CN110016509B

CN110016509B - 马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫scar标记及其应用

Info

Publication number: CN110016509B
Application number: CN201910205412.1A
Authority: CN
Inventors: 潘慧鹏; 郭木娟; 陈诗敏; 瘐家琪; 吕晶; 邱宝利
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2019-03-18
Filing date: 2019-03-18
Publication date: 2021-12-24
Anticipated expiration: 2039-03-18
Also published as: CN110016509A

Abstract

本发明公开了马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记及其应用。本发明首次得到了马铃薯瓢虫的SCAR标记片段和茄二十八星瓢虫的SCAR标记片段；并基于所述SCAR标记片段构建了马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的检测及鉴别SCAR标记引物组，该引物组稳定性高、特异性强、灵敏度高。并在此基础上进一步建立了能够准确、稳定、快速地检测并鉴别两种二十八星瓢虫的方法，操作简便快速，鉴别准确度高，成本较低，且对标本的完整性无要求，为马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的检测及鉴别提供了技术支持，对两种二十八星瓢虫的田间精准性防控具有重要理论意义和应用价值。

Description

马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记及其应用。

背景技术

马铃薯瓢虫Henosepilachna vigintioctomaculata(Motschulsky)和茄二十八星瓢虫Henosepilachna vigintioctopunctata(Fabricius)均被称为二十八星瓢虫，属鞘翅目瓢虫科。两种二十八星瓢虫均为我国重要的农业害虫，两者外形相似度极高，寄主植物也几乎相同，但对于寄主植物的嗜好不同，而且对不同的农药所表现的抗药性也不相同。马铃薯瓢虫以成虫越冬，多分布在我国北方地区，其成虫体形为半球形、赤褐色，各鞘翅上均具有14个黑斑，其主要为害的经济作物有马铃薯、茄子、番茄及辣椒等茄科蔬菜，但以危害马铃薯为主。茄二十八星瓢虫与马铃薯瓢虫相似度极高，危害的农作物种类也几乎相同，但以危害茄子为主，分布的范围更为广泛。两种瓢虫的幼虫及成虫均以叶片为食，初孵幼虫主要群集于叶片背面取食叶肉，幼虫稍大后扩散危害，受害叶片通常形成不规则透明斑或穿孔，后期变为褐色凹陷斑痕。此外，嫩茎、花瓣、萼片、果实等也会受到危害，导致植株产量下降、果实品质不佳或植株枯死，严重影响马铃薯、茄子等农作物的经济价值。而由于这两种二十八星瓢虫外形相似度极高，经常被人们混为一谈，导致难以制定针对性的田间防治方案。

现有技术中有报道利用二十八星瓢虫外表形态在细微结构上的区别来鉴别马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的方法，但是这两种害虫外部形态的区分对于非二十八星瓢虫专业研究人士来说仍比较困难，且对于标本的完整程度有较高的要求。近几年来，随着气候变暖、贸易发展及种植业结构的调整，蔬菜种植面积的不断扩增，马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的危害越发严重，有扩大蔓延的趋势，严重影响马铃薯、辣椒及茄子等茄科蔬菜的经济效益。因此，亟需寻找一种能快速、准确鉴别马铃薯瓢虫及茄二十八星瓢虫的方法，对两种二十八星瓢虫的精准性防控具有重要的意义。

序列特征扩增区域(sequence characterized amplified regions,SCAR)是基于随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)发展而来，经过对RAPD标记技术所扩增的目的片段进行克隆、测序并分析序列，而后根据测序结果设计出来的稳定性标记。Paran等在1993年首次提出SCAR标记技术后，近二十多年来SCAR标记技术被广泛地应用于不同领域，在昆虫的种类鉴别方面也发挥着十分重要的作用。与其他分子标记方法相比，SCAR标记具有稳定性高、操作简便快速、特异性强、灵敏度高等优点。而SCAR标记技术对昆虫的种类鉴别效果与多种关键因素有关，如合适靶基因的寻找、检测靶位点的选择、引物的设计、检测体系的建立等。目前尚未有利用SCAR标记技术鉴别马铃薯瓢虫及茄二十八星瓢虫的技术报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有鉴别马铃薯瓢虫及茄二十八星瓢虫的技术缺陷和不足，提供了一种马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记及其应用。本发明首先研究获得了马铃薯瓢虫及茄二十八星瓢虫特异性SCAR标记片段，然后设计SCAR标记引物并进行PCR扩增，建立了快速鉴别马铃薯瓢虫及茄二十八星瓢虫的方法。

本发明的第一个目的是提供马铃薯瓢虫的SCAR标记的核苷酸序列。

本发明的第二个目的是提供上述序列在检测马铃薯瓢虫或制备检测马铃薯瓢虫的试剂盒中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种可用于检测马铃薯瓢虫的RAPD引物。

本发明的第四个目的是提供上述RAPD引物在检测马铃薯瓢虫或制备马铃薯瓢虫的SCAR标记检测引物中的应用。

本发明的第五个目的是提供一组检测马铃薯瓢虫的SCAR标记引物。

本发明的第六个目的是提供茄二十八星瓢虫的SCAR标记的核苷酸序列。

本发明的第七个目的是提供上述序列在检测茄二十八星瓢虫或制备检测茄二十八星瓢虫的试剂盒中的应用。

本发明的第八个目的是提供一种可用于检测茄二十八星瓢虫的RAPD引物。

本发明的第九个目的是提供上述RAPD引物在检测茄二十八星瓢虫或制备茄二十八星瓢虫的SCAR标记检测引物中的应用。

本发明的第十个目的是提供一组检测茄二十八星瓢虫的SCAR标记引物。

本发明的第十一个目的是提供一种检测鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的SCAR标记引物组。

本发明的第十二个目的是提供上述SCAR标记引物组在鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫或制备马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的鉴别试剂盒中的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了马铃薯瓢虫的SCAR标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；以及茄二十八星瓢虫的SCAR标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。该SCAR标记可以用于构建马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的检测及鉴别的方法及试剂盒，准确度高、成本低、快速。因此以下应用均应在本发明的保护范围之内：

所述SEQ ID NO：1所示SCAR标记序列在检测马铃薯瓢虫中的应用。

所述SEQ ID NO：1所示SCAR标记序列在制备检测马铃薯瓢虫的试剂和/或试剂盒中的应用。

所述SEQ ID NO：2所示SCAR标记序列在检测茄二十八星瓢虫中的应用。

所述SEQ ID NO：2所示SCAR标记序列在制备检测茄二十八星瓢虫的试剂和/或试剂盒中的应用。

本发明还提供了一种可用于检测马铃薯瓢虫的RAPD引物OPI-6，其核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示。

引物OPI-6(SEQ ID NO.7)：AAGGCGGCAG。

所述RAPD引物OPI-6在检测马铃薯瓢虫或制备马铃薯瓢虫的SCAR标记检测引物中的应用，也在本发明的保护范围之内。

本发明还提供了一组检测马铃薯瓢虫的SCAR标记引物，其核苷酸序列如SEQ IDNO：3～4所示。

引物OPI-6F(SEQ ID NO.3)：5’-CGTCTCGGGTCTAGAGAT-3’

引物OPI-6R(SEQ ID NO.4)：5’-GACATACCGCCCGATTAG-3’。

本发明还提供了一种可用于检测茄二十八星瓢虫的RAPD引物OPJ-15，其核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示。

引物OPJ-15(SEQ ID NO.8)：TGTAGCAGGG。

所述RAPD引物OPJ-15在检测茄二十八星瓢虫或制备茄二十八星瓢虫的SCAR标记检测引物中的应用，也在本发明的保护范围之内。

本发明还提供了一组检测茄二十八星瓢虫的SCAR标记引物，其核苷酸序列如SEQID NO：5～6所示：

引物OPJ-15F(SEQ ID NO.5)：5’-GGTATGGAGTATCACCAAT-3’

引物OPJ-15R(SEQ ID NO.6)：5’-ATTCCTCCGTATCTCTTTC-3’。

本发明还提供了一种能够鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的SCAR标记引物组，所述引物组的核苷酸序列如SEQ ID NO：3～6所示。

该引物组对马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的鉴别具有很好的稳定性、特异性，具有很好的应用前景。因此，所述SCAR标记引物组在鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫中的应用，以及在制备马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的鉴别试剂和/或鉴别试剂盒中的应用，都应在本发明的保护范围之内。

基于上述SCAR标记引物组，本发明还提供了一种能够鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的方法，以待鉴别样品DNA为模板，利用上述SCAR标记引物组进行PCR扩增反应，根据反应结果判定待鉴别样品中是否含有马铃薯瓢虫或茄二十八星瓢虫。

优选地，所述PCR扩增反应的体系为：DNA模板1μL，2X PCR TaqMasterMix 10μL，引物OPI-6F/OPI-6R各1μL或引物OPJ-15F/OPJ-15R各1μL，ddH₂O补足20μL。

优选地，所述PCR扩增反应的条件为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸10min。

所述反应结果判定的方法为：将扩增产物进行凝胶电泳检测，若扩增出大小为645bp的条带，则判定待测样品中含有马铃薯瓢虫；若扩增出大小为436bp的条带，则判定待测样品中含有茄二十八星瓢虫。

本发明还提供了一种能够鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的试剂盒，包括上述SCAR标记引物组。

所述试剂盒的使用方法为即为上述鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的方法。

另外，上述方法或上述试剂盒在鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫中的应用，也应在本发明的保护范围之内。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明首次提供了马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记及其应用，并首次提出利用分子手段快速鉴别马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫，为鉴别马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫提供了简便稳定的分子标记，解决了区分两种二十八星瓢虫的难题。

本发明通过大量的研究与探索，得到了SCAR标记引物组，该引物组的稳定性高、特异性强、灵敏度高；并利用该引物组建立了能够成功鉴别两种二十八星瓢虫的方法，该方法的扩增图谱单一，操作简便快速，鉴别准确度高，成本较低，且对标本的完整性无要求，能够及时监测田间两种二十八星瓢虫危害动态，掌握其发生规律，为制定防治方案提供依据，对两种二十八星瓢虫的田间精准性防控具有重要理论意义和应用价值。

附图说明

图1是引物OPI-6对马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的RAPD扩增电泳图；其中，M：2000bp分子量标准；1～4：马铃薯瓢虫；5～8：茄二十八星瓢虫。

图2是引物OPJ-15对马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的RAPD扩增电泳图；其中，M：2000bp分子量标准；1～4：马铃薯瓢虫；5～8：茄二十八星瓢虫。

图3是SCAR标记引物组对马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的SCAR标记扩增电泳图；其中，M：2000bp分子量标准；1～2：加入引物OPI-6F/OPI-6R(1：马铃薯瓢虫；2：茄二十八星瓢虫)；3～4：加入引物OPJ-15F/OPJ-15R(3：马铃薯瓢虫；4：茄二十八星瓢虫)。

图4马铃薯瓢虫的SCAR标记灵敏性检测结果电泳图；其中，M：2000bp分子量标准；1～6：DNA模板浓度依次为146.4ng/μL、14.64ng/μL、1.464ng/μL、0.1464ng/μL、0.01464ng/μL、0.001464ng/μL。

图5茄二十八星瓢虫的SCAR标记灵敏性检测结果电泳图；其中，M：2000bp分子量标准；1～6：DNA模板浓度依次为300.4ng/μL、30.04ng/μL、3.004ng/μL、0.3004ng/μL、0.03004ng/μL、0.003004ng/μL。

具体实施方式

以下结合具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。

除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。

以下实施例中的引物和试剂：RAPD引物采用生工生物工程(上海)股份有限公司的RAPD通用引物系列，分别为OPH、OPI、OPJ，每个系列的引物各20条。特异性引物合成以及DNA序列测序均委托广州擎科生物技术有限公司完成。PCR扩增中所用到的2XPCR TaqMasterMix购自abm生物科技有限公司，DNA提取所用试剂盒、DNA纯化回收所用的试剂盒均购自天根生化科技(北京)有限公司、克隆试剂盒购自TAKARA生物技术有限公司；DNA标准Maker购自深圳辉诺生物科技有限公司。

实施例1单头马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫DNA提取

马铃薯瓢虫2018年5月采于河北省张家口北方学院的教学基地，经形态学鉴定，确定为马铃薯瓢虫；茄二十八星瓢虫2018年4月采自华南农业大学校园内的龙葵上，经形态学鉴定，确定为茄二十八星瓢虫。

单头马铃薯瓢虫与单头茄二十八星瓢虫的DNA提取使用DNA提取试剂盒，DNA浓度用微量核酸蛋白浓度测定仪(Thermo Fisher Scientific,美国)测定，放置-20℃保存备用。

实施例2马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的RAPD扩增、测序

1、实验方法

(1)RAPD扩增

以实施例1中提取的两种二十八星瓢虫的DNA作为模板，利用合成的60条RAPD引物进行PCR扩增；两种瓢虫分别设置4个重复，以确保筛选出稳定的特异性条带。

PCR扩增体系为：DNA模板1μL，2X PCR Taq MasterMix 10μL，RAPD上游引物(10mM)1.5μL，RAPD下游引物(10mM)1.5μL，ddH₂O补足20μL。

PCR反应程序为：首先进行94℃预变性4min，之后进行40个循环(包括94℃变性1min，37℃退火50s，72℃延伸95s)，最后72℃延伸10min。

扩增反应在PCR仪(Eppendorf，德国)上进行。程序反应完成后，从各样品的PCR扩增产物中吸取5μL于1％的琼脂糖凝胶上进行电泳(120V，20min)，并利用凝胶成像分析仪对结果进行分析，找出特异性扩增的条带。

(2)特异性扩增条带的测序

记录以上获取的特异性扩增条带，并采用DNA纯化试剂盒对其进行DNA纯化回收。然后使用克隆试剂盒，根据说明书步骤，将纯化回收的目的片段连接到PMD-18T载体上，并转化到JM109感受态细胞中，37℃过夜培养，挑白色阳性克隆于10μL ddH₂O中作为模板，利用通用引物M13(F：5’-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3’，R：5’-CACACAGGAAACA GCTA T-3’)进行PCR扩增验证目的条带，根据电泳结果确定目的条带成功连接到PMD-18T载体上后，将具有目的条带的模板加入5mL含Amp的LB培养基中过夜振荡(200rpm，37℃)培养，将菌液委托于广州擎科生物技术有限公司进行测序。

2、实验结果

在60条RAPD引物中，引物OPI-6(AAGGCGGCAG)在马铃薯瓢虫中扩增出一条大小为750bp的条带，而茄二十八星瓢虫无此条带(引物OPI-6在马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫中的RAPD扩增电泳图如图1所示)。引物OPJ-15(TGTAGCAGGG)在茄二十八星瓢虫中扩增到大小为750bp的条带，而在马铃薯瓢虫中无此条带(引物OPJ-15在马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫中的RAPD扩增电泳图如图2所示)。

RAPD引物OPI-6(SEQ ID NO.7)：AAGGCGGCAG；

RAPD引物OPJ-15(SEQ ID NO.8)：TGTAGCAGGG。

至此得到马铃薯瓢虫的SCAR标记片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，以及茄二十八星瓢虫的SCAR标记片段，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

实施例3马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的SCAR标记扩增

基于实施例2中得到马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的SCAR标记片段，以及引物OPI-6(AAGGCGGCAG)和引物OPJ-15(TGTAGCAGGG)，设计了特异性的SCAR标记引物，并筛选出效果最好的引物组，核苷酸序列分别如SEQ IDNO：3～6所示：

引物OPI-6F(如SEQ ID NO.3所示)：5’-CGTCTCGGGTC TAGAGAT-3’

引物OPI-6R(如SEQ ID NO.4所示)：5’-GACATACCGCCCGATTAG-3；

引物OPJ-15F(如SEQ ID NO.5所示)：5’-GGTATGGAGTATCACCAAT-3’

引物OPJ-15R(如SEQ ID NO.6所示)：5’-ATTCCTCCGTATCTCTTTC-3’。

以利用上述引物组，以提取的马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的DNA作为模板，进行PCR扩增。

PCR扩增反应的体系为：DNA模板1μL，2X PCR Taq MasterMix 10μL，引物OPI-6F/OPI-6R各1μL或引物OPJ-15F/OPJ-15R各1μL，ddH₂O补足20μL。

PCR扩增反应的程序为：94℃预变性3min；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸10min。

扩增反应在PCR仪上进行，扩增产物同样使用1％琼脂糖凝胶电泳进行检测。

2、实验结果

SCAR标记引物组对马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的SCAR标记扩增电泳图如图3所示，可以看出，引物OPI-6F/OPI-6R仅能在马铃薯瓢虫中扩增出大小为645bp的条带；而引物OPJ-15F/OPJ-15R仅能在茄二十八星瓢虫中扩增出大小为436bp的条带。

因此，本发明设计的SCAR标记引物具有很好的特异性，能够准确、稳定且快速地区分马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫。

实施例4马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫的SCAR标记扩增灵敏性

1、马铃薯瓢虫的SCAR标记扩增灵敏性检测

(1)实验方法

将单头马铃薯瓢虫的基因组DNA(浓度为146.4ng/μL)依次梯度稀释之后作为模板，以OPI-6F/OPI-6R为引物，采用实施例3所述的扩增反应的体系、程序及检测方式进行扩增和检测。

(2)实验结果

马铃薯瓢虫的SCAR标记灵敏性检测结果电泳图如图4所示，结果发现，当马铃薯瓢虫的DNA模板稀释到10⁴倍时未见目的扩增条带，表明该SCAR引物灵敏度较高，检测灵敏度达0.1464ng/uL。

2、茄二十八星瓢虫的SCAR标记灵敏性检测

(1)实验方法

将单头茄二十八星瓢虫的基因组DNA(浓度为300.4ng/μL)依次梯度稀释之后作为模板，以OPJ-15F/OPJ-15R为引物，同样采用实施例3所述的扩增反应的体系、程序及检测方式进行扩增和检测。

(2)实验结果

茄二十八星瓢虫的SCAR标记灵敏性检测结果电泳图如图5所示，由图可见，当茄二十八星瓢虫的DNA模板稀释到10⁵倍时未见目的扩增条带，表明该SCAR引物同样具有较高的灵敏性，检测灵敏度达0.03004ng/μL。

以上具体实施方式为便于理解本发明而说明的较佳实施例，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 马铃薯瓢虫与茄二十八星瓢虫SCAR标记及其应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 877

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gaaggggggg gggagggtag cgacggccag tgtctgaggc tcggctgcaa tcgcgtgtcg 60

cccttaaggg cggcaggaag gtaagtccac tatctaaaat aactccgaga tacttttgtt 120

cgctgctcca cctgacaggc cggtcataaa gacgaatcga aggtggtcgt ctcgggtcta 180

gagatccctt aaggagcagg gcacccgtct ttcctggaga gatgcgcaga taattttcct 240

ctagccactg agcagtagca tcgaggaagc gctgtagtcc tgtctccagt agtcgtcggc 300

tgtcagcccc cacaaggaga gctaagtcgt cggcgtacgc aatacaggtc cctcccaacg 360

agtttatata ggtcaggcac tcgtcaaaga ccatattcca cagaaaaggc cccagaatgg 420

agccctgggg gcagccgcgc gagagctgac gtgtctgctg gtaagaaccc tggttataga 480

tcaaggaacg gtcctgtaaa tagctggtga gtagcaggta aacatccccc ggaaaacccg 540

caaggcgagc cctcctgagg acgctcgccc accacaaacc gtcaaatgca ccatctatgt 600

caataaaaat tgagctaaca tatttacggt cagactcccg cgcaaaacgg agcaaggccc 660

ccacggcgtc ctcagtcccc aggccagaac gaaaaccata ttgacacgag ttggctaagc 720

ctgatgacga atatgagacc tgcatgcgag ccagcatgag gcgctccagc aatttgccaa 780

gctccgacag gaggctaatc gggcggtatg tcttcgggtc gtccctaggc ctgtctgccg 840

ccttaagggc aacacgcgat tgcagtcaat actgacg 905

<210> 2

<211> 766

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

gtatggagta tcaccaatca tttttaataa cgttttagaa aagatcatca gaaaatgata 60

acctcatata aggggcataa aagttttcat cacaaaagaa aatcggatga aagtcagttg 120

tctcgccttt gcaaactaca ttgctgtcaa tacatataac agaactgaag tgattcatac 180

tgtgaaaaac taaaatgaaa ttacacagaa aacagaatca cgaatctaca atatgtagaa 240

agttagtcag aaaataaacc taaatcacaa gacgtggcca aattcataat ccagccactt 300

taaagacctc ggagatctta tacttcacaa tgcgaatttc acagcctcaa aattaaggca 360

ttttaacata atgatttttc cagaagcggt atacgcagct gaaacaaaaa ttctcagaaa 420

gagatacgga ggaatcaata cgagatcaat aatgagactt agattggaag acttcggaag 480

gtatgttata aaaaggcaaa tatactgaga gaagaaatca gaaaaagccg atcaaagccg 540

agacgaagtg atgggaaaac tttgtggcct gatcacatcc agcaaacagt aaaacatcct 600

tcgaaacaaa tgttttgggg ttttttcaca accaatggca ctggacgatt acctcttata 660

acatggatga tgaattcagt gaaatatatg gaaatattgc gcaccaggat tgtcccattc 720

gtagaaacgt ttgatggatc atttcagcac gacctagctc cctgct 790

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

cgtctcgggt ctagagat 18

<210> 4

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gacataccgc ccgattag 18

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggtatggagt atcaccaat 19

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

attcctccgt atctctttc 19

<210> 7

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

aaggcggcag 10

<210> 8

<211> 10

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

tgtagcaggg 10

Claims

1.一对鉴别马铃薯瓢虫和茄二十八星瓢虫的SCAR标记引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3～4所示。