CN109999049B

CN109999049B - 奥地帕西在治疗粘多糖贮积症中的用途

Info

Publication number: CN109999049B
Application number: CN201910022697.5A
Authority: CN
Inventors: 菲利普·马松; 让-路易斯·朱尼恩
Original assignee: Inventiva SA
Current assignee: Inventiva SA
Priority date: 2013-10-04
Filing date: 2014-10-03
Publication date: 2022-01-25
Anticipated expiration: 2034-10-03
Also published as: EA201690709A1; DK3047851T3; US9561246B2; RS56235B1; RS54907B1; SI3047851T1; HUE027787T2; US20150099789A1; MY184721A; MX362596B; AU2014330977A1; PH12016500541A1; PL3047851T3; MX2016004333A; MA38931A1; TN2016000111A1; FR3011468B1; DK2857023T3; MA38931B1; CA2925567A1

Abstract

本发明涉及4‑甲基‑2‑氧代‑2H‑1‑苯并吡喃‑7‑基‑5‑硫代‑β‑D‑木吡喃糖苷（奥地帕西）在治疗诸如Maroteaux‑Lamy综合征的粘多糖贮积症中的用途。

Description

奥地帕西在治疗粘多糖贮积症中的用途

本申请是申请日为2014年10月03日、发明名称为“奥地帕西在治疗粘多糖贮积症中的用途”的申请号为201480053707.7的专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及奥地帕西(odiparcil)或者包含该化合物的药物组合物在治疗粘多糖贮积症、特别是Maroteaux-Lamy疾病中的用途。

背景技术

粘多糖贮积症(MPS)是与酶缺陷有关的退行性遗传疾病。特别地，MPS由催化称为糖胺聚糖(GAG)的复合糖分子的逐步代谢(gradual metabolism)的溶酶体酶的失活或缺乏引起。这类酶缺乏引起GAG在患病的受试者的细胞和组织中、尤其是在细胞溶酶体中累积，导致永久和渐进的细胞损伤，这影响了患病的受试者的外貌、体能、器官功能，并在多数情况下影响患病的受试者的心智发育。

已经确定了十一种不同的酶缺陷，对应于MPS的七种不同的临床分类。各MPS的特征在于降解粘多糖(即硫酸乙酰肝素、硫酸皮肤素、硫酸软骨素和硫酸角质素)的一种或多种酶的失活或缺乏。

粘多糖贮积症III型(MPS III)或Sanfilippo疾病是粘多糖贮积症群组的溶酶体贮积疾病，其特征在于严重且快速的智力退化。最初的症状出现在 2岁-6岁之间：行为问题(运动过度、攻击性)和智力退化，以及具有非常温和的变形迹象的睡眠问题。神经损伤在年龄为10岁左右变得更为显著，并丧失精神运动的习得以及与周围人的交流。癫痫通常在年龄为10岁以后发生。该疾病是由于未降解的硫酸乙酰肝素的存在，其归因于硫酸乙酰肝素的分解代谢所需的四种酶的一种或其它种的缺陷，这四种酶分别负责MPS III的四种类型之一：IIIA型(乙酰肝素磺酰胺酶)、IIIB型(α-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶)、IIIC型(乙酰CoA：α-氨基葡萄糖苷-N-乙酰基-转移酶)和 IIID型(N-乙酰氨基葡萄糖-6-硫酸酯硫酸酯酶)。当前对于这种疾病尚无有效的治疗方法。

粘多糖贮积症VI型(MPS VI)或Maroteaux-Lamy疾病是粘多糖贮积症群组的溶酶体贮积疾病，其特征在于严重的体细胞损害(somatic involvement)和精神智力复原的缺失。这种罕见的粘多糖贮积症的患病率为出生人数的1/250 000-1/600 000。在严重的形态中，最初的临床表现发生在 6-24个月之间，并逐渐加重：面部畸形(巨舌、口时常半开、加厚特征(thick features))、关节限制、非常严重的多发性骨发育障碍(扁平椎、脊柱后凸、脊柱侧凸、鸡胸、膝外翻、长骨变形)、体型小(低于1.10米)、肝肿大、心脏瓣膜损伤、心肌病、耳聋、角膜混浊。智力发育通常正常或基本上正常，但听觉和视觉的损伤可导致学习困难。疾病的症状和严重程度在不同患者之间变化很大，并且还存在中间形态或者甚至非常温和的形态(与心血管损害相关的脊椎骨骺发育不良)。如同其它的粘多糖贮积症，在N-乙酰半乳糖胺 -4-硫酸酯酶(也称为芳基硫酸酯酶B)的情况下，Maroteaux-Lamy疾病与粘多糖代谢酶的缺陷有关。这种酶对硫酸皮肤素的硫酸酯基团进行代谢 (Neufeld等，“Themucopolysaccharidoses”，The Metabolic Basis of Inherited Diseases，Scriver等编著，New York，McGraw-Hill，1989，第1565-1587页)。这种酶缺陷阻碍了硫酸皮肤素的逐步降解，从而导致硫酸皮肤素在贮积组织的溶酶体中的累积。当前，批准治疗这种疾病的药物只有一种：

(重组人加硫酶)，其花费非常高(在美国，每年约$350,000)。这种治疗的替代方案是骨髓同种异体移植。

粘多糖贮积症VII型(MPS VII)或Sly疾病是粘多糖贮积症群组的非常罕见的溶酶体贮积疾病。症候学极其多样：产前形态(非免疫性胎儿胎盘水肿)、严重的新生儿形态(在幸存者事件中，伴有畸形、疝气、肝脾肿大、畸形足、骨发育不全、显著的张力减退以及演变为生长迟滞和深度智力缺陷的神经学问题)、在青春期或者甚至在成年期发现的非常温和的形态(胸椎后凸)。该疾病归因于在溶酶体中对多种糖胺聚糖(硫酸皮肤素、硫酸乙酰肝素和硫酸软骨素)的累积作出回应的β-D-葡萄糖苷酸酶的缺陷。当前对于这种疾病尚无有效的治疗方法。

因此，明确地需要对患有MPS III型、VI型和VII型的患者提供药物治疗，并且对患有MPS VI型的患者而言，需要提供并非来自生物技术的替代治疗。

奥地帕西(4-甲基-2-氧代-2H-1-苯并吡喃-7-基-5-硫代-β-D-木吡喃糖苷； CAS137215-12-4)属于硫代木糖苷族。专利申请EP-A-0 421 829中描述了这一化合物，对应于下式：

在20世纪90年代末和21世纪初，该化合物是血栓形成的治疗中的临床开发(1期和2期)的对象。它的作用机制可按如下方式概括：奥地帕西作为酶GT1(半乳糖基转移酶1)的底物，启动了GAG链向硫酸皮肤素/硫酸软骨素途径的合成。这些GAG是作为蛋白聚糖的细胞成分(当它们在丝氨酸和第一糖(木糖)处与蛋白质结合时)，并且也被分泌到细胞外基质中。它们具有从控制凝固(分泌到循环中的硫酸皮肤素和肝素/乙酰肝素)到调节生长因子(β-聚糖)的多种作用。

现已注意到并作为本发明的主题的是，奥地帕西使得能够增加细胞外水平的总的GAG合成，同样地，奥地帕西通过作为“诱饵”将有助于降低细胞内的GAG负荷，使得N-乙酰半乳糖胺-4-硫酸酯酶的残余活性更加有效。由于细胞内水平的GAG累积的减少，因此能够预期对MPS III型、VI型和 VII型的治疗。

发明内容

根据第一方面，本发明涉及用于治疗粘多糖贮积症III型、VI型或VII 型，特别是用于治疗MPS VI型(也称为Maroteaux-Lamy疾病)的用途的奥地帕西。

在专利申请EP-A-0 421 829中对奥地帕西以及获得奥地帕西的工艺进行了描述。

在本发明的上下文中，术语“奥地帕西”表示“β-D-木吡喃糖苷”的形式。

在一个实施方式中，在本发明的上下文中使用的奥地帕西的至少60％、优选至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％处于D-构型。在这一实施方式中，奥地帕西优选处于β-端基异构体形式。

在另一实施方式中，在本发明的上下文中使用的奥地帕西的至少60％、优选至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％处于β-端基异构体形式。

有利地，以约100mg/天至约5000mg/天的份额给予奥地帕西。例如，每天给予约100mg、约250mg、约300mg、约375mg、约400mg、约500 mg、约750mg、约800mg、约1000mg、约1500mg、约2000mg、约3000 mg、约4000mg或约5000mg的奥地帕西。

在一个实施方式中，每天给予至少约0.1mg/kg患者体重至约70mg/kg 患者体重的奥地帕西。例如，每天给予至少约1mg/kg患者体重或2mg/kg 患者体重至约5mg/kg患者体重、至约10mg/kg患者体重、至约15mg/kg 患者体重、至约20mg/kg患者体重、至约25mg/kg患者体重、至约30mg/kg 患者体重、至约35mg/kg患者体重、至约40mg/kg患者体重、至约45mg/kg 患者体重、至约50mg/kg患者体重、至约55mg/kg患者体重、至约60mg/kg 患者体重、至约65mg/kg患者体重、或至约70mg/kg患者体重的奥地帕西。

在一个实施方式中，每天给予一次或两次奥地帕西(例如，每隔10小时至12小时给予)。因此，可将上述日剂量分为每日两次(bid)给予，例如，1000mg的日剂量将以各自为500mg份额的两个剂量给予。可理解的是，各剂量可由一种或多种药物剂型组成，例如，500mg的剂量可由各自为250mg的两种药物剂型组成。

在一个实施方式中，在禁食状态(即，处于空腹状态，例如在进食前至少1h或进食后超过2h)给予奥地帕西。在另一实施方式中，在进食期间给予奥地帕西(即，在用餐时或用餐前，例如，在用餐前约20min-约30min 或用餐后5min内)。

在一个实施方式中，根据本领域技术人员已知的技术，例如在书籍“Remington，The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Lippincott Williams&Wilkins，2006”中描述的技术，将奥地帕西配制成包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

因此，根据第二方面，本发明涉及包含奥地帕西以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物，所述药物组合物用于治疗粘多糖贮积症III 型、VI型或VII型，特别是治疗Maroteaux-Lamy疾病的用途。

药物组合物可处于适合于所期望的给予途径的任何形式。可经口、舌部、舌下、口腔(buccale)、直肠、局部、静脉内、动脉内、皮下、鼻内、经皮、肌内或腹膜内进行该给予。

在一个实施方式中，药物组合物包含约100mg-约1000mg的奥地帕西，例如100mg、125mg、150mg、250mg、375mg、400mg、500mg或1000 mg的奥地帕西。

在一个实施方式中，通过注射途径给予药物组合物，并且该药物组合物包含载体，该载体通常是无菌水溶液，该无菌水溶液有时含有除水之外的一种或多种成分，该成分例如糖、防腐剂、盐、缓冲剂等。可注射的混悬液可包含悬浮剂和给定的液态载体。

在一个实施方式中，口服给予药物组合物。合适的口服药物剂型包括固体制剂和液体制剂。当药物组合物是固体制剂时(诸如例如明胶胶囊剂、片剂、干粉剂)，有用的赋形剂包括特别是稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、填充剂等。固体制剂可被包衣或不被包衣；当固体制剂被包衣时，该包衣可以是肠溶的或非肠溶的。当药物组合物是液体制剂时(诸如例如酏剂或糖浆剂)，有用的赋形剂包括例如水、乙二醇、盐水溶液、醇和芳香剂等。

有利地，药物组合物是片剂。通过一个或多个步骤制备这种组合物，所述步骤包括：将各种成分混合直至获得均匀的混合物，并对混合物进行压制以获得片剂。在一个实施方式中，通过湿法制粒工艺制备组合物，该湿法制粒工艺是本领域技术人员熟知的技术。例如，将奥地帕西、全部或部分稀释剂、粘合剂和足够量的造粒液(例如水)进行组合；制粒、干燥和研磨，以形成颗粒。然后任选地将颗粒与其余的成分组合，并对混合物进行压制。相对于片剂的总重量，片剂有利地包含约5％-约90％的奥地帕西。

根据第三方面，本发明涉及用于治疗粘多糖贮积症III型、VI型或VII 型的方法，特别是治疗Maroteaux-Lamy疾病的方法，该方法在于向有需要的受试者给予治疗有效量的奥地帕西或包含该化合物的药物组合物。在一个实施方式中，药学组合物和奥地帕西的日剂量给予方案如上所限定。

附图说明

图1示出了奥地帕西以剂量依赖的方式增高了牛主动脉内皮细胞的培养物上清液中的³⁵S-标记的GAG的水平。

图2示出了奥地帕西以剂量依赖的方式促进了人皮肤成纤维细胞的总的GAG的合成。

通过如下的实验部分对本发明进行说明。

实施例

药理活性

1.针对所培养的细胞得到的结果

1.1.牛主动脉内皮细胞

在以多种浓度(1μM-10μM；0.1％的DMSO终浓度)溶于DMSO中的奥地帕西和³⁵S硫酸钠(10μci/mL)的存在下，将培养在6孔板中的牛主动脉内皮细胞(ECACC 92010601)孵育24h。回收培养物上清液，并用磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗细胞层。将培养物上清液和漂洗溶液合并在管中。然后加入未标记的硫酸皮肤素(200μg)的溶液，以作为夹带剂(entrainingagent)。然后通过Sephadex G25柱上的凝胶过滤移除未吸收的³⁵S，在柱排阻部分(V0)洗脱GAG。向洗脱液中加入氯化十六烷基吡啶(0.1％终浓度) 的溶液，以在室温下将GAG沉淀24h。然后，将样品离心并移除上清液。将获得的沉淀物重新溶于2M的氯化镁中，并用5倍体积的95％乙醇将GAG 沉淀。离心后，将醇沉淀物重新溶于0.9％的氯化钠中，然后，在计数瓶中加入闪烁液后，对等份的部分(aliquot fraction)的放射性进行测量。

为了对产自所培养的细胞的上清液中的GAG进行分型，在37℃下，用 0.5mU/μL份额的软骨素酶ABC(普通变形杆菌，Proteus vulgaris)对重新溶解的醇沉淀物处理3小时。在100℃下使酶失活3分钟后，用5倍体积的 95％乙醇将未消化的GAG在4℃下沉淀过夜。离心后，将醇沉淀物重新溶解在0.9％的氯化钠中，然后在计数瓶中加入闪烁液后，对等份的部分的放射性进行测量。

在30℃下，用4mU/μL份额的肝素酶II(肝黄黄杆菌，Flavobacterium heparinum)对硫酸乙酰肝素型GAG处理12h。在100℃下使酶失活3分钟后，用5倍体积的95％乙醇将未消化的GAG在4℃下沉淀过夜。离心后，将醇沉淀物重新溶解在0.9％的氯化钠中，然后在计数瓶中加入闪烁液后，对等份的部分的放射性进行测量。

如图1所示，奥地帕西以剂量依赖的方式增高了牛主动脉内皮细胞的培养物上清液中的³⁵S-标记的GAG的水平。

此外，酶消化表明由培养的细胞合成的GAG主要为硫酸软骨素型。

1.2.人成纤维细胞

将正常的人皮肤成纤维细胞(BIOAlternatives PF2)在96孔板中培养 24h。然后，将培养基替换为包含或不包含(对照)多种浓度的奥地帕西 (1μM、3μM、10μM)或10ng/mL的TGF-β参照(阳性对照)的培养基，然后，随着加入³H-氨基葡萄糖放射性标记，将细胞孵育72h，用于评价总的GAG合成。在孵育的末期，向培养板的孔中加入离液序列高的缓冲液(chaotropic buffer)，以裂解成纤维细胞。然后，通过离子交换色谱 (Q-Sepharose柱)对细胞裂解物的总的GAG进行纯化。通过液体闪烁法对吸收至阴离子部分的放射性进行测量。

如图2所示，奥地帕西以剂量依赖的方式促进了人皮肤成纤维细胞的总的GAG的合成(在10μM下为+94％)。对数据通过单向方差分析进行统计学分析，接着进行Dunnett测试(*p<0.05vs.对照；**p<0.01vs.对照；*** p<0.001vs.对照)。

2.口服给予后在兔子体内得到的结果

将奥地帕西以400mg/kg的剂量口服给予新西兰兔。在给予4小时后，将动物麻醉，在颈动脉插管后用柠檬酸管采集血样。在离心后，将血浆移出并冷冻。在50℃下用链霉蛋白酶E将蛋白质消化48小时后，将血浆GAG 分离。通过加入三氯乙酸，将蛋白质和蛋白质残留物沉淀，并在4℃下孵育过夜。离心后，收集上清液，然后在4℃下以100倍体积的磷酸盐缓冲液透析48h。向透析液中加入氯化十六烷基吡啶溶液(0.1％终浓度)，以在环境温度下将GAG沉淀24h。然后，将样品离心并移除上清液。将获得的沉淀物重新溶解在2M氯化钠中，并用5倍体积的95％乙醇对GAG进行沉淀。离心后，将醇沉淀物重新溶解在0.9％氯化钠中，并在Sephadex G25柱(PD10) 上脱盐。

通过改良的Bitter和Muir咔唑方法测定糖醛酸含量，对提取的血浆GAG 进行定量。通过用软骨素酶ABC(来自普通变形杆菌)和软骨素酶AC(来自金黄节杆菌，Arthrobacter aurescens)进行酶消化后获得的二糖的HPLC，对血浆GAG提取物进行定性分析。

下表示出与对照动物相比，用400mg/kg剂量的奥地帕西处理动物使血浆GAG水平(通过糖醛酸含量测定)增加了5倍。从定性的角度看，通过半乳糖胺-4-硫酸酯二糖(Δdi-4S DS)进行测量，软骨素型的GAG经历了在其半乳糖胺-6-硫酸酯成分方面的增高以及在硫酸皮肤素成分(软骨素B)方面的增高。

UA：糖醛酸

Δdi-0S：未硫酸酯化的二糖

Δdi-4S：4-硫酸酯化的二糖

Δdi-6S：6-硫酸酯化的二糖(半乳糖胺-6-硫酸酯成分)

Δdi-UA2S：2UA-硫酸酯化的二糖

Δdi-4S DS：4-硫酸酯化的二糖(硫酸皮肤素成分)

这些结果表明，奥地帕西能够增高总的GAG的合成(人成纤维细胞)、增高软骨素型的细胞外GAG的浓度(牛主动脉内皮细胞)以及增高血浆 GAG的合成，特别是增高软骨素型的GAG的合成。可理解的是，MPS III 型、VI型和VII型的特征在于细胞内的GAG的累积，这些结果表明，奥地帕西能够降低细胞内的GAG负载，因此，在所述MPS的治疗中具有有益效果。

药物制剂的实施例

通过湿法制粒工艺获得片剂，该片剂包含(以重量％计)：

。

Claims

1.奥地帕西在制备旨在用于治疗其特征在于溶酶体中的硫酸皮肤素和/或硫酸软骨素的累积的粘多糖贮积症的药物组合物中的用途。

2.如权利要求1所述的用途，其中，所述药物组合物包含100mg至1000mg的奥地帕西。

3.如权利要求1或2所述的用途，其中，所述药物组合物是口服的药物组合物。

4.如权利要求3所述的用途，其中，所述口服的药物组合物是固体制剂。

5.如权利要求4所述的用途，其中，所述固体制剂是片剂。

6.如权利要求5所述的用途，其中，相对于所述片剂的总重量，所述片剂包含5％-90％的奥地帕西。

7.如权利要求1或2所述的用途，其中，所述药物组合物是可注射的药物组合物。