CN110036860A - 用于判断烟草根部病害压力的方法 - Google Patents

Abstract

本发明的公开了一种用于判断烟草根部病害压力的方法，包括以下步骤：（1）采集计划用于下一年植烟田块的土壤，装入烟苗培育装置中；（2）将烟苗接种于烟苗培育装置中，模拟植烟田块的自然环境温室培养25‑35天；（3）用水冲洗除去烟苗培育装置中的土壤，考擦根系生长指标以判断烟草根部病害压力。本发明的用于判断烟草根部病害压力的方法，检测准确，操作简单，而且检测周期短。

Description

用于判断烟草根部病害压力的方法

技术领域

本发明涉及烟草种植技术领域，特别涉及一种用于判断烟草根部病害压力的方法。

背景技术

烟草根结线虫(Meloidogyne spp.)是植物病原线虫中种类最多、分布最广和危害最严重的一类线虫。这类线虫主要以土壤传播的形式，危害植物的根系，使受害植物的根部形成肿瘤状的根结，从而发生严重影响植物正常生长发育的根结线虫病，受根结线虫危害最为严重，在我国自20世纪80年代中后期以来，烟草根结线虫病病区不断扩大，危害加重，在河南、山东、云南、贵州、四川、湖北等烟区发生较为普遍，危害较重，病区发病率一般为70％－100％，重者达90％以上，减产30％－70％，成为了我国烟草生产上的主要病害。

烟草根黑腐病是世界性烟草病害,其病原菌为根串珠霉[Thielaviopsisbasicola(Berk and Br)Ferraris],该菌寄主范围广泛,可为害多种重要的农作物。烟草根黑腐病发病最适温度范围为17～23℃。15℃以下，26℃以上发病较轻。幼苗到成株期均可发生，主要危害根系。烟苗发病后，幼茎、子叶和根尖发黑腐烂，重病株的根系则全部腐烂，呈黑色。病菌不死，地上部分呈现生长缓慢，发黄，矮化。主要发生于烟株根系上，使根呈特异性的黑色腐烂，从幼苗至成株期均可发病。苗染病引起“猝倒”，但根部发黑，别于猝倒病。病菌从根茎部侵入，病斑环绕茎部一周，向上侵至于叶，下侵至侧根，使整株幼苗枯死。较大烟株染病侧根根尖变黑，病株生长迟缓，植株矮小，叶色黄褐。重病株拔起可见整株根系变黑褐、坏死。气候炎热时，白天病株萎蔫，夜间恢复正常，病株叶片变黄、变薄，严重影响烟草产量和质量。

现有技术中植烟土壤中烟草根结线虫病、根黑腐病等烟草根部病害检测有些操作复杂，有些周期长。对于根黑腐病的检测现有技术中包括从土壤中分离鉴定、根黑腐病菌PCR验证法等方法。根黑腐病菌采用PCR验证法等不能区别根黑腐病菌存在的形式，有些死细胞并不会导致发病，从而导致检测误差。烟草根结线虫病的检测也主要采用PCR鉴定方法，申请号为03131763.4的专利“一种根结线虫快速分子检测引物及其用法”，申请号为201610585565的专利“一种烟草中根结线虫的鉴定方法”提供了烟草根结线虫病病原线虫PCR鉴定的新方法，该方法采用三对根结线虫种类特异引物对分离自烟草病根和土壤的根结线虫分别进行PCR检测，鉴定方便，准确率高，大大提高了烟草根结线虫病病原的诊断效率。但由于采用了常规PCR检测法，使得鉴定过程操作繁琐、耗时长，且需要较为昂贵的仪器设备。此外根结线虫的PCR检测也不能区分活细胞和死细胞，从而对植烟田块的土壤实际发病情况指导会有很大的误差。

因此，有必要对现有技术进行改进以解决上述技术问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种用于判断烟草根部病害压力的方法，检测准确，操作简单，而且检测周期短。

本发明的用于判断烟草根部病害压力的方法，包括以下步骤：

(1)采集计划用于下一年植烟田块的土壤，装入烟苗培育装置中；

(2)将烟苗接种于烟苗培育装置中，模拟植烟田块的自然环境温室培养25-35天；

(3)用水冲洗除去烟苗培育装置中的土壤，考擦根系生长指标以判断烟草根部病害压力。

优选技术方案中，所述烟苗培育装置为沿着竖直方向延伸的细长形状，每个烟苗培育装置只装一株烟苗。

优选技术方案中，所述烟苗培育装置放置在培育装置保持架上。

优选技术方案中，所述烟苗培育装置采用沿竖直方向设置可拆卸式接口，所述步骤(1)和步骤(2)烟苗培育过程接口闭合，待所述步骤(3)考擦根系生长指标时拆开接口后用水冲洗土壤。

本发明的有益效果：本发明的用于判断烟草根部病害压力的方法，检测准确，操作简单，而且检测周期短；本发明的其他有益效果将结合下文具体实施例进行进一步的说明。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述：

图1为烟苗培育装置和培育装置保持架的结构示意图。

具体实施方式

本实施例的用于判断烟草根部病害压力的方法，包括以下步骤：

(1)采集计划用于下一年植烟田块的土壤，装入烟苗培育装置1中；土壤的采集可以根据植烟田块的形状平均分布多处采样，使得选取的样本具有代表性，具体取样方法为现有技术，此处不再赘述；

(2)将烟苗接种于烟苗培育装置1中，模拟植烟田块的自然环境温室培养25-35天；所选烟苗采用与下一年计划种植的烟苗品种相同的烟苗，病害压力的判断更加准确，温度、湿度、光照时间长短都模拟当地的自然条件；温室培养的具体时间根据烟苗的品种进行适当调整，在25-35天。

(3)用水冲洗除去烟苗培育装置1中的土壤，考擦根系生长指标以判断烟草根部病害压力；根系生长指标包括根长、根体积、根干重等。

模拟植烟田块的自然环境温室培养不仅检测速度快，而且由于实际的根系生长指标判断烟草根部病害压力，死细胞并不会对检测结果造成影响，所以检测结果更准确，对实际生产的指导性更强。

本实施例中，所述烟苗培育装置1为沿着竖直方向延伸的细长形状，每个烟苗培育装置只装一株烟苗。沿着竖直方向延伸的细长形状不仅结构紧凑，占用空间少，而且利于根部的快速发育，有利于缩短检测时间。

本实施例中，所述烟苗培育装置1放置在培育装置保持架2上。整体占用空间更少。

本实施例中，所述烟苗培育装置1采用沿竖直方向设置可拆卸式接口，所述步骤(1)和步骤(2)烟苗培育过程接口闭合，待所述步骤(3)考擦根系生长指标时拆开接口后用水冲洗土壤；可拆卸式接口可以采用卡扣等方式，也可以只设置开口，部分重叠，利用培育装置保持架的挤压作用保持开口部分的闭合，待考擦根系生长指标时将烟苗培育装置直接从培育装置保持架中取出即可。冲洗泥土更加方便，可以防止传统盆栽烟苗时不易冲洗、根部容易折断流失，从而影响根部生长指标考擦。

具体实施例1

实验组：2016年11月按网格法采集河南南阳内乡县某计划用于种植烟草的大田样品土壤，去除石块、昆虫等杂质；分别装入不同的烟苗培育装置中，植入烟苗，品种为云烟87，总共实验数量为200株烟苗；模拟植烟田块的自然环境，温度15～25℃，光照1000～2000Lx，温室培养30天，取出烟苗培育装置，打开接口，用水冲洗干净泥土；观察根部情况。

通过对根部的观察，烟草根黑腐病发病的烟苗为2株，占整个实验数量的1％；烟草根结线虫发病的烟苗为3株，占整个实验数量的1.5％。根据实验组的判定结果为该地块可以种植烟草。

表1实施例1培育装置与大田发病率(％)统计

根部病害种类	培育装置	大田
			根结线虫病	1.5％	0.5％
根黑腐病	1.0％	1.93％

表2实施例1培育装置中根结线虫病和根黑腐病对烤烟根系生长的影响

对照组：从与对照组同一地块中取检测土壤进行土壤稀释平板法配合PCR验证，根据特异扩增曲线判断烟草根黑腐病有Ct值为阳性，含量1.95×10⁶cfu/g，根结线虫病无Ct值为阴性。根据对照组的判定结果该地块不易发生根结线虫病，容易发生烟草根黑腐病。

验证结果与分析：2017年考察该地块种植烟草的实际发病情况，第二年实际种植烟草品种云烟87，烟草根黑腐病发病率为1.93％，发病率较低，感染烟草根结线虫病发病植株为0.5％，并未对烟叶产量品质造成明显损失。本具体实施例说明土壤稀释平板法配合PCR验证中根结线虫病的预测结果都准确，不易发生根结线虫病；但是对照组中预测容易发生烟草根黑腐病带菌量较高，但实际发病率较低，可能的原因是：一是PCR检测不能区分活细胞和死细胞，将死细胞认定为阳性，影响检测结果；二是烟草根黑腐病发病条件除需要一定量的根黑腐病病菌数量外，还需要合适的温度湿度及在烟株根系上的感染繁殖，这些PCR检测无法模拟。因此，通过本方法能够很好的预测下一年大田烟草根系病害状况，有利于对实际生产的指导。

具体实施例2

实验组：2016年在河南平顶山郏县李口镇某计划用于种植烟草的地块按网格法平均分布选取样品土壤，去除石块、昆虫等杂质；分别装入不同的烟苗培育装置中，植入烟苗品种中烟100，总共实验数量为200株烟苗；模拟植烟田块的自然环境温度12～23℃，光照1000～2000Lx，温室培养30天，取出烟苗培育装置，打开接口，用水冲洗干净泥土；观察根部情况。

通过对根部的观察，烟草根黑腐病发病的烟苗为29株，占整个实验数量的大约15％；烟草根结线虫发病的烟苗为4株，占整个实验数量的2％。根据实验组的判定结果为该地块容易发生烟草根黑腐病。

对照组：从与对照组同一地块中取检测土壤进行土壤稀释平板法配合PCR验证，根据特异扩增曲线判断烟草根黑腐病有Ct值为阳性，含量2.95×10⁶cfu/g；根结线虫病无Ct值为阴性。根据对照组的判定结果该地块不易发生根结线虫病，容易发生烟草根黑腐病。

表3实施例2培育装置与大田发病率(％)统计

根部病害种类	培育装置	大田
			根结线虫病	2.0％	2.5％
根黑腐病	15％	17％

表4实施例2培育装置中根结线虫病和根黑腐病对烤烟根系生长的影响

验证结果与分析：2017年该地块实际种植烟草品种中烟100的发病情况，只有极少量的烟草根结线虫病，但是发生了严重的烟草根黑腐病。该地块两种检测方法都很准确。

具体实施例3

实验组：2016年在河南许昌襄县王洛镇某计划用于种植烟草的地块平均分布选取样品土壤，去除石块、昆虫等杂质；分别装入不同的烟苗培育装置中，植入烟苗，品种为云烟87，总共实验数量为200株烟苗；模拟植烟田块的自然环境温度13～24℃，光照1000～2000Lx，温室培养35天，取出烟苗培育装置，打开接口，用水冲洗干净泥土；观察根部情况。

通过对根部的观察，烟草根黑腐病发病的烟苗为41株，占整个实验数量的20.5％；烟草根结线虫发病的烟苗为6株，占整个实验数量的3％。根据实验组的判定结果为该地块容易发生烟草根黑腐病。

对照组：从与对照组同一地块中取检测土壤进行土壤稀释平板法配合PCR验证，根据特异扩增曲线判断烟草根黑腐病有Ct值为阳性，3.16×10⁶cfu/g；根结线虫病无Ct值为阴性。根据对照组的判定结果该地块不易发生根结线虫病，容易发生烟草根黑腐病。

验证结果与分析：因为两种方法得出的结论都是容易发生烟草根黑腐病，为了减少损失，因此没有实际验证。

表5实施例3培育装置与大田发病率(％)统计

根部病害种类	培育装置	大田
			根结线虫病	3.0％
根黑腐病	20.5％

表6实施例3培育装置中根结线虫病和根黑腐病对烤烟根系生长的影响

具体实施例4

实验组：2016年，在河南驻马店泌阳县盘古镇某计划用于种植烟草的地块平均分布选取样品土壤，去除石块、昆虫等杂质；分别装入不同的烟苗培育装置中，植入烟苗品种中烟100，总共实验数量为200株烟苗；模拟植烟田块的自然环境温度13～24℃，光照1000～2000Lx，温室培养35天，取出烟苗培育装置，打开接口，用水冲洗干净泥土；观察根部情况。

通过对根部的观察，烟草根黑腐病发病的烟苗为7株，占整个实验数量的3.5％；烟草根结线虫发病的烟苗为6株，占整个实验数量的3％。根据实验组的判定结果为该地块适宜种植烟草。

对照组：从与对照组同一地块中取检测土壤进行土壤稀释平板法配合PCR验证，根据特异扩增曲线判断烟草根黑腐病无Ct值为阴性，根结线虫病有Ct值为阳性，含量为2.35×10⁶cfu/g。根据对照组的判定结果该地块不易发生烟草根黑腐病，容易发生根结线虫病。

表7实施例4培育装置与大田发病率(％)统计

根部病害种类	培育装置	大田
			根结线虫病	3.5％	2.5％
根黑腐病	3.0％	2.3％

表8实施例4培育装置中根结线虫病和根黑腐病对烤烟根系生长的影响

验证结果与分析：第二年该地块实际种植烟草的发病情况，第二年实际种植烟草，只有极少量的烟草根黑腐病和烟草根结线虫病，并未影响产量造成严重损失。本具体实施例说明土壤稀释平板法配合PCR验证中烟草根黑腐病的预测结果都准确，不易发生根结线虫病；但是对照组中预测容易发烟草根结线虫病，实际结果没有发生，可能的原因是：一是PCR检测不能区分活细胞和死细胞，将死细胞认定为阳性，影响检测结果；二是烟草根结线虫病发病条件除需要一定量的根黑腐病病菌数量外，还需要合适的温度湿度及在烟株根系上的感染繁殖，这些PCR检测无法模拟。因此，通过本方法能够很好的预测下一年大田烟草根系病害状况，有利于对实际生产的指导。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (4)

1.一种用于判断烟草根部病害压力的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）采集计划用于下一年植烟田块的土壤，装入烟苗培育装置中；

（2）将烟苗接种于烟苗培育装置中，模拟植烟田块的自然环境温室培养25-35天；

（3）用水冲洗除去烟苗培育装置中的土壤，考擦根系生长指标以判断烟草根部病害压力。

2.根据权利要求1所述的用于判断烟草根部病害压力的方法，其特征在于：

所述烟苗培育装置为沿着竖直方向延伸的细长形状，每个烟苗培育装置只装一株烟苗。

3.根据权利要求2所述的用于判断烟草根部病害压力的方法，其特征在于：所述烟苗培育装置放置在培育装置保持架上。

4.根据权利要求2所述的用于判断烟草根部病害压力的方法，其特征在于：所述烟苗培育装置采用沿竖直方向设置可拆卸式接口，所述步骤（1）和步骤（2）烟苗培育过程接口闭合，待所述步骤（3）考擦根系生长指标时拆开接口后用水冲洗土壤。