CN110036902B - 多管藻丝状无性系育苗方法 - Google Patents

多管藻丝状无性系育苗方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多管藻丝状无性系育苗方法，包括如下步骤：(1)在2‑3月份，采集多管藻的果孢子、四分孢子和营养体中的一种或几种，培养为丝状无性系；(2)在充气状态下，将丝状无性系悬浮培养为絮状的无性系群体；(3)在11月下旬，将絮状的无性系群体粉碎为50‑100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气培养10‑15天，待幼苗肉眼可见且分布均匀，直立枝长度平均在1mm以上，下海养殖。本发明可用于多管藻属海藻的规模化苗种生产，解决传统育苗方法中存在生产周期长、受季节限制、生产成本过高等缺点和不足。

Description

多管藻丝状无性系育苗方法
技术领域
本发明涉及一种基于丝状无性系构建和扩增的育苗方法，可用于多管藻属海藻的苗种生产。
背景技术
多管藻属海藻是目前海洋生物活性研究领域的热点，其提取物具有抗氧化、抗细菌和真菌、抗癌和抗肿瘤等活性，此外，由于藻胶含量较低，藻胆蛋白丰富，所以多管藻是提取藻红蛋白和藻蓝蛋白的理想材料。随着我国海岸工程的开展和沿海富营养化的加剧，底栖海藻正面临栖息地丧失，多样性下降的不利局面，多管藻的生物量正逐年减少，因此，仅靠野外采集，已经无法满足科研和天然产物规模化生产的需要，亟需人工栽培。
关于多管藻的苗种来源，发明专利“多管藻孢子体直接成苗的方法”(授权号CN100566556C)和“多管藻四分孢子成苗的方法”(授权号CN101167439B)公开了两种多管藻的育苗方法，尽管苗种形式不同，但这两种方法都是依赖于海区的自然藻体作为种源，受季节限制，且采苗后需要在育苗室中进行较长的度夏培育，育苗效率低、成本高，不利于推广。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的是建立一种多管藻丝状无性系育苗方法，是一种基于丝状无性系构建和扩增的多管藻育苗方法，可用于多管藻属海藻的规模化苗种生产，解决以往育苗方法中存在生产周期长、受季节限制、生产成本过高等问题。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：多管藻丝状无性系育苗方法，包括如下步骤：
(1)无性系构建：在2-3月份，采集多管藻的果孢子、四分孢子和营养体中的一种或几种，培养为丝状无性系；
(2)无性系扩增：在充气状态下，将丝状无性系悬浮培养为絮状的无性系群体；
(3)无性系育苗：在11月下旬，将絮状的无性系群体粉碎为50-100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气培养10-15天，待幼苗肉眼可见且分布均匀，直立枝长度平均在1mm以上，下海养殖。
本发明所述的充气培养均为充空气培养。
进一步，所述多管藻为红藻门真红藻纲松节藻科多管藻属的海藻。
进一步，步骤(1)中，所述多管藻的果孢子和四分孢子的采集季节是在3月份，由多管藻的果孢子和四分孢子培养为丝状无性系的方法为：将含有繁殖器官的藻体，经清洗，去除藻体表面的杂藻和动物，阴干刺激0.5-1h，诱导孢子释放，再将单个孢子放入装有PES培养液的培养皿中培养，培养条件：温度15-20℃、光照强度1000-2000lx、光周期12:12h，待孢子附着萌发形成单列丝状体后，剥离并转入底层铺有消毒滤纸的培养皿中，继续培养形成丝状无性系，每10-15天更换一半培养液。
进一步，步骤(1)中，所述多管藻的营养体的采集季节是在2月份，由多管藻的营养体培养为丝状无性系的方法为：取藻体的分枝末端，经清洗，镜检确认无杂藻后，切割成5mm以下片段，放入装有PES培养液的培养皿(皿底铺设一层消毒滤纸)中培养，培养条件同上(培养条件为：温度15-20℃、光照强度1000-2000lx、光周期12:12h，每10-15天更换一半培养液)，经过15-20天，片段再生形成丝状无性系。
进一步，步骤(2)中，所述无性系扩增的方法具体为：将培养皿中培养的丝状无性系转入装有2000ml PES培养液的细口瓶中，充气培养，培养条件为：温度15-20℃、光照强度1000～2000lx、光周期12:12h，每10-15天更换一半培养液，将丝状无性系培养为絮状的无性系群体。
进一步，步骤(3)中，所述无性系育苗的方法具体为：在11月下旬，采苗池底预先铺设充气管(提供空气)，间隔10-15cm，网帘折叠为4-6层铺设在充气管的上方，采苗当天加水20cm，施加硝酸钠和磷酸二氢钾至浓度分别为100ppm和10ppm，将絮状的无性系群体粉碎为50-100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气混匀，充气培养10-15天，培养条件为：温度5-15℃，光照强度3000-5000lx。进一步，步骤(3)中，将絮状的无性系群体用粉碎机粉碎为50-100μm的片段，粉碎机的转速10000-150000转/分。
进一步，步骤(3)中，在无性系育苗充气培养期间，每4-6天换水并上下颠倒一次苗帘。
进一步，所述网帘上无性系片段附着密度为平均10-20个片段/显微镜视野，所述显微镜视野为100倍。
进一步，所述网帘为维尼纶网帘。
进一步，多管藻丝状无性系的特征为：丧失典型形态、由大小一致的围轴细胞包裹形成的丝状藻体，具有再生能力，即在适当条件下，能附着并重新恢复原有的典型藻体形态。
本发明的有益效果：
基于多管藻繁殖生物学特征的传统育苗方法，需要占用育苗室培育苗帘长达半年以上，期间面临杂藻污染、病害、夏季高温等问题，不仅需要大量人力物力进行刷洗、调光等管理，还存在育苗效果不稳定、无补救措施等缺点。而本发明可用于多管藻属海藻的规模化苗种生产，解决以往育苗方法中存在生产周期长、受季节限制、生产成本过高等问题。本发明公开的多管藻丝状无性系育苗方法，占用空间少，不受季节和环境影响，在遇到不利情况下，可随时补救。
具体实施方式
下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
本实例以大连旅顺开展多管藻育苗为材料，对本发明作进一步详细的叙述。
1.在2月大潮期间，在旅顺子弹库潮间带采集多管藻营养体的幼体(营养体)，低温运回实验室后，经毛刷反复清洗，去除藻体表面的动物和杂藻，经镜检确认后，切割成5mm以下片段，放入装有PES培养液的培养皿(皿底铺设一层消毒滤纸)中培养，培养条件为温度为20℃、光照强度为1000～2000lx、光周期为12:12h，经过15天，片段再生形成丝状无性系。
2.将培养皿中培养的丝状无性系转入装有2000ml PES培养液的细口瓶中，充气培养，培养条件为温度为20℃、光照强度为1000～2000lx、光周期为12:12h，每15天更换一半培养液，丝状无性系培养为絮状的群体。
3.11月下旬，在旅顺柏岚子选择一个采光较好的育苗室，采苗前三天采苗池底铺设充气管，间隔15cm，15亩维尼纶绳网帘折叠为4层铺设在充氧管的上方，采苗当天上午，加水20cm，施加硝酸钠和磷酸二氢钾至浓度分别为100ppm和10ppm，现场用粉碎机(转速12000转/分)将絮状的无性系群体粉碎为50-100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气混匀，附着密度为平均10-20个片段/显微镜视野(100×)。
4.充气培养12天，培养条件为温度为5-15℃，光照强度为3000-5000lx，每4天换水并上下颠倒一次苗帘。待幼苗肉眼可见且分布均匀，直立枝长度平均在1mm以上，下海养殖。
实施例2
本实例以大连大李家开展多管藻育苗为材料，对本发明作进一步详细的叙述。
1.在3月大潮期间，在大连凌水湾潮间带采集含有繁殖器官的多管藻藻体(含有繁殖器官)，低温运回实验室后，经毛刷反复清洗，去除藻体表面的杂藻和动物，阴干刺激1h，诱导孢子释放，然后采用微吸管吸取单个孢子放入装有PES培养液的培养皿中培养，培养条件为温度为20℃、光照强度为1000～2000lx、光周期为12:12h，待孢子附着萌发形成丝状藻体后，剥离并转入底层铺有消毒滤纸的培养皿，继续培养形成丝状无性系，每10天更换一半培养液。
2.将培养皿中培养的丝状无性系转入装有2000ml PES培养液的细口瓶中，充气培养，培养条件为温度为20℃、光照强度为1000-2000lx、光周期为12:12h，每隔15天更换一半培养液，丝状无性系培养为絮状的群体。
3.11月下旬，在大连大李家选择一个采光较好的育苗室，采苗池底预先铺设充气管，间隔15cm，20亩维尼纶绳网帘折叠为6层铺设在充气管的上方，采苗当天，加水20cm，施加硝酸钠和磷酸二氢钾至浓度分别为100ppm和10ppm，现场用粉碎机(转速12000转/分)将絮状的无性系群体粉碎为50-100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气混匀，附着密度为平均10-20个片段/显微镜视野(100×)。
4.充气培养15天，培养条件为温度为5-15℃，光照强度为3000-5000lx，每4天换水并上下颠倒一次苗帘。待幼苗肉眼可见且分布均匀，直立枝长度平均在1mm以上，下海养殖。
本发明可用于多管藻属海藻的规模化苗种生产，解决以往育苗方法中存在生产周期长、受季节限制、生产成本过高等问题。本发明公开的多管藻丝状无性系育苗方法，占用空间少，不受季节和环境影响，在遇到不利情况下，可随时补救。
对于任何熟悉本领域的技术人员而言，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均应仍属于本发明技术方案保护的范围内。

Claims (4)

1.多管藻丝状无性系育苗方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)无性系构建：在2-3月份，采集多管藻的果孢子、四分孢子和营养体中的一种或几种，培养为丝状无性系；
(2)无性系扩增：在充气状态下，将丝状无性系悬浮培养为絮状的无性系群体；
(3)无性系育苗：在11月下旬，将絮状的无性系群体粉碎为50-100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气培养10-15天，待幼苗肉眼可见且分布均匀，直立枝长度平均在1mm以上，下海养殖；
所述多管藻为红藻门真红藻纲松节藻科多管藻属的海藻；
步骤(1)中，所述多管藻的果孢子和四分孢子的采集时间为3月份，所述多管藻的营养体采集时间为2月份；
步骤(1)中，由多管藻的果孢子和四分孢子培养为丝状无性系的方法为：将含有繁殖器官的藻体，经清洗，去除藻体表面的杂藻和动物，阴干刺激0.5-1h，诱导孢子释放，然后采用微吸管吸取单个孢子放入装有PES培养液的培养皿中培养，培养条件为：温度15-20℃、光照强度1000～2000lx、光周期12:12h，待孢子附着萌发形成单列丝状体后，剥离并转入底层铺有消毒滤纸的培养皿中，继续培养形成丝状无性系，每10-15天更换一半培养液；
步骤(1)中，由多管藻的营养体培养为丝状无性系的方法为：取藻体的分枝末端，经清洗，镜检确认无杂藻后，切割成5mm以下片段，放入装有PES培养液的培养皿中培养，培养皿的皿底铺设一层消毒滤纸，培养条件为：温度15-20℃、光照强度1000-2000lx、光周期12:12h，每10-15天更换一半培养液，经过15-20天，片段再生形成丝状无性系；
步骤(2)中，所述无性系扩增的具体方法为：将培养皿中培养的丝状无性系转入装有2000ml PES培养液的细口瓶中，充气培养，培养条件为：温度15-20℃、光照强度1000～2000lx、光周期12:12h，每10-15天更换一半培养液，将丝状无性系培养为絮状的无性系群体；
步骤(3)中，所述无性系育苗的具体方法为：在11月下旬，采苗池底预先铺设充气管，间隔10-15cm，网帘折叠为4-6层铺设在充气管的上方，采苗当天加水20cm，施加硝酸钠和磷酸二氢钾至浓度分别为100ppm和10ppm，将絮状的无性系群体粉碎为50-100μm的片段，均匀泼洒到网帘上，充气混匀，充气培养10-15天，培养条件为：温度5-15℃，光照强度3000-5000lx。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，在无性系育苗充气培养期间，每4-6天换水并上下颠倒一次网帘。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述网帘上无性系片段附着密度为平均10-20个片段/显微镜视野，所述显微镜视野为100倍。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述网帘为维尼纶网帘。
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