CN110093286A - 假小链双歧杆菌ccfm1046、其组合物、发酵食品、用途、菌剂及其菌剂制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了假小链双歧杆菌CCFM1046、其组合物、发酵食品、用途、菌剂及其菌剂制备方法，假小链双歧杆菌CCFM1046能耐受人体胃肠环境，显著改善高脂饮食导致的代谢综合征小鼠肝脏甘油三酯含量的升高；缓解代谢综合征小鼠体重上升；显著改善代谢综合征小鼠的空腹血糖及口服糖耐量异常，降低葡萄糖耐量药时曲线下面积，提高血清胰岛素水平；显著改善代谢综合征小鼠由于高脂饮食导致的血清中低密度脂蛋白胆固醇含量升高；显著改善高脂饮食导致的肠道内Proteus属的升高，用于制备缓解代谢综合征、减少帕金森，肠道感染及尿路、肾脏感染等疾病发生的药物组合物与发酵食品，具有非常广泛的应用前景。

Description

假小链双歧杆菌CCFM1046、其组合物、发酵食品、用途、菌剂及 其菌剂制备方法
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及假小链双歧杆菌CCFM1046、其组 合物、发酵食品、用途、菌剂及其菌剂制备方法。
背景技术
近年来，随着我国社会经济水平的不断发展，大众的生活水平不断改善， 饮食结构中碳水化合物、油脂的比重日益增加，而诸多工作条件的限制让人们 极易养成久坐不动的行为习惯。这些外部环境因素结合自身的遗传因素共同导 致了我国人群代谢综合征发病率的不断提升。据报道，在2002-2010年间，我 国20岁以上人群中患有代谢综合征的比例从5.4％上升到了21.3％，增长了4 倍，且可以预见未来该数据仍可能逐年递增。因此，寻求一种合适的缓解代谢 综合征的手段是十分必要的。
代谢综合征是一簇代谢危险因素集合而成的征候群，其以胰岛素抵抗为中 心环节及病理基础，患者呈中心型肥胖(腰臀比异常)的比例极高，且常伴随 着、高空腹血糖、高血脂(血清甘油三酯及低密度脂蛋白含量升高)、高血压 等诸多不利体征。代谢综合征患者体内的糖脂代谢异常直接提高了动脉粥样硬 化性心血管疾病以及2型糖尿病的发生风险。虽然代谢综合征及胰岛素抵抗作 为临床上预测心血管疾病发生的因子仍存在一定的不确定性，但是仍具有一定 的参考意义，若不及时加以控制，代谢综合征进一步加重可能会引起脂肪肝、 动脉粥样硬化、高尿酸血症等一系列脏器疾病。
目前针对代谢综合征采用的治疗措施主要是加强运动改善饮食并结合药 物治疗，目标均为降低代谢综合征的各项危险因素，主要包括降低体重的药物 如奥利司他、氯卡色林；减轻胰岛素抵抗的如二甲双胍、噻唑烷二酮类(罗格 列酮、吡格列酮等)；降低血脂的贝特类药物如非诺贝特及降胆固醇的他汀类 药物如辛伐他汀等；降血压的血管紧张素转换酶抑制剂类药物如卡托普利等。 这些药物针对代谢综合征的各项单一风险因素具有良好的疗效，但是，长期服 用药物存在一定的副作用，如长期服用二甲双胍会引起刺激一些患者的胃肠道 造成不适并且可能会影响患者对维生素B12的吸收，罗格列酮会引起肝功能损 伤及水肿等。
发明内容
本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较 佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或 省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略 不能用于限制本发明的范围。
鉴于上述的技术缺陷，提出了本发明。
因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提 供一种假小链双歧杆菌CCFM1046(Bifidobacterium pseudocatenulatum)，于2019 年03月04日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100 号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No：60599。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种 缓解代谢综合征的组合物。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种缓解代谢综合征 的组合物，其中：所述组合物包括假小链双歧杆菌CCFM1046及其在药学上可 接受的载体；所述的组合物的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液 剂型；所述在药学上可接受的载体包括医学上通常使用的填充剂、粘合剂、润 湿剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂中的一种或多种。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种 发酵食品。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种发酵食品，其中： 所述发酵食品为使用含有假小链双歧杆菌CCFM1046的发酵剂生产的乳制品、 豆制品与果蔬制品，所述发酵食品包括固态食品、液态食品、半固态食品；所 述发酵剂是指含有所述假小链双歧杆菌CCFM1046的产品，使用该产品可以快 速发酵产生终端食品。
作为本发明所述的发酵食品的一种优选方案：所述的乳制品包括牛奶、酸 奶油或干酪；所述的豆制品包括豆奶、豆豉或豆酱；所述的果蔬制品包括黄瓜、 胡萝卜、甜菜、芹菜或圆白菜制品。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供假小 链双歧杆菌CCFM1046在制备体内定植益生菌中的应用。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供假小 链双歧杆菌CCFM1046在制备降血脂、降血糖、改善胰岛素抵抗、抗帕金森、 抗肠道感染、抗尿路及肾脏感染药物中的应用。
作为本发明所述的应用的一种优选方案：所述假小链双歧杆菌CCFM1046 能够改善代谢综合征小鼠的指标异常，降低代谢综合征小鼠血清低密度脂蛋白 胆固醇LDL-C、肝脏甘油三酯TG含量；所述假小链双歧杆菌CCFM1046能够 提高代谢综合征小鼠胰岛素分泌；所述假小链双歧杆菌CCFM1046能够降低由 高脂饮食导致的变形杆菌属Proteus丰度的上升，改善由高脂饮食引发的小鼠 肠道菌群结构紊乱，减少帕金森，肠道感染及尿路、肾脏感染等疾病的发生。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供所述 的发酵食品在制备缓解代谢综合征、减少帕金森、肠道感染、尿路、肾脏感染 的功能性食品中的应用。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种 含有假小链双歧杆菌CCFM1046的菌剂。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种含有假小链双歧 杆菌CCFM1046的菌剂，其中：所述菌剂为将含有假小链双歧杆菌CCFM1046 的菌液干燥得到的粉剂，它含有大于106CFU/g的活性假小链双歧杆菌 CCFM1046。
作为本发明的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种 含有假小链双歧杆菌CCFM1046的菌剂制备方法。
为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种含有假小链双歧 杆菌CCFM1046的菌剂制备方法，其包括，
(1)培养基的制备：假小链双歧杆菌的培养基为改良MRS培养基，即 MRS培养基+0.05％L-半胱氨酸盐酸盐，调整其pH为6.8±0.2，得到培养基；
(2)保护剂的制备：使用水与保护剂原料混合制备得到含有100g/L-150g/ L脱脂奶粉、100g/L-150g/L麦芽糊精、140g/L-160g/L海藻糖、余量为水 的冻干保护剂；
(3)假小链双歧杆菌CCFM1046菌种按照以所述培养基的质量计2-4％的 接种量接种到在119-123℃条件下灭菌15-25min后的培养基中，然后在温度 35-39℃厌氧条件下培养24-48h，用pH为6.8-7.2磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用 所述的保护剂重悬，使菌浓达到1010CFU/mL，悬浮液在温度37℃厌氧条件下 预培养50-70min，在-15～-20℃预冻8-14h，进行真空冷冻干燥得到所述的发酵 菌剂。
本发明的有益效果：本发明假小链双歧杆菌CCFM1046能耐受人体胃肠环 境，显著改善高脂饮食导致的代谢综合征小鼠肝脏甘油三酯含量的升高；缓解 代谢综合征小鼠体重上升；显著改善代谢综合征小鼠的空腹血糖及口服糖耐量 异常，降低葡萄糖耐量药时曲线下面积，提高血清胰岛素水平；显著改善代谢 综合征小鼠由于高脂饮食导致的血清中低密度脂蛋白胆固醇含量升高；显著改 善高脂饮食导致的肠道内Proteus属的升高。所述的假小链双歧杆菌CCFM1046 用于制备缓解代谢综合征、减少帕金森，肠道感染及尿路、肾脏感染等疾病发 生的药物组合物与发酵食品，具有非常广泛的应用前景。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需 要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的 一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下， 还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
图1是假小链双歧杆菌CCFM1046的菌落形态；
图2是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠肠道中Proteus属丰度 的影响；
图3是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠体重的影响；
图4是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠空腹血糖水平的影响；
图5是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠的口服葡萄糖耐量的 影响；
图6是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠口服葡萄糖耐量药时 曲线下面积(AUCglucose)的影响；
图7是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠血清胰岛素含量的影响；
图8是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠血清低密度脂蛋白胆固 醇(LDL-C)水平的影响
图9是假小链双歧杆菌CCFM1046对代谢综合征小鼠肝脏甘油三酯(TG)水平 的影响；
注：a,b,c表示不同字母所代表的组别都存在显著性差异(P<0.05)。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实 施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明 还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不 违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例 的限制。
其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少 一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在 一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施 例互相排斥的实施例。
假小链双歧杆菌CCFM1046具有下述生物学特性：
(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，不形成孢子，不运动的细菌。
(2)菌落特征：厌氧培养36小时形成明显的菌落，直径在0.5-2mm之间， 正面形态圆形，侧面形态呈突起状，边缘整齐，乳白色，不透明，表面湿润光 滑，不产生色素，参见附图1。
(3)生长特性：在37℃恒温厌氧的条件下，在mMRS培养基中培养约24 小时达到对数末期。
(4)对模拟胃肠液具有较好的耐受能力；
(6)能够显著改善代谢综合征小鼠的口服糖耐量异常；
(7)缓解口服葡萄糖耐量药时曲线下面积升高；
(8)缓解血清胰岛素含量升高；
(5)能够显著降低高脂饮食导致的血清中低密度脂蛋白胆固醇含量升高；
(9)可调节肝脏中甘油三酯含量，使其降低至正常水平，
(10)可显著恢复由高脂饮食导致的肠道内Proteus属丰度的升高；
本菌株的提取方法为：
(一)乳酸菌的分离筛选
(1)取1g来自杭州母乳喂养新生婴儿新鲜粪便。梯度稀释后涂布于 mMRS固体培养基，置于厌氧环境下37℃培养72小时。
(2)观察记录菌落形态，挑取菌落划线纯化。
(3)在mMRS液体培养基中，37℃培养48小时，所得菌落进行革兰 氏染色，记录菌落形态。
(4)弃除菌落中的革兰氏阴性菌菌株和革兰氏阳性球菌，挑选得到革 兰氏阳性杆菌。
(5)过氧化氢酶分析后，弃除过氧化氢酶阳性菌株，保留过氧化氢酶 阴性菌株。
(二)双歧杆菌的初步鉴定：果糖-6-磷酸盐磷酸酮酶测定法
(l)将步骤(一)所筛选得到的乳酸菌在液体mMRS培养液中培养24h， 然后取l mL培养物8000rpm离心2min；
(2)用含0.05％(质量百分数)半胱氨酸的pH 6.5的0.05M KH2PO4溶液 洗涤两次；
(3)重悬于200uL添加了0.25％(质量百分数)Triton X-100的上述磷酸 盐缓冲液；
(4)添加50uL浓度为6mg/mL氟化钠和10mg/mL碘乙酸钠的混合液以及 50uL浓度为80mg/mL的果糖-6-磷酸，37℃孵育1h；
(5)添加300uL浓度为0.139g/mL、pH 6.5的盐酸轻胺，并于室温放置10 min；
(6)分别添加200uL15％(质量百分数)的三氯乙酸和4M HCI；
(7)添加200uL含有5％(质量百分数)三氯化铁的0.1M HCI，若体系迅 速变为红色，即为F6PPK阳性，可初步断定其为双歧杆菌。
(三)双歧杆菌的分子生物学鉴定
(l)单菌基因组提取(按照TIANamp Bacteria DNA kit操作步骤进行)
A.将步骤(二)所筛选得到的乳酸菌培养过夜，取菌悬液l mL于1.5mL 离心管，10,000rpm(～11,500×g)离心1min，尽量吸净上清；
B.向菌体沉淀中加入180μL缓冲液(20mM Tris,pH 8.0；2mM Na2-EDTA； 1.2％Triton；终浓度为20mg/mL的溶菌酶(溶菌酶必须用溶菌酶干粉溶解在缓 冲液中进行配制，否则会导致溶菌酶无活性))，37℃处理30min以上；
C.向管中加入20μL Proteinase K溶液，混匀；
D.加入220μL缓冲液GB，振荡15sec，70℃放置10min，溶液应变清亮， 简短离心以去除管盖内壁的水珠；
E.加220μL无水乙醇，充分振荡混匀15sec，此时可能会出现絮状沉淀， 简短离心以去除管盖内壁的水珠；
F.将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收 集管中)，12,000rpm(～13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放入 收集管中；
G.向吸附柱CB3中加入500μL缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入 无水乙醇)，12,000rpm(～13,400×g)离心30sec，倒掉废液，将吸附柱CB3放 入收集管中；
H.向吸附柱CB3中加入600μL漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无 水乙醇)，12,000rpm(～13,400×g)离心30sec，倒掉废液，吸附柱CB3放入收 集管中；重复操作一次；
I.将吸附柱CB3放回收集管中，12,000rpm(～13,400×g)离心2min，倒掉 废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗 液；
J.将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴 加50-200μL洗脱缓冲液TE，室温放置2-5min，12,000rpm(～13,400×g)离心 2min，将溶液收集到离心管中。
(2)16S rDNA PCR
A.细菌16S rDNA 50uLPCR反应体系：
10×Taq buffer，5uL；dNTP，5uL；27F，0.5uL；1492R，0.5uL；Taq酶， 0.5uL；模板，0.5uL；ddH2O，38uL。
B.PCR条件：
95℃5min；95℃10s；55℃30s；72℃30s；step2-4 30×；72℃5min；12℃ 2min；
(3)制备1％琼脂糖凝胶，之后将PCR产物与10000×loading buffer混合， 上样量2uL，120V跑30min，然后进行凝胶成像；
(4)将16S rDNA的PCR产物进行测序分析，将得到的序列结果使用 BLAST在GeneBank中进行搜索和相似性比对，选取测序结果鉴定为假小链双 歧杆菌的乳酸菌，﹣80℃保藏备用。
实施例1：假小链双歧杆菌CCFM1046对模拟胃肠液具有良好的耐受性
将冷冻保存的假小链双歧杆菌CCFM1046接种于mMRS培养基(MRS培养 基+0.05％半胱氨酸盐酸盐)中，在温度37℃厌氧培养48h，再经mMRS培养 液传代培养2～3次后，取1mL假小链双歧杆菌CCFM1046的培养液，与9.0mL pH 2.5人工模拟胃液(含1％胃蛋白酶、pH＝2.5的mMRS培养基)混合，并在 37℃下厌氧培养，分别在0h、0.5h、1h和2h时取样，用mMRS琼脂培养基浇注 培养进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。
存活率是在该培养液中在取样时的活菌数对数值与在第0h时活菌数对数值 之比，以％表示。取1mL假小链双歧杆菌CCFM1046的培养液加入9mL人工模 拟肠液(含0.3％牛胆盐、1％胰蛋白酶、pH＝8.0的mMRS培养基)中，在37℃ 下厌氧培养，分别在0h、0.5h、1h和2h时取样，用mMRS琼脂培养基浇注培 养进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。存活率是在该培养液中在 取样时的活菌数对数值与在第0h时活菌数对数值之比，以％表示。实验结果如 表1和表2所示。结果表明，假小链双歧杆菌CCFM1046对人工胃肠液具有较好的耐受性。
表1假小链双歧杆菌CCFM1046在人工模拟胃液中的耐受性
表2假小链双歧杆菌CCFM1046在人工模拟肠液中的耐受性
实施例2：假小链双歧杆菌CCFM1046对C57BL/6J小鼠无毒副作用 将假小链双歧杆菌CCFM1046菌体重悬于3％的蔗糖溶液中，制成浓度为3.0 ×108CFU/mL的菌悬液。取体重20g左右的健康雄性C57BL/6J小鼠6只，适应 环境一周后，每日给予该浓度菌悬液灌胃一次，观察一周，记录死亡和体重情 况。
这些试验结果列于表3中。这些结果表明，喂食浓度3.0×108CFU/mL的假 小链双歧杆菌CCFM1046未对小鼠造成明显影响，体重无显著变化，无死亡现 象产生。小鼠外观无明显病理症状。
表3小鼠体重的变化及死亡情况
注：-：小鼠无死亡
实施例3：假小链双歧杆菌CCFM1046对由高脂饲料导致的肠道菌群失调具 有恢复作用
取体重18-20g的健康雄性C57BL/6J小鼠36只，适应环境1周，随机分为6 组：空白对照组(NC)、高脂模型对照组(HFD)、辛伐他汀对照组(SC)、罗 格列酮对照组(RH)、假小链双歧杆菌CCFM1046干预组(CCFM1046)、动物 双歧杆菌BB12对照组(BB12)，每组含小鼠6只，灌胃菌悬液的剂量为3.0× 108CFU/mL，重悬于3％的蔗糖溶液中。实验动物分组及处理方法见表4：
表4实验动物分组
试验期间定期监测小鼠体重。
试验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃，提取粪便中的宏基因组，并利用二 代测序仪对肠道菌群结构进行分析。试验结束时，小鼠禁食不禁水12h，腹腔 注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血，辅以颈椎脱臼法处死。血液样本 3000×g、4℃条件下离心15min，取上清，-80℃冻存用于测定相关血清指标。部 分肝脏收集后迅速置于预冷的生理盐水中漂洗去血，放入多聚甲醛中固定，剩 余部分肝脏于液氮中速冻并转移至-80℃冻存，后续制成肝匀浆以用于测定相关 指标，具体制备方法如下：称取一定量肝脏组织，按1:9比例加入生理盐水进行 组织研磨，3000r离心10min，取上清冻存于-80℃备用。
菌群分析实验结果如图2所示。高脂饲料诱导的模型组小鼠粪便中Proteus 属的相对丰度显著升高，而假小链双歧杆菌CCFM1046的摄入可将Proteus属的 丰度回调，这表明本发明筛选的假小链双歧杆菌CCFM1046具有减少帕金森， 肠道感染及尿路、肾脏感染等疾病发生的功能。
实施例4：假小链双歧杆菌CCFM1046可缓解代谢综合征小鼠体重上升
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例2。
实验结果如图3所示。模型组小鼠体重显著升高，灌胃假小链双歧杆菌 CCFM1046明显降低了小鼠的体重并接近于空白对照组。其降低小鼠体重水平的 能力显著高于药物罗格列酮、辛伐他汀和动物双歧杆菌BB12。
实施例5：假小链双歧杆菌CCFM1046可降低代谢综合征小鼠(空腹)血糖 水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例2。
实验结果如图4所示。模型组小鼠空腹血糖显著升高，灌胃假小链双歧杆菌CCFM1046明显降低了模型小鼠的空腹血糖水平并接近于空白对照组。其降低小 鼠空腹血糖水平的能力稍强于罗格列酮和动物双歧杆菌BB12。
实施例6：假小链双歧杆菌CCFM1046可增强代谢综合征小鼠葡萄糖耐受能 力
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例2。小鼠处死前，禁食不禁 水12h，腹腔注射葡萄糖溶液(2g/kg体重)，分别测量0，30，60，120min的 血糖情况。
实验结果如图5及图6所示。由图5可以看出，模型组小鼠对葡萄糖的耐受 能力较差，灌胃葡萄糖后，血糖值明显升高，并且下降缓慢。从图6可以看出， 灌胃假小链双歧杆菌CCFM1046明显降低了AUCglucose面积，但仍显著高于正常 组。这说明，假小链双歧杆菌CCFM1046能够显著改善口服糖耐量，且作用效 果与动物双歧杆菌BB12类似。这些结果与血糖指标结果相一致，提示假小链双 歧杆菌CCFM1046可以通过增强葡萄糖耐受能力，进一步降低血糖水平。
实施例7：假小链双歧杆菌CCFM1046可降低代谢综合征小鼠血清胰岛素(INS) 的水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例2。试验结束时，小鼠禁食不 禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血。血样3000×g、4℃ 条件下离心10min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定血液中胰岛素(INS)的含 量。
实验结果如附图7所示。由图7可以看出高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠血清 胰岛素含量显著下降，而假小链双歧杆菌CCFM1046可以缓解血清中胰岛素含 量的下降，其对胰岛素水平的恢复能力显著强于对照药物及动物双歧杆菌BB12。
实施例8：假小链双歧杆菌CCFM1046可降低代谢综合征小鼠血清低密度脂 蛋白胆固醇(LDL-C)的水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例2。试验结束时，小鼠禁食不 禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血。血样3000×g、4℃ 条件下离心10min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定血液中低密度脂蛋白胆 固醇(LDL-C)的含量。
实验结果如附图8所示。由图8可以看出，高脂饮食组小鼠血清低密度脂蛋 白胆固醇含量明显升高，灌胃假小链双歧杆菌CCFM1046可降低血清低密度脂 蛋白胆固醇的含量，其对血清低密度脂蛋白胆固醇含量的恢复能力要稍强于对 照药物及动物双歧杆菌BB12，提示假小链双歧杆菌CCFM1046对于血脂代谢具 有积极作用。
实施例9：假小链双歧杆菌CCFM1046可降低代谢综合征小鼠肝脏甘油三酯(TG)的水平
C57BL/6J小鼠分组、造模及处理方法同实施例2。试验结束时，小鼠禁食 不禁水12h，腹腔注射10％的水合氯醛溶液麻醉后，心脏采血，颈椎脱臼处死。 取肝脏-80℃冻存，测定时称取一定量肝脏组织，按1:9比例加入生理盐水进行组 织研磨，3000r离心10min，取上清，按照试剂盒的检测方法测定肝脏中甘油三 酯(TG)的含量。
实验结果如附图9所示。由实验结果可以看出，与正常对照组相比，高脂 饮食组小鼠肝脏甘油三酯含量显著升高，灌胃假小链双歧杆菌CCFM1046可降 低肝脏甘油三酯的含量，药物罗格列酮对照组肝脏TG水平反常升高，而灌胃 辛伐他汀无显著作用，假小链双歧杆菌CCFM1046对肝脏甘油三酯水平的恢复 能力显著强于对照药物及动物双歧杆菌BB12。
实施例10：含有假小链双歧杆菌CCFM1046的发酵剂生产发酵果蔬汁
选用新鲜水果及蔬菜洗净后榨汁，按照5g/L的比例加入食品级蛋白胨， 接着进行高温瞬间灭菌，在温度140℃下高温热杀菌2秒后，立即降温至37℃， 再接入本发明制备的假小链双歧杆菌CCFM1046菌剂发酵剂，使其浓度达到 106CFU/mL以上，并在37℃下发酵24h，然后在温度4℃下冷藏保存，于是 得到含有本发明假小链双歧杆菌CCFM1046活菌的果蔬饮料。
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参 照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可 以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精 神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种假小链双歧杆菌CCFM1046(Bifidobacterium pseudocatenulatum)，于2019年03月04日保藏在广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No：60599。
2.一种缓解代谢综合征的组合物，其特征在于：所述组合物包括假小链双歧杆菌CCFM1046及其在药学上可接受的载体；所述的组合物的剂型包括颗粒剂、胶囊剂、片剂、丸剂或口服液剂型；所述在药学上可接受的载体包括医学上通常使用的填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、矫味剂中的一种或多种。
3.一种发酵食品，其特征在于：所述发酵食品为使用含有假小链双歧杆菌CCFM1046的发酵剂生产的乳制品、豆制品与果蔬制品，所述发酵食品包括固态食品、液态食品、半固态食品；所述发酵剂是指含有所述假小链双歧杆菌CCFM1046的产品，使用该产品可以快速发酵产生所述发酵食品。
4.根据权利要求3所述的发酵食品，其特征在于：所述的乳制品包括牛奶、酸奶油或干酪；所述的豆制品包括豆奶、豆豉或豆酱；所述的果蔬制品包括黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜或圆白菜制品。
5.假小链双歧杆菌CCFM1046在制备体内定植益生菌中的应用。
6.假小链双歧杆菌CCFM1046在制备降血脂、降血糖、改善胰岛素抵抗、抗帕金森、抗肠道感染、抗尿路及肾脏感染药物中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于：所述假小链双歧杆菌CCFM1046能够改善代谢综合征小鼠的指标异常，降低代谢综合征小鼠血清低密度脂蛋白胆固醇LDL-C、肝脏甘油三酯TG含量；所述假小链双歧杆菌CCFM1046能够提高代谢综合征小鼠胰岛素分泌；所述假小链双歧杆菌CCFM1046能够降低由高脂饮食导致的变形杆菌属Proteus丰度的上升，改善由高脂饮食引发的小鼠肠道菌群结构紊乱，减少帕金森，肠道感染及尿路、肾脏感染等疾病的发生。
8.权利要求3或4所述的发酵食品在制备缓解代谢综合征、减少帕金森、肠道感染、尿路、肾脏感染的功能性食品中的应用。
9.一种含有假小链双歧杆菌CCFM1046的菌剂，其特征在于：所述菌剂为将含有假小链双歧杆菌CCFM1046的菌液干燥得到的粉剂，它含有大于106CFU/g的活性假小链双歧杆菌CCFM1046。
10.一种含有假小链双歧杆菌CCFM1046的菌剂制备方法，其特征在于：包括，
培养基的制备：假小链双歧杆菌的培养基为改良MRS培养基，即MRS培养基+0.05％L-半胱氨酸盐酸盐，调整其pH为6.8±0.2，得到培养基；
保护剂的制备：使用水与保护剂原料混合制备得到含有100g/L-150g/L脱脂奶粉、100g/L-150g/L麦芽糊精、140g/L-160g/L海藻糖、余量为水的冻干保护剂；
假小链双歧杆菌CCFM1046菌种按照以所述培养基的质量计2-4％的接种量接种到在119-123℃条件下灭菌15-25min后的培养基中，然后在温度35-39℃厌氧条件下培养24-48h，用pH为6.8-7.2磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用所述的保护剂重悬，使菌浓达到1010CFU/mL，悬浮液在温度37℃厌氧条件下预培养50-70min，在-15～-20℃预冻8-14h，进行真空冷冻干燥得到所述的发酵菌剂。
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