CN110129449A - 一种用于检测ddx11基因突变的试剂盒及其专用捕获探针组 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测DDX11基因突变的试剂盒及其应用。本发明的试剂盒包括用于检测DDX11基因突变的探针组，所述探针组由探针1‑探针36组成。本发明的试剂盒不仅可用于检测肿瘤基因组层面的DDX11体细胞突变和胚系突变，也可用于血液肿瘤患者，特别是急性髓系细胞白血病患者的辅助诊断、微小残留病监测和预后的评估等，且本发明试剂盒的检测方法简便、灵敏，将在医学检测领域发挥重要作用。

Description

一种用于检测DDX11基因突变的试剂盒及其专用捕获探针组

技术领域

本发明属于医学检测技术领域，具体涉及一种用于检测DDX11基因突变的试剂盒及其专用捕获探针组。

背景技术

尽管急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia，AML)患者经过标准诱导方案化疗可以获得70％～80％的完全缓解率，但仅50％患者能被治愈。部分患者即使在强烈的诱导化疗及标准的巩固治疗甚至异基因造血干细胞移植后仍面临着疾病的进展和/或复发。分子诊断技术的发展在AML的精准分型和个体化治疗中起了巨大推动作用。但尽管如此，AML患者的临床预后仍然展示出巨大的异质性，复发仍然是临床医生及AML患者所共同面临的挑战之一，而新型生物学标记物的发现是实现AML个体化诊疗的必经之路。

DDX11(DEAD/H-box helicase 11)基因定位于染色体12p11，编码一种ATP依赖性的DNA解螺旋酶，参与多种生物过程，如DNA复制、DNA修复和异染色质组织以及核糖体RNA合成等，在维持基因组稳定性中起到重要作用。DDX11基因缺陷与许多影响基因组稳定性的疾病有关。人类DDX11基因的突变与华沙破裂综合征这一罕见的遗传疾病相关，伴随广泛的染色体断裂和染色单体凝聚缺陷。此外，越来越多的证据表明DDX11基因在肿瘤的发生发展中存在重要的作用。Bhattacharya等报道在黑色素瘤从非侵袭性进展到高度恶性的侵袭性黑色素瘤的过程中，DDX11基因的表达量显著增高，通过DDX11-特异性si-RNA敲低该基因在黑色素瘤细胞系WM1158中的表达，观察到黑色素瘤细胞增殖受抑，凋亡细胞增多。Farina A和Parish JL等也采用DDX11靶向的si-RNA干扰其在Hela细胞系中的表达，观察到敲低组中Hela细胞分裂过程中染色单体凝聚严重缺陷。但目前尚未见DDX11在血液肿瘤中的相关研究报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供用于检测DDX11基因突变的探针组。

本发明提供的用于检测DDX11基因突变的探针组由探针1-探针36组成：

所述探针1为序列表中序列1所示的单链DNA分子；

所述探针2为序列表中序列2所示的单链DNA分子；

所述探针3为序列表中序列3所示的单链DNA分子；

所述探针4为序列表中序列4所示的单链DNA分子；

所述探针5为序列表中序列5所示的单链DNA分子；

所述探针6为序列表中序列6所示的单链DNA分子；

所述探针7为序列表中序列7所示的单链DNA分子；

所述探针8为序列表中序列8所示的单链DNA分子；

所述探针9为序列表中序列9所示的单链DNA分子；

所述探针10为序列表中序列10所示的单链DNA分子；

所述探针11为序列表中序列11所示的单链DNA分子；

所述探针12为序列表中序列12所示的单链DNA分子；

所述探针13为序列表中序列13所示的单链DNA分子；

所述探针14为序列表中序列14所示的单链DNA分子；

所述探针15为序列表中序列15所示的单链DNA分子；

所述探针16为序列表中序列16所示的单链DNA分子；

所述探针17为序列表中序列17所示的单链DNA分子；

所述探针18为序列表中序列18所示的单链DNA分子；

所述探针19为序列表中序列19所示的单链DNA分子；

所述探针20为序列表中序列20所示的单链DNA分子；

所述探针21为序列表中序列21所示的单链DNA分子；

所述探针22为序列表中序列22所示的单链DNA分子；

所述探针23为序列表中序列23所示的单链DNA分子；

所述探针24为序列表中序列24所示的单链DNA分子；

所述探针25为序列表中序列25所示的单链DNA分子；

所述探针26为序列表中序列26所示的单链DNA分子；

所述探针27为序列表中序列27所示的单链DNA分子；

所述探针28为序列表中序列28所示的单链DNA分子；

所述探针29为序列表中序列29所示的单链DNA分子；

所述探针30为序列表中序列30所示的单链DNA分子；

所述探针31为序列表中序列31所示的单链DNA分子；

所述探针32为序列表中序列32所示的单链DNA分子；

所述探针33为序列表中序列33所示的单链DNA分子；

所述探针34为序列表中序列34所示的单链DNA分子；

所述探针35为序列表中序列35所示的单链DNA分子；

所述探针36为序列表中序列36所示的单链DNA分子。

上述探针组中，所述每条探针均标记生物素。具体的，所述每条探针的5’端均标记生物素。

本发明的另一个目的是提供用于检测DDX11基因突变的试剂盒。

本发明提供的用于检测DDX11基因突变的试剂盒包括上述探针组。

进一步的，所述试剂盒还可包括构建文库所需的试剂和/或PCR扩增所需试剂。所述构建文库所需的试剂具体可包括末端修复所需试剂、加A尾所需试剂。所述PCR扩增所需试剂具体可为KAPA HiFi HotStart ReadyMix(2X)试剂盒(KAPA，KK2602)中的试剂。

更进一步的，所述试剂盒还可包括基因组DNA提取所需试剂和/或纯化试剂。

本发明还有一个目的是提供上述探针组或上述试剂盒或检测DDX11基因是否发生突变的物质的新用途。

本发明提供了上述探针组或上述试剂盒在检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异中的应用。

本发明还提供了上述探针组或上述试剂盒在制备检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异的产品中的应用。

本发明还提供了上述探针组或上述试剂盒在检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病中的应用。

本发明还提供了上述探针组或上述试剂盒在制备检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品中的应用。

本发明还提供了检测DDX11基因是否发生突变的物质在诊断或辅助诊断急性髓系白血病中的应用。

本发明还提供了检测DDX11基因是否发生突变的物质在制备诊断或辅助诊断急性髓系白血病的产品中的应用。

本发明还提供了检测DDX11基因是否发生突变的物质在检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病中的应用。

本发明还提供了检测DDX11基因是否发生突变的物质在制备检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品中的应用。

DDX11基因作为靶标在急性髓系白血病诊断中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明还有一个目的是提供检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品。

本发明提供的检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品包括检测DDX11基因是否发生突变的物质。

上述应用或产品中，所述检测DDX11基因是否发生突变的物质为上述探针组。

上述应用或产品中，若待测患者DDX11基因发生突变或变异，则待测患者患有或候选患有急性髓系白血病。所述突变或变异的类型具体可为下述实施例的表2中所示。

本发明的最后一个目的是提供一种检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异的方法。

本发明提供的检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异的方法包括如下步骤：

1)将待测样本的基因组DNA进行片段化后，构建gDNA文库；

2)用上述探针组与所述gDNA文库杂交，得到杂交产物；

3)对所述杂交产物进行测序，根据测序结果分析待测样本中DDX11基因的突变或变异情况。

上述方法中，所述1)中，所述片段化为将基因组DNA打断成长度为200-300bp的片段。

所述gDNA文库的构建方法可按照如下步骤进行：将片段化的DNA片段进行末端修复；然后将“A”碱基加入到DNA片段的3’末端；最后在DNA片段两端分别连接上带有特异index的接头，得到连接产物；纯化连接产物，并对纯化后的连接产物进行PCR扩增，得到带有特异index的DNA文库。

所述2)中，所述探针组中的各探针的摩尔量相同。

所述2)或所述3)之间还包括如下步骤：使用带链霉素的磁珠捕获杂交产物中的目的DNA片段，并采用KAPA HiFi HotStart ReadyMix(2X)试剂盒对捕获的DNA片段进行PCR线性扩增，扩增产物经质检合格后即可进行测序。

所述3)中，所述测序为利用Illumina HiSeq平台进行PE150测序。

上述探针组或试剂盒或应用或产品中，所述DDX11基因突变可为DDX11体细胞突变和DDX11胚系突变。所述DDX11基因突变包括单个核苷酸变异、小片段插入缺失和拷贝数变异。

上述探针组或试剂盒或应用或产品中，所述待测样本可为来源于待测患者的外周血或骨髓。

上述探针组或试剂盒或应用或产品中，所述DDX11基因序列如序列表的序列37所示，所述DDX11基因编码区序列如序列表的序列38所示，所述DDX11基因编码的蛋白的氨基酸序列如序列表的序列39所示。

上述探针组或试剂盒或应用或产品中，所述DDX11基因突变或变异具体可为如下(1)-(14)中的至少一种：

(1)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第1222位核苷酸由G突变为A；

(2)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第947位核苷酸由C突变为T；

(3)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第637位核苷酸由A突变为G；

(4)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第572位核苷酸由A突变为C；

(5)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第1087位核苷酸由C突变为A；

(6)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第2146位核苷酸由G突变为A；

(7)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第2291位核苷酸由G突变为T；

(8)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第2476位核苷酸由C突变为T；

(9)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第545位核苷酸由C突变为G；

(10)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第697位核苷酸由A突变为G；

(11)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第821位核苷酸由G突变为A；

(12)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第487-489位核苷酸缺失；

(13)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第641-642位核苷酸中间插入GGATGA(NM_001257144(DDX11):c.641_642insGGATGA(p.V214delinsVDE))；

(14)野生型DDX11基因(序列表的序列38)第781位核苷酸G缺失(NM_001257144(DDX11):c.781delG(p.G261fs))。

本发明提供了一种用于检测DDX11基因突变的试剂盒，所述试剂盒不仅可以用于检测肿瘤基因组层面的体细胞突变和胚系突变，且检测方法简便、灵敏，还可用于血液肿瘤患者(特别是AML患者)的辅助诊断、微小残留病监测和预后的评估等，将在医学检测领域发挥重要作用。

附图说明

图1为DDX11基因部分突变类型的Sanger测序验证结果。图1A为样本0951D：NM_001257144(DDX11):c.487_489del(p.163_163del)，Exon5，del GAA。图1B为样本338B：NM_001257144(DDX11):c.641_642insGGATGA(p.V214delinsVDE)，Exon6，insGGATGA。图1C为样本2798E：NM_001257144(DDX11):c.781delG(p.G261fs)，Exon7，del G。图1D为样本1032B：NM_001257144(DDX11):c.947C>T(p.P316L)，Exon9，C>T。图1E为样本1682B：NM_001257144(DDX11):c.1087C>A(p.Q363K)，Exon9，C>A。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

实施例1、检测DDX11基因突变的试剂盒及其检测方法

一、检测DDX11基因突变的试剂盒

1、探针序列

本发明的用于检测DDX11基因突变的试剂盒中包括36个探针序列，36个探针序列的名称及具体序列如表1所示。本发明的36条探针可覆盖DDX11基因的全部编码序列。

表1、本发明的检测试剂盒中探针序列

2、目标区域检测原理

将待测样本的基因组DNA经Covaris超声破碎仪随机打断成长度为200-300bp的片段，末端修复和加A尾后在片段两端分别连接上接头制备DNA文库。将步骤1中的探针进行生物素标记，然后将带有特异index的DNA文库与生物素标记的探针进行液相杂交，再使用带链霉素的磁珠将外显子捕获下来，经PCR线性扩增后进行文库质检，合格即可进行测序。后续利用Illumina HiSeq平台进行PE150测序，得到的测序数据利用相关生物信息学软件检出目标基因DDX11突变或变异情况。

二、检测DDX11基因突变的方法

(一)检测方法

1、检测样本

本实施例中的检测样本为310例来源于北京大学人民医院的急性髓系白血病(AML)患者，所有患者均经临床诊断确定，诊断标准依据世界卫生组织新的分型标准，且患者知情同意。

2、DNA样品的提取及检测

分别提取上述患者的外周血或骨髓的基因组DNA，并对DNA样品进行检测。检测主要包括3种方法：

1)毛细管电泳分析DNA降解程度；

2)Nanodrop检测DNA的纯度(OD260/OD280比值)；

3)Qubit对DNA浓度进行精确定量。

其中OD260/OD280值在1.8～2.0之间，DNA浓度≥20ng/μl，总量1μg以上的DNA样品被用来建库。

3、文库构建及目标基因捕获

(1)对基因组DNA进行片段化处理，将基因组DNA经Covaris超声破碎仪随机打断成长度为200-300bp的片段；

(2)对步骤(1)获得的片段化的双链DNA进行末端修复；然后将“A”碱基加入到DNA片段的3’末端；最后在DNA片段两端分别连接上带有特异index的接头，得到连接产物；纯化连接产物以除去未连接的接头序列，采用KAPA HiFi HotStart ReadyMix(2X)试剂盒(KAPA，KK2602)对纯化后的连接产物进行PCR扩增，并纯化PCR产物，得到带有特异index的DNA文库；

(3)将表1中的各探针的5’端均进行生物素标记，得到生物素标记的探针。然后将带有特异index的DNA文库与生物素标记的探针进行液相杂交，捕获目的DNA片段；

(4)使用带链霉素的磁珠(Dynabeads^TM M-270Streptavidin，Invitrogen，65305)捕获杂交的目的DNA片段并分离纯化(Ampure XP beads，Beckman，A63882)，除去未结合的DNA片段；

(5)采用KAPA HiFi HotStart ReadyMix(2X)试剂盒(KAPA，KK2602)对捕获的DNA片段进行PCR扩增，并纯化PCR产物。

4、文库质检

文库构建完成后进行质量检测：先使用Qubit 4.0进行初步定量，随后使用Agilent 2100对文库的Insert size进行检测，Insert size符合预期后，使用Q-PCR方法对文库的有效浓度进行准确定量，以保证文库质量。

5、上机测序

库检合格后，根据文库的有效浓度及数据产出需求进行Illumina HiSeq PE150测序。PE150(Pair end 150bp)为高通量双端测序，每端各测150bp。在构建的小片段文库中插入DNA，即插入片段是高通量测序直接测序的片段。双端测序是将每条插入片段的两端进行测序的方法。

6、生物信息分析流程

测序结束获得原始测序序列(Raw Data)后，进入信息分析流程，流程可概括为三个主要阶段：

1)测序数据质量控制：主要通过对测序质量、测序错误率、数据量、比对率、覆盖率等进行统计，评估测序数据是否达到了质控标准，符合标准则进行后续的分析；

2)变异检测：将高质量的序列比对到人参考基因组(GRCH37)上，对比对数据进行质量校正和去除duplication，然后检测样本中的变异信息。利用GATK软件检测Germline胚系突变，利用MuTect2软件检测Somatic SNV以及Indel；

3)变异注释和过滤：采用Annovar软件对检测变异进行注释，包括基因、HGVS、人群频率、变异类型等。此外，需要对检出的变异进行过滤，保留对蛋白有影响(如错义突变，移码突变等)且在正常人群位点突变频率<1％的位点。

(二)检测结果

310例急性髓系白血病(AML)患者中共检出DDX11基因突变型患者23例，突变检出率为7.4％(23/310)，为首次在成人正常核型AML报道的高频突变基因。

23例DDX11突变阳性患者具体突变情况如下：

4例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第1222位核苷酸由G突变为A。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第408位氨基酸由V突变为M；

4例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第947位核苷酸由C突变为T。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第316位氨基酸由T突变为L；

3例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第637位核苷酸由A突变为G。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第213位氨基酸由R突变为G；

2例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第572位核苷酸由A突变为C。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第191位氨基酸由E突变为A；

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第1087位核苷酸由C突变为A。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第363位氨基酸由Q突变为K。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第2146位核苷酸由G突变为A。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第716位氨基酸由V突变为I。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第2291位核苷酸由G突变为T。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第764位氨基酸由G突变为V。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第2476位核苷酸由C突变为T。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第826位氨基酸由P突变为S。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第545位核苷酸由C突变为G。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第182位氨基酸由P突变为R。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第697位核苷酸由A突变为G。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第233位氨基酸由S突变为G。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第821位核苷酸由G突变为A。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第274位氨基酸由S突变为N。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第487-489位核苷酸缺失。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第163位氨基酸缺失。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第641-642位核苷酸中间插入GGATGA。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第214位氨基酸由V突变为VDE。

1例：与野生型DDX11基因的编码区(序列表的序列38)的区别在于：第781位核苷酸G缺失。与野生型DDX11蛋白的区别在于：第261位氨基酸G后发生移码突变。

表2展示了23例DDX11基因突变检出详情。

表2、DDX11基因在23个AML样本中检出突变情况

对23例突变患者所涉及的全部14种突变类型中的5种进行了Sanger测序验证。部分测序结果如图1所示。测序结果表明：本发明方法得到的检测结果与Sanger测序法得到的结果完全一致。说明本发明得到的DDX11基因突变检测结果是正确的。

上述结果表明：本发明的探针组可以有效检测出待测样本中的DDX11基因突变情况，在急性髓系白血病的辅助诊断中可发挥重要作用。

序列表

<110> 北京大学人民医院（北京大学第二临床医学院）

<120> 一种用于检测DDX11基因突变的试剂盒及其专用捕获探针组

<160> 39

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

catggctaat gaaacacaga aggttggtgc catccatttt ccttttccct tcacacccta 60

ttccatccag gaagacttca tggcagagct gtaccgggtt ttggaggctg gcaagattgg 120

<210> 2

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ggtgccatcc attttccttt tcccttcaca ccctattcca tccaggaaga cttcatggca 60

gagctgtacc gggttttgga ggctggcaag attgggatat ttgagagtcc aactggcact 120

<210> 3

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

ggggaagtcc ttaagtctta tttgtggggc cctctcttgg ctccgtgact ttgaacagaa 60

gaagcgtgaa gaagaggcac gactccttga aactggaact ggccccttac atgatgagaa 120

<210> 4

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

agatgaatcc ctgtgtctgt cttcttcctg cgaaggggct gcaggcaccc cgaggcctgc 60

tggagaaccg gcctgggtta ctcagtttgt gcagaagaaa gaagagaggg acctggtgga 120

<210> 5

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ctgtgtctgt cttcttcctg cgaaggggct gcaggcaccc cgaggcctgc tggagaaccg 60

gcctgggtta ctcagtttgt gcagaagaaa gaagagaggg acctggtgga ccgactaaag 120

<210> 6

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

ggcggagcag gccaggagga agcagcgaga agaacgcctg cagcagctgc agcacagggt 60

gcagctcaag tatgcagcca agcgcctggt gagcctcatt tcttgggggg caggattatg 120

<210> 7

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

gaggcaggaa gaagaagaaa gagagaatct cctccgcctc agcagggaga tgctagagac 60

aggcccggag gctgagcggc tggagcagct ggagtctggg gaggaggagc tggtcctcgc 120

<210> 8

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

cagcagggag atgctagaga caggcccgga ggctgagcgg ctggagcagc tggagtctgg 60

ggaggaggag ctggtcctcg ccgaatacga gagtgatgag gagaaaaagg tggcgagcag 120

<210> 9

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gagtggatga ggatgaggat gacctggagg aagaacacat aactaaggta acacaagtgt 60

cctcagctgg tgctgtgctg ggggtatagg ctgggctgtg cacccctggg gaggaggctg 120

<210> 10

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

gatttattac tgtagtcgga cacactccca gctggcccag tttgtgcatg aggtgaagaa 60

gagccccttt ggcaaggatg ttcggctggt ctcccttggc tcccggcagg taaacagtag 120

<210> 11

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

gaacctttgt gtaaatgaag acgtgaaaag cctaggttct gtgcagctta tcaacgaccg 60

ctgtgtggac atgcagagaa gcaggcacgg tagccactgg gaccatggtg tagccgcagg 120

<210> 12

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

gagaagaaga aaggagctga ggaggagaag ccaaagagga ggaggcagga gaagcaggca 60

gcctgcccct tctacaacca cgagcagatg ggccttctcc gggatgaggc cctggcagag 120

<210> 13

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

ggccttctcc gggatgaggc cctggcagag gtgaaggaca tggagcagct gctggccctt 60

gggaaggagg cccgggcctg tccctattac gggagccgcc ttgccatccc tgcagcccag 120

<210> 14

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

gctggtggtg ctgccctatc agatgctgct gcatgcggcc actcggcagg ccgcgggcat 60

ccggctgcag gaccaggtgg tgatcatcga cgaggcgcac aacctgatcg acaccatcac 120

<210> 15

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gcggccactc ggcaggccgc gggcatccgg ctgcaggacc aggtggtgat catcgacgag 60

gcgcacaacc tgatcgacac catcacgggc atgcacagcg tggaggtcag cggctcccag 120

<210> 16

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

gctctgccag gcccattccc agctgctgca gtacgtggag cgatacgggt gagatgtgac 60

cctctgaggt agtgggacag tcccttggtg gccccctgcg tgggcctctg agaggcaggc 120

<210> 17

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

ggaagcgttt gaaggccaag aacctgatgt acctgaagca gatcctgtat ttgctggaga 60

aattcgtggc tgtgctaggg ggtgagagcc tcgtccccct gctgaccccg ggcctgcaaa 120

<210> 18

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

gggaacatta agcaaaatcc caatacacag agtctgtcac agacaggtaa gagagttgcc 60

ctcagagggc ccagagctga tctgagccac ttccgagctt aaccctggga ctgaaacctg 120

<210> 19

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

gggacggagc tgaagaccat caacgacttt ctcttccaga gccagatcga caacatcaac 60

ctgttcaagg tagaggtttc cacctttcca cattccacat ccaatttcct tcctgtcacc 120

<210> 20

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

ggtgcagcga tactgtgaga agagcatgat cagcagaaag gtaactgctc ccatcttgtg 60

gtcctgaaca agacccagct gtgccccaac cccctgccct tgccatgctt tcctcccctg 120

<210> 21

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

gctctttgga ttcactgaac ggtacggagc agtgttctca tcccgggagc agcccaaact 60

ggctgggttt cagcaattcc tgcagagcct gcagcccagg acgactgaag gtgaggcagg 120

<210> 22

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

gctcttgcag cccctgcaga cgagagtcag gccagcaccc tgcgaccagc ttctccactg 60

atgcacatcc aaggcttcct ggcagctctc actacggcca accaggacgg cagggtcatc 120

<210> 23

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

ctgcagacga gagtcaggcc agcaccctgc gaccagcttc tccactgatg cacatccaag 60

gcttcctggc agctctcact acggccaacc aggacggcag ggtcatcctg agccgccaag 120

<210> 24

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

ggcagcctca gtcagagcac cctgaagttt ttgctcctga atccagctgt gcactttgcc 60

caagtggtga aggaatgccg ggcagtggtc attgcggggg gtaccatgca gccggtaagg 120

<210> 25

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

ggtgtctgac ttccggcagc agctgctggc ctgtgccggg gtggaagctg agcgcgtggt 60

ggagttttcc tgtggtgaga agctgtgccc agggtggggc aggctagagg tcaggttctg 120

<210> 26

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

ggtcacgtga tccctccaga caacatcctg cccctcgtca tctgcagcgg gatctccaac 60

cagccgctgg aattcacgtt ccagaaaaga gagctgcctc agatggtcag tcccagccag 120

<210> 27

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

gatggacgag gtgggtcgca ttctctgtaa cctgtgcggt gtggttcctg gaggggtggt 60

ctgtttcttc ccctcctacg agtacctgcg ccaggtccat gcccactggg agaagggtgg 120

<210> 28

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

ctgtgcggtg tggttcctgg aggggtggtc tgtttcttcc cctcctacga gtacctgcgc 60

caggtccatg cccactggga gaagggtggc ctgctgggcc gtctggctgc caggaagaag 120

<210> 29

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

gatattccag gaacctaaga gcgcacacca ggtggagcag gtgctgctgg catattccag 60

gtgcatccag gtgcgggcgt catgctgggc ttgggtctga gatcgtgtgg gggtggcagc 120

<210> 30

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

ggcctgtggc caggagagag gccaggtgac aggggccctg ctcctctctg tggttggagg 60

aaagatgagt gaagggatca acttctctga caacctaggc cggtaagtag tggttctgct 120

<210> 31

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

ggtgtgtggt gatggtgggc atgcccttcc ccaacatcag gtctgcagag ctgcaggaga 60

agatggccta cttggatcaa accctcgtga gtgaccccag tgtcacagag ggtgacagga 120

<210> 32

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

gagcccccgg ccaggcaccc ccagggaagg ctctggtgga gaacctgtgc atgaaggccg 60

tcaaccagtc cataggtgag cctggctgcc tccagctggg tggacagatg ggggctggag 120

<210> 33

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

ggcagggcca tcaggcacca gaaggatttt gccagcgtag tgctcctgga ccagcgatat 60

gcccggcccc ctgtcctggc caagctgccg gcctggatcc gagcccgtgt ggaggtcaaa 120

<210> 34

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

gtagtgctcc tggaccagcg atatgcccgg ccccctgtcc tggccaagct gccggcctgg 60

atccgagccc gtgtggaggt caaagctacc tttggccccg ccattgctgc tgtgcagaag 120

<210> 35

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

gtttcaccgg gagaagtcgg cctcttcctg atgggcaacc acaccactgc ctggcgccgt 60

gcccttcctt tgtcctgccc gctggagaca gtgtttgtcg tgggcgtggt ctgcggggat 120

<210> 36

<211> 120bp

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

gtctgcgggg atcctgttac aaaggtgaaa cccaggagga gagtgtggag tccagagtgc 60

tgccaggacc caggcacagg cgttagctcc cgtaggagaa aatgggggaa tcctgaatga 120

<210> 37

<211> 3823

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 37

tgcgcagcgg cgggggttgt tccggctgcc tttcactgag gggacccgcc agtttctaac 60

tcagtggcgt ttgccctgat tcccggggcc tggctttcag cgtagcaatt ctgccggcga 120

agaaggtcca tggctaatga aacacagaag gttggtgcca tccattttcc ttttcccttc 180

acaccctatt ccatccagga agacttcatg gcagagctgt accgggtttt ggaggctggc 240

aagattggga tatttgagag tccaactggc actgggaagt ccttaagtct tatttgtggg 300

gccctctctt ggctccgtga ctttgaacag aagaagcgtg aagaagaggc acgactcctt 360

gaaactggaa ctggcccctt acatgatgag aaagatgaat ccctgtgtct gtcttcttcc 420

tgcgaagggg ctgcaggcac cccgaggcct gctggagaac cggcctgggt tactcagttt 480

gtgcagaaga aagaagagag ggacctggtg gaccgactaa aggcggagca ggccaggagg 540

aagcagcgag aagaacgcct gcagcagctg cagcacaggg tgcagctcaa gtatgcagcc 600

aagcgcctga ggcaggaaga agaagaaaga gagaatctcc tccgcctcag cagggagatg 660

ctagagacag gcccggaggc tgagcggctg gagcagctgg agtctgggga ggaggagctg 720

gtcctcgccg aatacgagag tgatgaggag aaaaaggtgg cgagcagagt ggatgaggat 780

gaggatgacc tggaggaaga acacataact aagatttatt actgtagtcg gacacactcc 840

cagctggccc agtttgtgca tgaggtgaag aagagcccct ttggcaagga tgttcggctg 900

gtctcccttg gctcccggca gaacctttgt gtaaatgaag acgtgaaaag cctaggttct 960

gtgcagctta tcaacgaccg ctgtgtggac atgcagagaa gcaggcacga gaagaagaaa 1020

ggagctgagg aggagaagcc aaagaggagg aggcaggaga agcaggcagc ctgccccttc 1080

tacaaccacg agcagatggg ccttctccgg gatgaggccc tggcagaggt gaaggacatg 1140

gagcagctgc tggcccttgg gaaggaggcc cgggcctgtc cctattacgg gagccgcctt 1200

gccatccctg cagcccagct ggtggtgctg ccctatcaga tgctgctgca tgcggccact 1260

cggcaggccg cgggcatccg gctgcaggac caggtggtga tcatcgacga ggcgcacaac 1320

ctgatcgaca ccatcacggg catgcacagc gtggaggtca gcggctccca gctctgccag 1380

gcccattccc agctgctgca gtacgtggag cgatacggga agcgtttgaa ggccaagaac 1440

ctgatgtacc tgaagcagat cctgtatttg ctggagaaat tcgtggctgt gctagggggg 1500

aacattaagc aaaatcccaa tacacagagt ctgtcacaga cagggacgga gctgaagacc 1560

atcaacgact ttctcttcca gagccagatc gacaacatca acctgttcaa ggtgcagcga 1620

tactgtgaga agagcatgat cagcagaaag ctctttggat tcactgaacg gtacggagca 1680

gtgttctcat cccgggagca gcccaaactg gctgggtttc agcaattcct gcagagcctg 1740

cagcccagga cgactgaagc tcttgcagcc cctgcagacg agagtcaggc cagcaccctg 1800

cgaccagctt ctccactgat gcacatccaa ggcttcctgg cagctctcac tacggccaac 1860

caggacggca gggtcatcct gagccgccaa ggcagcctca gtcagagcac cctgaagttt 1920

ttgctcctga atccagctgt gcactttgcc caagtggtga aggaatgccg ggcagtggtc 1980

attgcggggg gtaccatgca gccggtgtct gacttccggc agcagctgct ggcctgtgcc 2040

ggggtggaag ctgagcgcgt ggtggagttt tcctgtggtc acgtgatccc tccagacaac 2100

atcctgcccc tcgtcatctg cagcgggatc tccaaccagc cgctggaatt cacgttccag 2160

aaaagagagc tgcctcagat gatggacgag gtgggtcgca ttctctgtaa cctgtgcggt 2220

gtggttcctg gaggggtggt ctgtttcttc ccctcctacg agtacctgcg ccaggtccat 2280

gcccactggg agaagggtgg cctgctgggc cgtctggctg ccaggaagaa gatattccag 2340

gaacctaaga gcgcacacca ggtggagcag gtgctgctgg catattccag gtgcatccag 2400

gcctgtggcc aggagagagg ccaggtgaca ggggccctgc tcctctctgt ggttggagga 2460

aagatgagtg aagggatcaa cttctctgac aacctaggcc ggtgtgtggt gatggtgggc 2520

atgcccttcc ccaacatcag gtctgcagag ctgcaggaga agatggccta cttggatcaa 2580

accctcagcc cccggccagg cacccccagg gaaggctctg gtggagaacc tgtgcatgaa 2640

ggccgtcaac cagtccatag gcagggccat caggcaccag aaggattttg ccagcgtagt 2700

gctcctggac cagcgatatg cccggccccc tgtcctggcc aagctgccgg cctggatccg 2760

agcccgtgtg gaggtcaaag ctacctttgg ccccgccatt gctgctgtgc agaagtttca 2820

ccgggagaag tcggcctctt cctgatgggc aaccacacca ctgcctggcg ccgtgccctt 2880

cctttgtcct gcccgctgga gacagtgttt gtcgtgggcg tggtctgcgg ggatcctgtt 2940

acaaaggtga aacccaggag gagagtgtgg agtccagagt gctgccagga cccaggcaca 3000

ggcgttagct cccgtaggag aaaatggggg aatcctgaat gaacagtggg tcctggctgt 3060

ccttggggcg ttccagggca gctcccctcc tggaatagaa tctttctttc catcctgcat 3120

ggctgagagc caggcttcct tcctggtctc cgcaggaggc tgtggcagct gtggcatcca 3180

ctgtggcatc tccgtcctgc ccaccttctt aagaggcgag atggagcagg cccatctgcc 3240

tctgcccttt ctagccaagg ttatagctgc cctggactgc tcactctctg gtctcaattt 3300

aaaatgatcc atggccacag ggctcctgcc caggggcttg tcaccttccc ctcctccttc 3360

ctgagtcact ccttcagtag aaggccctgc tccctatcct gtcccacagc cctgcctgga 3420

tttgtatcct tggcttcgtg ccagttcctc caagtctatg gcacctccct ccctctcaac 3480

cacttgagca aactccaaga caccttctac cccaacacca gcaattatgc caagggccgt 3540

taggctctca acatgactat agagaccccg tgtcatcacg gagacctttg ttcctgtggg 3600

aaaatatccc tcccacctgc aacagctgcc cctgctgact gcgcctgtct tctccctctg 3660

accccagaga aaggggctgt ggtcagctgg gatcttctgc caccatcagg gacaaacggg 3720

ggcaggagga aagtcactga tgcccagatg tttgcatcct gcacagctat aggtccttaa 3780

ataaaagtgt gctgttggtt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 3823

<210> 38

<211> 2913

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 38

atggctaatg aaacacagaa ggttggtgcc atccattttc cttttccctt cacaccctat 60

tccatccagg aagacttcat ggcagagctg taccgggttt tggaggctgg caagattggg 120

atatttgaga gtccaactgg cactgggaag tccttaagtc ttatttgtgg ggccctctct 180

tggctccgtg actttgaaca gaagaagcgt gaagaagagg cacgactcct tgaaactgga 240

actggcccct tacatgatga gaaagatgaa tccctgtgtc tgtcttcttc ctgcgaaggg 300

gctgcaggca ccccgaggcc tgctggagaa ccggcctggg ttactcagtt tgtgcagaag 360

aaagaagaga gggacctggt ggaccgacta aaggcggagc aggccaggag gaagcagcga 420

gaagaacgcc tgcagcagct gcagcacagg gtgcagctca agtatgcagc caagcgcctg 480

aggcaggaag aagaagaaag agagaatctc ctccgcctca gcagggagat gctagagaca 540

ggcccggagg ctgagcggct ggagcagctg gagtctgggg aggaggagct ggtcctcgcc 600

gaatacgaga gtgatgagga gaaaaaggtg gcgagcagag tggatgagga tgaggatgac 660

ctggaggaag aacacataac taagatttat tactgtagtc ggacacactc ccagctggcc 720

cagtttgtgc atgaggtgaa gaagagcccc tttggcaagg atgttcggct ggtctccctt 780

ggctcccggc agaacctttg tgtaaatgaa gacgtgaaaa gcctaggttc tgtgcagctt 840

atcaacgacc gctgtgtgga catgcagaga agcaggcacg agaagaagaa aggagctgag 900

gaggagaagc caaagaggag gaggcaggag aagcaggcag cctgcccctt ctacaaccac 960

gagcagatgg gccttctccg ggatgaggcc ctggcagagg tgaaggacat ggagcagctg 1020

ctggcccttg ggaaggaggc ccgggcctgt ccctattacg ggagccgcct tgccatccct 1080

gcagcccagc tggtggtgct gccctatcag atgctgctgc atgcggccac tcggcaggcc 1140

gcgggcatcc ggctgcagga ccaggtggtg atcatcgacg aggcgcacaa cctgatcgac 1200

accatcacgg gcatgcacag cgtggaggtc agcggctccc agctctgcca ggcccattcc 1260

cagctgctgc agtacgtgga gcgatacggg aagcgtttga aggccaagaa cctgatgtac 1320

ctgaagcaga tcctgtattt gctggagaaa ttcgtggctg tgctaggggg gaacattaag 1380

caaaatccca atacacagag tctgtcacag acagggacgg agctgaagac catcaacgac 1440

tttctcttcc agagccagat cgacaacatc aacctgttca aggtgcagcg atactgtgag 1500

aagagcatga tcagcagaaa gctctttgga ttcactgaac ggtacggagc agtgttctca 1560

tcccgggagc agcccaaact ggctgggttt cagcaattcc tgcagagcct gcagcccagg 1620

acgactgaag ctcttgcagc ccctgcagac gagagtcagg ccagcaccct gcgaccagct 1680

tctccactga tgcacatcca aggcttcctg gcagctctca ctacggccaa ccaggacggc 1740

agggtcatcc tgagccgcca aggcagcctc agtcagagca ccctgaagtt tttgctcctg 1800

aatccagctg tgcactttgc ccaagtggtg aaggaatgcc gggcagtggt cattgcgggg 1860

ggtaccatgc agccggtgtc tgacttccgg cagcagctgc tggcctgtgc cggggtggaa 1920

gctgagcgcg tggtggagtt ttcctgtggt cacgtgatcc ctccagacaa catcctgccc 1980

ctcgtcatct gcagcgggat ctccaaccag ccgctggaat tcacgttcca gaaaagagag 2040

ctgcctcaga tgatggacga ggtgggtcgc attctctgta acctgtgcgg tgtggttcct 2100

ggaggggtgg tctgtttctt cccctcctac gagtacctgc gccaggtcca tgcccactgg 2160

gagaagggtg gcctgctggg ccgtctggct gccaggaaga agatattcca ggaacctaag 2220

agcgcacacc aggtggagca ggtgctgctg gcatattcca ggtgcatcca ggcctgtggc 2280

caggagagag gccaggtgac aggggccctg ctcctctctg tggttggagg aaagatgagt 2340

gaagggatca acttctctga caacctaggc cggtgtgtgg tgatggtggg catgcccttc 2400

cccaacatca ggtctgcaga gctgcaggag aagatggcct acttggatca aaccctcagc 2460

ccccggccag gcacccccag ggaaggctct ggtggagaac ctgtgcatga aggccgtcaa 2520

ccagtccata ggcagggcca tcaggcacca gaaggatttt gccagcgtag tgctcctgga 2580

ccagcgatat gcccggcccc ctgtcctggc caagctgccg gcctggatcc gagcccgtgt 2640

ggaggtcaaa gctacctttg gccccgccat tgctgctgtg cagaagtttc accgggagaa 2700

gtcggcctct tcctgatggg caaccacacc actgcctggc gccgtgccct tcctttgtcc 2760

tgcccgctgg agacagtgtt tgtcgtgggc gtggtctgcg gggatcctgt tacaaaggtg 2820

aaacccagga ggagagtgtg gagtccagag tgctgccagg acccaggcac aggcgttagc 2880

tcccgtagga gaaaatgggg gaatcctgaa tga 2913

<210> 39

<211> 970

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 39

Met Ala Asn Glu Thr Gln Lys Val Gly Ala Ile His Phe Pro Phe Pro

1 5 10 15

Phe Thr Pro Tyr Ser Ile Gln Glu Asp Phe Met Ala Glu Leu Tyr Arg

20 25 30

Val Leu Glu Ala Gly Lys Ile Gly Ile Phe Glu Ser Pro Thr Gly Thr

35 40 45

Gly Lys Ser Leu Ser Leu Ile Cys Gly Ala Leu Ser Trp Leu Arg Asp

50 55 60

Phe Glu Gln Lys Lys Arg Glu Glu Glu Ala Arg Leu Leu Glu Thr Gly

65 70 75 80

Thr Gly Pro Leu His Asp Glu Lys Asp Glu Ser Leu Cys Leu Ser Ser

85 90 95

Ser Cys Glu Gly Ala Ala Gly Thr Pro Arg Pro Ala Gly Glu Pro Ala

100 105 110

Trp Val Thr Gln Phe Val Gln Lys Lys Glu Glu Arg Asp Leu Val Asp

115 120 125

Arg Leu Lys Ala Glu Gln Ala Arg Arg Lys Gln Arg Glu Glu Arg Leu

130 135 140

Gln Gln Leu Gln His Arg Val Gln Leu Lys Tyr Ala Ala Lys Arg Leu

145 150 155 160

Arg Gln Glu Glu Glu Glu Arg Glu Asn Leu Leu Arg Leu Ser Arg Glu

165 170 175

Met Leu Glu Thr Gly Pro Glu Ala Glu Arg Leu Glu Gln Leu Glu Ser

180 185 190

Gly Glu Glu Glu Leu Val Leu Ala Glu Tyr Glu Ser Asp Glu Glu Lys

195 200 205

Lys Val Ala Ser Arg Val Asp Glu Asp Glu Asp Asp Leu Glu Glu Glu

210 215 220

His Ile Thr Lys Ile Tyr Tyr Cys Ser Arg Thr His Ser Gln Leu Ala

225 230 235 240

Gln Phe Val His Glu Val Lys Lys Ser Pro Phe Gly Lys Asp Val Arg

245 250 255

Leu Val Ser Leu Gly Ser Arg Gln Asn Leu Cys Val Asn Glu Asp Val

260 265 270

Lys Ser Leu Gly Ser Val Gln Leu Ile Asn Asp Arg Cys Val Asp Met

275 280 285

Gln Arg Ser Arg His Glu Lys Lys Lys Gly Ala Glu Glu Glu Lys Pro

290 295 300

Lys Arg Arg Arg Gln Glu Lys Gln Ala Ala Cys Pro Phe Tyr Asn His

305 310 315 320

Glu Gln Met Gly Leu Leu Arg Asp Glu Ala Leu Ala Glu Val Lys Asp

325 330 335

Met Glu Gln Leu Leu Ala Leu Gly Lys Glu Ala Arg Ala Cys Pro Tyr

340 345 350

Tyr Gly Ser Arg Leu Ala Ile Pro Ala Ala Gln Leu Val Val Leu Pro

355 360 365

Tyr Gln Met Leu Leu His Ala Ala Thr Arg Gln Ala Ala Gly Ile Arg

370 375 380

Leu Gln Asp Gln Val Val Ile Ile Asp Glu Ala His Asn Leu Ile Asp

385 390 395 400

Thr Ile Thr Gly Met His Ser Val Glu Val Ser Gly Ser Gln Leu Cys

405 410 415

Gln Ala His Ser Gln Leu Leu Gln Tyr Val Glu Arg Tyr Gly Lys Arg

420 425 430

Leu Lys Ala Lys Asn Leu Met Tyr Leu Lys Gln Ile Leu Tyr Leu Leu

435 440 445

Glu Lys Phe Val Ala Val Leu Gly Gly Asn Ile Lys Gln Asn Pro Asn

450 455 460

Thr Gln Ser Leu Ser Gln Thr Gly Thr Glu Leu Lys Thr Ile Asn Asp

465 470 475 480

Phe Leu Phe Gln Ser Gln Ile Asp Asn Ile Asn Leu Phe Lys Val Gln

485 490 495

Arg Tyr Cys Glu Lys Ser Met Ile Ser Arg Lys Leu Phe Gly Phe Thr

500 505 510

Glu Arg Tyr Gly Ala Val Phe Ser Ser Arg Glu Gln Pro Lys Leu Ala

515 520 525

Gly Phe Gln Gln Phe Leu Gln Ser Leu Gln Pro Arg Thr Thr Glu Ala

530 535 540

Leu Ala Ala Pro Ala Asp Glu Ser Gln Ala Ser Thr Leu Arg Pro Ala

545 550 555 560

Ser Pro Leu Met His Ile Gln Gly Phe Leu Ala Ala Leu Thr Thr Ala

565 570 575

Asn Gln Asp Gly Arg Val Ile Leu Ser Arg Gln Gly Ser Leu Ser Gln

580 585 590

Ser Thr Leu Lys Phe Leu Leu Leu Asn Pro Ala Val His Phe Ala Gln

595 600 605

Val Val Lys Glu Cys Arg Ala Val Val Ile Ala Gly Gly Thr Met Gln

610 615 620

Pro Val Ser Asp Phe Arg Gln Gln Leu Leu Ala Cys Ala Gly Val Glu

625 630 635 640

Ala Glu Arg Val Val Glu Phe Ser Cys Gly His Val Ile Pro Pro Asp

645 650 655

Asn Ile Leu Pro Leu Val Ile Cys Ser Gly Ile Ser Asn Gln Pro Leu

660 665 670

Glu Phe Thr Phe Gln Lys Arg Glu Leu Pro Gln Met Met Asp Glu Val

675 680 685

Gly Arg Ile Leu Cys Asn Leu Cys Gly Val Val Pro Gly Gly Val Val

690 695 700

Cys Phe Phe Pro Ser Tyr Glu Tyr Leu Arg Gln Val His Ala His Trp

705 710 715 720

Glu Lys Gly Gly Leu Leu Gly Arg Leu Ala Ala Arg Lys Lys Ile Phe

725 730 735

Gln Glu Pro Lys Ser Ala His Gln Val Glu Gln Val Leu Leu Ala Tyr

740 745 750

Ser Arg Cys Ile Gln Ala Cys Gly Gln Glu Arg Gly Gln Val Thr Gly

755 760 765

Ala Leu Leu Leu Ser Val Val Gly Gly Lys Met Ser Glu Gly Ile Asn

770 775 780

Phe Ser Asp Asn Leu Gly Arg Cys Val Val Met Val Gly Met Pro Phe

785 790 795 800

Pro Asn Ile Arg Ser Ala Glu Leu Gln Glu Lys Met Ala Tyr Leu Asp

805 810 815

Gln Thr Leu Ser Pro Arg Pro Gly Thr Pro Arg Glu Gly Ser Gly Gly

820 825 830

Glu Pro Val His Glu Gly Arg Gln Pro Val His Arg Gln Gly His Gln

835 840 845

Ala Pro Glu Gly Phe Cys Gln Arg Ser Ala Pro Gly Pro Ala Ile Cys

850 855 860

Pro Ala Pro Cys Pro Gly Gln Ala Ala Gly Leu Asp Pro Ser Pro Cys

865 870 875 880

Gly Gly Gln Ser Tyr Leu Trp Pro Arg His Cys Cys Cys Ala Glu Val

885 890 895

Ser Pro Gly Glu Val Gly Leu Phe Leu Met Gly Asn His Thr Thr Ala

900 905 910

Trp Arg Arg Ala Leu Pro Leu Ser Cys Pro Leu Glu Thr Val Phe Val

915 920 925

Val Gly Val Val Cys Gly Asp Pro Val Thr Lys Val Lys Pro Arg Arg

930 935 940

Arg Val Trp Ser Pro Glu Cys Cys Gln Asp Pro Gly Thr Gly Val Ser

945 950 955 960

Ser Arg Arg Arg Lys Trp Gly Asn Pro Glu

965 970

Claims (10)

1.用于检测DDX11基因突变的探针组，其由探针1-探针36组成：

所述探针1为序列表中序列1所示的单链DNA分子；

所述探针2为序列表中序列2所示的单链DNA分子；

所述探针3为序列表中序列3所示的单链DNA分子；

所述探针4为序列表中序列4所示的单链DNA分子；

所述探针5为序列表中序列5所示的单链DNA分子；

所述探针6为序列表中序列6所示的单链DNA分子；

所述探针7为序列表中序列7所示的单链DNA分子；

所述探针8为序列表中序列8所示的单链DNA分子；

所述探针9为序列表中序列9所示的单链DNA分子；

所述探针10为序列表中序列10所示的单链DNA分子；

所述探针11为序列表中序列11所示的单链DNA分子；

所述探针12为序列表中序列12所示的单链DNA分子；

所述探针13为序列表中序列13所示的单链DNA分子；

所述探针14为序列表中序列14所示的单链DNA分子；

所述探针15为序列表中序列15所示的单链DNA分子；

所述探针16为序列表中序列16所示的单链DNA分子；

所述探针17为序列表中序列17所示的单链DNA分子；

所述探针18为序列表中序列18所示的单链DNA分子；

所述探针19为序列表中序列19所示的单链DNA分子；

所述探针20为序列表中序列20所示的单链DNA分子；

所述探针21为序列表中序列21所示的单链DNA分子；

所述探针22为序列表中序列22所示的单链DNA分子；

所述探针23为序列表中序列23所示的单链DNA分子；

所述探针24为序列表中序列24所示的单链DNA分子；

所述探针25为序列表中序列25所示的单链DNA分子；

所述探针26为序列表中序列26所示的单链DNA分子；

所述探针27为序列表中序列27所示的单链DNA分子；

所述探针28为序列表中序列28所示的单链DNA分子；

所述探针29为序列表中序列29所示的单链DNA分子；

所述探针30为序列表中序列30所示的单链DNA分子；

所述探针31为序列表中序列31所示的单链DNA分子；

所述探针32为序列表中序列32所示的单链DNA分子；

所述探针33为序列表中序列33所示的单链DNA分子；

所述探针34为序列表中序列34所示的单链DNA分子；

所述探针35为序列表中序列35所示的单链DNA分子；

所述探针36为序列表中序列36所示的单链DNA分子。

2.根据权利要求1所述的探针组，其特征在于：所述每条探针均标记生物素。

3.用于检测DDX11基因突变的试剂盒，其包括权利要求1或2所述的探针组。

4.权利要求1或2所述的探针组或权利要求3所述的试剂盒在检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异中的应用；

或，权利要求1或2所述的探针组或权利要求3所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异的产品中的应用。

5.权利要求1或2所述的探针组或权利要求3所述的试剂盒在检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病中的应用；

或，权利要求1或2所述的探针组或权利要求3所述的试剂盒在制备检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品中的应用。

6.DDX11基因作为靶标在急性髓系白血病诊断中的应用。

7.检测DDX11基因是否发生突变的物质在诊断或辅助诊断急性髓系白血病中的应用；

或，检测DDX11基因是否发生突变的物质在制备诊断或辅助诊断急性髓系白血病的产品中的应用；

或，检测DDX11基因是否发生突变的物质在检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病中的应用；

或，检测DDX11基因是否发生突变的物质在制备检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品中的应用。

8.检测或辅助检测待测患者是否患有急性髓系白血病的产品，其包括检测DDX11基因是否发生突变的物质。

9.根据权利要求7所述的应用或权利要求8所述的产品，其特征在于：所述检测DDX11基因是否发生突变的物质为权利要求1或2所述的探针组或权利要求3所述的试剂盒。

10.一种检测或辅助检测待测样本中DDX11基因突变或变异的方法，包括如下步骤：

1)将待测样本的基因组DNA进行片段化后，构建gDNA文库；

2)用权利要求1或2所述的探针组与所述gDNA文库杂交，得到杂交产物；

3)对所述杂交产物进行测序，根据测序结果分析待测样本中DDX11基因的突变或变异情况。