浸泡一分钟以上,在室温下干燥得到试纸条。
本发明的目的在于提供一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,该发明可以有效避免复杂基质的自荧光干扰,检测快捷、准确。
为解决此技术问题,本发明的技术方案是:一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,包括以下步骤
步骤一、制备浓度为0.1M的自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液;
首先在pH值为7.4的HEPES缓冲液加入中四苯基氯化鏻和人血清,制备具有自荧光复杂基质的浓度为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
步骤二、获得复杂基质中磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
将浓度分布在0.0至120.0μM范围内多种高氯酸根离子加入至自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液中,测试溶液中生成沉淀微晶四苯基高氯酸钾;
采用μF2微秒闪光灯在330nm激发下记录每一高氯酸根离子浓度对应的测试液混合物延迟10μS的磷光发光光谱,获得复杂基质中延迟10μS磷光发光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
步骤三、检测待测高氯酸根离子浓度;
测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度。
优选自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液中加入血清的体积是仅加入有四苯基氯化鏻的HEPES缓冲液体积的1/100。
优选步骤三至少重复三次。多次测量,获得准确的高氯酸根离子浓度。以具有强蓝色自荧光的人血清为典型实例,评价了ClO4 的时间门控发光分析法。在应用5.0ms的延迟时间之后,随ClO4 的浓度的逐渐增加,相应血清样品的PL光谱被记录下来,因为在这样的条件下,来自自体荧光的干扰几乎完全消除。随着ClO4 浓度的增加,光致发光强度逐渐增强,在0.1~120.0μM范围内建立了较宽的线性范围。
优选可检测出的高氯酸根离子浓度范围是0.1~120.0μM。
通过采用上述技术方案,本发明的有益效果是:
一、本发明利用TPPCl可溶于水,TPPClO4在水溶液中高度不溶,从水中沉淀时以微晶形式存,且TPPClO4的高量子产率使得TPPCl能够作为水溶液中高氯酸盐离子的磷光开启分子探针;在固定浓度的TTPCl溶液中加入不同量的ClO4 时,磷光强度随着逐渐增加,其中随着加入TTPCl溶液中高氯酸盐离子的浓度的提高,TPPClO4微晶的形成量增加。由于TPPClO4晶体不仅具有超亮的瞬态磷光,而且在停止辐照后还具有等亮的余辉,其超高磷光量子产率为0.56。因此通过测量与高氯酸根离子生成沉淀TPPClO4的磷光发光强度得到加入TTPCl溶液中的浓度;本发明具有高灵敏度、选择性好且测试快捷方便,检测高氯酸根离子浓度的成本较低;
二、本发明利用含有四苯基膦(TPP)阳离子的有机离子晶体可以通过阴离子的改变实现瞬态和持久室温磷光的调控,同时增强TPPClO4的瞬态和持续磷光使体内高氯酸盐的灵敏检测和成像成为可能;高氯酸根离子触发的有机磷光晶体的明亮磷光使得能够以时间门控的方式实现高氯酸离子的高度特异性测定,以避免复杂基质的自体荧光干扰。四苯基高氯酸钾(TPPClO4)的超高量子产率的微晶瞬态磷光使我们能够在试纸条等固体衬底的基础上构建具有高灵敏度和选择性的高氯酸离子检测试纸条;
三、本发明中试纸条基于TPPClO4的超高量子产率的微晶瞬态磷光,建立了水溶液和固体基质中高氯酸根离子的超灵敏检测方法,该试纸条对高氯酸离子的检测不仅有高度特异性,而且可以实现以发光开启方式来进行高氯酸离子的时间门控测定。检测试纸条对高氯酸根离子的检测有高的灵敏度,且检测过程更加方便、快捷,更有利于实际的应用。该测试条对高氯酸离子的检测有很高的选择性,不会受到其它常见阴离子干扰,对高氯酸离子的高特异性保证了在实际样品中的应用;
四、本发明中制备含有一定量TPPCl简易试纸条测定ClO4 ,随着ClO4 溶液的连续加入,测试条的PL强度逐渐增强,并且根据其在PL强度与ClO4 量之间的校准曲线,检测极限非常低,具体数值为5.0ng;甚至用肉眼也能从试纸条上的蓝色磷光中很容易地识别出非常少量的ClO4 低至25.0ng,并且试纸条对ClO4 的检测也表现出了优异的选择性。
五、本发明中TPPClO4微晶的长寿命达到3.5μs,利用这一特点可检验具有自荧光复杂基体水溶液中高氯酸盐离子浓度,通过的时间门控发光检测方法;通过延迟10μS获得测试溶液中TPPClO4的荧光强度,从而避免了血清荧光光谱被记录下来,来自自体荧光的干扰几乎完全消除,所获得的明亮的蓝色磷光来源于TPPClO4,随着ClO4 浓度的增加,光致发光强度逐渐增强,在0.1~120.0μM范围内建立了较宽的线性范围;因此在复杂基质中本发明仍具有快捷准确的检测特点。
从而实现本发明的上述目的。
附图说明
图1、TPPClO4晶体的磷光激发和发射光谱,插图为四苯基鏻高氯酸盐晶体在紫外灯下的磷光照片;
图2、TPPClO4晶体的时间分辨磷光衰减曲线。拟合寿命为2.8微秒;
图3、TPPClO4沉淀微晶的磷光激发和发射光谱,插图为其在紫外灯下的磷光照片;
图4、TPPClO4沉淀微晶的时间分辨磷光衰减曲线;拟合寿命为3.5微秒;
图5、加入0.0~100.0μM不同量的高氯酸根离子,TPPCl溶液(100.0μM)的PL光谱变化;
图6、磷光强度与加入高氯酸根离子浓度在3.3-60.0μM间的标准曲线。
图7、高氯酸根离子的选择性实验。字母a-o分别表示NO3 ,PO4 3–,CO3 2–,CH3CO2 ,SO4 2–,SO3 2–,S2O3 2–,S2–,ClO3 ,IO3 ,F,Cl,Br,I和ClO4 (100.0μM);
图8、加入0.0~120.0μM不同量的高氯酸根离子,含有TPPCl(100.0μM)的血清溶液的PL光谱变化;
图9、血清复杂基质中磷光强度与加入高氯酸根离子浓度在0.5-120.0μM间的标准曲线;
图10、加入0.0~15.0μg不同量的高氯酸根离子,含有TPPCl试纸条的PL光谱变化;
图11、试纸条上磷光强度与加入高氯酸根离子浓度在0.0~7.5μg间的标准曲线;
图12、加入0.0~7.5μg不同量的高氯酸根离子,含有TPPCl试纸条的磷光照片;
图13、在试纸条上加入不同阴离子的磷光照片。数字1-14分别表示NO3 ,PO4 3–,CO3 2–,CH3CO2 ,SO4 2–,SO3 2–,S2O3 2–,S2–,ClO3 ,IO3 ,F,Cl,Br,I和ClO4 (15.0μg)。
具体实施方式
为了进一步解释本发明的技术方案,下面通过具体实施例来对本发明进行详细阐述。
实施例1
本实施例公开一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法,包括以下步骤:
步骤一、制备浓度为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
首先在pH值为7.4的HEPES缓冲液加入中四苯基氯化鏻,制备四苯基氯化鏻为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
步骤二、获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
将浓度分布在0.0至100.0μM范围内多种高氯酸根离子加入至四苯基氯化鏻测试溶液中,测试溶液中生成沉淀微晶四苯基高氯酸钾;
用氙弧灯在330nm激发下记录每一高氯酸根离子浓度对应的测试液混合物的磷光发光光谱获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
步骤三、测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入浓度为100.0μM的四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度。TPPClO4晶体的时间分辨磷光激发和发射光谱以及时间分辨磷光衰减曲线见图1至图4所示;
浓度为100.0μM TTPCl溶液中加入不同量的ClO4 时磷光强度的逐渐增加,如图5,其中随着高氯酸盐离子的连续引入,TPPClO4微晶的形成量增加。在3.3~60.0μM范围内,发现PL强度与ClO4 浓度之间具有良好的线性关系,如图6所示,三个时间标准偏差的检测限为0.08μM。
对高氯酸离子的选择性试验如下进行:
在HEPES缓冲液中,将每种选定的阴离子100.0μM如NO3 ,PO4 3–,CO3 2-,CH3CO2 ,SO4 2–,SO3 2–,S2O3 2–,S2–,ClO3 ,IO3 ,F,Cl,Br和I分别加入到0.1M的TPPCl溶液中,然后用荧光光谱仪在430nm发射下对得到的溶液进行监测。其他14种常见的阴离子被引入到同样的TPP:Cl溶液中没有产生响应,因为这些阴离子在这种条件下不会产生发光沉淀,如图7所示。
实施例2
本实施例公开一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,
包括以下步骤:
步骤一、制备浓度为0.1M的自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液;
首先在pH值为7.4的HEPES缓冲液加入中四苯基氯化鏻和人血清,制备具有自荧光复杂基质的浓度为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
步骤二、获得复杂基质中磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
将浓度分布在0.0至120.0μM范围内多种高氯酸根离子加入至自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液中,测试溶液中生成沉淀微晶四苯基高氯酸钾;
采用μF2微秒闪光灯在330nm激发下记录每一高氯酸根离子浓度对应的测试液混合物延迟10μS的磷光发光光谱,获得复杂基质中延迟10μS磷光发光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
步骤三、检测待测高氯酸根离子浓度;
测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度。
优选自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液中加入血清的体积是仅加入有四苯基氯化鏻的HEPES缓冲液体积的1/100。
优选步骤三至少重复三次。
优选可检测出的高氯酸根离子浓度范围是0.1~120.0μM。
所有的检测重复至少三次。以具有强蓝色自荧光的人血清为典型实例,评价了ClO4 的时间门控发光分析法。在应用10μS的延迟时间之后,随ClO4 的浓度的逐渐增加,相应血清样品的PL光谱被记录下来,因为在这样的条件下,来自自体荧光的干扰几乎完全消除。随着ClO4 浓度的增加,光致发光强度逐渐增强,在0.1~120.0μM范围内建立了较宽的线性范围,见图8和9。
实施例3
本实施例公开一种固体基质室温磷光的高氯酸离子检测试纸,用滤纸制成的试纸条在浓度为0.2M四苯基氯化鏻溶液中浸泡一分钟以上,在室温下干燥得到试纸条。
用滤纸制成的50条试纸条在浓度为0.2M TPPCl溶液中浸泡1分钟,然后在室温下干燥得到试纸条。将0.0–10.0μg范围内的一系列不同量的高氯酸根离子分别滴在试纸上,在370nm激发光下记录所得试纸的发光光谱,干燥后在紫外灯下拍摄。选择性试验根据上述步骤进行的,加入不同的阴离子,包括NO3 ,PO4 3–,CO3 2-,CH3CO2 ,SO4 2–,SO3 2–,S2O3 2–,S2–,ClO4 ,IO3 ,F,Cl,Br,I和ClO4 ,如图10至13所示,在试验条上添加的量为10.0μg。由于明亮的蓝色磷光来源于TPP ClO4的固体形式,因此可以制备含有一定量的TPP Cl的简易试纸来测定ClO4 。随着ClO4 溶液的连续加入,测试条的PL强度逐渐增强,并且根据其在PL强度与ClO4 量之间的校准曲线,可以达到非常低的检测极限(5.0ng)。甚至用肉眼也能从试纸上的蓝色磷光中很容易地识别出非常少量的ClO4 低至25.0ng,并且试纸对ClO4 的检测也表现出了优异的选择性。

Claims (7)

1.一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法,其特征在于:包括以下步骤:
步骤一、制备浓度为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
首先在pH值为7.4的HEPES缓冲液加入中四苯基氯化鏻,制备四苯基氯化鏻为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
步骤二、获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
将浓度分布在0.0至100.0μM范围内多种高氯酸根离子加入至四苯基氯化鏻测试溶液中,测试溶液中生成沉淀微晶四苯基高氯酸钾;
用氙弧灯在330nm激发下记录每一高氯酸根离子浓度对应的测试液混合物的磷光发光光谱获得磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
步骤三、测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入浓度为100.0μM的四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度。
2.如权利要求1所述的一种基于聚集诱导发光定量检测高氯酸根离子浓度的方法,其特征在于:待测浓度高氯酸根离子溶液的分布范围为3.3~60.0μM。
3.一种固体基质室温磷光的高氯酸离子检测试纸,其特征在于:用滤纸制成的试纸条在浓度为0.2M四苯基氯化鏻溶液中浸泡一分钟以上,在室温下干燥得到试纸条。
4.一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,其特征在于:
步骤一、制备浓度为0.1M的自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液;
首先在pH值为7.4的HEPES缓冲液加入中四苯基氯化鏻和人血清,制备具有自荧光复杂基质的浓度为0.1M的四苯基氯化鏻测试溶液;
步骤二、获得复杂基质中磷光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
将浓度分布在0.0至120.0μM范围内多种高氯酸根离子加入至自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液中,测试溶液中生成沉淀微晶四苯基高氯酸钾;
采用μF2微秒闪光灯在330nm激发下记录每一高氯酸根离子浓度对应的测试液混合物延迟10μS的磷光发光光谱,获得复杂基质中延迟10μS磷光发光强度与高氯酸根离子浓度之间经过线性拟合获得的标准曲线;
步骤三、检测待测高氯酸根离子浓度;
测量待测浓度高氯酸根离子溶液加入复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液产生沉淀微晶后的磷光发光强度,将获得的磷光发光强度与步骤二获得的标准曲线对应,获得待测高氯酸根离子溶液的浓度。
5.根据权利要求4所述的一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,其特征在于:
自荧光复杂基质四苯基氯化鏻测试溶液中加入血清的体积是仅加入有四苯基氯化鏻的HEPES缓冲液体积的1/100。
6.根据权利要求4所述的一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,其特征在于:
步骤三至少重复三次。
7.根据权利要求4所述的一种基于时间门控检测具有自荧光复合基质中高氯酸根离子浓度定量检测的方法,其特征在于:
可检测出的高氯酸根离子浓度范围是0.1~120.0μM。
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