CN110092486A - 一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明具体涉及一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法。该方法将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：光合细菌10‑40份、酵母菌20‑50份、巨大芽孢杆菌10‑30份、乳酸菌20‑35份、铁细菌10‑20份。本发明利用本公司分离保存得到的功能菌株复配对应的污染水源中的原位微生物，固定化后对污染水体进行修复，修复效率更高。

Description

一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法
技术领域
本发明涉及污染水体的微生物修复技术领域，具体涉及一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法。
背景技术
随着工业化进程的加快，在人类活动和气候环境的共同作用下，水体污染问题越来越严重。目前针对污染水体的修复方法主要为物理法、化学法、生物及生态净化技术。物理和化学方法治理水体污染一般工程量大、费用高，河流的生物和生态净化技术主要依靠微生物的代谢活动实现对水体中污染物的降解，因其具有经济有效的有点备受青睐。固定化微生物技术是利用物理或化学手段将游离微生物细胞定位与限定的空间区域，保持反应区域的生物量和传质面，能够持续保证微生物的活性，具有反应速度块、稳定性强、微生物流失少等多种优势，是目前常用的污染水体修复技术。
但是，目前常用的微生物固定化技术中，采用的功能菌种多为仅仅经过功能验证的工业化微生物，该工业化微生物在不同水体中的适应能力不同，也因此导致该固定化技术修复在不同污染水体中的修复效果参差不齐。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，该固定化微生物修复技术将从原位筛选的微生物与功能菌种进行复配，两者相互补充，修复效率高。
本发明通过以下技术方案来实现上述技术目的：
本发明提供的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：
光合细菌 10-40份
酵母菌 20-50份
巨大芽孢杆菌 10-30份
乳酸菌 20-35份
铁细菌 10-20份
其中，从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物包括硝化细菌、反硝化细菌和枯草芽孢杆菌，其通过以下步骤筛选得到：
（1）硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；
（2）反硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的反硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；
（3）枯草芽孢杆菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体到盛有99mL已灭菌的枯草芽孢杆菌富集培养基的三角瓶中，160rpm恒温振荡1h，在80-85℃水浴锅中加热20min，然后将培养液按照1：9的比例接入富集培养基培养，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体。
值得注意的是：上述硝化细菌、反硝化细菌、枯草芽孢杆菌是粗筛得到的相对含量较高的菌株，操作方便、成本较低，便于工业化应用。
其中，将从污染水体中分离收集得到的菌体按照如下重量配比进行混合均匀：硝化细菌20-40份、反硝化细菌30-50份、枯草芽孢杆菌30-40份；再将上述混合后的原位菌株与功能菌株按照6:4的重量配比进行混合，并按照体积质量比1：99的比例加入无菌生理盐水制成复合微生物液。
其中，微生物的固定化包括如下步骤：
（1）将沸石烘干，121℃灭菌30min，冷却，加入微生物菌液中，在30℃、160rpm的摇床中振荡24h；
（2）将氯化钙溶解于去离子水中制成水溶液；
（3）将海藻酸钠溶液加入步骤（1）中得到的溶液中，振荡均匀后静置，制成混合凝胶；
（4）在保持振荡的同时，吸取步骤（3）得到的混合凝胶加入步骤（2）的混合溶液中，持续振荡12h固定成型，然后将得到的固定化菌剂用生理盐水洗涤，4℃冷藏备用。
其中，固定化的载体为沸石和海藻酸钠，沸石的用量为复合微生物液总质量的5%-20%，海藻酸钠溶液的质量浓度为1%-4%，海藻酸钠溶液质量为步骤（1）中溶液总质量的0.3-0.5%。
其中，步骤（2）中氯化钙的质量浓度为1%-4%。
其中，硝化细菌富集培养基的配方包括(NH4)2SO4 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 0.9g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.4g/L、CaCO3 5g/L。
其中，反硝化细菌富集培养基的配方包括蛋白胨8.6g/L、KNO3 1g/L、NaCl 5g/L、C4H4O4Na2 1.5g/L、pH 7.0-7.3。
其中，枯草芽孢杆菌富集培养基的配方包括可溶性淀粉3g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏3g/L、KH2PO4 1.5g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、pH 7.2-7.4。
本发明中，所用的功能菌株光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌为本公司分离保存的功能菌株；本发明利用本公司分离保存得到的功能菌株复配对应的污染水源中的原位微生物制成固定化菌剂，两者具有协同作用，对污染水体的适应能力更强，修复效率更高；采用沸石、海藻酸钠原料对复合微生物进行固定化，成本较低，且由于其具有多孔性质，能够持续保持功能微生物活性。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例对本发明进行清除、完整的描述，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
实施例1
一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：光合细菌 10份、酵母菌 45份、巨大芽孢杆菌 10份、乳酸菌 35份、铁细菌 10份。
本实施例中，从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物包括硝化细菌、反硝化细菌和枯草芽孢杆菌，其通过以下步骤筛选得到：（1）硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（2）反硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的反硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（3）枯草芽孢杆菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体到盛有99mL已灭菌的枯草芽孢杆菌富集培养基的三角瓶中，160rpm恒温振荡1h，在80-85℃水浴锅中加热20min，然后将培养液按照1：9的比例接入富集培养基培养，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体。
将从污染水体中分离收集得到的菌体按照如下重量配比进行混合均匀：硝化细菌20份、反硝化细菌40份、枯草芽孢杆菌40份；再将上述混合后的原位菌株与功能菌株按照6:4的重量配比进行混合，并按照体积质量比1：99的比例加入无菌生理盐水制成复合微生物液。
上述微生物的固定化包括如下步骤：
（1）将沸石烘干，121℃灭菌30min后，加入微生物菌液中，在30℃、160rpm的摇床中振荡24h；
（2）将氯化钙溶解于去离子水中制成水溶液；
（3）将海藻酸钠溶液加入步骤（1）中得到的溶液中，振荡均匀后静置，制成混合凝胶；
（4）在保持振荡的同时，吸取步骤（3）得到的混合凝胶加入步骤（2）的混合溶液中，持续振荡12h固定成型，然后将得到的固定化菌剂用生理盐水洗涤，4℃冷藏备用。
其中，固定化的载体为沸石和海藻酸钠，沸石的用量为复合微生物液总质量的5%，海藻酸钠溶液的质量浓度为2%，海藻酸钠溶液质量为步骤（1）中溶液总质量的0.5%。
其中，步骤（2）中氯化钙的质量浓度为1%。
其中，硝化细菌富集培养基的配方包括(NH4)2SO4 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 0.9g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.4g/L、CaCO3 5g/L。
其中，反硝化细菌富集培养基的配方包括蛋白胨8.6g/L、KNO3 1g/L、NaCl 5g/L、C4H4O4Na2 1.5g/L、pH 7.0-7.3。
其中，枯草芽孢杆菌富集培养基的配方包括可溶性淀粉3g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏3g/L、KH2PO4 1.5g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、pH 7.2-7.4。
实施例2
一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：光合细菌 20份、酵母菌 35份、巨大芽孢杆菌 20份、乳酸菌 20份、铁细菌 15份。
本实施例中，从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物包括硝化细菌、反硝化细菌和枯草芽孢杆菌，其通过以下步骤筛选得到：（1）硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（2）反硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的反硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（3）枯草芽孢杆菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体到盛有99mL已灭菌的枯草芽孢杆菌富集培养基的三角瓶中，160rpm恒温振荡1h，在80-85℃水浴锅中加热20min，然后将培养液按照1：9的比例接入富集培养基培养，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体。
将从污染水体中分离收集得到的菌体按照如下重量配比进行混合均匀：硝化细菌25份、反硝化细菌45份、枯草芽孢杆菌30份；再将上述混合后的原位菌株与功能菌株按照6:4的重量配比进行混合，并按照体积质量比1：99的比例加入无菌生理盐水制成复合微生物液。
上述微生物的固定化包括如下步骤：
（1）将沸石烘干，121℃灭菌30min后，加入微生物菌液中，在30℃、160rpm的摇床中振荡24h；
（2）将氯化钙溶解于去离子水中制成水溶液；
（3）将海藻酸钠溶液加入步骤（1）中得到的溶液中，振荡均匀后静置，制成混合凝胶；
（4）在保持振荡的同时，吸取步骤（3）得到的混合凝胶加入步骤（2）的混合溶液中，持续振荡12h固定成型，然后将得到的固定化菌剂用生理盐水洗涤，4℃冷藏备用。
其中，固定化的载体为沸石和海藻酸钠，沸石的用量为复合微生物液总质量的10%，海藻酸钠溶液的质量浓度为1%，海藻酸钠溶液质量为步骤（1）中溶液总质量的0.3%
其中，步骤（2）中氯化钙的质量浓度为2%。
其中，硝化细菌富集培养基的配方包括(NH4)2SO4 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 0.9g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.4g/L、CaCO3 5g/L。
其中，反硝化细菌富集培养基的配方包括蛋白胨8.6g/L、KNO3 1g/L、NaCl 5g/L、C4H4O4Na2 1.5g/L、pH 7.0-7.3。
其中，枯草芽孢杆菌富集培养基的配方包括可溶性淀粉3g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏3g/L、KH2PO4 1.5g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、pH 7.2-7.4。
实施例3
一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：光合细菌 25份、酵母菌 25份、巨大芽孢杆菌 25份、乳酸菌 25份、铁细菌 10份。
本实施例中，从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物包括硝化细菌、反硝化细菌和枯草芽孢杆菌，其通过以下步骤筛选得到：（1）硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（2）反硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的反硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（3）枯草芽孢杆菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体到盛有99mL已灭菌的枯草芽孢杆菌富集培养基的三角瓶中，160rpm恒温振荡1h，在80-85℃水浴锅中加热20min，然后将培养液按照1：9的比例接入富集培养基培养，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体。
将从污染水体中分离收集得到的菌体按照如下重量配比进行混合均匀：硝化细菌35份、反硝化细菌35份、枯草芽孢杆菌30份；再将上述混合后的原位菌株与功能菌株按照6:4的重量配比进行混合，并按照体积质量比1：99的比例加入无菌生理盐水制成复合微生物液。
上述微生物的固定化包括如下步骤：
（1）将沸石烘干，121℃灭菌30min后，加入微生物菌液中，在30℃、160rpm的摇床中振荡24h；
（2）将氯化钙溶解于去离子水中制成水溶液；
（3）将海藻酸钠溶液加入步骤（1）中得到的溶液中，振荡均匀后静置，制成混合凝胶；
（4）在保持振荡的同时，吸取步骤（3）得到的混合凝胶加入步骤（2）的混合溶液中，持续振荡12h固定成型，然后将得到的固定化菌剂用生理盐水洗涤，4℃冷藏备用。
其中，固定化的载体为沸石和海藻酸钠，沸石的用量为复合微生物液总质量的15%，海藻酸钠溶液的质量浓度为3%，海藻酸钠溶液质量为步骤（1）中溶液总质量的0.4%。
其中，步骤（2）中氯化钙的质量浓度为3%。
其中，硝化细菌富集培养基的配方包括(NH4)2SO4 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 0.9g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.4g/L、CaCO3 5g/L。
其中，反硝化细菌富集培养基的配方包括蛋白胨8.6g/L、KNO3 1g/L、NaCl 5g/L、C4H4O4Na2 1.5g/L、pH 7.0-7.3。
其中，枯草芽孢杆菌富集培养基的配方包括可溶性淀粉3g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏3g/L、KH2PO4 1.5g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、pH 7.2-7.4。
实施例4
一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：光合细菌 35份、酵母菌 20份、巨大芽孢杆菌 15份、乳酸菌 25份、铁细菌 15份。
本实施例中，从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物包括硝化细菌、反硝化细菌和枯草芽孢杆菌，其通过以下步骤筛选得到：（1）硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（2）反硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的反硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；（3）枯草芽孢杆菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体到盛有99mL已灭菌的枯草芽孢杆菌富集培养基的三角瓶中，160rpm恒温振荡1h，在80-85℃水浴锅中加热20min，然后将培养液按照1：9的比例接入富集培养基培养，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体。
将从污染水体中分离收集得到的菌体按照如下重量配比进行混合均匀：硝化细菌35份、反硝化细菌30份、枯草芽孢杆菌35份；再将上述混合后的原位菌株与功能菌株按照6:4的重量配比进行混合，并按照体积质量比1：99的比例加入无菌生理盐水制成复合微生物液。
上述微生物的固定化包括如下步骤：
（1）将沸石烘干，121℃灭菌30min后，加入微生物菌液中，在30℃、160rpm的摇床中振荡24h；
（2）将氯化钙溶解于去离子水中制成水溶液；
（3）将海藻酸钠溶液加入步骤（1）中得到的溶液中，振荡均匀后静置，制成混合凝胶；
（4）在保持振荡的同时，吸取步骤（3）得到的混合凝胶加入步骤（2）的混合溶液中，持续振荡12h固定成型，然后将得到的固定化菌剂用生理盐水洗涤，4℃冷藏备用。
其中，固定化的载体为沸石和海藻酸钠，沸石的用量为复合微生物液总质量的20%，海藻酸钠溶液的质量浓度为4%，海藻酸钠溶液质量为步骤（1）中溶液总质量的0.3%，其中，步骤（2）中氯化钙的质量浓度为3.5%。
其中，硝化细菌富集培养基的配方包括(NH4)2SO4 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 0.9g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.4g/L、CaCO3 5g/L。
其中，反硝化细菌富集培养基的配方包括蛋白胨8.6g/L、KNO3 1g/L、NaCl 5g/L、C4H4O4Na2 1.5g/L、pH 7.0-7.3。
其中，枯草芽孢杆菌富集培养基的配方包括可溶性淀粉3g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏3g/L、KH2PO4 1.5g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、pH 7.2-7.4。
应用试验例1
取体积为2L的烧杯6个，并分别编号为实验组一、实验组二、实验组三、实验组四和对照组一、对照组二，分别向上述五个烧杯中添加重度黑臭污染河水至1L标线处，向实验组一、实验组二、实验组三、实验组四中分别加入按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4方法制得的固定化菌剂20g，对照组一中加入只含有功能菌株（即不加筛选得到的土著微生物）的固定化菌剂20g，对照组二中加入只含有筛选得到的土著微生物的固定化菌剂20g，将其放入相同的自然条件下（南方5、6月份天气）进行静置，定期检测水体的指标COD、氨氮含量和磷含量；添加的原始重度污染黑臭河水的CODcr为84.60 mg/L，NH3-N为14.31 mg/L，TP为2.34 mg/L。
监测结果如下表所示：
应用试验例2
取体积为2L的烧杯6个，并分别编号为实验组一、实验组二、实验组三、实验组四和对照组一、对照组二，分别向上述五个烧杯中添加微污染河水至1L标线处，向实验组一、实验组二、实验组三、实验组四中分别加入按照实施例1、实施例2、实施例3、实施例4方法制得的固定化菌剂20g，对照组一中加入只含有功能菌株（即不加筛选得到的土著微生物）的固定化菌剂20g，对照组二中加入只含有筛选得到的土著微生物的固定化菌剂20g，将其放入相同的自然条件下（南方5、6月份天气）进行静置，定期检测水体的指标COD、氨氮含量和磷含量；添加的原始微污染河水的CODcr为40.34mg/L，NH3-N为6.21 mg/L，TP为1.30 mg/L。
监测结果如下表所示：
从上述2个应用试验例中可以得到，采用本发明的固定化微生物技术修复污染水体的方法可以适用于多种水体的污染治理，其利用特定的功能菌株加对应的筛选得到的原位菌株复配的方法，充分利用菌株的协同作用，修复效果显著。

Claims (9)

1.一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，将从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物与功能菌种混合后进行固定化，再将固定化后的复合微生物投入到待修复水体中进行修复；功能菌株包括光合细菌、酵母菌、巨大芽孢杆菌、乳酸菌、铁细菌，所述功能菌株的比例如下：
光合细菌 10-40份
酵母菌 20-50份
巨大芽孢杆菌 10-30份
乳酸菌 20-35份
铁细菌 10-20份。
2.根据权利要求1所述的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，从待修复的污染水体中分离到的具有修复作用的微生物包括硝化细菌、反硝化细菌和枯草芽孢杆菌，其通过以下步骤筛选得到：
（1）硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；
（2）反硝化细菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体样品至盛有99mL已灭菌的反硝化细菌富集培养基的三角瓶中，150rmp恒温振荡24h，然后将培养液按照1：9的比例接种至新的富集培养基中，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体；
（3）枯草芽孢杆菌，富集筛选方法为：取1mL污染水体到盛有99mL已灭菌的枯草芽孢杆菌富集培养基的三角瓶中，160rpm恒温振荡1h，在80-85℃水浴锅中加热20min，然后将培养液按照1：9的比例接入富集培养基培养，最终将富集得到的培养液，10000rmp条件下离心10min，得到菌体。
3.根据权利要求2所述的固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，将从污染水体中分离收集得到的菌体按照如下重量配比进行混合均匀：硝化细菌20-40份、反硝化细菌30-50份、枯草芽孢杆菌30-40份；再将上述混合后的原位菌株与功能菌株按照6:4的重量配比进行混合，并按照体积质量比1：99的比例加入无菌生理盐水制成复合微生物液。
4.根据权利要求1所述的固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，微生物的固定化包括如下步骤：
（1）将沸石烘干，121℃灭菌30min，冷却，加入微生物菌液中，在30℃、160rpm的摇床中振荡24h；
（2）将氯化钙溶解于去离子水中制成水溶液；
（3）将海藻酸钠溶液加入步骤（1）中得到的溶液中，振荡均匀后静置，制成混合凝胶；
（4）在保持振荡的同时，吸取步骤（3）得到的混合凝胶加入步骤（2）的混合溶液中，持续振荡12h固定成型，然后将得到的固定化菌剂用生理盐水洗涤，4℃冷藏备用。
5.根据权利要求4所述的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，固定化的载体为沸石和海藻酸钠，沸石的用量为复合微生物液总质量的5%-20%，海藻酸钠溶液的质量浓度为1%-4%，海藻酸钠溶液质量为步骤（1）中溶液总质量的0.3-0.5%。
6.根据权利要求4所述的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，步骤（2）中氯化钙的质量浓度为1%-4%。
7.根据权利要求4所述的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，硝化细菌富集培养基的配方包括(NH4)2SO4 2g/L、NaCl 2g/L、K2HPO4 0.9g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、FeSO4·7H2O 0.4g/L、CaCO3 5g/L。
8.根据权利要求4所述的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，反硝化细菌富集培养基的配方包括蛋白胨8.6g/L、KNO3 1g/L、NaCl 5g/L、C4H4O4Na21.5g/L、pH 7.0-7.3。
9.根据权利要求4所述的一种固定化复合微生物技术修复污染水体的方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌富集培养基的配方包括可溶性淀粉3g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏3g/L、KH2PO4 1.5g/L、K2HPO4 2g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、pH 7.2-7.4。
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