CN110124106A - 一种表面修饰的去细胞生物组织材料及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及表面修饰的去细胞生物组织材料及其制备方法与应用。在去细胞生物材料的至少一个表面利用高含氟量的硅烷偶联剂或者酰氯偶联剂，修饰去细胞生物材料表面，实现制备既能具有与生物组织相近的机械性能，又能具有优异的抗生物粘附特性的材料。所述表面修饰的去细胞生物组织材料用作预防生物粘连、抗血栓形成、抗生物污染的材料使用，进一步修饰后可以用于组织器官的润滑抗磨损。与现有技术相比，本发明表面修饰的去细胞生物组织材料为生物惰性材料，具有很好的生物惰性，同时不可吸收，具有很高的实用性。

Description

一种表面修饰的去细胞生物组织材料及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种生物组织材料，尤其是涉及一种表面修饰的去细胞生物组织材料及其制备方法与应用。
背景技术
随着人口老龄化的发展，冠心病已成为一个严重的公共卫生问题，给我国的社会、经济的健康发展造成了严重的阻碍。在冠心病的手术治疗中，冠状动脉旁路移植术相较于冠状动脉介入手术是更为理想和有效的治疗手段。冠状动脉旁路移植术为了将部分或全部血流绕过冠状动脉狭窄区域，供应到缺血的心脏远端，需要用到搭桥血管。选用人造小血管作为搭桥血管，可以避免在手术前对患者进行自体血管取材的多次手术，能够极大地降低手术风险，缓解患者的痛苦，更可以使得自体血管来源不足的冠心病患者重获手术机会。
由于可降解材料在体外种植细胞周期长、体内降解过程不可控，目前实现商品化的人造血管为生物惰性材料，如聚四氟乙烯。虽然在大口径的血管移植手术中聚四氟乙烯材料是自体血管的理想替代材料，但是它在冠状动脉旁路移植术的应用上依然不理想。因为用于搭桥的小血管口径小(<6毫米)、血流流速慢，血液更易粘附在小血管的管壁形成血栓，导致血管堵塞；而且聚四氟乙烯材料还具有弹性差、顺应性差以及易形成血栓等缺点。
另外，肿瘤复发是外科手术治疗肿瘤后常见的问题，很多患者往往要承担两次甚至更多次的外科手术治疗。在诸如这种需要多次开刀的手术过程中，极容易因手术或一些其他原因引起的炎症导致器组织间粘连，提高了再次手术的困难和增加了术前分离组织间粘连所需要的时间。而且粘连可能发生进一步的并发症，如肠梗阻、腹腔和盆腔疼痛、不育症等。预防粘连的目的是消灭或減少粘连发生的严重程度或范围，进而防止由粘连引发的并发症出现，防止造成继发病如局部器官的机能减退的情况。目前用来预防粘连多采用透明质酸制剂，用于直接隔离受伤部位，防止组织表面之间发生粘连。在临床使用过程中，透明质酸有明显预防粘连的效果，但是在使用中会引起严重的不良反应，包括腹痛和腹腔感染肠粘连。同时可吸收的透明质酸制剂在使用过程中还会在体内发生游离现象，从而降低了其隔离效果。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种表面修饰的去细胞生物组织材料及其制备方法与应用。
本发明利用高含氟量的硅烷偶联剂或者酰氯偶联剂，修饰去细胞生物材料表面，实现制备既能具有与生物组织相近的机械性能，又能具有优异的抗生物粘附特性的材料。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
本发明技术方案一，提供一种表面修饰的去细胞生物组织材料。
一种表面修饰的去细胞生物组织材料，在去细胞生物材料的至少一个表面进行氟化修饰，含有原子个数含量大于10％以上的氟。
在本发明的一个实施方式中，形成的表面用X射线光电子能谱法测定的氟/碳，以原子个数比计，大于0.17。
在本发明的一个实施方式中，在去细胞生物材料的至少一个表面进行氟化修饰，形成结构如式I-1、式I-2、式I-3或式I-4所示的基团：
所述式I-1、式I-2、式I-3或式I-4中，n为1-11的正整数，优选为7，p为正整数，m为正整数。
在本发明的一个实施方式中，所述去细胞生物材料包括去细胞静脉、去细胞动脉、去细胞瓣膜、去细胞尿道、去细胞输尿管、去细胞隔膜、去细胞半月板、去细胞脑、去细胞肾脏、去细胞肝脏、去细胞脾脏、去细胞肺脏、去细胞胰脏、去细胞子宫、去细胞膀胱、去细胞皮肤、去细胞大肠、去细胞小肠、去细胞肠系膜、去细胞腹壁、去细胞气管、去细胞脊髓、去细胞骨、去细胞肌肉、去细胞关节、去细胞软骨、去细胞肌腱、去细胞韧带、去细胞角膜、去细胞巩膜或去细胞结膜。
在本发明的一个实施方式中，所述表面修饰的去细胞生物组织材料表面还吸附有含氟液体。
在本发明的一个实施方式中，所述含氟液体是指一类含氟的在-100℃～1000℃区间内为液态的化合物，可选自全氟聚醚或全氟萘烷或C5-18-全氟烷，优选全氟萘烷。
含氟液体的作用：主要是利用氟化修饰的表面和含氟液体具有良好的亲和性，从而能够在经过修饰的去细胞生物组织材料表面形成稳定的含氟液体吸附层。借助于含氟液体与水、蛋白、血液等组分完全不亲和，含有稳定含氟液体吸附层的去细胞生物组织材料表面将会具有更佳的抗生物粘附效果，所得到的表面修饰的去细胞生物组织材料在用于体内后具有更好的抗凝血和抗组织间黏附的特性。
本发明技术方案二，提供上述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，
具体方法是：采用气相沉积或溶液浸润的方法，将去细胞生物材料表面与结构如式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6或式II-7所示的氟化试剂反应，得到氟化修饰的去细胞生物组织材料；
所述式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6或式II-7中，x、y、z、m、n、x1、y1、z1、m1、n1、x2、y2、z2、m2、n2、x3、y3、z3、m3、n3为正整数，X、X1、X2、X3为氯或甲氧基或乙氧基，R、R1、R2、R3为烷基或氢。
在本发明的一个实施方式中，所述氟化试剂选自式III-1、式III-2、式III-3、式III-4、式III-5或式III-6所示的试剂：
所述式III-1、式III-2、式III-3、式III-4、式III-5或式III-6中，n为1-11的正整数，p为正整数，X、X2、X3为氯或甲氧基或乙氧基。
在本发明的一个实施方式中，所述氟化试剂选自式IV
所述式IV中，n为1-11的正整数，n优选为7，p为正整数，X3为氯或甲氧基或乙氧基，X3优选为氯。
在本发明的一个实施方式中，去细胞生物材料的表面进行氟化修饰反应前，进行等离子体处理。
在等离子气体处理后，去细胞生物材料的表面将具有更多能够和氟化试剂进行反应的位点，如羟基等。因此在进行氟化反应之前对去细胞生物材料表面进行等离子气体进行处理，可以使得去细胞生物材料表面的得到更好的表面修饰效果。
在本发明的一个实施方式中，所述等离子体选自低温等离子体，等离子体放电气源选自氩气或氮气或二氧化碳或氧气或空气，优选空气。
在本发明的一个实施方式中，去细胞生物材料的表面进行氟化修饰反应后，浸润在含氟液体处理。
在本发明的一个实施方式中，所述含氟液体是指一类含氟的在-100℃～1000℃区间内为液态的化合物，可选自全氟聚醚或全氟萘烷或C5-18-全氟烷，优选全氟萘烷。
本发明技术方案三，提供上述表面修饰的去细胞生物组织材料的应用。
所述表面修饰的去细胞生物组织材料用作以下材料使用：预防生物材料粘连的材料、抗血栓形成材料、抗生物污染材料。
在本发明的一个实施方式中，所述表面修饰的去细胞生物组织材料用作搭桥血管材料。
在本发明的一个实施方式中，所述表面修饰的去细胞生物组织材料修饰后用作组织器官的润滑抗磨损材料。
在本发明的一个实施方式中，所述表面修饰的去细胞生物组织材料于干燥密封的条件下保存。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
1、本发明经过氟化修饰后的去细胞生物组织材料，其表面能够形成稳定的氟化修饰层，这种修饰层具有完全疏水疏油和抗生物粘附的效果。在植入体内后，本发明的氟化修饰后的去细胞生物组织材料能够防止多次手术之间发生生物降解，避免因材料发生降解和体内吸收，造成结构强度和完整性的破坏，影响在体内中抗粘附的应用效果。
2、本发明提供的一种表面修饰的去细胞生物组织材料，利用了去细胞生物组织材料具有与生物组织相近的机械性能，同时降低了免疫原性；在经过氟化表面修饰后，去细胞生物组织材料可以进一步获得优异的抗生物粘附的特性。本发明的表面修饰的去细胞生物组织材料，在解决了搭桥血管材料来源不足的同时，还具有材料制备周期短、弹性与顺应性与天然人体组织相近和防止血栓形成的优点，为冠状动脉旁路移植术和体内抗组织间粘附手术的应用提供了理想的材料来源。
3、本发明表面修饰的去细胞生物组织材料制备方法简单，方便制备，同时保存条件要求不高，在干燥密封的条件下即可保存。
4、本发明表面修饰的去细胞生物组织材料使用方便，使用时，直接在需要防止生物材料粘连的生物材料之间放置即可，具有很高的实用性。
附图说明
图1为实施例16中氟化修饰前去细胞生物材料表面接触角示意图；
图2为实施例16中氟化修饰后去细胞生物材料表面接触角示意图；
图3为实施例16中氟化修饰前去细胞生物材料表面血液黏附试验图；
图4为实施例16中氟化修饰前后细胞生物材料表面血液黏附试验图；
图5为没有放置生物材料的大鼠的腹壁损伤并缝合创口7天后创口损伤图；
图6为放置实施例16所得生物材料的大鼠的腹壁损伤并缝合创口7天后创口损伤图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明进行详细说明。
以下实施例中，
全氟十二烷基三氯硅烷(FDTS)购于Adamas，商品目录号：78560-44-8；
1H,1H,2H,2H-全氟辛基二甲基氯硅烷购于TCI，商品目录号：102488-47-1；
全氟辛酰氯购于Aldrich，商品目录号：335-64-8；
双(九氟己基)二氯硅烷购于Chemenu，商品目录号：156323-66-9；
(1H,1h,2H,2H-全氟-n-己基)甲基二氯硅烷购于Matrix Scientific，商品目录号：38436-16-7；
1H,1H,2H,2H-全氟辛基二甲基氯硅烷购于TCI，商品目录号：102488-47-1；
5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,10-tridecafluoro-2-(tridecafluorohexyl)decyltrichlorosilan e)购于Gelest，商品目录号：1621953-16-9；
TFCS根据文献Cai L,Dai L,Yuan Y,et al.Synthesis of novelpolymethacrylates with siloxyl bridging perfluoroalkyl side-chains forhydrophobic application on cotton fabrics[J].APPL SURF SCI,2016,371:453-467.合成，商品目录号：147701-71-1；
5-bromo-4,4,5,5-tetrafluoropentanoyl chloride购于Apichemical，商品目录号：1375158-41-0；
6,6,7,7,7-pentafluoroheptanoyl chloride购于Apichemical，商品目录号：177352-63-5；
全氟萘烷购于Aldrich，商品目录号：306-94-5。
实施例1
利用真空干燥器作为氟化修饰的反应环境，打开真空干燥器的上半球体，在上半球体和下半球体的磨砂表面涂抹高真空硅脂，用于密封。在下半球体内部的陶瓷隔板下方，放置蓝色硅胶，用于吸附水蒸气和大致显示真空干燥器内湿度。用1000微升的移液枪吸取200微升的FDTS到20毫升样品瓶，敞开瓶口放置在陶瓷隔板中心。将干燥处理后的去细胞猪颈静脉，放置在陶瓷隔板周围。盖好真空干燥器上半球体，每隔30分钟，将真空干燥器内压力通过真空泵抽气5秒，共抽5-10次，使最终真空干燥器内压力不高于10kPa。24小时后，气相沉积完成。氟化修饰后的去细胞猪颈静脉，放置在干燥密封的条件下保存。
对上述实施例1中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：54.65％，F：28.36％，O：13.63％，Si：2.15％，N：1.22％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到101.2°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.80×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例2
在实施例1的基础上，吸取FDTS到20毫升样品瓶之前，先在样品瓶中加入15毫升的二甲苯，在二甲苯的液面下加入200微升的FDTS并盖上盖摇匀后，再敞开瓶口放置在陶瓷隔板中心。氟化修饰过程中，通过调节红外加热灯和真空干燥器的距离，保持真空干燥器30℃。
本实施例所用的氟化修饰方法为气相沉积法，利用氟化试剂容易挥发形成气态物质，使得氟化试剂转移至需要进行表面修饰的去细胞生物材料表面。之后氟化试剂与去细胞生物材料的表面产生化学反应，从而使得去细胞生物材料表面进行氟化修饰。实施例中所设置的二甲苯和红外加热灯，都是为了提高氟化试剂挥发速率，提高反应效率；同时二甲苯对氟化试剂进行浓度的调节，能够防止氟化试剂在反应环境中升温迅速，导致后续在去细胞生物材料表面沉积的程度不均匀，影响材料的质量和性能。
对上述实施例2中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：52.42％，F：31.05％，O：13.07％，Si：2.35％，N：1.11％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到104.2°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.65×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例3
在实施例1的基础上，去细胞的猪颈静脉表面经过预处理。预处理包括，将去细胞的猪颈静脉冷冻后，利用冻干机干燥除水；通过低温等离子体发生器，对干燥处理后的去细胞猪颈静脉进行等离子体处理，所用等离子体放电气源为空气。
对上述实施例3中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：47.36％，F：32.56％，O：13.81％，Si：2.46％，N：3.81％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到106.1°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.55×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例4
在实施例3的基础上，所用等离子处理的放电气源为氧气。
本实施例所用的等离子处理的放电气源为氧气，利用氧气等离子处理后，在去细胞生物材料的表面将具有更多能够和氟化试剂进行反应的羟基位点，可以使得去细胞生物材料表面的得到更好的表面氟化修饰效果。
对上述实施例4中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：43.25％，F：33.86％，O：19.24％，Si：2.56％，N：1.09％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到105.7°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.50×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例5
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为1H,1H,2H,2H-全氟辛基二甲基氯硅烷。
对上述实施例5中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：53.62％，F：29.54％，O：13.37％，Si：2.16％，N：1.31％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到103.8°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.73×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例6
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为全氟辛酰氯。
对上述实施例6中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：53.84％，F：29.61％，O：15.46％，N：1.09％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到104.7°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.67×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例7
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为双(九氟己基)二氯硅烷。
对上述实施例7中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：53.43％，F：31.15％，O：11.64％，Si：1.86％，N：1.92％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到105.2°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.61×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例8
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为(1H,1h,2H,2H-全氟-n-己基)甲基二氯硅烷。
对上述实施例8中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：52.79％，F：29.59％，O：14.16％，Si：2.24％，N：1.22％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到104.2°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.71×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例9
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为1H,1H,2H,2H-全氟辛基二甲基氯硅烷。
对上述实施例9中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：53.89％，F：29.14％，O：14.53％，Si：1.34％，N：1.10％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到103.6°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.73×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例10
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为5,5,6,6,7,7,8,8,9,9,10,10,10-tridecafluoro-2-(tridecafluorohexyl)decyltrichlorosilane)。
对上述实施例10中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：53.47％，F：28.94％，O：14.06％，Si：2.19％，N：1.34％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到102.3°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.76×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例11
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为TFCS。
对上述实施例11中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：59.76％，F：15.60％，O：18.64％，Si：1.95％，N：4.05％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到100.8°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.91×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例12
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为5-bromo-4,4,5,5-tetrafluoropentanoylchloride。
对上述实施例12中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：58.26％，F：10.17％，O：29.44％，N：2.13％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到100.3°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.92×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例13
在实施例1的基础上，所用氟化试剂为6,6,7,7,7-pentafluoroheptanoylchloride。
对上述实施例13中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：51.71％，F：27.72％，O：17.90％，N：2.67％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到100.5°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.86×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例14
在实施例1的基础上，进一步对氟化修饰后的去细胞生物材料进行后处理。将材料浸泡在含氟液体全氟萘烷中12-36小时，使材料表面形成光滑的润滑层，进一步提高表面修饰的去细胞生物组织材料的抗粘附能力。
对上述实施例14中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：40.06％，F：41.80％，O：15.40％，Si：1.81％，N：0.93％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到106.5°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.13×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例15
在实施例1的基础上，所用去细胞生物材料为去细胞的牛主动脉，干燥方式为浸泡在无水乙醇中脱水干燥。干燥之前。将外径合适的一根或几根玻璃管支撑在去细胞的牛主动脉内，防止干燥过程中具有立体结构的去细胞生物材料塌陷。
对上述实施例15中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：51.12％，F：31.64％，O：12.75％，Si：2.39％，N：2.10％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到105.8°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2，实验组细胞密度为0.50×104个/cm2。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
实施例16
利用溶液浸润的方式对去细胞生物材料进行氟化修饰。去细胞的猪颈静脉表面经过预处理。预处理包括，将去细胞的猪颈静脉冷冻后，利用冻干机干燥除水；通过低温等离子体发生器，对干燥处理后的去细胞猪颈静脉进行等离子体处理，所用等离子体放电气源为氧气。将2毫升的浓度为5％(v/v)的FDTS-乙醇溶液加入2毫升离心管中，盖好离心管盖子，混匀后再加入去细胞生物材料。在旋转摇床上室温反应24小时，转速为50转/分钟。氟化修饰之后用无水乙醇浸洗3分钟，氮气枪吹干后，放置在干燥密封的条件下保存。进一步对氟化修饰后的去细胞生物材料进行后处理。将材料浸泡在含氟液体全氟萘烷中12-36小时，使材料表面形成光滑的润滑层，进一步提高表面修饰的去细胞生物组织材料的抗粘附能力。
对上述实施例16中制备的表面修饰的去细胞生物组织材料进行性能测定。
1、表面修饰的去细胞生物组织材料的表面元素组成
为检测所制备的材料的表面修饰效果，对修饰后的去细胞生物组织材料进行了相应的XPS元素分析测试。XPS元素分析测试显示修饰后的产物表面原子组成比为：C：45.07％，F：41.92％，O：8.18％，Si：3.88％，N：0.94％。修饰后表面有F元素的存在，说明在去细胞生物组织材料表面成功实现了氟化修饰。
2、表面修饰的去细胞生物组织材料的疏水性试验
为检测所制备的材料的表面疏水性能，分别对材料进行了接触角测试。从图1中对应的插图可以看出，在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面接触角为0°，显示出明显的亲水效果。图2对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物的接触角达到107.8°，疏水效果有了明显的改进。
3、表面修饰的去细胞生物组织材料的抗细胞粘附试验
为检测所制备的材料的抗成纤维细胞粘附性能，分别对材料进行了体外细胞黏附测试。取对数期生长的小鼠成纤维细胞(NIH/3T3)用PBS缓冲溶液洗涤，0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数。准备一块24孔板，实验组每孔中央滴一滴培养基，小心放入一片修饰后的去细胞生物组织材料；对照组放入未进行修饰的去细胞生物组织材料。每孔接种4×104个细胞，每孔补加1mL培养液。将24孔板置于37℃细胞培养箱中，5％CO2条件下孵育48h。细胞培养完毕后，小心地吸去培养液，将适量的PBS缓冲溶液轻轻加入孔内，摇晃清洗三次，洗去未粘附生长的细胞。之后各组取出材料，用0.25％(w/v)的胰蛋白酶消化材料上粘附生长的细胞，加入新鲜培养基吹打后将其制备成细胞悬液，并在倒置显微镜下用血球计数板计数，细胞密度＝粘附生长细胞数/材料表面积。测试结果显示对照组细胞密度为8×104个/cm2；实验组材料表面细胞密度为0，未观察到细胞黏附。因此，表面修饰的去细胞生物组织材料具有很好的排斥细胞黏附的能力。
4、表面修饰的去细胞生物组织材料的血液粘附试验
为检测所制备的材料的表面抗生物粘附性能，将氟化修饰前后的去细胞生物材料剪成大约1厘米×1厘米的方形，然后放入24孔板中，并加入含0.25U/毫升肝素的500微升人全血。24孔板放在水平摇床上100转/分钟，30分钟后取出小血管样品。小血管样品用生理盐水清洗3次之后，进行观察。从图3中对应的插图可以看出，在氟化修饰之前，去细胞生物材料表面粘附了大量的血液成分，颜色变深，显示出明显的血液粘附效果。图4对去细胞生物材料进行氟化修饰，所得产物表面不粘附任何血液成分，抗血液粘附效果有了明显的改进。
5、表面修饰的去细胞生物组织材料的应用。
在大鼠的体内实验中，开腹后将麻醉的大鼠的腹壁进行人为损伤。对照组不放置材料，实验组在腹壁创口放置实施例16中的氟化表面修饰去细胞生物材料。缝合创口后的7天内，大鼠状况正常。7天后打开大鼠腹腔观察创口损伤情况。如图5所示空白对照组，损伤的创口与肠壁等组织发生粘连，不容易分离；而如图6所示的实验组，损伤的创口呈现正常的深红色恢复状态，未发生任何粘连的情况。
可见，本发明的氟化表面修饰去细胞生物材料在用于术后预防粘连，与对照组相比，具有明显的抗粘连技术效果。
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。

Claims (15)

1.一种表面修饰的去细胞生物组织材料，其特征在于，在去细胞生物材料的至少一个表面进行氟化修饰，含有原子个数含量大于10％以上的氟。
2.根据权利要求1所述表面修饰的去细胞生物组织材料，其特征在于，形成的表面用X射线光电子能谱法测定的氟/碳，以原子个数比计，大于0.17。
3.根据权利要求1所述表面修饰的去细胞生物组织材料，其特征在于，在去细胞生物材料的至少一个表面进行氟化修饰，形成结构如式I-1、式I-2、式I-3或式I-4所示的基团：
所述式I-1、式I-2、式I-3或式I-4中，n为1-11的正整数，优选为7，p为正整数，m为正整数。
4.根据权利要求1所述表面修饰的去细胞生物组织材料，其特征在于，所述去细胞生物材料包括去细胞静脉、去细胞动脉、去细胞瓣膜、去细胞尿道、去细胞输尿管、去细胞隔膜、去细胞半月板、去细胞脑、去细胞肾脏、去细胞肝脏、去细胞脾脏、去细胞肺脏、去细胞胰脏、去细胞子宫、去细胞膀胱、去细胞皮肤、去细胞大肠、去细胞小肠、去细胞肠系膜、去细胞腹壁、去细胞气管、去细胞脊髓、去细胞骨、去细胞肌肉、去细胞关节、去细胞软骨、去细胞肌腱、去细胞韧带、去细胞角膜、去细胞巩膜或去细胞结膜。
5.根据权利要求1所述表面修饰的去细胞生物组织材料，其特征在于，所述表面修饰的去细胞生物组织材料表面吸附有含氟液体。
6.如权利要求1-3中任一项所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，采用气相沉积或溶液浸润的方法，将去细胞生物材料表面与结构如式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6或式II-7所示的氟化试剂反应，得到氟化修饰的去细胞生物组织材料；
所述式II-1、式II-2、式II-3、式II-4、式II-5、式II-6或式II-7中，x、y、z、m、n、x1、y1、z1、m1、n1、x2、y2、z2、m2、n2、x3、y3、z3、m3、n3为正整数，X、X1、X2、X3为氯或甲氧基或乙氧基，R、R1、R2、R3为烷基或氢。
7.根据权利要求6所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，所述氟化试剂选自式III-1、式III-2、式III-3、式III-4、式III-5或式III-6所示的试剂：
所述式III-1、式III-2、式III-3、式III-4、式III-5或式III-6中，n为1-11的正整数，p为正整数，X、X2、X3为氯或甲氧基或乙氧基。
8.根据权利要求7所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，所述氟化试剂选自式IV
所述式IV中，n为1-11的正整数，n优选为7，p为正整数，X3为氯或甲氧基或乙氧基，X3优选为氯。
9.根据权利要求6所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，去细胞生物材料的表面进行氟化修饰反应前，进行等离子体处理。
10.根据权利要求9所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，所述等离子体选自低温等离子体，等离子体放电气源选自氩气或氮气或二氧化碳或氧气或空气，优选空气。
11.根据权利要求6所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，去细胞生物材料的表面进行氟化修饰反应后，浸润在含氟液体处理。
12.根据权利要求11所述表面修饰的去细胞生物组织材料的制备方法，其特征在于，所述含氟液体选自全氟聚醚或全氟萘烷或C5-18-全氟烷，优选全氟萘烷。
13.如权利要求1-3中任一项所述表面修饰的去细胞生物组织材料的应用，其特征在于，所述表面修饰的去细胞生物组织材料用作以下材料使用：预防生物材料粘连的材料、抗血栓形成材料、抗生物污染材料。
14.根据权利要求13所述表面修饰的去细胞生物组织材料的应用，其特征在于，所述表面修饰的去细胞生物组织材料用作搭桥血管材料。
15.根据权利要求13所述表面修饰的去细胞生物组织材料的应用，其特征在于，所述表面修饰的去细胞生物组织材料修饰后用作组织器官的润滑抗磨损材料。
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