CN110117330A - 一种分离的白茅根多糖及其用途 - Google Patents

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CN110117330A CN201810112124.7A CN201810112124A CN110117330A CN 110117330 A CN110117330 A CN 110117330A CN 201810112124 A CN201810112124 A CN 201810112124A CN 110117330 A CN110117330 A CN 110117330A
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Abstract

本申请涉及医药领域。本申请涉及一种分离的白茅根多糖及其在制备用于治疗高脂血症的药物中的用途。特别地，本申请涉及一种包含L‑阿拉伯糖、D‑木糖、D‑甘露糖、D‑葡萄糖和D‑半乳糖的分离的白茅根多糖，其中L‑阿拉伯糖、D‑木糖、D‑甘露糖、D‑葡萄糖和D‑半乳糖的摩尔比为20‑40：40‑60：1‑10：10‑30：10‑20，优选为25‑30：45‑55：1‑5：10‑15：10‑15。

Description

一种分离的白茅根多糖及其用途
技术领域
本申请涉及医药领域。具体而言，本申请涉及一种分离的白茅根多糖(Imperatacylindrica polysaccharide，ICP)及其在制备用于治疗高脂血症的药物中的用途。
背景技术
近年的研究发现，糖类物质不仅是一类重要的结构物质和能量物质，而且还具有重要的生物学功能。糖类物质参与细胞间的相互识别及信息传递过程，被认为是生物体内除核酸以外的又一类重要的信息分子。而且，糖类物质还是细胞表面信号识别、抗原抗体反应、细胞间信息传递和感受的关键因子。因此，对具有生物活性的多糖的研究日益受到重视。由于糖类物质结构复杂，其分离及结构鉴定均很困难。到目前为止，只有云芝多糖、猪苓多糖、香菇多糖、裂褶多糖、茯苓多糖等用于临床。本领域中需要更多具有生物活性的多糖。
中药白茅根为伞形科植物白茅根(Imperata cylindrica(Linn)Beauv.var.major(Nees)C.E.Hubb.)的干燥根茎。白茅根主要的化学成分有糖类、三萜类、内酯类、有机酸类等。白茅根多糖是一种由多种单糖连接成的支链多糖。通常，通过其中所含的单糖组成及其连接方式来表征白茅根多糖。通过不同提取方法制得的各种白茅根多糖的单糖组成及其连接方式彼此并不相同。邹一可等(邹一可、张明月、王彩云等，白茅根多糖IC1的分离及其相对分子质量和单糖组成的测定，中国实验方剂学杂志，2012，18(2)：80-82)报道了一种白茅根多糖，其分子量为8292.2，包括摩尔比为1：11.45：1.26：1.02：95.23的鼠李糖、木糖、果糖、甘露糖、葡萄糖。白茅根多糖在本领域中通常用于止血、调节免疫、利尿降压、抑菌、抗炎镇痛、抗肿瘤、抗氧化、改善肾功能等作用等。迄今尚未报道白茅根多糖用于治疗高脂血症。
高脂血症(Hyperlipoidemia)是指血液中一种或多种脂质水平异常(例如，多种脂质水平高于正常水平)的代谢疾病。高脂血症表现为血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平过低。近年来，高脂血症的发病率不断上升。高脂血症还与一些严重的心脑血管疾病(比如动脉粥样硬化、冠心病等)密切相关。
发明内容
由于糖类物质结构复杂，不同的提取方式会直接影响到多糖的结构组成，从而影响药效。本发明提供一种改进的制备白茅根多糖的方法，所述方法包括碱性提取和梯度沉淀的步骤。经结构鉴定，发现本发明所述分离的白茅根多糖与已知的白茅根多糖结构完全不相同。经动物试验验证，发现本发明所述分离的白茅根多糖具有潜在的调节血脂的作用。
本申请在一个方面提供一种包含L-阿拉伯糖(L-Ara)、D-木糖(D-Xyl)、D-甘露糖(D-Man)、D-葡萄糖(D-Glc)和D-半乳糖(D-Gal)的分离的白茅根多糖，其中L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的摩尔比为20-40：40-60：1-10：10-30：10-20，优选为25-30：45-55：1-5：10-15：10-15。
在一种实施方式中，所述分离的白茅根多糖包含的单糖组分通过糖苷键相互连接在一起。所述L-阿拉伯糖包括端基L-阿拉伯糖和/或1,2,4-连接的L-阿拉伯糖；所述D-木糖包括端基D-木糖、1,4-连接的D-木糖和/或1,3,4-连接的D-木糖；所述D-甘露糖包括端基D-甘露糖和/或1,6-连接的D-甘露糖；所述D-葡萄糖包括1,4-连接的D-葡萄糖和/或1,6-连接的D-葡萄糖；或者所述D-半乳糖包括1,4-连接的D-半乳糖。
在一种优选实施方式中，本申请所述L-阿拉伯糖包括端基L-阿拉伯糖和/或1,2,4-连接的L-阿拉伯糖。
在一种优选实施方式中，本申请所述D-木糖包括端基D-木糖、1,4-连接的D-木糖和/或1,3,4-连接的D-木糖
在一种优选实施方式中，本申请所述D-甘露糖包括端基D-甘露糖和/或1,6-连接的D-甘露糖。
在一种优选实施方式中，本申请所述D-葡萄糖包括1,4-连接的D-葡萄糖和/或1,6-连接的D-葡萄糖。
在一种优选实施方式中，本申请所述D-半乳糖包括1,4-连接的D-半乳糖。
在一种实施方式中，所述分离的白茅根多糖包含端基L-阿拉伯糖、1,2,4-连接的L-阿拉伯糖、端基D-木糖、1,4-连接的D-木糖、1,3,4-连接的D-木糖、端基D-甘露糖、1,6-连接的D-甘露糖、1,4-连接的D-葡萄糖、1,6-连接的D-葡萄糖和1,4-连接的D-半乳糖。在另一优选的实施方式中，所述端基L-阿拉伯糖：1,2,4-连接的L-阿拉伯糖：端基D-木糖：1,4-连接的D-木糖：1,3,4-连接的D-木糖：端基D-甘露糖：1,6-连接的D-甘露糖：1,4-连接的D-葡萄糖：1,6-连接的D-葡萄糖：1,4-连接的D-半乳糖的摩尔比为1-5：15-30：1-5：10-20：15-30：1-5：1-5：5-15：5-15：10-20，优选为1-5：15-25：1-5：10-15：20-25：1-3：1-3：5-10：5-10：10-15。
在另一种实施方式中，所述单糖组分中的一种或多种是吡喃糖；在一种优选的实施方式中，所述单糖组分都是吡喃糖。
在一种优选的实施方式中，本申请所述分离的白茅根多糖分子量为1×104至5×105Da，优选地为1×105至3×105Da。
本申请在另一个方面提供一种制备分离的白茅根多糖的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)用碱性溶液一次或多次提取白茅根，得到白茅根碱性提取液
(2)向所述白茅根碱性提取液加入酸以调节pH至7.0，以得到中性提取液，任选浓缩所述中性提取液；
(3)向所述中性提取液加入有机溶剂以得到有机溶剂浓度为15-30％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液；
(4)向所述上清液中加入有机溶剂以得到有机溶剂浓度为70-90％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(5)干燥所述沉淀，以得到所述的分离的白茅根多糖。
在一种实施方式中，所述步骤(1)所述碱性溶液选自氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸钾水溶液或碳酸氢钾水溶液中的一种或多种，优选氢氧化钠水溶液。
在一种实施方式中，所述步骤(1)所述碱性溶液的浓度为0.01-5mol/L，优选为0.1-1mol/L。
在一种实施方式中，所述步骤(1)中碱性溶液与防风的体积重量比为8：1至30：1，优选20：1至30：1。
在一种实施方式中，所述步骤(2)所述的酸选自盐酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸中的一种或多种，优选为盐酸。
在一种实施方式中，所述步骤(3)中的有机溶剂浓度优选为17-28％、更优选20-25％。在一些实施方式中，所述步骤(3)也被称为第一梯度沉淀。
在一种实施方式中，所述步骤(4)中的有机溶剂浓度优选为70-85％，更优选80-85％。
在一种实施方式中，所述步骤(1)中所述提取温度为40-100℃，优选60-100℃，更优选80-100℃、最优选90-95℃。在一种实施方式中，所述步骤(1)中所述提取时间为1-4小时，优选1-2小时。在一种实施方式中，所述步骤(1)中用碱性溶液提取白茅根的次数为1、2、3或4次。
在一种实施方式中，所述步骤(4)和(5)之间还存在步骤(4’)：用水溶解步骤(4)所得沉淀以得到水溶液，向所述水溶液加入有机溶剂以得到有机溶剂浓度为70-90％、优选为75-85％、更优选80-85％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；步骤(4’)可以重复一次或多次，优选1、2、或3次。
在一些实施方式中，所述步骤(4)和/或(4’)也被称为第二梯度沉淀。
在一种实施方式中，所述步骤(3)和/或(4)和/或(4’)中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、或其混合物，优选乙醇。
本申请所述白茅根包括商业上可获得的药材白茅根(即植物白茅根的干燥根茎)和白茅根饮片。在一种实施方式中，本申请所述白茅根是白茅根饮片。
术语“分离的白茅根多糖”是指通过人工手段(例如提取、纯化等)将白茅根多糖从其原始植物原料的自然环境中分离出来而得到的白茅根多糖。所述植物原料可以是植物形式的白茅根或药材形式的白茅根，例如植物白茅根的干燥根茎或白茅根饮片。
在一种实施方式中，本申请提供一种分离的白茅根多糖，其是根据本申请所述制备方法获得的。在一种优选的实施方式中，所述分离的白茅根多糖包含L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的白茅根多糖，其中L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的摩尔比为20-40：40-60：1-10：10-30：10-20，优选为25-30：45-55：1-5：10-15：10-15。在一种优选的实施方式中，所述L-阿拉伯糖包括端基L-阿拉伯糖和/或1,2,4-连接的L-阿拉伯糖；所述D-木糖包括端基D-木糖、1,4-连接的D-木糖和/或1,3,4-连接的D-木糖；所述D-甘露糖包括端基D-甘露糖和/或1,6-连接的D-甘露糖；所述D-葡萄糖包括1,4-连接的D-葡萄糖和/或1,6-连接的D-葡萄糖；或者所述D-半乳糖包括1,4-连接的D-半乳糖。在一种实施方式中，所述白茅根多糖包含端基L-阿拉伯糖、1,2,4-连接的L-阿拉伯糖、端基D-木糖、1,4-连接的D-木糖、1,3,4-连接的D-木糖、端基D-甘露糖、1,6-连接的D-甘露糖、1,4-连接的D-葡萄糖、1,6-连接的D-葡萄糖和1,4-连接的D-半乳糖。在另一优选的实施方式中，所述端基L-阿拉伯糖：1,2,4-连接的L-阿拉伯糖：端基D-木糖：1,4-连接的D-木糖：1,3,4-连接的D-木糖：端基D-甘露糖：1,6-连接的D-甘露糖：1,4-连接的D-葡萄糖：1,6-连接的D-葡萄糖：1,4-连接的D-半乳糖的摩尔比为1-5：15-30：1-5：10-20：15-30：1-5：1-5：5-15：5-15：10-20，优选为1-5：15-25：1-5：10-15：20-25：1-3：1-3：5-10：5-10：10-15。
所述端基L-阿拉伯糖是指通过糖环1位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的L-阿拉伯糖。
所述1,2,4-连接的L-阿拉伯糖是指通过糖环1、2和4位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的L-阿拉伯糖。
所述端基D-木糖是指通过糖环1位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-木糖。
所述1,4-连接的D-木糖是指通过糖环1和4位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-木糖。
所述1,3,4-连接的D-木糖是指通过糖环1、3和4位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-木糖。
所述端基D-甘露糖是指通过糖环1位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-甘露糖。
所述1,6-连接的D-甘露糖是指通过糖环1和6位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-甘露糖。
所述1,4-连接的D-葡萄糖是指通过糖环1和4位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-葡萄糖。
所述1,6-连接的D-葡萄糖是指通过糖环1和6位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-葡萄糖。
所述1,4-连接的D-半乳糖是指通过糖环1和4位上的糖苷键与相邻基团(例如相邻单糖残基)连接的D-半乳糖。
本申请所述糖可以是α构型或β构型。
本申请在另一个方面提供了本发明所获得的分离的白茅根多糖在制备用于治疗高脂血症的药物中的用途。
在一种实施方式中，所述治疗高脂血症药物为血脂代谢调节剂。
本申请在另一个方面提供了一种药物组合物，包含治疗有效量的本发明所获得的分离的白茅根多糖，以及药学上可接受的载体。
在一种优选的实施方式中，所述药物组合物是片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、悬浮液、溶液、分散剂、用于口服或非口服给药的缓释制剂、静脉注射制剂、皮下注射制剂、吸入制剂、透皮制剂、直肠或阴道栓剂。
本申请所述药学上可接受载体是指本领域技术人员熟知的药学上可接受载体，本申请的药学上可接受载体包括但不限于：填充剂、润湿剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、粘合剂、助流剂、掩味剂、表面活性剂、防腐剂等。填充剂包括但不限于乳糖、微晶纤维素、淀粉、糖粉、糊精、甘露醇、硫酸钙等。润湿剂与黏合剂包括但不限于羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮等。崩解剂包括但不限于羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素等。润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇、月桂醇硫酸镁等。粘合剂包括但不限于阿拉伯胶、藻酸、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、葡萄糖结合剂、糊精、右旋糖、乙基纤维素、明胶、液体葡萄糖、瓜尔胶、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、硅酸铝镁、麦芽糖糊精、甲基纤维素、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、预明胶化淀粉、藻酸钠、山梨醇、淀粉、糖浆和黄蓍胶。助流剂包括但不限于胶体二氧化硅、粉状纤维素、三硅酸镁、二氧化硅和滑石粉。掩味剂包括但不限于阿斯巴坦、甜菊苷、果糖、葡萄糖、糖浆、蜂蜜、木糖醇、甘露醇、乳糖、山梨醇、麦芽糖醇、甘草甜素。表面活性剂包括但不限于吐温-80、泊洛沙姆。防腐剂包括但不限于尼泊金酯、苯甲酸钠、山梨酸钾等。
制备各种含有各种比例活性成分的药物组合物的方法是已知的，或根据本申请的公开内容对于本领域技术人员是显而易见的。如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES,Martin,E.W.,ed.,Mack Publishing Company,19th ed.(1995)所述。制备所述药物组合物的方法包括掺入适当的药学赋形剂、载体、稀释剂等。以已知的方法制造本申请所述药物组合物，包括常规的混合、溶解或冻干方法。
在本申请所述药物组合物中，活性成分的比例可以变化，可占给定的单位剂型重量的大约0.01％至大约99％。在这种治疗有用的药物组合物制剂中，活性成分的量使得能够获得有效剂量水平。
本申请所述的片剂、胶囊剂等可以包含：粘合剂，如黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉或明胶；赋形剂，如磷酸氢二钙；崩解剂，如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸等；润滑剂，如硬脂酸镁；和甜味剂，如蔗糖、果糖、乳糖或阿司帕坦；或调味剂，如薄荷、冬青油或樱桃香味。当单位剂型是胶囊时，除了上面类型的材料，它还可以包含液体载体，如植物油或聚乙二醇。各种其他材料可以存在，作为包衣，或以其他方式改变固体单位剂型的物理形式。例如，片剂或胶囊剂可以用明胶、蜡、虫胶或糖等包衣。糖浆可以包含活性成分，蔗糖或果糖作为甜味剂，对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯作为防腐剂，染料和调味剂(如樱桃香料或桔子香料)。当然，用于制备任何单位剂型的任何材料应该是药学上可以接受的且以应用的量为无毒。此外，活性成分可以掺入缓释制剂和缓释装置中。
活性成分也可以通过输注或注射到静脉内或腹膜内施用。可以制备活性成分或其盐的水溶液，任选可混和无毒的表面活性剂。也可以制备在甘油、液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯及其混合物以及油中的分散剂。在普通的储存和使用条件下，这些制剂包含防腐剂以防止微生物生长。
适于注射或输注的药物组合物剂型可以包括包含适于无菌的可注射或可输注的溶液或分散剂的即时制剂的活性成分(任选封装在脂质体中)的无菌水溶液或分散剂或无菌粉末。在所有情况下，最终的剂型在生产和储存条件下必须是无菌的、液体的和稳定的。液体载体可以是溶剂或液体分散介质，包括，例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)、植物油、无毒的甘油酯及其合适的混合物。可以维持合适的流动性，例如，通过脂质体的形成，通过在分散剂的情况下维持所需的粒子大小，或通过表面活性剂的使用。可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂(如对羟苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等)产生预防微生物的作用。在许多情况下，优选包括等渗剂，如糖、缓冲剂或氯化钠。通过使用延缓吸收剂的组合物(例如，单硬脂酸铝和明胶)可以产生可注射的组合物的延长吸收。
通过将合适的溶剂中的需要量的活性成分与需要的上面列举的各种其他成分结合，然后进行过滤灭菌，制备无菌可注射溶液。在用于制备无菌注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法是真空干燥和冷冻干燥技术，这会产生活性成分加上任何另外需要的无菌过滤溶液中存在的成分的粉末。
有用的固体载体包括粉碎的固体(如滑石、粘土、微晶纤维素、二氧化硅、氧化铝等)。有用的液体载体包括水、乙醇或乙二醇或水-乙醇/乙二醇混合物，本申请的药物组合物可以任选在无毒的表面活性剂的帮助下以有效含量溶解或分散在其中。可以加入佐剂(如香味)和另外的抗微生物剂来优化对于给定用途的性质。
增稠剂(如合成的聚合物、脂肪酸、脂肪酸盐和酯、脂肪醇、改性纤维素或改性无机材料)也可和液体载体用于形成可涂覆的糊剂、凝胶、软膏、肥皂等，直接用于使用者的皮肤上。
活性成分的治疗有效量，不仅取决于选择的特定的盐，而且取决于施药方式、待治疗的疾病的性质和患者的年龄和状态，最终取决于在场医师或临床医生的决定。
上述制剂可以以单位剂型存在，该单位剂型是含有单位剂量的物理分散单元，适于向人体和其它哺乳动物体给药。单位剂型可以是胶囊或片剂。根据所涉及的具体治疗，活性成分的单位剂量的量可以在大约0.01到大约1000毫克或更多之间进行变化或调整。
本申请在另一个方面提供了含有治疗有效量的本发明所获得的分离的白茅根多糖的药物组合物在制备用于治疗高脂血症的药物中的用途。
在一种实施方式中，所述治疗高脂血症药物为血脂代谢调节剂。
本申请在另一个方面提供一种分离的白茅根多糖，其是根据本申请所述方法获得的。
在还有另一个方面，本申请提供一种治疗高脂血症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本发明所获得的分离的白茅根多糖。
在一种实施方式中，所述治疗高脂血症是指调节血脂代谢。
在一种优选的实施方式中，所述的治疗高脂血症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的含有治疗有效量的本发明所获得的白茅根多糖的药物组合物。
在还有一个方面，本申请还提供分离的白茅根多糖，用于治疗高脂血症。在一种实施方式中，所述治疗高脂血症是指调节血脂代谢。
本申请所述治疗高脂血症包括调节血脂代谢、调节血脂水平(比如降低血液中脂质的水平，例如降低血液中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平)。另外，本申请所述白茅根多糖还能增加受试者(例如血清和肝中)的超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)的活性，降低丙二醛(MDA)的含量。
本申请使用的术语“治疗”一般是指获得需要的药理和/或生理效应。该效应根据完全或部分地预防疾病或其症状，可以是预防性的；和/或根据部分或完全稳定或治愈疾病和/或由于疾病产生的副作用，可以是治疗性的。本文使用的“治疗”涵盖了对患者疾病的任何治疗，包括：(a)预防易感染疾病或症状但还没诊断出患病的患者所发生的疾病或症状；(b)抑制疾病的症状，即阻止其发展；或(c)缓解疾病的症状，即，导致疾病或症状退化。
除非特别说明，本申请所述百分数、比例、比率或份数是按体积计。本申请所述体积重量比是以毫升/克(或升/千克)计算的体积重量比。本申请所述浓度是体积浓度。
附图说明
图1：白茅根多糖对高脂血症小鼠血脂水平的影响(n＝10)。与正常对照组(正常组)比较，#P<0.05(LSD法检验)，##P<0.01(LSD法检验)；与高脂模型组比较，*P<0.05(LSD法检验)，**P<0.01(LSD法检验)。
图2：白茅根多糖对高脂血症小鼠肝TC和TG含量的影响(n＝10)。与正常对照组(正常组)比较，##P<0.01(LSD法检验)；与高脂模型组比较，*P<0.05(LSD法检验)，**P<0.01(LSD法检验)。
图3：白茅根多糖对高脂血症小鼠肝形态学的影响。图3A：正常对照组；图3B：高脂模型组；图3C：力平之40mg/kg组；图3D：白茅根多糖100mg/kg组；图3E：白茅根多糖200mg/kg组；图3F：白茅根多糖400mg/kg组。
图4：白茅根多糖对高脂血症小鼠肝脏SOD、GSH-px活性和MDA含量的影响(n＝10)。与正常对照组(正常组)比较，#P<0.05(LSD法检验)，##P<0.01(LSD法检验)；与高脂模型组比较，*P<0.05(LSD法检验)，**P<0.01(LSD法检验)。
具体实施方式
下面，本申请将通过实施例展示本申请的有益效果。本领域技术人员会知道，这些实施例是示例性的，而不是限制性的。这些实施例不会以任何方式限制本申请的范围。下述实施例中所述实验操作，如无特殊说明，均为常规操作；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
主要试剂与材料
白茅根饮片，购自安徽亳州中药材市场，产地安国；95％乙醇、盐酸、氢氧化钠、考马斯亮蓝、硫酸、苯酚、氯化钡、三氟乙酸、硼氢化钠、二甲基亚砜等均购自国药集团化学试剂有限公司；L-阿拉伯糖(L-Ara)、D-木糖(D-Xyl)、D-甘露糖(D-Man)、D-葡萄糖(D-Glc)和D-半乳糖(D-Gal)等对照品和1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)均购自Sigma公司。
主要仪器
1260型高效液相色谱仪(DAD和RID检测器，美国Agilent公司)；DAWN HELEOS-Ⅱ型18角度激光光散射仪(美国Wayyat公司)；7890B型气相色谱质谱联用仪(美国Agilent公司)；Infinite M200型酶标微孔板读数仪(美国Tecan公司)。
实施例1：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入0.1mol/L的NaOH水溶液9L。在90℃下用所述NaOH水溶液提取白茅根饮片3小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取2次，每次使用0.1mol/L的NaOH水溶液9L，每次3小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入盐酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入乙醇以得到乙醇浓度为20％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖16g，收率5.3％。
实施例2：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入0.05mol/L的KOH水溶液9L。在40℃下用所述KOH水溶液提取白茅根饮片4小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取3次，每次使用0.05mol/L的KOH水溶液9L，每次4小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入甲酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入甲醇以得到甲醇浓度为30％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入甲醇以得到甲醇浓度为90％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入甲醇以得到甲醇浓度为90％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。重复步骤(4’)操作2次。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖14.8g，收率4.9％。
实施例3：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入5mol/L的Na2CO3水溶液3L。在90℃下用所述Na2CO3水溶液提取白茅根饮片2小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取3次，每次使用5mol/L的Na2CO3水溶液3L，每次2小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入乙酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入乙醇以得到乙醇浓度为15％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。重复步骤(4’)操作2次。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖15.1g，收率5.0％。
实施例4：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入3mol/L的NaHCO3水溶液2.4L。在100℃下用所述NaHCO3水溶液提取白茅根饮片1小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取4次，每次使用3mol/L的NaHCO3水溶液2.4L，每次1小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入磷酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入丙醇以得到丙醇浓度为20％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入丙醇以得到丙醇浓度为70％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入丙醇以得到丙醇浓度为70％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖14.5g，收率4.8％。
实施例5：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入4mol/L的K2CO3水溶液6L。在60℃下用所述K2CO3水溶液提取白茅根饮片3小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取2次，每次使用4mol/L的K2CO3水溶液6L，每次3小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入硝酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入丙酮以得到丙酮浓度为20％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入丙酮以得到丙酮浓度为75％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入丙酮以得到丙酮浓度为75％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖15.2g，收率5.1％。
实施例6：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入2mol/L的KHCO3水溶液6L。在80℃下用所述KHCO3水溶液提取白茅根饮片2小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取2次，每次使用2mol/L的KHCO3水溶液6L，每次2小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入盐酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入乙醇以得到乙醇浓度为25％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖13.6g，收率4.5％。
实施例7：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入0.01mol/L的NaOH水溶液9L。在70℃下用所述NaOH水溶液提取白茅根饮片2小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取3次，每次使用0.01mol/L的NaOH水溶液9L，每次2小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入盐酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入乙醇以得到乙醇浓度为20％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入乙醇以得到乙醇浓度为85％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入乙醇以得到乙醇浓度为85％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖15.6g，收率5.2％。
实施例8：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入1mol/L的NaOH水溶液6L。在95℃下用所述NaOH水溶液提取白茅根饮片1小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取1次，每次使用1mol/L的NaOH水溶液6L，每次1小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入盐酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入乙醇以得到乙醇浓度为20％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖16.3g，收率5.4％。
实施例9：白茅根多糖的制备
(1)向300g白茅根饮片中加入0.5mol/L的NaOH水溶液6L。在90℃下用所述NaOH水溶液提取白茅根饮片2小时，以得到碱性提取液。分离所述碱性提取液后，重复提取2次，每次使用0.5mol/L的NaOH水溶液6L，每次2小时。合并所得碱性提取液。
(2)向所述碱性提取液中加入盐酸以调节pH至7，得到中性提取液，将所述中性提取液浓缩至2L。
(3)向所述中性提取液中加入乙醇以得到乙醇浓度为20％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液。
(4)向所述上清液中加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(4’)向所述沉淀加入0.5L蒸馏水，以使之溶解。然后，再次加入乙醇以得到乙醇浓度为80％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀。
(5)干燥所得沉淀，以得到白茅根多糖17.6g，收率5.9％。
实施例10：白茅根多糖的结构鉴定
(1)总糖、糖醛酸、蛋白及硫酸基含量测定
根据硫酸-苯酚法(参见王海侠，白茅根多糖的提取与含量测定，中国中医药信息杂志，2010，17(2)：55-57页)测定实施例1至实施例9所得白茅根多糖总糖含量。
(2)根据间羟联苯法(参见高林，MCP中糖醛酸的含量测定，化学工业与工程，2005，22(6)：487-489)测定实施例1至实施例9所得白茅根多糖糖醛酸含量。
(3)根据考马斯亮蓝法(参见张婕，盐炙前后关黄柏多单糖本含量测定及对免疫功能的影响，辽宁中医杂志，2017，44(6)：1263-1267)测定实施例1至实施例9所得白茅根多糖蛋白含量。
(4)根据BaCl2比浊法(参见陈乾，硫酸钡-比浊法测定褐藻糖胶中硫酸根的含量，药学实践杂志，2012，30(2)：118-120)测定实施例1至实施例9所得白茅根多糖硫酸基含量。
测定结果见下表1：
表1
(5)重均分子量测定
采用多角度激光光散射法(参见丁厚强，多角度激光光散射仪与尺寸排阻色谱法联用测定透明质酸相对分子质量及其分布，食品与药品，2009，11(3)：24-26)测定实施例1至实施例9所得白茅根多糖的重均分子量。
测定方法
将10mg待测样品置于1.5mL离心管中。然后加入1mL去离子水，以使所述样品使溶解。在14000rpm转速下将所述离心管离心10min，以得到上清液。使用Agilent 1260HPLC色谱仪对所述上清液进行测定，以确定重均分子量。
色谱条件：
色谱柱：XBridge Protein BEH SECColumn(3.5μm,7.8×300mm)；柱温：25℃；RID温度：35℃；流动相：0.1mol/L NaOAc溶液；流速：0.5mL/min；进样量：30μL。
测定结果见表2：
表2
实施例编号 重均分子量/Da
1 1.4×10<sup>5</sup>
2 9.3×10<sup>4</sup>
3 2.2×10<sup>5</sup>
4 6.7×10<sup>4</sup>
5 3.9×10<sup>5</sup>
6 2.7×10<sup>4</sup>
7 1.7×10<sup>5</sup>
8 2.1×10<sup>5</sup>
9 2.8×10<sup>5</sup>
(6)单糖组成分析
将2mg实施例1-9所得白茅根多糖溶解于安瓿瓶中的1mL的3mol/L的三氟乙酸(TFA)水溶液中，然后将所述安瓿瓶封口。将所述安瓿瓶中的白茅根多糖在105℃水解4小时。将所述安瓿瓶中的水在减压条件下蒸干后，向所述安瓿瓶中加入2mL甲醇，然后蒸干。重复添加乙醇并蒸干的操作2次以除去TFA。然后，向所述安瓿瓶中加入100μL水，得到所述多糖的酸性条件完全水解的样品。
再称取适量单糖对照品配制成浓度为1mg/mL的母液。吸取母液10μL，定容至100μL。
衍生化处理：取50μL对照品溶液，依次加入100μL 0.3mol/L NaOH溶液、120μL0.5mol/L的1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮的甲醇溶液并混匀以得到混合溶液。将所述混合溶液在70℃反应60分钟。反应结束后，将所述溶液冷却至室温，加入适量0.3mol/L的HCl以调节pH值至中性，然后用1mL氯仿萃取并弃去有机相。取50μL所述多糖的酸性条件完全水解的样品，同样按照以上方法进行衍生化处理。
色谱条件：
Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱；流动相：0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH＝6.7)∶乙腈(v/v＝83∶17)；柱温25℃；检测波长245nm；流速1.0mL/min；进样体积10μL。
测定结果见下表3：
表3
(7)甲基化分析
参照文献方法(方积年，多糖的甲基化分析方法，国外医学(药学分册)，1986，(4)：222-226)分别对实施例1-9获得的白茅根多糖进行甲基化。甲基化后的产物用90％甲酸解聚，并用2mol/L TFA全水解，得到甲基化单糖。然后所得甲基化单糖用NaBH4还原、并用醋酸酐乙酰化以制成所述甲基化单糖的阿尔迪醇乙酸酯衍生物，然后对所述衍生物进行GC-MS分析。
根据甲基化分析结果，可确定实施例1-9获得的白茅根多糖包含以下连接方式的单糖：端基L-阿拉伯糖、1,2,4-L-阿拉伯糖、端基D-木糖、1,4-D-木糖、1,3,4-D-木糖、端基D-甘露糖、1,6-D-甘露糖、1,4-D-葡萄糖、1,6-D-葡萄糖、1,4-D-半乳糖。甲基化分析结果见表4-12。
表4实施例1所得白茅根多糖的甲基化分析结果
甲基化糖残基 单糖 摩尔比
2,3,4-Me<sub>3</sub>-L-Ara 端基L-阿拉伯糖 4
3-Me-L-Ara 1,2,4-L-阿拉伯糖 21
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Xyl 端基D-木糖 2
2,3-Me<sub>2</sub>-D-Xyl 1,4-D-木糖 14
2-Me-D-Xyl 1,3,4-D-木糖 23
2,3,4,6-Me<sub>4</sub>-D-Man 端基D-甘露糖 1
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Man 1,6-D-甘露糖 2
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,4-D-葡萄糖 5
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,6-D-葡萄糖 7
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Gal 1,4-D-半乳糖 13
表5实施例2所得白茅根多糖的甲基化分析结果
表6实施例3所得白茅根多糖的甲基化分析结果
甲基化糖残基 单糖 摩尔比
2,3,4-Me<sub>3</sub>-L-Ara 端基L-阿拉伯糖 1
3-Me-L-Ara 1,2,4-L-阿拉伯糖 22
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Xyl 端基D-木糖 5
2,3-Me<sub>2</sub>-D-Xyl 1,4-D-木糖 15
2-Me-D-Xyl 1,3,4-D-木糖 25
2,3,4,6-Me<sub>4</sub>-D-Man 端基D-甘露糖 1
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Man 1,6-D-甘露糖 1
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,4-D-葡萄糖 5
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,6-D-葡萄糖 10
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Gal 1,4-D-半乳糖 11
表7实施例4所得白茅根多糖的甲基化分析结果
甲基化糖残基 单糖 摩尔比
2,3,4-Me<sub>3</sub>-L-Ara 端基L-阿拉伯糖 1
3-Me-L-Ara 1,2,4-L-阿拉伯糖 25
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Xyl 端基D-木糖 3
2,3-Me<sub>2</sub>-D-Xyl 1,4-D-木糖 18
2-Me-D-Xyl 1,3,4-D-木糖 20
2,3,4,6-Me<sub>4</sub>-D-Man 端基D-甘露糖 1
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Man 1,6-D-甘露糖 1
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,4-D-葡萄糖 8
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,6-D-葡萄糖 9
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Gal 1,4-D-半乳糖 11
表8实施例5获得的白茅根多糖的甲基化分析结果
甲基化糖残基 单糖 摩尔比
2,3,4-Me<sub>3</sub>-L-Ara 端基L-阿拉伯糖 2
3-Me-L-Ara 1,2,4-L-阿拉伯糖 23
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Xyl 端基D-木糖 1
2,3-Me<sub>2</sub>-D-Xyl 1,4-D-木糖 13
2-Me-D-Xyl 1,3,4-D-木糖 28
2,3,4,6-Me<sub>4</sub>-D-Man 端基D-甘露糖 3
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Man 1,6-D-甘露糖 2
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,4-D-葡萄糖 7
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,6-D-葡萄糖 4
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Gal 1,4-D-半乳糖 12
表9实施例6所得白茅根多糖的甲基化分析结果
表10实施例7所得白茅根多糖的甲基化分析结果
甲基化糖残基 单糖 摩尔比
2,3,4-Me<sub>3</sub>-L-Ara 端基L-阿拉伯糖 4
3-Me-L-Ara 1,2,4-L-阿拉伯糖 15
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Xyl 端基D-木糖 1
2,3-Me<sub>2</sub>-D-Xyl 1,4-D-木糖 19
2-Me-D-Xyl 1,3,4-D-木糖 22
2,3,4,6-Me<sub>4</sub>-D-Man 端基D-甘露糖 1
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Man 1,6-D-甘露糖 3
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,4-D-葡萄糖 8
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,6-D-葡萄糖 5
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Gal 1,4-D-半乳糖 12
表11实施例8所得白茅根多糖的甲基化分析结果
甲基化糖残基 单糖 摩尔比
2,3,4-Me<sub>3</sub>-L-Ara 端基L-阿拉伯糖 5
3-Me-L-Ara 1,2,4-L-阿拉伯糖 24
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Xyl 端基D-木糖 4
2,3-Me<sub>2</sub>-D-Xyl 1,4-D-木糖 10
2-Me-D-Xyl 1,3,4-D-木糖 22
2,3,4,6-Me<sub>4</sub>-D-Man 端基D-甘露糖 1
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Man 1,6-D-甘露糖 1
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,4-D-葡萄糖 7
2,3,4-Me<sub>3</sub>-D-Glc 1,6-D-葡萄糖 6
2,3,6-Me<sub>3</sub>-D-Gal 1,4-D-半乳糖 10
表12实施例9获得的白茅根多糖的甲基化分析结果
实施例11白茅根多糖降血脂作用实验
实验药物：实施例9获得的白茅根多糖，分别以100mg/kg(低剂量)、200mg/kg(中剂量)和400mg/kg(高剂量)的剂量施用。
实验试剂：TC、TG、LDL-C、HDL-C、SOD、GSH-px、MDA和考马斯亮兰蛋白测定试剂盒，均由南京建成生物工程研究所提供。
实验动物：健康清洁级的雄性昆明小鼠(体重18-22g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供)。
实验仪器：高速冷冻离心机，由德国Eppendorf公司生产；电子天平，由Mettler-Toledo公司生产；多功能酶标仪，由美国伯腾仪器有限公司生产
参照文献方法(孙立彦，刘振亮，孙金霞，等.白茅根多糖对小鼠耐缺氧作用的影响，中国医院药学杂志，2008,28(2):96-99；冷斌，白茅根多糖对IgA肾病大鼠免疫调节及肾纤维化的干预，桂林医学院学位论文，2013；吕世静，龙启才，何德袁等，白茅根多糖对乙肝患者淋巴细胞增殖及T细胞亚群的调节作用，[会议论文]2001-第二届全国中医药免疫学术研讨)，建立高脂血症模型。实验方法：将小鼠在20±2℃的温度下和在50±5％的湿度下在12小时光照和12小时黑暗的条件下饲养3天，其间小鼠可自由进食摄水。将小鼠随机分为6组：正常对照组(正常组)、高脂模型组、阳性药力平之(Lipanthyl，非诺贝特，40mg/kg)组、低剂量白茅根多糖组(ICP 100mg/kg)、中剂量白茅根多糖组(ICP 200mg/kg)和高剂量白茅根多糖组(ICP 400mg/kg)，每组10只。对于各给药组，在每天8:00-9:00按0.2ml/10g体重给予不同剂量的药物。正常对照组与高脂饮食组给予等体积的蒸馏水。给药第4天，除正常对照组外，各组小鼠于每天14:00-15:00按0.2ml/10g体重灌胃给予高脂饮食(含有20％猪油、10％胆固醇、0.2％丙基硫氧嘧啶、20％丙二醇和20％吐温-80)，连续3周。实验结束时，小鼠禁食不禁水8h后处理。从小鼠眼眶取血，并通过离心从血中获得血清。测定血清TC、LDL-C和HDL-C，并计算LDL-C/HDL-C比值。取小鼠部分肝脏组织，匀浆，测定肝TC和TG含量，以及SOD、GSH-px活性和MDA含量。另取小鼠部分肝脏组织，用10％甲醛固定并进行形态学检查。
实验结果：
(1)白茅根多糖对高脂血症小鼠血脂水平的影响
如图1所示：与正常对照组比较，高脂模型组中小鼠的血清TC和LDL-C水平均显著升高(P<0.01)，而且LDL-C/HDL-C比值显著升高(P<0.05)。与高脂模型组相比，白茅根多糖高剂量组(400mg/kg)能够降低血清TC、LDL-C以及LDL-C/HDL-C比值(P<0.05)，白茅根多糖中剂量组(200mg/kg)能够降低血清TC(P<0.05)。
(2)白茅根多糖对高脂血症小鼠肝TC和TG的影响
如图2所示：与正常对照组比较，高脂模型组中小鼠肝TC和TG含量均显著升高(P<0.01)。与高脂模型组相比，白茅根多糖高剂量(400mg/kg)能够降低肝TC和TG含量(P<0.05)
(3)白茅根多糖对高脂血症小鼠肝形态学的影响
如图3所示，正常对照组小鼠肝结构完整，肝索清晰可见，未见有明显的脂质空泡(图3A)。当给予小鼠高脂饮食3周后，高脂模型组小鼠肝中可见有大量的脂质空泡(图3B)。白茅根多糖能明显改善肝脏的脂质空泡；高剂量白茅根多糖具有较好的效果(图3D、3E、图3F)。
(4)白茅根多糖对高脂血症小鼠肝SOD、GSH-px活性和MDA含量的影响
SOD和GSH-px是肝中的抗氧化酶，可以减少活性氧的量，减轻脂质过氧化物对肝细胞的损伤。如图4所示：与正常对照比较，高脂模型组小鼠肝中SOD和GSH-px活性均显著降低(P<0.01)，同时MDA含量显著升高(P<0.05)。白茅根多糖能够升高小鼠肝SOD和GSH-px活性(P<0.05或P<0.01)，降低MDA含量。特别地，中剂量和高剂量白茅根多糖均能够显著升高小鼠肝SOD和GSH-px活性(P<0.05或P<0.01)，高剂量白茅根多糖能够显著降低MDA含量(P<0.05)。
实验结论：白茅根多糖可显著降低高脂饮食诱导的高脂血症小鼠血清TC和LDL-C水平以及LDL-C/HDL-C比值，同时亦可降低肝TC和TG含量，明显减少肝中的脂质空泡。

Claims (20)

1.一种分离的白茅根多糖，包含L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖，其特征在于，所述L-阿拉伯糖、D-木糖、D-甘露糖、D-葡萄糖和D-半乳糖的摩尔比为20-40：40-60：1-10：10-30：10-20，优选为25-30：45-55：1-5：10-15：10-15。
2.如权利要求1所述的分离的白茅根多糖，其特征在于：
所述L-阿拉伯糖包括端基L-阿拉伯糖和/或1,2,4-连接的L-阿拉伯糖；
所述D-木糖包括端基D-木糖、1,4-连接的D-木糖和/或1,3,4-连接的D-木糖；
所述D-甘露糖包括端基D-甘露糖和/或1,6-连接的D-甘露糖；
所述D-葡萄糖包括1,4-连接的D-葡萄糖和/或1,6-连接的D-葡萄糖；或者
所述D-半乳糖包括1,4-连接的D-半乳糖。
3.如权利要求2所述的分离的白茅根多糖，其特征在于，所述端基L-阿拉伯糖：1,2,4-连接的L-阿拉伯糖：端基D-木糖：1,4-连接的D-木糖：1,3,4-连接的D-木糖：端基D-甘露糖：1,6-连接的D-甘露糖：1,4-连接的D-葡萄糖：1,6-连接的D-葡萄糖：1,4-连接的D-半乳糖的摩尔比为1-5：15-30：1-5：10-20：15-30：1-5：1-5：5-15：5-15：10-20，优选为1-5：15-25：1-5：10-15：20-25：1-3：1-3：5-10：5-10：10-15。
4.如权利要求1-3中任一项所述的分离的白茅根多糖，其特征在于，所述分离的白茅根多糖分子量为1×104至5×105Da，优选为1×105至3×105Da。
5.一种制备分离的白茅根多糖的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)用碱性溶液一次或多次提取白茅根，得到白茅根碱性提取液
(2)向所述白茅根碱性提取液加入酸以调节pH至7.0，以得到中性提取液，任选浓缩所述中性提取液；
(3)向所述中性提取液加入有机溶剂以得到有机溶剂浓度为15-30％、优选17-28％、更优选20-25％的混合物，离心处理所述混合物以得到上清液；
(4)向所述上清液中加入有机溶剂以得到有机溶剂浓度为70-90％、优选为75-85％、更优选80-85％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；
(5)干燥所述沉淀，以得到所述的分离的白茅根多糖。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)所述碱性溶液选自氢氧化钠水溶液、氢氧化钾水溶液、碳酸钠水溶液、碳酸氢钠水溶液、碳酸钾水溶液或碳酸氢钾水溶液中的一种或多种，优选氢氧化钠水溶液。
7.如权利要求5-6任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)所述碱性溶液的浓度为0.01-5mol/L，优选为0.1-1mol/L。
8.如权利要求5-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中碱性溶液与白茅根的体积重量比为8：1至30：1，优选20：1至30：1。
9.如权利要求5-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取温度为40-100℃，优选60-100℃，最优选90-95℃。
10.如权利要求5-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取时间为1-4小时，优选1-2小时。
11.如权利要求5-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中用碱性溶液提取白茅根1-4次，优选2-3次。
12.如权利要求5-6任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)所述的酸选自盐酸、磷酸、硝酸、甲酸、乙酸中的一种或多种，优选为盐酸。
13.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)和(5)之间还存在步骤(4’)：用水溶解步骤(4)所得沉淀以得到水溶液，向所述水溶液加入有机溶剂以得到有机溶剂浓度为70-90％、优选为75-85％、更优选80-85％的混合物，离心处理所述混合物以得到沉淀；步骤(4’)可以重复一次或多次，优选1、2、或3次。
14.如权利要求5或13所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)和/或(4)和/或(4’)中所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、或其混合物，优选乙醇。
15.如权利要求5-6中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述白茅根是白茅根饮片。
16.如权利要求1-4中任一项所述的分离的白茅根多糖在制备用于治疗高脂血症的药物中的用途。
17.一种药物组合物，包含如权利要求1-4中任一项所述的分离的白茅根多糖，以及药学上可接受的载体。
18.如权利要求17所述的药物组合物在制备用于治疗高脂血症的药物中的用途。
19.如权利要求1-4中任一项所述的分离的白茅根多糖，用于治疗高脂血症。
20.一种治疗高脂血症的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的如权利要求1-4中任一项所述的分离的白茅根多糖。
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