CN110051849A - 一种复合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用 - Google Patents

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CN110051849A CN201910416828.8A CN201910416828A CN110051849A CN 110051849 A CN110051849 A CN 110051849A CN 201910416828 A CN201910416828 A CN 201910416828A CN 110051849 A CN110051849 A CN 110051849A
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Abstract

本发明提供一种复合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用，其中复合物由青蒿素类抗疟药和氨基喹啉类抗疟药组成，其副作用低，能够有效地提高对乳腺癌的治疗效果，减少患者并发症的发生及发展。

Description

一种复合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用
本申请是申请号为201610742316.7、申请日为2016年08月26日、发明名称为“一种治疗癌症的复合物及其制剂和用途”的中国专利申请的分案申请。
技术领域
本发明属于含有机有效成分的医药配制品领域，特别涉及一种复合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用。
背景技术
癌症是威胁人类健康最重要的疾病之一，其发表率呈逐年上升的趋势。其中肺癌和乳腺癌是较为常见的恶性肿瘤。目前癌症的主要治疗手段为化疗。以上市的抗癌药物较多，包括烷化剂药物、抗代谢药物、抗肿瘤抗生素等，但是大多数药物由于毒性大，病人不耐受。随着科学技术的不断发展，生活方式的不断改变，癌症发病率和死亡率的不断上升，研究治疗癌症的药物迫在眉睫。
青蒿素(Artemisinin)是从中草药黄花蒿(Artemisia annua L.)中分离的倍半萜内酯，具有良好的抗疟活性。青蒿素的抗疟作用是因其能与疟原虫内的血红素发生反应形成自由基，导致细胞死亡。但由于青蒿素的水溶性从，其应用收到了限制，再次基础上，研制出了蒿甲醚、青蒿琥酯等青蒿素类抗疟药，以上药物治疗疟疾效果显著，副作用低。还有研究表明，青蒿素类抗疟药还可以用于治疗癌症，其可选择性地杀伤肿瘤细胞，而对正常细胞的作用较弱，与其他的化疗药不存在交叉耐药，并且其还能通过抑制谷胱甘肽转移酶的活性而逆转肿瘤细胞的多药耐药性。
氨基喹啉类抗疟药是以氨基侧链异喹啉化合物为基本结构，将奎宁的碱性侧链引入4-氨基喹啉中，获得对裂殖原虫最显速效的杀虫作用衍生物，其中活性最强的为氯喹(Chloroquine)。氯喹进入疟原虫体后，其分子插入疟原虫DNA双螺旋链之间，形成稳定的复合物，从而影响DNA复制、RNA的转录和蛋白质合成。在对8-氨基喹啉衍生物进行研究时，发现抗疟作用强、毒性低的伯氨喹(Primaquine)，其在体内转变为具有较强氧化性能的喹啉醌衍生物，能将红细胞内的还原型谷胱甘肽(GSH)转变为氧化型谷胱甘肽(GSSH)，当后者还原时，需要消耗还原型辅酶Ⅱ(NADPH)。由于疟原虫红外期在肝实质细胞内发育本已消耗辅酶Ⅱ(NADP)，而伯氨喹的作用又干扰辅酶Ⅱ的还原过程，使辅酶Ⅱ减少，严重地破坏疟原虫的糖代谢及氧化过程。
为了提高癌症的治愈率，现有技术长采用联合用药的方法治疗肿瘤，并且公开了许多治疗癌症的复合物，例如CN101940569公开的含有索拉菲尼和青蒿素及青蒿素类衍生物的药物组合物，主要用于治疗肺癌、肝癌等癌症；CN101380325公开的青蒿素衍生物与长春瑞滨的组合物，该组合物主要用于治疗乳腺癌和肺腺癌等癌症；陈卫强等(双氢青蒿素和顺铂对人肺腺癌A549细胞及其耐顺铂细胞株A549/CDDP的体外作用，中国临床康复，2005.43)公开的用于治疗人肺腺癌的双氢青蒿素和顺铂组成的复合物；WO200213826公开的抗疟疾药物氯喹宁、伯氨喹等与抗癌剂顺铂和对柔比星的组合物，该组合物对少数细胞系可产生更好的抑癌功效；又如：CN101920015公开的安维汀和氯喹组成的治疗癌症的药物组合物，等。现有技术公开了许多包含抗疟药的用于治疗癌症的复合物，但是现有技术并没有公开过由青蒿素类抗疟药和氨基喹啉类抗疟药组成的复合物，也没未公开过该复合物的治疗用途。
发明内容
为了解决现有技术存在的问题，本发明提供一种由青蒿素类抗疟药和氨基喹啉类抗疟药组成的治疗癌症的复合物及其制剂和制备方法。
本发明提供一种治疗癌症的复合物，其中，该复合物包括青蒿素类抗疟药和氨基喹啉类抗疟药，所述青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药的摩尔比为0.1-100:0.1-100。
进一步的改进，青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药的摩尔比为1-6:1-15。
优选地，青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药的摩尔比为5:12，或1.25:12，或5:6，或4:1。
进一步的改进，所述青蒿素类抗疟药为青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚、双氢青蒿素或蒿乙醚。
进一步的改进，所述氨基喹啉类抗疟药选自氯喹、磷酸氯喹、哌喹、伯氨喹或磷酸伯氨喹。
进一步的改进，所述青蒿素类抗疟药为青蒿素，所述氨基喹啉类抗疟药为氯喹。
本发明另一方面提供一种制剂，该制剂选择片剂、胶囊剂、颗粒剂等。进一步的改进，本发明提供的制剂还包括药用载体。
进一步的改进，本发明的制剂优选为片剂，该片剂为由缓释层和速释层组成的双层片剂，所述缓释层由重量份数为1-15份的氨基喹啉类抗疟药和15-50份的赋形剂制备而成；所述速释层由重量份数为1-6份的青蒿素类抗疟药和4-20份的辅料制备而成。
进一步的改进，赋形剂包括乳酸十六烷基甘油酯、苯乙烯马来酸酐共聚物、麦芽糊精、微晶纤维素和月桂酰肌氨酸钠；辅料包括胆固醇棕榈酸酯、预凝胶淀粉、淀粉甘醇酸钠、胶态二氧化硅和胆酸钠。
优选地，所述片剂各成分的重量份如下：
缓释层：
速释层：
优选地，所述片剂各成分的重量份如下：
缓释层：
速释层：
进一步的改进，本发明提供的赋形剂中的乳酸十六烷基甘油酯、苯乙烯马来酸酐共聚物和麦芽糊精与氨基喹啉类抗疟药形成微球，提供了氨基喹啉类抗疟药的溶解度，同时起到缓释的效果；月桂酰肌氨酸钠不但起到粘合剂和润滑剂的作用，同时还与微晶纤维素起到崩解剂的作用；辅料中的胆固醇棕榈酸酯和预凝胶淀粉起到稀释剂的作用，同时还起到提高青蒿素溶解度，促进其吸收的作用；淀粉甘醇酸钠和胆酸钠共同发挥崩解剂的作用，使得速释层的崩解时限低于10s。
本发明另一方面提供了微球的制备方法，该制备方法包括如下步骤：将氨基喹啉类抗疟药和苯乙烯马来酸酐共聚物，均匀分散在重量份为20-50份的无水乙醇中，制得分散液；将分散液用磁力搅拌器在1000r·min-1，5℃下搅拌，制得混悬液；将乳酸十六烷基甘油酯和麦芽糊精加入重量份为10-30份的无水乙醇中，搅拌均匀，制得油相；将混悬液加入油相中，在1000r·min-1，5℃下搅拌均匀，喷雾干燥，再用石油醚洗涤三次，室温干燥，制得粒径范围为15-25μm的微球。
本发明进一步提供了片剂的制备方法，该方法包括如下步骤：
1)制备微球；
2)将微球与微晶纤维素和月桂酰肌氨酸钠混合均匀，干法制粒，即得颗粒；
3)将青蒿素类抗疟药与胆固醇棕榈酸酯和预凝胶淀粉混合均匀，制得混合粉，用超微粉碎法将混合粉粉碎，制得粒径d0.9为10-25μm的微粉化物；将微粉化物与淀粉甘醇酸钠、胆酸钠和胶态二氧化硅混合均匀，干法制粒，制得颗粒；
4)将步骤2)制得的颗粒和步骤3)制得的颗粒置于双层压片机中，制得片剂。
本发明另一方面提供了复合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
进一步的改进，癌症为肺癌、乳腺癌或黑色素瘤等。
本发明复合物中的青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药可以先后使用也可以同时使用。
本发明的有益效果在于，本发明提供一种由青蒿素类抗疟药和氨基喹啉类抗疟药组成的复合物，该复合物可以用于治疗肺癌、乳腺癌和黑色素瘤等癌症，副作用低，能够有效地提高对癌症的治疗效果，减少患者并发症的发生及发展。
附图说明
图1为本发明提供的复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用；
图2为本发明提供的复合物对肺癌细胞株H1437的抑制作用；
图3为本发明提供的复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用；
图4为本发明提供的复合物对乳腺癌细胞株T47D的抑制作用；
图5为本发明提供的复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用；
图6为各复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用；
图7为各复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用；
图8为各复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用；
图9两组小鼠的存活率曲线图；
图10为连续给药8周后，肺癌小鼠肺部病理图；
图11为连续给药18周后，肺癌小鼠肺部病理图；
图12为两组小鼠的肿瘤/肺比率图；
图13为实施例15-17的治疗癌症的复合物的体外释放度试验结果。
具体实施例方式
实施例1一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为0.1:100。
实施例2一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为100:0.1。
实施例3一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为1:1。
实施例4一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为5:12。
实施例5一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为1.25:12。
实施例6一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为5:6。
实施例7一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为4:1。
实施例8一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比为6:15。
实施例9一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和氯喹，青蒿素和氯喹的摩尔比3.5:8
实施例10一种治疗癌症的复合物
该复合物包括蒿甲醚和磷酸氯喹，蒿甲醚和磷酸氯喹的摩尔比2:5
实施例11一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿琥酯和伯氨喹，青蒿琥酯和伯氨喹的摩尔比3:10。
实施例12一种治疗癌症的复合物
该复合物包括双氢青蒿素和氯喹，双氢青蒿素和氯喹的摩尔比2:15。
实施例13一种治疗癌症的复合物
该复合物包括蒿乙醚和哌喹，蒿乙醚和哌喹的摩尔比5:2。
实施例14一种治疗癌症的复合物
该复合物包括青蒿素和哌喹，青蒿素和伯氨喹的摩尔比5:12。
实施例15一种片剂
该片剂各成分的重量份数如下：
缓释层：
速释层：
实施例16一种片剂
该片剂各成分的重量份数如下：
缓释层：
速释层：
该片剂的制备方法为：
1)将氯喹和苯乙烯马来酸酐共聚物，均匀分散在重量份为20-50份的无水乙醇中，制得分散液；将分散液用磁力搅拌器在1000r·min-1，5℃下搅拌，制得混悬液；将乳酸十六烷基甘油酯和麦芽糊精加入重量份为10-30份的无水乙醇中，搅拌均匀，制得油相；将混悬液加入油相中，在1000r·min-1，5℃下搅拌均匀，喷雾干燥，再用石油醚洗涤三次，室温干燥，制得粒径范围为15-25μm的微球；
2)将微球与微晶纤维素和月桂酰肌氨酸钠混合均匀，干法制粒，即得颗粒；
3)将青蒿素与胆固醇棕榈酸酯和预凝胶淀粉混合均匀，制得混合粉，用超微粉碎法将混合粉粉碎，制得粒径d0.9为10-25μm的微粉化物；将微粉化物与淀粉甘醇酸钠、胆酸钠和胶态二氧化硅混合均匀，干法制粒，制得颗粒；
4)将步骤2)制得的颗粒和步骤3)制得的颗粒置于双层压片机中，制得片剂。
实施例17一种片剂
该片剂各成分的重量份数如下：
缓释层：
速释层：
该片剂的制备方法同实施例16。
本发明提供的复合物与青蒿素和氯喹单独给药的药效学实验
1.材料
1.1仪器及耗材
全自动CO2培养箱(日本Sanyo)
酶标仪(美国Bio-Rad 680)
一次性细胞培养瓶和培养板(美国Corning)
一次性eppendorf管和ip头(德国eppendorf)。
1.2试剂
RPMI-1640培养基和DMEM培养基均购自于美国Gibco，胎牛血清购于Sigma，MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购于Invitrogen。1.3细胞株
肺腺癌细胞株H460、肺癌细胞株H1437、乳腺癌细胞株MCF-7、乳腺癌细胞株T47D以及黑色素瘤细胞株B16F10均购于美国ATCC。1.4供试品
青蒿素由瑞士诺华公司提供，氯喹购于美国Sigma公司
2.实验方法
2.1细胞培养
各种肿瘤细胞在含10％灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基或者DMEM培养基中培养，置于37℃含5％CO2细胞培养箱中，每2-3天传代。
2.2细胞毒性测定(MTT法)
取对数生长期细胞接种于96孔板中，每组设6个平行孔，每孔8000个细胞，对照组细胞接种约24小时后，给予生理盐水，其余各组细胞接种约24小时后加入不同浓度的氯喹，8小时后更换培养基，加入不同浓度的青蒿素，青蒿素处理24小时后用MTT试剂盒检测细胞活性，每个实验独立重复3次。将没有任何药物处理的细胞活性定为1，然后各给药组的数值与对照组进行比较，从而得出相对存活率。
注意：在进行MTT实验前，分别对青蒿素和氯喹进行滴定实验，确定合适的药物浓度(即该浓度范围不会对肿瘤细胞有显著的杀伤作用)。
3.统计学处理
各组数值均用mean±SEM显示，检验方法为unpaired t test，P<0.05有统计学意义。
4.实验结果
本发明提供的复合物对肺腺癌细胞株H460、肺癌细胞株H1437、乳腺癌细胞株MCF-7、乳腺癌细胞株T47D以及黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用分别见图1-5。
5.结论
图1为本发明提供的复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＞0.05，P#＜0.01，由此得出，氯喹对肺腺癌细胞株H460的抑制作用不显著，青蒿素及本发明提供的复合物对肺腺癌细胞株H460具有显著的抑制作用；与氯喹组相比，P&＜0.01，与青蒿素组相比，P&＜0.05，由此得出，与对应剂量的氯喹或青蒿素相比，不同剂量的青蒿素与60μM氯喹组成的复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用均好于对应剂量的氯喹或青蒿素单品，具有统计学意义。由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹的复合物可以有效抑制肺腺癌细胞株H460的存活率，抑制作用明显好于青蒿素或氯喹；并且随着青蒿素浓度的增加，青蒿素和氯喹的复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用增强。
图2为本发明提供的复合物对肺癌细胞株H1437的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＞0.05，P#＜0.01，由此得出，氯喹对肺癌细胞株H1437没有抑制作用，青蒿素及本发明提供的复合物对肺癌细胞株H1437具有显著的抑制作用；与氯喹组相比，P&＜0.01，与青蒿素组相比，P&＜0.05，由此得出，与对应剂量的氯喹或青蒿素相比，不同剂量的青蒿素与60μM氯喹组成的复合物对肺癌细胞株H1437的抑制作用均好于对应剂量的氯喹或青蒿素单品，具有统计学意义；由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹的复合物可以有效抑制肺癌细胞株H1437的存活率，抑制作用明显好于青蒿素或氯喹；并且随着青蒿素浓度的增加，青蒿素和氯喹的复合物对肺癌细胞株H1437的抑制作用增强。
图3为本发明提供的复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＞0.05，P#＜0.01，由此得出，低剂量的氯喹对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用不显著，高剂量的氯喹、不剂量的青蒿素及本发明提供的复合物对乳腺癌细胞株MCF-7具有显著的抑制作用；与氯喹组相比，P&＜0.01，与青蒿素组相比，P&＜0.05，由此得出，与对应剂量的氯喹或青蒿素相比，不同剂量的青蒿素与60μM氯喹组成的复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用均好于对应剂量的氯喹或青蒿素单品，具有统计学意义。由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹的复合物可以有效抑制乳腺癌细胞株MCF-7的存活率，抑制作用明显好于青蒿素或氯喹，并且随着青蒿素浓度的增加，青蒿素和氯喹的复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用降低。
图4为本发明提供的复合物对乳腺癌细胞株T47D的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＞0.05，P#＜0.01，由此得出，青蒿素对乳腺癌细胞株T47D没有抑制作用，不剂量的氯喹及本发明提供的复合物对乳腺癌细胞株T47D具有显著的抑制作用；与青蒿素组相比，P&＜0.01，与氯喹组相比，P&＜0.05，由此得出，与对应剂量的氯喹或青蒿素相比，不同剂量的青蒿素与60μM氯喹组成的复合物对乳腺癌细胞株T47D的抑制作用均好于对应剂量的氯喹或青蒿素单品，具有统计学意义。由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹的复合物可以有效抑制乳腺癌细胞株T47D的存活率，抑制作用明显好于青蒿素或氯喹，并且随着青蒿素浓度的增加，青蒿素和氯喹的复合物对乳腺癌细胞株T47D的抑制作用降低。
图5为本发明提供的复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＜0.01，由此得出，氯喹、不剂量的青蒿素及本发明提供的复合物对黑色素瘤细胞株B16F10具有显著的抑制作用；与青蒿素组相比，P&＜0.01，与氯喹组相比，P&＜0.01，由此得出，与对应剂量的氯喹或青蒿素相比，不同剂量的青蒿素与30μM氯喹组成的复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用均好于对应剂量的氯喹或青蒿素单品，具有统计学意义。由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹的复合物可以有效抑制黑色素瘤细胞株B16F10的存活率，抑制作用明显好于青蒿素或氯喹，并且随着青蒿素浓度的增加，青蒿素和氯喹的复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用增强。
本发明提供的复合物与现有技术公开的其他复合物的药效学实验
1.材料
1.1仪器及耗材
全自动CO2培养箱(日本Sanyo)
酶标仪(美国Bio-Rad 680)
一次性细胞培养瓶和培养板(美国Corning)
一次性eppendorf管和ip头(德国eppendorf)。
1.2试剂
RPMI-1640培养基和DMEM培养基均购自于美国Gibco，胎牛血清购于Sigma，MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒购于Invitrogen。1.3细胞株
肺腺癌细胞株H460、乳腺癌细胞株MCF-7、以及黑色素瘤细胞株B16F10均购于美国ATCC。
1.4供试品
青蒿素、双氢青蒿素和青蒿琥酯由瑞士诺华公司提供，氯喹、伯氨喹、顺铂、长春瑞滨购于美国Sigma公司。
2.实验方法
2.1细胞培养
各种肿瘤细胞在含10％灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基或者DMEM培养基中培养，置于37℃含5％CO2细胞培养箱中，每2-3天传代。
2.2细胞毒性测定(MTT法)
取对数生长期细胞接种于96孔板中，每组设6个平行孔，每孔8000个细胞，各组细胞接种约24小时后加入复合物，复合物处理24小时后用MTT试剂盒检测细胞活性，每个实验独立重复3次。将没有任何药物处理的细胞活性定为1，然后各给药组的数值与对照组进行比较，从而得出相对存活率。
注意：在进行MTT实验前，分别对青蒿素和氯喹进行滴定实验，确定合适的药物浓度(即该浓度范围不会对肿瘤细胞有显著的杀伤作用)。
3.分组和给药
对肺腺癌细胞株H460、乳腺癌细胞株MCF-7、以及黑色素瘤细胞株B16F10进行处理所加入的各复合物机分组情况分别见表1-3。
表1对肺腺癌细胞株H460进行处理所加入的复合物
表2对乳腺癌细胞株MCF-7进行处理所加入的复合物
表3对黑色素瘤细胞株B16F10进行处理所加入的复合物
4.统计学处理
各组数值均用mean±SEM显示，检验方法为unpaired t test，P<0.05有统计学意义。
5.实验结果
本发明提供的复合物对肺腺癌细胞株H460、肺癌细胞株H1437、乳腺癌细胞株MCF-7、以及黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用分别见图6-8。
6.实验结论
图6为不同复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＜0.01，由此得出，表1中提供的不同复合物均对肺腺癌细胞株H460有明显的抑制作用，并且其抑制作用均好于单品青蒿素；与给药1组相比，P#＜0.05，P&＜0.01，由此得出，与青蒿素和氯喹组成的复合物相比，本发明提供的其他青蒿素类抗疟药和其他氨基喹啉类抗疟药组成的复合物对肺腺癌细胞株H460的抑制作用有所降低，具有统计学意义，并且现有技术公开的复合物与氯喹和青蒿素组成的复合物相比，对肺腺癌细胞株H460的抑制作用明显降低，具有显著性差异；由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹组成的复合物可以有效抑制肺腺癌细胞株H460的存活率，疗效好于本发明公开的其他复合物，并且明显好于现有技术公开的治疗癌症的复合物。
图7为不同复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＜0.01，由此得出，表1中提供的不同复合物均对乳腺癌细胞株MCF-7有明显的抑制作用，并且其抑制作用均好于单品青蒿素；与给药1组相比，P#＜0.05，P&＜0.01，由此得出，与青蒿素和氯喹组成的复合物相比，本发明提供的其他青蒿素类抗疟药和其他氨基喹啉类抗疟药组成的复合物对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用有所降低，具有统计学意义，并且现有技术公开的复合物与氯喹和青蒿素组成的复合物相比，对乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用明显降低，具有显著性差异；由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹组成的复合物可以有效抑制乳腺癌细胞株MCF-7的存活率，疗效好于本发明公开的其他复合物，并且明显好于现有技术公开的治疗癌症的复合物。
图8为不同复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用，从图中可以看出，与对照组相比，P*＜0.01，由此得出，表1中提供的不同复合物均对黑色素瘤细胞株B16F10有明显的抑制作用，并且其抑制作用均好于单品氯喹；与给药1组相比，P#＜0.05，P&＜0.01，由此得出，与青蒿素和氯喹组成的复合物相比，本发明提供的其他青蒿素类抗疟药和其他氨基喹啉类抗疟药组成的复合物对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用有所降低，具有统计学意义，并且现有技术公开的复合物与氯喹和青蒿素组成的复合物相比，对黑色素瘤细胞株B16F10的抑制作用明显降低，具有显著性差异；由此得出，本发明提供的青蒿素和氯喹组成的复合物可以有效抑制黑色素瘤细胞株B16F10的存活率，疗效好于本发明公开的其他复合物，并且明显好于现有技术公开的治疗癌症的复合物。
动物实验
1.1药品与试剂
青蒿素由瑞士诺华医药提供的分析纯级，氯喹购于Sigma公司(C6628)，玉米油购于Sigma公司(C8267)，Cre腺病毒购于美国Iowa大学，其余所有试剂均为分析纯。
1.2实验动物
LSL-KRasG12D肺癌小鼠购于jackson实验室，共60只均为雌性，年龄均为6-8周。
2.实验方法
2.1肺癌模型建立
将实验用小鼠全麻后置于37℃加热板上，配置Cre腺病毒-CaCl2混合液，其中包括60μL MEME培养基，2.5μL AdCre(1010pfu/mL)和0.6μL CaCl2(1M)，室温静置20min后，将62.5μL混合液通过滴鼻注入小鼠体内。
2.2分组及给药
将60只小鼠随机分为两组，其中30只为给药组，30只为对照组。
给药组小鼠每周通过腹腔注射给予氯喹(2mg/kg体重)，4个小时后，将溶解于玉米油的青蒿素(10mg/kg)通过灌胃注射到小鼠体内，每周给药一次直至小鼠死亡。
对照组小鼠分别在同一时间注射等体积的PBS和玉米油，但不含有氯喹和青蒿素成分。
2.3指标测定
分别比较两组小鼠的存活曲线，结果见图9，并且在给药第8周和第18周以后，每组任意选取5只小鼠，处死后进行肺部病理实验，结果见图10-11，比较两组小鼠的肿瘤/肺比率，结果见图12。
2.4统计学方法
用Prism软件进行统计学检测，其中存活曲线用Log RANK进行分析，病理结果用卡方检验。P＜0.05表示为显著性差异。
3.实验结果
从图9中可以看出，与对照组相比P＜0.01，具有统计学意义，由此得出，本发明提供的复合物可显著降低肺癌小鼠的存活率。
从图10和图11中可以看出，与对照组相比，于给药第8周和第18周后，给药组可显著延缓肺癌的进程。
从图12中可以看出，与对照组相比，给药8周后，P***＜0.01，给药18周后，P**＜0.05，具有统计学意义，由此得出，本发明提供的复合物可以显著降低癌变组织的百分比。
4.结论
本发明提供的复合物对肺癌具有显著的抑制作用。
体外释放度测定试验
片剂的药物释放度检测:参照2010版版《中国药典》附录XIXD体外药物释放度检查。
分别取以上实施例15-17的片剂，置药物溶出仪中，于1h、2h、4h、6h、12h、24h分别取样，用高效液相色谱法检测溶出百分率，并计算药物的累积释放百分率，结果见图13。
从图中可以看出实施例15-17提供的片剂在24h内缓慢释放；说明本发明提供的片剂可延长其对癌症的作用时间，延长疗效。
崩解时限效果测定
选择由淀粉甘醇酸钠、胆酸钠、微晶纤维素组成不同的崩解剂，其余的成分与实施例15中的成分相同；根据中国药典中的规定，测片剂的崩解时限，结果见表4；
表4不同辅料对片剂崩解时限的影响
从表中可看出，采用本发明特殊重量份数的淀粉甘醇酸钠和胆酸钠的混合物才可显著提高速释层的崩解时限。

Claims (7)

1.一种复合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用，其特征在于，所述复合物包括青蒿素类抗疟药和氨基喹啉类抗疟药，所述青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药的摩尔比为0.1-100:0.1-100。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药的摩尔比为1-6:1-15。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述青蒿素类抗疟药为青蒿素、青蒿琥酯、蒿甲醚、双氢青蒿素或蒿乙醚。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述氨基喹啉类抗疟药选自氯喹、磷酸氯喹、哌喹、伯氨喹或磷酸伯氨喹。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述青蒿素类抗疟药为青蒿素。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述氨基喹啉类抗疟药为氯喹。
7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述复合物中的青蒿素类抗疟药与氨基喹啉类抗疟药可以先后使用也可以同时使用。
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