CN110122176A - 羊肚菌平板出菇方法 - Google Patents

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CN110122176A CN201910510394.8A CN201910510394A CN110122176A CN 110122176 A CN110122176 A CN 110122176A CN 201910510394 A CN201910510394 A CN 201910510394A CN 110122176 A CN110122176 A CN 110122176A
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彭天祥
时小东
庄国庆
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    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01GHORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G18/00Cultivation of mushrooms
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    • B01DSEPARATION
    • B01D61/00Processes of separation using semi-permeable membranes, e.g. dialysis, osmosis or ultrafiltration; Apparatus, accessories or auxiliary operations specially adapted therefor

Abstract

本发明涉及羊肚菌平板出菇方法,属于真菌培育领域。羊肚菌平板出菇方法,包括以下步骤:a、将高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水混匀,离心,取上清液,过滤得土壤滤液;b、向PDA培养基中添加培养基改良剂和步骤a所得的土壤滤液,混匀后得到羊肚菌高效培养基,冷却凝固,备用;c、接种羊肚菌菌丝于羊肚菌高效培养基中进行避光培养,保持培养温度为14~24℃,得到羊肚菌子实体。本发明方法可以提高菌丝生长速度,加快菌核形成时间以及增加菌核数目,加快原基形成时间以及增加原基数目。

Description

羊肚菌平板出菇方法
技术领域
本发明涉及羊肚菌平板出菇方法,属于真菌培育领域。
背景技术
羊肚菌Morchella,隶属子囊菌门Ascomycota、盘菌纲Discomycetes、盘菌目Pezizales、羊肚菌科Morchellaceae,因其菌盖有不规则的凹陷且多有褶皱,外形似羊肚而得名。羊肚菌营养丰富,味道鲜美,作为享誉世界的美味食用菌和药用菌,是目前价格最为昂贵的野生菌之一。
近年来,羊肚菌在中国地区的人工栽培发展迅速,栽培方式多样,栽培规模逐年扩大。近年来的栽培情况表明,羊肚菌是一种低温高湿菌,现有栽培品种多为菌盖呈褐色至黑色的黑色羊肚菌系(black morels),为腐生营养型,对于土壤中有机质含量要求较高,以腐殖质含量高的沙棕壤为宜。田间栽培周期中,水分管理至关重要,水分过少,原基形成数目降低;水分过多则幼菇易腐烂,虫病害频发。羊肚菌栽培品种的这一特性,使得栽培过程中劳动强度大,产量稳定性差。
目前羊肚菌大都在大田栽培出菇,尚未见平板出菇的方法。
发明内容
本发明要解决的第一个问题就是提供一种羊肚菌的出菇方法,该种方法为平板出菇法。
所述平板出菇法是在平板培养基上进行培育的方法。
羊肚菌平板出菇方法,包括以下步骤:
a、将高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水混匀,离心,取上清液,过滤得土壤滤液;其中,所述高有机质含量的土壤为腐殖土或花木土;
b、向PDA培养基中添加培养基改良剂和步骤a所得的土壤滤液,混匀后得到羊肚菌高效培养基,冷却凝固,备用;其中,所述培养基改良剂由蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、FeSO4、维生素B、维生素C和水按重量比1~3:1~3:1~3:2~4:3~5:1~3:100混匀制得;PDA培养基、培养基改良剂和土壤滤液的体积比为1000:10~30:40~65;
c、接种羊肚菌菌丝于羊肚菌高效培养基中进行避光培养,保持培养温度为14~24℃,得到羊肚菌子实体。
优选的,所述高有机质含量的土壤为腐殖土。
优选的,步骤a中,高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水的重量比为80~120:8~20:80~150;更优选的,高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水的重量比为100:10:100。
优选的,步骤a中,过滤采用细胞滤器过滤;更优选的,所述细胞滤器的滤网孔径为0.3~0.5μm;当滤网孔径为0.45μm时,得到的细胞滤液作为培养基添加剂的效果最好。
优选的,步骤b中,蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、FeSO4、维生素B、维生素C和水的重量比为2:2:2:3:4:2:100。
进一步优选的,步骤b中,PDA培养基、培养基改良剂和土壤滤液的体积比为1000:25:50。
优选的,步骤c中,培养过程中的温度采用梯度控温法进行控制,具体为:接种后0~12h,温度保持22~24℃;接种后12~36h,温度保持15~16℃;接种后36~72h,温度保持18~20℃;接种72h之后,温度保持14~16℃:
进一步优选的,步骤c中,温度控制为:接种后0~12h,温度保持24℃;12~36h,温度保持16℃;36~72h,温度保持18℃;72h之后,温度保持16℃。
优选的,步骤c中:在培养过程中,需要进行补光,具体为:接种后11~13h,采用150~250勒克斯照度白光处理1~1.5h;接种后34~38h,采用150~250勒克斯照度白光处理1~1.5h;接种后70~74h,采用100~120勒克斯照度白光处理2~2.5h。
进一步优选的,接种后12h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后36h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后72h,采用100勒克斯照度白光处理2h。
本发明的有益效果:
1、本发明的方法为平板出菇法,可以用于羊肚菌选种,以及验证出菇能力。
2、本发明采用的PDA改良培养基、梯度控温法或者关键节点补光,提高了菌丝生长速度,加快菌核形成时间以及增加菌核数目,加快原基形成时间以及增加原基数目;当三种改进处理同时应用时,可以达到最优的效果。
3、本发明改良培养基中,采用滤膜过滤,除去土壤中其他真菌,相较于常规高温灭菌,操作简单,对有效成分没有损失,节约了能耗。
具体实施方式
本发明要解决的第一个问题就是提供一种羊肚菌的出菇方法,该种方法为平板出菇法。
羊肚菌平板出菇方法,包括以下步骤:
a、将高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水混匀,离心,取上清液,过滤得土壤滤液;其中,所述高有机质含量的土壤为腐殖土或花木土;
b、向PDA培养基添加培养基改良剂和步骤a所得土壤滤液,混匀后得到羊肚菌高效培养基,冷却凝固,备用;其中,所述培养基改良剂为:将蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、FeSO4、维生素B、维生素C和水按重量比1~3:1~3:1~3:2~4:3~5:1~3:100混匀制得;PDA培养基、培养基改良剂和步骤b所得土壤滤液的重量比为1000:10~30:40~65。
其中,所述PDA培养基由下述配比的组份制备:每1000mL培养基中,马铃薯150~300g,葡萄糖10~25g,琼脂10~25g,加水定容至1000mL。优选的,每1000ml培养基中,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂18g,加水定容至1000ml。
所述,羊肚菌菌柄土壤为自然发生羊肚菌的土壤,优选的,所述自然发生羊肚菌的土壤采用产生黑色系羊肚菌的土壤。
本发明添加培养基改良剂,其目的是为了优化羊肚菌菌丝生长,使得菌核快速大量出现。
c、接种羊肚菌菌丝于羊肚菌高效培养基中进行避光培养,保持培养温度为14~24℃,持续培养,即得到羊肚菌子实体。
优选的,所述高有机质含量的土壤为腐殖土。
优选的,步骤a中,高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水的重量比为80~120:8~20:80~150;优选的,高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水的重量比为100:10:100。
优选的,步骤b中,上清液过滤采用细胞滤器;优选的,所述细胞滤器的滤网孔径为0.3~0.5μm;滤网孔径更优选为0.45μm。采用细胞过滤器过滤,可以有效保存土壤中有利于羊肚菌菌丝生长的成分。
优选的,步骤b中,蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、FeSO4、维生素B、维生素C和水的重量比为2:2:2:3:4:2:100。
优选的,步骤b中,PDA培养基、培养基改良剂和土壤滤液的体积比为1000:25:50。
为了加速菌核萌发,加速原基的形成,优选的,其中,培养过程中的温度采用梯度控温法进行控制,具体为:接种后0~12h,温度保持22~24℃;12~36h,温度保持15~16℃;36~72h,温度保持18~20℃;72h之后,温度保持14~16℃。
更优选的,步骤c中,温度控制为:接种后0~12h,温度保持24℃;12~36h,温度保持16℃;36~72h,温度保持18℃;72h之后,温度保持16℃。在该温度下,菌核的萌发最快,数量最多;原基的形成也最快,数量最多。
为了促进原基形成,最终长成羊肚菌子实体,优选的,步骤c中:在避光培养过程中,需要进行补光,具体为:接种后11~13h,采用150~250勒克斯照度白光处理1~1.5h;接种后34~38h,采用150~250勒克斯照度白光处理1~1.5h;接种后70~74h,采用100~120勒克斯照度白光处理2~2.5h。
为了进一步加快原基的形成时间和增加原基的数目,进一步优选的,步骤c中:接种后12h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后36h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后72h,采用100勒克斯照度白光处理2h。
在羊肚菌的培育过程中,菌核的形成和原基的形成,对培养基的要求不同。比如采用PDA培养基,虽然能形成菌核,但是后期不能形成原基。
下面结合实施例对本发明的具体实施方式做进一步的描述,并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
本发明下述实施例所使用的PDA培养基,采用以下制备方法:每1000ml培养基中,马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂18g,加水定容至1000ml。
本发明下述实施例所使用的培养基改良剂是由下述重量配比的组分混合溶解制备而成:KH2PO4 2份,MgSO4 2份,FeSO4 3份,维生素B 4份,维生素C 2份,蛋白胨2份,水100份。
本发明下述实施例所使用的土壤滤液的制备方法为:将100重量份的腐殖土、10重量份的羊肚菌菌柄土壤和100重量份的水混匀,离心,取上清液,用滤网孔径为0.45μm的细胞滤器过滤上清液,得土壤滤液。
实施例1
(1)配制PDA培养基1L,高温湿热灭菌,加入细胞滤器过滤的土壤滤液(1g/mL)50mL,加入培养基改良剂25mL,混合后得到改良PDA培养基。每个平皿倒入处理后的改良PDA培养基20mL,共20个平皿,置于超净台上自然凝固,作为试验组;
(2)设置PDA培养基作为对照组:每个平皿倒入20mLPDA培养基,共20个平皿;其中对照组和实验组所用的平皿完全一致;
(3)挑取等量的梯棱羊肚菌(Morchella importuna)菌丝分别接种在PDA培养基及改良PDA培养基上;
(4)将实验组和对照组置于真菌培养箱中避光培养,培养温度为18℃;
(5)观察菌丝生长情况以及菌核出现时间。
添加了羊肚菌菌柄土壤滤液和改良剂的改良培养基能有效促进菌丝生长,试验组6d可长满平板,优于对照组的8d,同时,试验组的菌丝生长速度也快于对照组;试验组菌核形成多且较快,试验组从接种后7d开始出现菌核,优于对照组的10d;同时,试验组菌核数目也显著多于对照组。
实验组和对照组的具体数据见表1。其中,实验组为表1中的PDA改良培养基处理组;对照组为PDA培养基处理组。
实施例2
(1)配制PDA培养基1L,高温湿热灭菌,加入细胞滤器过滤的土壤滤液(1g/mL)50mL,加入培养基改良剂25mL,混合后得到改良PDA培养基。每个平皿倒入处理后的改良PDA培养基20mL,共40个平皿,置于超净台上自然凝固;每个平皿接种与实施例1同等用量的梯棱羊肚菌菌丝;
(2)将40个平皿置于真菌培养箱中避光培养;
其中,将20个平皿设置为对照组,设定培养温度为18℃;
另外20个平皿设置为实验组,设定温度为:接种后0~12h,温度保持24℃;12~36h,温度保持16℃;36~72h,温度保持18℃;72h之后,温度保持16℃;
(3)观察实验组和对照组的菌丝生长情况,菌核出现时间和原基出现时间。
实验组和对照组的具体数据见表1。实验组为表1中的PDA改良培养基处理组+梯度控温法组;对照组为PDA改良培养基处理组。
在改良的PDA培养基础上,采用梯度控温法,可以提高原基的形成效率。对照组原基出现在接种后的14d,一个PDA平板中,平均原基数目为6.9个;梯度控温法使得原基出现在12d,一个PDA平板中,平均原基数目为9.3个。
实施例3
(1)配制PDA培养基1L,高温湿热灭菌,加入细胞滤器过滤的土壤滤液(1g/mL)50mL,加入培养基改良剂25mL,每个平皿倒入处理后的改良PDA培养基20mL,共40个平皿,置于超净台上自然凝固;每个平皿接种与实施例1同等用量的梯棱羊肚菌菌丝;
(2)置于真菌培养箱中培养,培养温度为18℃;
其中,将20个平皿设置为对照组,对照组为避光培养;
另外20个平皿设置为实验组,实验组也为避光培养,但是需要在关键节点补光,接种后12h,200勒克斯照度白光处理1h;接种后36h,200勒克斯照度白光处理1h;接种后72h,100勒克斯照度白光处理2h;
(3)观察实验组和对照组的菌丝生长情况,菌核出现时间和原基出现时间。
实验组和对照组的具体数据见表1。实验组为表1中的PDA改良培养基+关键节点补光组;对照组为PDA改良培养基处理组。
在改良的PDA培养基础上,采用关键节点补光法,可以提高原基的形成效率。对照组原基出现在接种后的14d,一个PDA平板中,平均原基数目为6.9个;关键节点补光法使得原基出现在13d,一个PDA平板中,平均原基数目为8.4个。
实施例4
(1)配制PDA培养基1L,高温湿热灭菌,加入细胞滤器过滤的土壤滤液(1g/mL)50mL,加入培养基改良剂25mL,每个平皿倒入处理后的改良PDA培养基20mL,共40个平皿,置于超净台上自然凝固;每个平皿接种与实施例1同等用量的梯棱羊肚菌菌丝;
(2)置于真菌培养箱中培养;
其中,将20个平皿设置为对照组,对照组培养温度为18℃,为避光培养;
将另外20个平皿设置为实验组,实验组采用梯度控温法,避光培养过程中采取关键节点补光,接种后0~12h,温度保持24℃;在接种后12h时,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后12-36h,温度保持16℃;接种后36h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后36~72h,温度保持18℃;接种后72h,采用100勒克斯照度白光处理2h,温度保持16℃;.
(3)观察实验组和对照组的菌丝生长情况,菌核出现时间和原基出现时间。
采用改良PDA培养基,梯度控温法和关键节点补光技术,结果观察到,平板中12d出现原基,一个PDA平板中,平均原基数目为12.9个。
实验组和对照组的具体数据见表1。实验组为表1中的3种处理协同作用组;对照组为PDA改良培养基处理组。
表1不同处理对梯棱羊肚菌出菇的影响
实施例5
(1)配制PDA培养基1L,高温湿热灭菌,加入细胞滤器过滤的土壤滤液(1g/mL)50mL,加入培养基改良剂25mL,每个平皿倒入处理后的改良PDA培养基20mL,共20个平皿,置于超净台上自然凝固;每个平皿接种与实施例1同等用量的梯棱羊肚菌菌丝;
(2)置于真菌培养箱中培养;采用梯度控温法和关键节点补光,接种后0~12h,温度保持22℃;在接种后12h时,采用150勒克斯照度白光处理1h;接种后12~36h,温度保持15℃;接种后36h,采用250勒克斯照度白光处理1h;接种后36~72h,温度保持20℃;接种后72h,采用120勒克斯照度白光处理2h,温度保持14℃;.
(3)观察菌丝生长情况,菌核出现时间和原基出现时间,数据见表2.。
实施例6
(1)配制PDA培养基1L,高温湿热灭菌,加入细胞滤器过滤的土壤滤液(1g/mL)50mL,加入培养基改良剂25mL,每个平皿倒入处理后的改良PDA培养基20mL,共20个平皿,置于超净台上自然凝固;每个平皿接种与实施例1同等用量的梯棱羊肚菌菌丝;
(2)置于真菌培养箱中培养;采用梯度控温法和关键节点补光,接种后0~12h,温度保持24℃;在接种后12h时,采用250勒克斯照度白光处理1h;接种后12~36h,温度保持16℃;接种后36h,采用150勒克斯照度白光处理1h;接种后36~72h,温度保持19℃;接种后72h,采用110勒克斯照度白光处理2h,温度保持15℃;
(3)观察菌丝生长情况,菌核出现时间和原基出现时间,数据见表2。
表2

Claims (10)

1.羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,包括以下步骤:
a、将高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水混匀,离心,取上清液,过滤得土壤滤液;其中,所述高有机质含量的土壤为腐殖土或花木土;
b、向PDA培养基中添加培养基改良剂和步骤a所得的土壤滤液,混匀后得到羊肚菌高效培养基,冷却凝固,备用;其中,所述培养基改良剂由蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、FeSO4、维生素B、维生素C和水按重量比1~3:1~3:1~3:2~4:3~5:1~3:100混匀制得;PDA培养基、培养基改良剂和土壤滤液的体积比为1000:10~30:40~65;
c、接种羊肚菌菌丝于羊肚菌高效培养基中进行避光培养,保持培养温度为14~24℃,得到羊肚菌子实体。
2.根据权利要求1所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤a中,高有机质含量的土壤为腐殖土。
3.根据权利要求1所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤a中,高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水的重量比为80~120:8~20:80~150;优选的,高有机质含量的土壤、羊肚菌菌柄土壤和水的重量比为100:10:100。
4.根据权利要求1或2所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤a中,过滤采用细胞滤器过滤;优选的,所述细胞滤器的滤网孔径为0.3~0.5μm;更优选的,滤网孔径为0.45μm。
5.根据权利要求1或2所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤b中,蛋白胨、KH2PO4、MgSO4、FeSO4、维生素B、维生素C和水的重量比为2:2:2:3:4:2:100。
6.根据权利要求1~5任一项所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤b中,PDA培养基、培养基改良剂和土壤滤液的体积比为1000:25:50。
7.根据权利要求1~6任一项所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤c中,培养过程中的温度采用梯度控温法进行控制,具体为:接种后0~12h,温度保持22~24℃;接种后12~36h,温度保持15~16℃;接种后36~72h,温度保持18~20℃;接种72h之后,温度保持14~16℃。
8.根据权利要求7所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤c中,温度控制为:接种后0~12h,温度保持24℃;12~36h,温度保持16℃;36~72h,温度保持18℃;72h之后,温度保持16℃。
9.根据权利要求1~8任一项所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于,步骤c中:在培养过程中,需要进行补光,具体为:接种后11~13h,采用150~250勒克斯照度白光处理1~1.5h;接种后34~38h,采用150~250勒克斯照度白光处理1~1.5h;接种后70~74 h,采用100~120勒克斯照度白光处理2~2.5h。
10.根据权利要求9所述的羊肚菌平板出菇方法,其特征在于:接种后12h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后36h,采用200勒克斯照度白光处理1h;接种后72h,采用100勒克斯照度白光处理2h。
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