CN109996558A - 心力衰竭和心脏缺血再灌注损伤的治疗 - Google Patents

Abstract

本发明涉及体外心脏冲击波治疗在治疗或预防心脏病中的用途，特别地，本发明提供二肽基肽酶‑4(DPP‑4)抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物，用于在受试者中：(a)治疗或预防心力衰竭；或者(b)治疗心脏缺血性再灌注损伤，其中所述受试者已经进行了体外心脏冲击波治疗，并且其中所述抑制剂用于在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

Description

心力衰竭和心脏缺血再灌注损伤的治疗

技术领域

本发明涉及体外心脏冲击波治疗在治疗或预防心脏病中的用途，特别是在心力衰竭和心脏缺血再灌注损伤中的用途。特别地，本发明涉及药剂，特别是二肽基肽酶-4的抑制剂(DPP-4抑制剂)和包含所述药剂的药物组合物，以及它们与冲击波治疗组合用于治疗或预防心脏病如心力衰竭和心脏缺血再灌注损伤的用途。所述药剂可单独使用或与其它治疗活性剂组合使用，例如干细胞动员剂，特别是旁分泌因子(如甲状旁腺激素)，以及干细胞(如骨髓衍生的单核细胞，特别是造血祖细胞)。还提供了治疗方法，其包括单独施用体外心脏冲击波治疗或与所述药剂组合用于上述用途。该试剂也可用于生产或制备用于上述疗法的药物。

背景技术

心力衰竭影响英国1-2％的人口，并且随着年龄的增长而逐渐普及(65岁以下1％，75-84岁人群占6-7％，85岁以上者占12-22％)。英国心力衰竭的主要原因是冠状动脉疾病(约70％的心力衰竭患者)，诊断后平均预期寿命为3年，这比许多恶性肿瘤更差，并且约14％的心力衰竭患者在诊断后6个月内死亡。

心力衰竭占医疗入院率的5％和NHS预算的1-2％。该综合症不仅带来重大的健康和经济负担，而且还对生活质量产生不利影响。随着人口在未来25年内老龄化，估计入院时心脏衰竭将增加50％。

冠心病通常在心肌梗塞(心脏病发作)中达到顶峰，而用于治疗心脏病发作的原发性血管成形术和支架增加了其存活的机会，心力衰竭的患病率实际上正在增加。据认为，心力衰竭患病率的增加部分归因于再灌注损伤占最终梗塞面积的占50％和急性心力衰竭病例的占25％。

尽管医学疗法和电生理干预措施有所进步，但许多患有充血性(慢性)心力衰竭的患者仍然存在生活质量下降和预后不良的不良后果。在某些情况下，可以考虑进行心脏移植或植入式循环辅助装置等根治性治疗，但缺乏可用的器官，而且心脏移植患者10年生存率仅为50％左右。

在患有心脏病发作的受试者中，心肌梗塞导致心脏组织的氧气严重缺乏，随后进行的治疗(例如，去除或绕过阻塞)允许组织再灌注并随后使心脏细胞再氧合。然而，当细胞暴露于严重缺乏氧气然后再复氧时，组织中一定比例的细胞将超过一定的应激阈值，这开始了称为细胞凋亡的程序性细胞死亡的不可逆过程。虽然细胞可能保持结构完整，它们将以受控的方式从体内移除，因为它们不再具有活性(viable)。因此，这些“应激”条件在患有心脏病发作的受试者中是常见的，并且超过氧缺乏/复氧应激阈值的心肌中的心肌细胞被瘢痕组织替代，即所谓的心脏缺血性再灌注损伤。活性心肌组织的损失削弱了心脏泵送的能力，并且在极端情况下导致心力衰竭。如上所述，这些患者的预后很差。

多能心脏干细胞维持心脏稳态，这种发育可塑性的能力通过用活的祖细胞重建梗塞组织，有望预防和治疗人类心力衰竭。细胞疗法确实可以在心肌梗塞后产生功能改善。例如，干细胞通过各种手术方法直接给予心衰，包括静脉内、冠状动脉内、经心内膜和心肌内注射。然而，迄今为止观察到的心脏功能的改善很小。这可能是由于心脏内细胞保留不良，细胞存活率差和/或单剂量可能不足以促进左心室功能的持续改善。而且，这些侵入性手术存在许多缺点，尤其是与侵入性心脏手术相关的潜在致命并发症。实际上，干细胞的外科给药是昂贵且耗时的，部分原因在于产生干细胞的过程。

因此，需要一种用于心力衰竭的新型治疗方法。特别地，消除心脏病发作患者中心肌细胞死亡可有益于降低心力衰竭的可能性并改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的患者的预后的方法。

发明内容

在通向本发明的工作中，令人惊讶地确定通过将细胞暴露于低能量冲击波可以挽救缺氧心肌细胞免于凋亡。值得注意的是，发明人已经确定用冲击波治疗缺氧心肌细胞增加了蛋白激酶B(也称为Akt)的磷酸化即活化。Akt是凋亡的关键调节因子，激活Akt磷酸化并抑制各种促凋亡蛋白，包括Bcl-2家族成员Bad、Bax、caspase-9、GSK-3和FoxO1。但是，应用PI3K/Akt通路的抑制剂(LY294002)不影响应用冲击波引起的抗细胞凋亡作用，即冲击波治疗的抗细胞凋亡作用与独立于PI3K/Akt通路(参见实施例5)。此外，发明人已表明已知抗凋亡的SDF1的表达在暴露于冲击波的心肌细胞中没有增加。然而有趣的是，全心脏组织的冲击波治疗确实导致各种抗凋亡蛋白的增加，包括SDF1、MCP1、ANG1、VEGF-A、NOS3和TAC-1。这些发现使得发明人提出了使用冲击波疗法治疗各种心脏疾病的新疗法，特别是在治疗由缺氧后再常氧引起的损伤，即心脏缺血再灌注损伤。

因此，本发明总体涉及用于减少或最小化心脏组织(例如，心肌细胞)中细胞凋亡(即细胞死亡)的方法和药剂。更具体地，本发明涉及单独使用或与其他疗法(特别是药物或药理学疗法)组合(在本文中称为联合疗法或联合疗法)使用的冲击波治疗(即体外心脏冲击波治疗)，以抑制、预防或减少心脏细胞(特别是心肌细胞)的凋亡。另外，此类治疗方法和药剂可与细胞疗法结合以修复和/或恢复心脏组织和功能。

例如，本发明提供了通过施用体外心脏冲击波疗法治疗患有急性心肌梗塞的受试者的方法，特别是作为冠状血管成形术和支架植入术的辅助治疗。在心肌梗塞后尽快开始本发明的体外心脏冲击波治疗是有利的。然而，对于延迟后入院并且不符合急性血运重建或有手术禁忌症的患者，可以单独使用本发明的体外心脏冲击波治疗。虽然不希望受理论束缚，但认为本发明的体外心脏冲击波治疗可通过预防细胞凋亡来延迟剩余心肌细胞的进行性丧失，这对于已确定梗塞的患者可能是特别有利的，即预防、减少或最小化心力衰竭的可能性。

因此，在其最广泛的范围内，可以看出本发明提供了减少、预防或最小化心脏组织中细胞凋亡的方法，包括对所述心脏组织施用冲击波治疗。特别地，本发明提供了减少、预防或最小化心脏组织(例如心脏)中心肌细胞凋亡的方法，包括对所述心脏组织(例如心脏)施用冲击波治疗。

或者，本发明涉及用于减少、预防或最小化心脏组织中细胞凋亡的冲击波治疗。特别地，本发明涉及用于减少、预防或最小化心脏组织(例如心脏)中心肌细胞凋亡的冲击波治疗，包括对所述心脏组织(例如心脏)施用冲击波治疗。

如上所述，已经发现本发明的冲击波疗法作为体外心肌细胞的抗细胞凋亡治疗(例如，在体外预防、减少或最小化心肌细胞凋亡)是有效的。因此，本发明还可以提供用于预防、减少或最小化体外心肌细胞凋亡的新方法和手段(例如在培养中，例如在用于生产人工或合成组织的心肌细胞的培养中)或离体(例如，在从受试者移除的心脏组织中，例如在心脏或心脏组织中，例如瓣膜，用于移植)。

在一个特别优选的方面，本发明提供了用于预防、减少或最小化体内(即在受试者内)心肌细胞凋亡的新方法和手段。例如，在心肌梗塞后的受试者的治疗中用于预防、减少或最小化心肌细胞凋亡的方法和手段，例如减少、预防或最小化心脏缺血再灌注损伤和/或心力衰竭，或者从另一个角度看，改善心力衰竭患者的预后。在这方面，显然冲击波治疗不需要在体内施用以对体内(即在待治疗的受试者中)细胞(例如心肌细胞)的生存力产生影响。因此，在本发明的优选实施方案中，冲击波治疗在受试者体外施用，即冲击波的施用是非侵入性的。或者从另一个角度看，本发明的冲击波疗法优选为体外心脏冲击波疗法。

因此，在一些实施方案中，可以看到本发明提供治疗、预防或最小化心脏缺血性再灌注损伤的方法，包括向有此需要的受试者施用体外心脏冲击波疗法。因此，在一些实施方案中，可以看出本发明提供了改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后的方法，包括对所述受试者施用体外心脏冲击波治疗。如上所述，该方法可以与血管成形术和支架置入疗法组合使用。

从另一个角度看，本发明提供了体外心脏冲击波治疗用于治疗、预防或减少心脏缺血再灌注损伤。因此，在一些实施方案中，可以看出本发明提供体外心脏冲击波治疗，用于改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后。

在另一个实施方案中，本发明提供体外心脏冲击波治疗用于治疗、预防或最小化心脏缺血性再灌注损伤的用途。因此，在一些实施方案中，可以看出本发明提供体外心脏冲击波疗法用于改善患有心力衰竭或具有心力衰竭风险的受试者的预后的用途。

如上所述，发明人已经确定心脏组织暴露于冲击波增加了各种趋化因子的分泌，特别是促存活的趋化因子如SDF-1(基质细胞衍生因子1，也称为C-X-C基序趋化因子12(CXCL12)，MCP1(单核细胞趋化蛋白1，也称为CCL2)，P物质和IGF1(胰岛素样生长因子1)，即冲击波增加了心脏组织中的促存活“分泌蛋白组”。值得注意的是，认为分泌蛋白组可以是一种或多种外泌体的形式，例如，细胞衍生的囊泡含有一种或多种趋化因子。虽然促存活的分泌蛋白组(或外来体)的增加不能解释冲击波对心肌细胞的抗细胞凋亡作用，但是认为这些促存活趋化因子的增加可以增强暴露于与心脏缺血和再灌注有关的应激条件的心肌细胞的存活。然而值得注意的是，趋化因子的快速更新意味着由冲击波治疗引起的促存活分泌蛋白组的增加可能是短暂的，这意味着可能需要重复的冲击波治疗以最大化上述冲击波治疗的效果。然而，在某些情况下，重复的冲击波治疗可能是或变得不切实际。通常，优选避免重复和定期到访诊所的需要，因为这给患者和医疗保健专业人员带来了负担。此外，反复的冲击波治疗可能导致不适，导致错过治疗，这可能降低治疗的总体功效。

趋化因子的快速更新是其降解和/或失活的结果。各种酶参与体内趋化因子的降解，例如二肽基肽酶-IV(DPP-IV或DPP-4)，其也称为腺苷脱氨酶复合蛋白2或分化簇26(CD26)。DPP-4是在大多数细胞类型的表面上表达的抗原酶。它是内源性膜糖蛋白和丝氨酸外肽酶，其从多肽的N-末端切割X-脯氨酸二肽。因此，DPP-4具有多种底物，包括SDF-1、MCP1、P物质和IGF1。

因此，发明人已经确定冲击波治疗可以有利地与一种或多种蛋白酶抑制剂组合以减少、预防或最小化由冲击波治疗诱导的趋化因子的降解和/或失活，即延长由冲击波治疗(此处指联合治疗或组合治疗)引起的心脏组织的促存活分泌蛋白组(其可以是一种或多种外泌体的形式)的半衰期。例如，DPP-4抑制剂在本领域中是公知的，并且可以容易地与上述的冲击波治疗方法和用途组合。因此，DPP-4抑制剂可以增强冲击波治疗在上述方法和用途中的作用，即可以加强或增强冲击波对心脏组织，特别是心肌细胞的抗细胞凋亡作用，从而改善心脏缺血再灌注损伤的治疗或者最小化或防止由心脏缺血和再灌注引起的心脏组织(特别是心肌)的损伤，例如进一步改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后。值得注意的是，结合疗法(组合疗法)可以起到减小最终梗塞的大小和/或预防、延缓或延迟心力衰竭的进展的作用。因此，在一些实施方案中，本发明提供治疗或预防心力衰竭或治疗心脏缺血性再灌注损伤的方法，包括向有此需要的受试者施用体外心脏冲击波治疗和DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂的药物组合物，其中所述抑制剂或组合物在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。因此，在一些实施方案中，本发明提供了改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后的方法，包括将体外心脏冲击波治疗和DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂的药物组合物给予有需要的受试者，其中所述抑制剂或组合物在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

或者，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物，用于在受试者中：

(a)治疗或预防心力衰竭；或者

(b)治疗心脏缺血再灌注损伤，

其中所述受试者已经施用体外心脏冲击波治疗，并且其中所述抑制剂或组合物用于在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。因此，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物，用于改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后，其中所述受试者已经进行了体外心脏冲击波治疗，并且其中所述抑制剂或组合物用于在施用所述冲击波治疗之前、同时、和/或之后施用。

在另一个实施方案中，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物在制备在受试者中用于以下作用的药物中的用途：

(a)治疗或预防心力衰竭；或者

(b)治疗心脏缺血再灌注损伤，

其中所述受试者已经施用了体外心脏冲击波疗法，并且其中所述药物用于在施用所述冲击波疗法之前、同时和/或之后施用。因此，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物在制备用于改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后的药物中的用途，其中所述受试者已经施用体外心脏冲击波治疗，并且其中所述抑制剂或组合物用于在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

有利地，发明人还确定冲击波治疗和DPP-4抑制剂治疗的组合还起到促进心脏组织中血管生成的作用，这可能对治疗患有心力衰竭的受试者(例如慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或心脏缺血再灌注损伤特别有益。

因此，在一些实施方案中，本发明提供诱导(例如增加或改善)受试者心脏组织中血管生成的方法，包括给予所述体外心脏冲击波治疗和DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂的药物组合物。其中所述抑制剂或组合物在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。在特别优选的实施方案中，受试者患有心力衰竭(例如慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或心脏缺血性再灌注损伤。

因此，在一些实施方案中，本发明提供了通过在所述受试者的心脏组织中诱导血管生成来治疗或预防心力衰竭(例如慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或治疗受试者的心脏缺血性再灌注损伤的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用体外心脏冲击波治疗和DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂的药物组合物，其中所述抑制剂或组合物在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

或者，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物，用于诱导受试者的心脏组织(例如，患有心力衰竭(例如慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或心脏缺血性再灌注损伤的受试者)的心脏组织中的血管生成，其中所述受试者已经施用了体外心脏冲击波治疗并且其中所述抑制剂或组合物在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。因此，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物，用于通过诱导血管生成来治疗或预防心力衰竭(例如慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或治疗受试者的心脏缺血性再灌注损伤。在所述受试者的心脏组织中，其中所述受试者已经施用了体外心脏冲击波疗法，并且其中所述抑制剂或组合物用于在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

在另一个实施方案中，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物在制备用于在受试者(例如患有心力衰竭(例如，慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或心脏缺血性再灌注损伤的受试者)的心脏组织中诱导血管生成的药物中的用途，其中所述受试者已经施用体外心脏冲击波治疗，并且其中所述药物用于在施用所述冲击波疗法之前、同时和/或之后施用。因此，本发明提供DPP-4抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物在制备通过在所述受试者的心脏组织中诱导血管生成用于治疗或预防心力衰竭(例如慢性缺血性心脏病或慢性心肌缺血)或治疗心脏缺血性再灌注的药物中的用途，其中所述受试者已经施用体外心脏冲击波治疗，并且其中所述抑制剂或组合物用于在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

显而易见的是，上述用于在受试者的心脏组织中诱导血管发生的方法和用途也可用于改善患有心力衰竭或具有心力衰竭风险的受试者的预后。

还已知干细胞分泌具有抗细胞凋亡作用的旁分泌因子，其可能对患有心脏病发作和/或心力衰竭的患者特别是由缺血性再灌注损伤引起的心力衰竭有益。然而，如上所述，向心脏施用干细胞是非常侵入性、昂贵的且与细胞滞留不良有关。此外，虽然上述冲击波疗法(包括联合疗法)可以最小化由心肌梗塞引起的对心脏组织的损害(例如心脏缺血性再灌注损伤)，就射血分数的改善而言，它们不能为心脏提供任何功能益处，即上述冲击波疗法不能恢复心脏功能或修复由心肌梗塞(例如心脏缺血性再灌注损伤)引起的损伤。

因此，本发明人进一步确定，通过向受试者提供可替代因与心肌梗塞(例如缺血再灌注损伤)相关的应激条件而死亡的心脏细胞(特别是心肌细胞)的干细胞或祖细胞，可以进一步增强上述本发明的方法和用途。在这方面，认为在暴露于冲击波时在心脏组织中诱导的促存活分泌蛋白组(其可以是一种或多种外泌体的形式)可以起到吸引或募集干细胞至受损组织的作用，从而增强保留心脏内的细胞并使受损组织的有效修复(即恢复至少一些失去的心脏功能)。换句话说，可以看到本发明的冲击波疗法提供了促进或加强心脏组织内干细胞保留和随后心脏组织内所述细胞植入的环境。虽然干细胞可以直接施用于心脏组织，例如，如上所述，通过静脉内、冠状动脉内、经心内膜和/或心肌内注射，从下面的讨论中可以明显看出，本发明不需要干细胞的侵入性给药。

在这方面，除了提供促进或加强心脏组织内干细胞滞留的环境之外，由本发明的冲击波治疗诱导的心脏组织分泌蛋白组(其可以是一种或多种外泌体的形式)可以起作用以从心脏以外的部位(例如血液中存在的干细胞)吸引或募集干细胞。换句话说，本发明的方法可以促进干细胞归巢到心脏。这可以使干细胞能够非侵入性地给药，即通过在心脏以外的部位注射，例如，注入外周血液循环。因此，本发明消除了心内直视手术的需要，并且不需要将干细胞直接注射(例如使用导管进入冠状动脉血液供给)到心脏组织。

有利地，本发明支持使用内源性干细胞，例如，存在于待治疗受试者血液中的干细胞。因此，在一些实施方案中，本发明的冲击波疗法可导致干细胞在心脏组织的外周循环中的非侵入性归巢(即募集和随后植入)。在这方面，其可能对增加血液中存在的干细胞的数量是有用的，例如，施用药理学干细胞动员剂，如甲状旁腺激素，如下面更详细讨论的。

因此，在一些实施方案中，本发明的方法可以进一步包括向所述受试者施用药理学干细胞动员剂(所谓的联合疗法)，例如，甲状旁腺激素或其片段。

或者从另一角度，抑制剂(例如DPP-4抑制剂)或包含所述抑制剂的或药物组合物作为与药理学干细胞动员剂(例如，甲状旁腺激素或其片段)的组合制剂提供，用于单独、同时或依次使用或给予受试者(所谓的联合疗法)。因此，在更进一步的实施方案中，本发明提供了抑制剂(例如，DPP-4抑制剂)或包含所述抑制剂的药物组合物用于制备与药理学干细胞动员剂(例如甲状旁腺激素或其片段)的组合制剂用于分开、同时或依次使用或给予受试者(所谓的联合疗法)的用途。

在一些受试者(即患者)中，从受试者收获干细胞(例如在治疗开始之前)并且在最合适的时间将所述细胞施用于受试者(例如通过注射到外周循环中)可能是有益的，例如在冲击波治疗之前，如下面更详细地讨论的。如果受试者对用于动员干细胞的药剂(例如甲状旁腺激素)没有反应，或者如果这些药物是禁忌的，则可能需要从受试者收获或获得干细胞。在一些实施方案中，在施用前扩增体外干细胞群(即，在体外培养受试者的内源性干细胞)可能是有用的。这种扩增方法在本领域中是众所周知的。

因此，在一些实施方案中，本发明的方法可以进一步包括向所述受试者施用干细胞(所谓的组合疗法)。特别地，该方法可包括在施用前从受试者(例如待治疗的受试者)获得或收获干细胞并任选地在体外扩增干细胞群的步骤。

或者从另一角度，抑制剂(例如，DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂的药物组合物作为与干细胞的组合制剂提供，用于单独、同时或依次使用或给予受试者(所谓的组合疗法)。因此，在更进一步的实施方案中，本发明提供了抑制剂(例如，DPP-4抑制剂)或包含所述抑制剂的药物组合物用于制备与干细胞的组合制剂以用于分别、同时或依次使用或施用于受试者(所谓的组合疗法)的用途。

因此，在一些实施方案中，干细胞从所述受试者获得并任选在施用前体外扩增。因此，在一些实施方案中，干细胞是外源干细胞，例如自体干细胞。

在更进一步的实施方案中，干细胞可以与适于动员干细胞的药理学试剂组合使用，例如甲状旁腺激素或其片段(所谓的联合疗法)。

在某些情况下，可能需要或必须使用来自供体受试者的干细胞。因此，在一些实施方案中，该方法可包括在给予待治疗的受试者之前从供体受试者获得或收获干细胞并任选地在体外扩增干细胞群的步骤。因此，在一些实施方案中，干细胞是外源供体干细胞，即同种异体干细胞。

显而易见的是，从受试者获得或收获的干细胞可能不适合立即给药，即在给药前修饰干细胞可能是必要的或有利的。例如，如上所述，在体外扩增或培养干细胞以增加用于施用的干细胞的数量可能是有用的。另外或可替代地，在施用之前分离或分开不同的干细胞类型可能是有用的。此外，在一些实施方案中，可以处理干细胞以区分细胞，使其更适合用于本发明的方法和用途，例如，用于本发明的方法和用途。将细胞分化成可能在本发明的治疗中特别有利的细胞类型，例如M2c巨噬细胞，如下所述。例如，收获或获得干细胞的步骤可以包括从受试者(例如待治疗的受试者或供体受试者)中分离血液祖细胞，例如骨髓衍生的单核细胞，并在适合于下面将更详细描述的优选的干细胞或干细胞群的条件下体外培养所述细胞。然而，在一些实施方案中，血液祖细胞在体外不经历分化，即在一些实施方案中，用于在本发明的方法和用途中给药的干细胞是血液祖细胞，例如骨髓来源的单核细胞。

如下文实施例中更详细讨论的，发明人已经确定血管内皮细胞暴露于冲击波导致SDF-1基因表达的快速和瞬时增加。在暴露于冲击波之后2-6小时，即约4小时，观察到SDF-1的最大表达，并在24小时的时间点恢复到基线水平。在心脏成纤维细胞中观察到VEGFA和MCP1的类似表达模式，其中在暴露于冲击波后3小时后观察到最大表达。然而，虽然暴露于冲击波会增加成纤维细胞中SDF-1的表达，但是表达滞后使得在暴露于冲击波后至少约24小时才能看到最大表达。

如上所述，认为由冲击波疗法诱导的分泌蛋白组(其可以是一种或多种外泌体的形式)可以起到将干细胞募集到心脏组织并加强它们在所述组织中的滞留的作用。因此，在一些实施方案中，在冲击波治疗之前施用干细胞和/或干细胞的药理学动员剂可能是有利的。例如，干细胞和/或干细胞的药理学动员剂可在冲击波治疗前至少8小时施用(即给药)，例冲在击波治疗前至少12、16、20、24小时。在一些实施方案中，在冲击波治疗之前至少24、30、36、42或48小时施用干细胞和/或干细胞的药理学动员剂。

在一些实施方案中，在冲击波治疗后立即施用(即在冲击波治疗后尽快施用)干细胞和/或干细胞的药理学动员剂可能是有用的。这可以是上述先前施用的补充或作为其替代实施方案，即在一些实施方案中，干细胞和/或干细胞的药理学动员剂不在冲击波治疗之前施用。冲击波治疗后立即或尽快施用意味着在冲击波治疗已完成的数分钟或数小时后，例如在完成冲击波治疗(即完成冲击波治疗剂量，例如500-2000个脉冲)的5、10、15、20、30、45、60、90或120分钟内。例如，施用可以在冲击波治疗完成后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12小时内进行。如下面进一步讨论的，在一些实施方案中，冲击波治疗剂量(例如500-2000)脉冲可以在多于一个疗程中施用，即可以中断剂量的施用。因此，在一些实施方案中，干细胞和/或干细胞的药理学动员剂可以在冲击波疗法期间施用，例如，在冲击波剂量的给药中断期间。

术语“冲击波治疗”和“体外冲击波治疗”(ESWT)在本文中可互换使用，并且指的是施加高振幅机械能脉冲(声压波)，类似于通常由电磁线圈产生的声波。特别是，ESWT指的是使用“低能量”冲击波。在这方面，“高能量”冲击波可以定义为“体外冲击波碎石术”(ESWL)中使用的那些，其是肾结石的非侵入性治疗。因此，用于本发明的“低能量”冲击波不同于ESWL中使用的冲击波。

因此，低能量冲击波可以定义为具有约0.01-0.50mJ/mm²(约0.1-5巴)的能量的冲击波。相反，高能冲击波可以定义为具有至少0.85mJ/mm²(约8.5巴)的能量的冲击波。因此，在一个优选的实施方案中，用于本发明的低能量冲击波具有大约0.01-0.45mJ/mm²的能量，例如，0.02-0.40、0.03-0.35、0.04-0.30或0.05-0.25mJ/mm²(约0.1-4.5巴，例如0.2-4、0.3-3.5、0.4-3.0或0.5-2.5巴)。例如，用于本发明的低能量冲击波具有约0.05、0.10、0.15、0.2或0.25mJ/mm²(约0.5、1、1.5、2或2.5巴)的能量。

可以使用本领域已知的任何合适的方法施用低能量冲击波。例如，可以使用液电式体外冲击波碎石机(例如SD1碎石机)来施用冲击波疗法。

实施例描述了使用产生径向冲击波的装置在体外施用冲击波。径向冲击波在大的表面区域扩散，因此不会穿透深层组织。这种径向冲击波通常可用于治疗近端表面病变，例如肌筋膜疼痛综合征。因此，径向冲击波特别适用于不需要深穿透的体外实验。相反，本发明的方法和用途通常使用能够产生聚焦冲击波的装置，其能够穿透深层组织，例如心脏。聚焦的冲击波具有一个小焦点，可以定位特定的组织区域。径向冲击波和聚焦冲击波都是“压力波”，其产生类似的生物反应，即细胞和组织中的类似反应。因此，在本发明的上下文中径向和聚焦冲击波之间的主要差异涉及组织穿透的深度。因此，在本发明的一个优选方面，本发明的方法和用途中使用的冲击波为聚焦冲击波。

术语“体外”是指冲击波在身体外部产生并传播，例如从垫子穿过皮肤。

冲击波治疗涉及多个低能量冲击波脉冲的施用。例如，在一些实施方案中，冲击波治疗(即一剂低能量冲击波)包括施用至少约500个冲击波脉冲，例如至少750、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700，1800、1900或2000个冲击波脉冲。因此，在一些实施方案中，冲击波疗法包括施用约500-2000个脉冲，例如，600-1900、700-1800、800-1700、900-1600或1000-1500个脉冲。

用于本发明的冲击波治疗是体外心脏冲击波治疗，意味着冲击波集中在心脏组织上，如下面更详细描述的。特别地，在心动周期的等容收缩和/或等容舒张期间递送(即施用)冲击波脉冲。因此，在一些实施方案中，冲击波疗法包括在心脏的等容收缩和/或等容舒张期期间施用冲击波脉冲(即一个或多个脉冲)。

等容(等体积)收缩期是收缩早期的时间，在此期间心室收缩而没有体积变化(等容量)。这种短暂持续的收缩部分发生在心脏瓣膜全部关闭的时刻。

等容舒张时间(IVRT)期是指心动周期中从主动脉瓣闭合到通过打开二尖瓣开始填充的间隔。

很明显，根据心率，可以在每次等容收缩和/或等容舒张期间递送超过一次的冲击波脉冲。因此，治疗时间(即作为冲击波剂量(例如500-2000个脉冲)递送(给药)所需的时间量)将取决于待治疗受试者的心率。然而，在一些实施方案中，优选所有冲击波脉冲(例如500-2000个脉冲)在4小时内施用，优选在3小时内或2小时内施用，例如在1小时内。在某些情况下，例如由于患者不适，可能无法在单个疗程中施用所有冲击波脉冲(即一定剂量的冲击波脉冲)。因此，在一些实施方案中，冲击波脉冲在多于一个疗程中施用，即在多个疗程中施用500-2000个脉冲。优选地，所有疗程都在上述时间段内，即在4小时内。

冲击波脉冲被传递(即施用)到患病的节段或心脏区域(例如梗塞的组织)及其周围的心脏组织。在一些实施例中，冲击波脉冲的焦点可以靶向心脏组织的特定区域，即患病区段。

在某些情况下，例如在急性情况下，例如经历心肌梗塞的受试者，可能没有足够的时间来确定患病(梗塞)节段的精确位置，即绘制患病节段。因此，在一些实施方案中，可以通常使用确定患病或受影响(例如梗塞)节段的位置可能需要使用心电图(ECG)模式识别和/或超声心动图(回声)可视化(即心脏回声，其是心脏的超声波图)来确定。因此，在一些实施方案中，待通过超声波治疗(即，冲击波脉冲的焦点所针对的区域)靶向的心脏区域(即心脏组织)通过超声心动图(回波)可视化和/或ECG模式识别来确定。

在某些情况下，例如在慢性情况下(例如治疗心力衰竭的受试者)或在心肌梗塞后患者病情稳定后，心脏病变部位(如梗塞和/或瘢痕组织)的位置可能准确地使用心脏磁共振成像(MRI)确定。特别地，心脏MRI可用于确定风险区域、残余指数和测量其他功能指数。理想情况下，心脏MRI应在心肌梗塞后尽快进行，例如在心肌梗塞的一周内。

因此，在一些实施例中，通过MRI确定冲击波治疗(即，冲击波脉冲的焦点所针对的区域)靶向的心脏区域(即心脏组织)。换句话说，本发明可以包括确定心脏组织的患病区段的大小的步骤，即确定或评估梗塞组织(例如疤痕组织)的面积和/或体积。

心脏MRI可用于评估本发明的治疗方法和用途的功效。因此，在一些实施方案中，该方法可以进一步包括在根据本发明的治疗后对受试者的心脏进行MRI的步骤，以确定治疗的功效和/或确定受试者的预后。这些步骤可以以适当的时间间隔进行，例如，每日、每周、每月和/或每年。

如下面更详细讨论的，心力衰竭是进行性疾病。因此，一些受试者(例如患有慢性心力衰竭的受试者)可以受益于重复的冲击波治疗疗程，任选地与本文所述的药理学治疗组合。例如，在一些实施方案中，冲击波治疗(即冲击波脉冲的剂量)可以每周提供超过一次，例如，每周两次或三次。此外，每周治疗疗程可以重复或循环，例如，每周、每两周、每月或每两个月直至长达6个月。此外，可以重复这些循环，例如，每季度、每两年、每年等，例如保持有益效果，特别是在已确定梗塞的患者中，其剩余心肌细胞的存活率处于危险之中。如上所述，可以使用心脏MRI监测治疗功效，适当的治疗方案将取决于待治疗的受试者，且在本领域技术人员的能力范围内。

用于本发明联合治疗的DPP-4抑制剂可以在施用冲击波治疗之前、同时和/或之后给药。在特别优选的实施方案中，DPP-4抑制剂的施用在冲击波治疗之前开始并且在冲击波治疗的整个过程中施用。因此，例如，在冲击波治疗在数周或数月内施用的情况下，DPP-4抑制剂在该时间段内连续施用于受试者，例如，在冲击波治疗期间向受试者施用每日或每周剂量的DPP-4抑制剂。优选地，DPP-4抑制剂将在冲击波治疗开始之前施用，并且可以在冲击波治疗之后继续以使效果最大化。例如，DPP-4抑制剂可以在第一剂冲击波脉冲之前数周(例如，1-4、1-3或1-2周)施用，并且可以在最后一剂冲击波脉冲之后持续数周或数月，例如，至少1、2、3、4、5或6周，例如给予最后一剂冲击波脉冲后1、2、3、4、5或6个月。

术语“DPP-4抑制剂”或“DPP-4拮抗剂”是指能够直接或间接抑制、降低或阻断DPP-4的活性或功能的药剂。例如，直接抑制剂包括与DPP-4直接相互作用以抑制、降低或阻断DPP-4的活性或功能的药剂。这些试剂可通过竞争性抑制、非竞争性抑制、持续竞争性抑制或混合抑制起作用。间接抑制剂不直接与DPP-4相互作用。因此，例如，间接抑制剂可通过降低编码DPP-4酶的基因的表达来抑制、降低或阻断DPP-4的活性或功能。在优选的实施方案中，DPP-4抑制剂直接抑制、降低或阻断DPP-4的活性或功能。

在一些优选的实施方案中，术语DPP-4抑制剂是指一类直接阻断DPP-4活性的口服降血糖药物。DPP-4抑制剂通常用于阻断胰高血糖素样肽1(GLP1)的降解，并且可用于治疗糖尿病。DPP-4抑制剂的实例包括西他列汀、利格列汀、维达列汀、沙格列汀、吉格列汀、安奈格列汀(Anagliptin)、替格列汀、阿格列汀、曲格列汀、度格列汀(Dutogliptin)、奥格列汀和羽扇豆醇。因此，在一些实施方案中，用于本发明的DPP-4抑制剂可以是西他列汀、利格列汀、维达列汀、吉格列汀、安奈格列汀(Anagliptin)、替格列汀、曲格列汀、度格列汀(Dutogliptin)、奥格列汀、羽扇豆醇或其组合。在特别优选的实施方案中，用于本发明的DPP-4抑制剂可以是西他列汀、利格列汀或其组合。在一些特别优选的实施方案中，用于本发明的DPP-4抑制剂不是阿格列汀或沙格列汀。

还包括这些化合物的盐，包括有机盐和无机盐(例如碱金属和碱土金属、铵、乙醇胺、二乙醇胺和葡甲胺、氯化盐、碳酸氢盐、磷酸盐，硫酸盐和乙酸盐抗衡离子)。在药学文献中充分描述了适当的药学上和/或生理学上可接受的盐。另外，这些盐中的一些可以与水或有机溶剂如乙醇形成溶剂化物。这些溶剂化物也包括在本发明的范围内。

如本文所用的术语“干细胞”和“祖细胞”是指可以分化成特化细胞的未分化生物细胞，即全能、亚全能或多能细胞。在优选的实施方案中，干细胞是非胚胎干细胞。特别地，用于本发明的干细胞或祖细胞能够分化成心脏干细胞和/或心肌细胞。在给受试者施用动员干细胞的药剂的实施方案中，干细胞或祖细胞可以从外周循环(即血液)中获得或募集。类似地，在施用前从受试者收获或获得干细胞或祖细胞的实施方案中，干细胞或祖细胞通常可以从待治疗的受试者或供体受试者的外周循环(即血液)中收获或获得。然而，显而易见的是，可以从其他合适的组织(例如骨髓)收获或获得干细胞或祖细胞。因此，在一些实施方案中，干细胞或祖细胞衍生自或包含骨髓衍生的单核细胞。

术语“骨髓衍生的单核细胞”(BM-MNC)是指包括造血祖细胞、淋巴细胞(淋巴球细胞(例如T细胞)和浆细胞)、单核细胞和巨噬细胞。虽然不希望受理论束缚，但认为M2巨噬细胞和造血祖细胞可以在拯救、修复或促进受损或死亡的心肌细胞(例如，由缺血性再灌注损伤引起)的替换中组合起作用。还假设本发明的冲击波治疗后T细胞被吸引(招募)至心脏组织(包括联合治疗)，这将创造有利于细胞存活的环境。

因此，在优选的实施方案中，使用干细胞群或组合可能是有用的，即干细胞或祖细胞包含含有造血祖细胞和任选的一种或多种选自淋巴细胞(淋巴球，例如T细胞)、单核细胞和巨噬细胞的细胞类型的细胞群。在一些情况下，使用BM-MNC的子集可能是有用的。因此，在一些实施方案中，干细胞或祖细胞是或包含造血祖细胞和任选的巨噬细胞，特别是M2巨噬细胞。

术语“M2巨噬细胞”(也称为活化的巨噬细胞)广泛地指在诸如伤口愈合和组织修复的构建过程中起作用的巨噬细胞。M2巨噬细胞还可以通过产生抗炎细胞因子如IL-10来关闭破坏性的免疫系统激活。M2巨噬细胞产生高水平的IL-10、TGF-β和低水平的IL-12。值得注意的是，M2巨噬细胞不构成统一的群体，并且通常进一步细分为M2a、M2b和M2c类别。M2a巨噬细胞参与Th2型免疫应答，例如，对抗寄生虫。M2b巨噬细胞被认为是免疫调节的并且由IL-1、LPS和免疫复合物诱导。M2c巨噬细胞在IL-10和TGF-β存在下诱导。它们通常因失活或抗炎被提到，并且已知参与组织修复和重塑。它们产生大量的IL-10和TGF-β并表达多种受体，例如：CD163、CD206，RAGE和其他清道夫受体。因此，在一些实施方案中，M2巨噬细胞是M2c巨噬细胞。

术语“药理学干细胞动员剂”是指能够直接或间接诱导、增强或增加受试者外周循环中干细胞数量的药剂。特别地，药理学干细胞动员剂可以是造血干细胞动员剂。本领域已知各种药剂，例如甲状旁腺激素、G-CSF、重组人干细胞因子、Mozobil、普乐沙福和Stemgen以及任何该类药剂，可用于本发明的方法和用途。在优选的实施方案中，药理学干细胞动员剂是甲状旁腺激素或其片段。

甲状旁腺激素(PTH)，也称为甲状旁腺素，是甲状旁腺分泌的一种激素。PTH由甲状旁腺的主要细胞分泌，作为含有84个氨基酸的多肽，其是激素原。值得注意的是，有效的激素-受体相互作用仅需要激素原的34-N末端氨基酸。因此，用于本发明的PTH片段至少包含PTH的34-N-末端氨基酸。在一些实施方案中，片段包含特立帕肽或由特立帕肽组成。特立帕肽是PTH的重组形式，其由PTH的34-N-末端氨基酸组成。

术语“植入”是指将移植组织掺入宿主体内。因此，在本发明的上下文中，植入是指将干细胞掺入待治疗的受试者的心脏组织中。干细胞对待治疗的受试者可以是内源性的，例如由于施用干细胞动员剂(例如甲状旁腺激素)而动员的干细胞。或者，干细胞可以是外源的，即单独施用，例如，从待治疗的受试者或供体受试者获得或收获并任选地在体外修饰后施用于待治疗的受试者的干细胞。

本文所用的术语“心力衰竭”包括以心脏功能受损为特征的任何病症，特别是由于泵作用减弱(收缩功能障碍)或减慢充盈(舒张功能障碍)导致的心室功能受损(心室功能障碍)。收缩功能障碍可被描述为心室收缩功能障碍的病症。可见心室排空不足。舒张功能障碍可被描述为对心室充盈的抵抗。因此，心力衰竭可被视为心室疾病或心室衰竭的病症。

心力衰竭可能是左侧(左心室受累或功能障碍)或右侧(右心室受累或功能障碍)，或者可能涉及心脏两侧(右心室和左心室)。心力衰竭意味着心脏心肌功能受损。因此，在一些实施方案中，本发明的治疗方法和用途可视为用于改善心脏心肌功能的疗法。然而值得注意的是，在一些患者中，特别是在心力衰竭的早期阶段，射血分数(下面讨论)可以在正常参数范围内，例如，50％或更高，即50-70％。例如，各种补偿机制可以增加每搏输出量，使得射血分数不会立即降低(例如通过改变预负荷、后负荷、全身血管阻力或其他补偿机制)。因此，在本发明的一些实施方案中，治疗方法和用途可以被视为用于维持心脏的心肌功能的疗法。

特别是，涉及慢性心力衰竭(即慢性心力衰竭)。

因此，心力衰竭可以定义为可能由降低心脏泵血能力的任何病症引起的病症。通常原因是由于冠状动脉血流减少(例如由冠状动脉疾病(CAD)或冠状动脉缺血性疾病引起的心力衰竭)导致的心肌收缩性降低，但是心脏瓣膜损伤、心脏周围的外部压力、原发性心肌疾病(例如特发性扩张型心肌病)或任何其他使心脏成为低效泵的异常也可能导致无法抽取足够量的血液。如上所述，慢性心力衰竭尤其令人担忧。

因此，包括在本发明范围内的是由缺血性心脏病(缺血性心肌病)，特别是慢性缺血性心脏病(例如慢性心肌缺血)引起或由其引起的心力衰竭。因此，通过本发明的方法和用途治疗的心力衰竭是慢性或缺血性心力衰竭。在特别优选的实施方案中，通过本发明的方法和用途治疗的心力衰竭是心脏缺血性再灌注损伤的结果，例如由心肌梗塞引起的心脏缺血再灌注损伤。

如上所述，心脏缺血性再灌注损伤是指在局部缺血或缺氧(缺氧症，氧不足)后血液供应返回心脏组织时引起的心脏组织损伤。在缺血期间缺乏来源于血液的氧气和营养物质会产生循环恢复和氧气水平迅速升高的状况(即常氧或高氧)，通过诱导氧化应激而不是恢复正常功能导致炎症和氧化损伤。这反过来可能导致心肌细胞凋亡和随后心脏心肌的损伤。

“缺氧”是指低氧张力的条件，通常在1-5％O₂的范围内，并且由于血管形成不良而经常在肿瘤的中央区域中发现。“缺氧”是指基本上不存在氧气，例如氧张力小于0.5％O₂，例如小于0.1％O₂。“常氧”是指氧气张力在10-21％之间。“高氧”是指氧气张力高于21％。

心力衰竭可能以两种方式表现出来：(1)心输出量减少或(2)左心或右心静脉血管阻塞。心脏可以作为整体单元衰竭，或者左侧或右侧可以独立于另一侧衰竭。无论哪种方式，心力衰竭都可能导致循环充血，这在过去被称为充血性心力衰竭。

心力衰竭可分为两个阶段，急性心力衰竭(短期和不稳定)和慢性心力衰竭(长期和相对稳定)。两者之间的划分很难准确定义，但一般而言，急性心力衰竭是心脏损伤后立即发生的衰竭阶段(即起病快，病程短)，并且与心脏功能和循环不稳定有关，例如心输出量突然下降。提供急性期并不严重到导致死亡，身体的交感神经反射立即被激活并且可以补偿心脏功能的突然丧失。这种补偿通常是如此有效和迅速，以至于如果受试者保持冷静，就不会感觉到对受试者的明显影响。

在急性心脏病发作的最初几分钟后，开始延长的继发状态。其特征在于肾脏保持液体，并且在数周至数月的时间内心脏逐渐恢复，直至心脏状况稳定。这个稳定阶段被称为慢性心力衰竭。虽然心脏有补偿和稳定，但它仍然很弱并可能逐渐更弱。

因此，虽然心力衰竭的急性期相对较快，但与心力衰竭的慢性期相关的稳定性可能需要几个月才能发展。通常，表现出心力衰竭症状超过3个月或更优选超过6个月的患者可被视为患有慢性心力衰竭，前提是在该3个月或6个月期间没有发生急性心力衰竭的进一步症状。

因此，这意味着虽然受试者之间的症状差异很大，但是患有心力衰竭，特别是慢性心力衰竭的受试者特征性地具有降低的心脏功能，特别是心室功能降低。心脏功能降低的最常见表现是收缩功能障碍。因此，心力衰竭可能是收缩性心力衰竭。例如，与未患心力衰竭的“正常”受试者相比，此类受试者显示出降低的心室射血分数，特别是降低的左心室射血分数(LVEF)。在正常人中，左心室射血分数通常高于60％(通常在55％-70％之间)，而射血分数小于45％，特别是小于40％，其特征在于收缩功能障碍。因此，LVEF小于45％，特别是小于40％，是心力衰竭，特别是慢性心力衰竭患者心功能降低的特征。通常，射血分数为35％-45％可表征为心脏功能轻度受损。射血分数为25％-35％可表征为中度受损的心脏功能。射血分数小于25％可表征为严重受损的心脏功能。射血分数小于15％的受试者可被表征为具有终末期心力衰竭并且可能是心脏移植的候选者。射血分数小于5％的受试者预计不能长期存活。

比收缩功能障碍更常见的是舒张功能障碍，其中射血分数相对保持(例如左心室EF>40％)或正常，但心室充盈(例如左心室充盈)减少。

根据本发明的优选治疗对象包括LVEF小于40％(LVEF<0.40)的受试者。在一些实施方案中，受试者可以定义为LVEF小于35％(LVEF<0.35)的受试者。然而，如上所述，心力衰竭早期阶段的一些受试者可能具有正常的LVEF，例如，45％或更高。因此，在一些实施方案中，根据本发明的治疗对象包括LVEF小于60％(LVEF<0.60)，优选小于55％(LVEF<0.55)，例如小于50％(LVEF<0.50)或小于45％(LVEF<0.45)。

在心力衰竭中可见的心功能降低的其他特征包括右心室射血分数减少、运动能力降低和血液动力学变量受损，例如心输出量减少、肺动脉压增加、心率增加和血压降低。

纽约心脏病协会(NYHA)分类系统根据疾病的严重程度将心脏病分为四级。NYHA I级：患者患有心脏病，但未导致体力活动受到限制，例如普通体力活动不会出现呼吸短促、疲劳或心悸；II级：患者患有心脏病，导致体力活动受到轻微限制，例如伴有普通体力活动的呼吸短促、疲劳或心悸，但患者在休息时感到舒适。III级：患者患有心脏病，以致体力活动明显受限，例如在小于普通体力活动时呼吸短促、疲劳或心悸，但患者在休息时感到舒适。IV级：患者患有心脏病，导致无法进行任何体力活动而没有不适，例如，即使在休息时，任何体力消耗和症状都可能出现呼吸短促、疲劳或心悸。

本发明可用于治疗或预防所有类型的心力衰竭，但特别是II-IV类或III-IV类受试者。因此，患者或受试者可以是I至IV类中的任何一种或多种，但优选它们属于II-IV或III-IV类。

因此，无论原因或病因如何，本发明可用于治疗或预防(防止)任何类型的心力衰竭。可以增加心脏对心力衰竭的抵抗力。因此，本发明可用于治疗既定的或有症状的或明显的心力衰竭，特别是慢性心力衰竭，但也包括急性心力衰竭或正在进行或发展的心力衰竭，包括无症状的初期心力衰竭或心力衰竭。它还可用于预防或延迟心力衰竭的发作或预防、限制或减少心力衰竭的发展，例如减少或限制心力衰竭发展的程度或等级或降低心脏对心力衰竭的易感性。因此，例如终末心力衰竭的发展可被延迟。因此，从另一个角度看，本发明可用于改善患有心力衰竭或有心力衰竭风险的受试者的预后。

如上所述，根据本发明治疗的心力衰竭，特别是慢性心力衰竭可能由任何原因引起，例如，可能是原发疾病的结果，也可能是继发于另一种疾病的结果。在本发明的一个实施方案中，待治疗的心力衰竭是继发于特发性扩张型心肌病(IDCM)和/或冠状动脉缺血性疾病(冠状动脉疾病-CAD)的慢性心力衰竭。

特别地，在另一个优选的实施方案中，根据本发明待治疗的心力衰竭是梗塞后心力衰竭或缺血性心力衰竭。

可以根据本发明治疗的其他类型的心力衰竭包括由负荷持续增加引起的心力衰竭，例如高血压性心力衰竭。由任何其他原因引起的心力衰竭，例如如上所述的，包括在本发明的范围内。

如上所述，根据本发明治疗的受试者可能表现出症状性心力衰竭。上面列出了心力衰竭的症状，可能包括体重增加、脚和脚踝或腹部肿胀、颈部静脉明显、食欲不振、消化不良、恶心和呕吐、活动或躺下后呼吸短促、睡眠困难、疲劳、虚弱或衰弱、心悸、脉搏不规则或快速、警觉或注意力下降、咳嗽、尿量减少、以及夜间需要排尿，但并非所有或任何这些症状都可能伴有心力衰竭。

可能表现出的心力衰竭的其他特征包括降低的射血分数(LV和/或RV)、降低的运动能力和受损的血液动力学变量，例如上面列出的那些。

受试者可能正在接受心力衰竭的标准治疗，包括标准药物治疗，如β受体阻滞剂、ACE抑制剂、ARB、醛固酮拮抗剂、利尿剂、抗高血压药、强心苷、血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂中的一种或多种(ARNI)联合治疗(例如缬沙坦/沙库巴曲)等，特别是受试者可能接受或未接受β受体阻滞剂。例如，受试者可能正在接受NPR-A激动剂治疗，例如BNP，例如重组BNP或其类似物或衍生物，或另一种利尿钠肽或其类似物或衍生物。

心力衰竭的发展或进展可能与心室重构有关，特别是左心室重构，表现为左心室舒张末期和收缩末期容量逐渐增加，壁变薄，腔室几何形状变得更加球形、细长的形状。该过程通常与射血分数的持续下降有关。在本发明的一个实施方案中，可以减少或预防重构，特别是心室重构，优选左心室重构。

重构可能导致心室功能障碍，尤其是左心室功能障碍。在本发明的另一个实施方案中，治疗或预防心室功能障碍。

如本文所用，“治疗”是指相对于治疗前的疾病或症状，减轻、缓解、改善或消除正在治疗的疾病(该术语包括任何疾病、病症或紊乱)或其一种或多种症状(例如心力衰竭或其症状)。治疗可包括心脏功能或性能，特别是心室功能或性能，更特别是左心室功能或性能的改善或增加。

如本文所用，“预防”(Prophylaxis或Prevention)是指延迟、限制或减轻疾病或其一种或多种症状的发作(例如相对于预防性治疗之前的疾病或症状)。因此，预防明确包括绝对预防疾病或症状的发生或发展，或减少或限制疾病或症状的发展或进展。

治疗或预防的受试者或患者可以是任何人或非人动物受试者，但优选是哺乳动物，例如人或任何牲畜或家畜，例如小鼠、大鼠、猪、猫、狗、绵羊、兔、马、牛或猴子。最优选地，受试者将是人类受试者。

鉴于大多数形式的心脏病的性质，不能预期根据本发明的“治疗”将导致所述心力衰竭的完全治愈。相反，根据本发明的“治疗”包括改善或减轻与心力衰竭相关的任何症状，并且还改善患者的生活质量，并最终延长寿命和改善生存，即改善预后。

根据本发明的“治疗”还包括改善或增加心脏的功能，或者换言之，心脏功能或性能的长期改善或增加。特别地，根据本发明的治疗可以导致与心力衰竭相关的任何一种或多种症状和功能参数的改善或增加，特别是与心室功能和特别是左心室功能相关的症状和参数。

与心力衰竭中改善的心脏功能相关的重要症状和参数是心室射血分数，特别是左心室射血分数(LVEF)的增加。这可以通过本领域公知和记载的标准方法来评估，例如通过超声心动图(“回声”，即心脏超声波，其是心脏的超声波图)，心电图(ECG)，ECG同步门控放射性核素心室造影术(MUGA扫描)，血管造影或磁共振成像(MRI)，通常在受试者休息时进行。已发现LVEF的改善与心力衰竭患者的存活率提高有关。因此，这是在根据本发明治疗的受试者中待改善的重要且有利的参数。RVEF也可能增加。

虽然LVEF的改善对于心脏功能的整体改善特别重要，但是根据本发明可以改善与心脏功能相关的许多其他参数。其中之一是通过NYHA功能等级评估的总体临床状态和临床表现的显著改善。换句话说，根据本发明，在治疗后可以降低患者的NYHA功能等级。这种临床评估通常可由训练有素的心脏病专家进行。

其他参数包括运动能力，例如，通过峰值氧摄取和峰值工作负荷测量。如上所述，运动能力下降是许多心力衰竭患者的不方便且可能使人衰弱的症状。测量运动能力的方法是众所周知的并且在本领域中有记载。例如，可以使用电动制动的自行车测力计进行运动测试。示例性方案可以包括20W的起始工作速率，每秒钟增加20W直到耗尽(定义为不能保持稳定在60rpm的踩踏速率)。可以使用例如EOS/SPRINT系统测量吸氧量(VO2)。峰值VO2被视为观察到的最高VO2。运动测试的另一个例子是6分钟步行测试，其中要求患者在标准化条件下在6分钟内尽可能长时间地行走，并且步行距离表示运动能力的量度。

还可以评估血液动力学超声心动图参数和变量以指示改善的心脏功能。例如，改善的心脏功能可以通过肺毛细血管楔压和/或肺动脉压的降低和/或峰值心率、峰值收缩压和二尖瓣速度减速时间的增加来指示。超声心动图变量可以方便地通过由训练有素的心脏病专家进行的超声心动图测量，并且可以根据标准技术通过右侧心脏导管插入术方便地评估血液动力学变量。

可以评估的另一个重要变量是Nt-proANP或Nt-proBNP的血浆水平。增加或通常高水平的Nt-proANP或Nt-proBNP已被认为是心脏功能障碍的标志物。此外，过去已显示Nt-proANP水平与心力衰竭中的肺动脉压相关，并为心力衰竭患者提供重要的预后信息。血液样品中Nt-proANP或Nt-proBNP的水平可以用本领域熟知和记载的许多方法测量，例如通过放射免疫测定。在免疫测定之前，通过本领域熟知和记载的方法再次从取自患者的血液样品中分离血浆。

上述受试者的症状、参数和/或预后的“改善”或“增加”包括当将所讨论的参数与未治疗的个体中的等效参数进行比较时或当将所讨论的参数与在较早时间点取得的同一个体中的等效参数进行比较时的参数的任何可测量的改善或增加(例如，与“基线”水平比较)。优选地，改善或增加在统计学上是显著的。特别优选地，症状、参数和/或预后的改善或增加将与所关注患者的健康状况改善相关，并且更优选地延长存活期。

确定参数差异的统计显著性的方法是本领域公知和记录的。例如，如果使用双尾显著性检验(例如Student t检验或Mann-Whitney U秩和检验)的统计比较显示概率值<0.05，则通常认为参数是显著的。

因此，本发明的方法和用途可用于改善心脏功能，特别是心力衰竭中的心脏功能。更具体地，从长远来看，本发明的方法和用途可用于增加心室功能，特别是左心室功能(例如，LVEF)，尤其是心力衰竭。

本发明可导致血浆Nt-proANP或Nt-proBNP水平的降低。如上所述，Nt-proANP或Nt-proBNP血浆水平的降低是心脏功能和性能改善的指标。如本文所用，“减少”包括当将所讨论的参数与未治疗的个体中的等效参数进行比较时或当将所讨论的参数与在较早时间点取得的同一个体中的等效参数进行比较时的任何可测量的减少(例如，与“基线”水平比较)。如上所述，优选地，降低是统计学上显著的。特别优选地，Nt-proANP或Nt-proBNP水平的降低将与所关注患者的健康感改善相关，并且更优选地延长存活期。

在一个方面，在施用本发明的冲击波治疗(包括组合治疗)之前，患者或受试者被识别为需要治疗或预防心力衰竭(例如，患有心力衰竭，或具有发展或易患心力衰竭的风险)。

如上所述，这种识别可以基于指示心力衰竭或心力衰竭风险的症状和/或参数。

如上所述，在施用本发明的冲击波治疗(包括联合治疗)之后，可以增加心脏性能。因此，如上所述和讨论的本发明的各个方面可以进一步包括在施用本发明的冲击波治疗(包括联合治疗)后评估所治疗的受试者的心脏性能改善或心力衰竭或其症状。如上所述，该评估可以是对心脏性能或功能的改善的评估，特别是心室，更特别是左心室的性能或功能，或者用于改善心力衰竭的任何症状或参数，如上所述。

当受试者有发生心力衰竭的风险或易患心力衰竭时，可以评估受试者的一种或多种心力衰竭的危险因素的因素。例如，这些可能是缺血性疾病或病症，如冠状动脉疾病、心肌病、高血压、瓣膜病、先天性心脏缺陷或本领域已知的或上文描述或提及的任何其他诱发性病症或因素。

在施用本发明的冲击波治疗(包括联合治疗)后，可以评估受试者心力衰竭的发展或心力衰竭的一种或多种风险因素。

当本发明的冲击波疗法与药理学药剂组合使用时，例如，DPP-4抑制剂和/或干细胞动员剂(例如甲状旁腺激素)，药理学药剂可方便地配制成根据本发明使用的药物组合物。药物组合物是指包含药理学药剂(即药理学活性剂或成分)的组合物，例如DPP-4抑制剂和/或干细胞动员剂(例如甲状旁腺激素)与至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物。因此，例如，本发明可被视为提供用于治疗或预防(防止)心力衰竭或治疗心脏缺血性再灌注损伤的药物组合物，其中所述受试者已经施用体外心脏冲击波治疗，并且其中所述组合物包含DPP-4抑制剂和至少一种药学上可接受的载体，用于在施用所述冲击波疗法之前、同时和/或之后的给药。

此类组合物中活性成分(药理学药剂，即药理学活性药剂或成分)的适当含量可根据本领域常规的原理和程序确定，并且可由技术人员容易地确定。因此，例如，此类组合物中的活性成分可占制剂重量的0.05％至99％，例如0.1％至1.0％或约0.5％。制剂中活性成分的浓度取决于制剂的类型。例如，肠内产品(例如片剂和胶囊)通常可具有5％至50％重量的活性成分，而肠胃外制剂通常具有较低浓度的活性化合物，例如重量百分比为1％至3％的活性成分，例如在注射溶液中。

“药学上可接受的”是指成分必须与组合物的其他成分相容以及接受者在生理上可接受。

药物组合物可根据本领域已知的任何常规方法配制并在文献中广泛描述。因此，活性成分(例如DPP-4抑制剂)可任选地与其它活性物质一起掺入一种或多种常规载体、稀释剂和/或赋形剂，以产生适合或可制成适合的常规盖仑制剂。用于口服、皮下、肌肉注射、静脉注射或任何其他给药，如粉剂、小药囊、扁囊剂、酏剂、悬浮液、乳液、溶液、糖浆、软膏、无菌可注射溶液、无菌包装粉末等。包含活性成分(例如甲状旁腺激素)的药物组合物可以以适于输注或注射到患者体内的形式制备。这种输注或注射优选是肌肉内(i.m.)，但也可以皮下(s.c.)或静脉内(i.v.)注射。

优选地，包含DPP-4抑制剂的组合物可以以适于口服给药的形式提供。例如，药物形式可包括普通或包衣片剂、胶囊、悬浮液和含有活性成分的溶液(例如，DPP-4抑制剂)，任选与一种或多种惰性常规载体和/或稀释剂一起。

优选地，包含用于动员干细胞的药理学试剂(例如甲状旁腺激素)的组合物可以以适于肠胃外给药，特别是肌肉内或腹腔内给药的形式提供。例如，药物形式可包括无菌可注射溶液或悬浮液，任选地与一种或多种惰性常规载体和/或稀释剂一起。

合适的载体、赋形剂和稀释剂的实例是乳糖、右旋糖、蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、山梨糖醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯树胶、磷酸钙、丙烯酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水糖浆、水、水/乙醇、水/乙二醇、水/聚乙烯、乙二醇、丙二醇、甲基纤维素、甲基羟基苯甲酸酯、羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、矿物油或脂肪物质如硬脂或其合适的混合物。该组合物可另外包括润滑剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、甜味剂、调味剂等。可以配制本发明的组合物，以便在通过采用本领域熟知的方法给予患者后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。

也可以使用增溶剂和/或稳定剂，例如，环糊精(CD)α、β、γ和HP-β环糊精。

合适的剂量将因患者而异，并且可由医师根据患者的体重、年龄和性别、给药方式和病症的严重程度以及用于治疗的特定活性成分来确定。用于口服给药的示例性单位剂量(例如DPP-4抑制剂)可以含有1-250mg活性成分，但是应该理解，这当然可以根据使用的特定拮抗剂等而变化。例如，单位剂量的西他列汀可以在100mg的范围内，例如75至125mg，而单位剂量的利格列汀可以在5mg范围内，例如，1至10mg。口服给药的日剂量可以是例如约0.01至10mg/kg/天，例如约0.1至5mg/kg/天，例如0.1至2mg/kg/天。例如，70kg成年人将接受1至700mg或0.7至700mg的日剂量，更通常1至350mg或7至350mg的日剂量，例如7至140mg的日剂量。对于肠胃外(例如静脉内或肌内)给药(例如甲状旁腺激素)，示例性单位剂量可以在0.1μg至100μg之间，例如在0.1μg至50μg之间，例如1-40、2-35、3-40、4-35或5-25μg，例如20μg的。肠胃外给药的每日剂量可以例如在约0.001至1μg/kg/天的范围内，例如，0.001至0.5μg/kg/天，例如0.001至0.3μg/kg/天。例如，70kg成年人将接受0.01至70μg或0.07至70μg的日剂量，更通常0.07至35μg或0.7至35μg的日剂量，例如0.7至21μg的日剂量。

在几天、几周或几个月后，可以看到根据本发明治疗的患者中看到的改善，这取决于个体患者。一旦看到初步改善，也可能在随后的几周和几个月内继续改善。如上所述，可以根据需要或必要的时间继续治疗。

本发明的冲击波治疗(包括联合治疗)可以代替或补充(即与其组合)使用其他药物治疗心力衰竭。因此，已知治疗心力衰竭的其他药物可以包括在上述药物组合物中，或者可以以适合于所涉及药物的方式单独给药。用于治疗心力衰竭的合适的另外的或补充的药物或药剂是本领域公知和记载的，包括用于治疗心脏病的已知药物。例如可使用利尿剂、血管扩张剂、正性肌力药物如地高辛或洋地黄毒苷，或其他化合物如抗凝血剂、β受体阻滞剂、血管紧张素II阻断剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(ARNI)联合治疗剂(例如缬沙坦/沙库巴曲)或醛固酮拮抗剂。

在一些实施方案中，向待治疗的受试者施用糖可能是有用的，例如葡萄糖。特别地，本发明的组合治疗利用DPP-4抑制剂，其阻断胰高血糖素样肽1(GLP-1)的降解。GLP-1增加胰岛素分泌，同时抑制胰高血糖素释放，从而降低血浆葡萄糖水平。因此，在一些实施方案中，向待治疗的受试者施用的补充剂或另外的药剂是葡萄糖。

可以单独配制另外的或补充的药物或药剂，用于与本发明的组合冲击波治疗中使用的活性剂(例如，DPP-4抑制剂和/或干细胞的药理动员剂，例如甲状旁腺激素)同时或顺序地或以不同的间隔施用。

因此，另外的或补充的药物或药剂可以与用于与本发明的组合冲击波治疗的活性剂一起以试剂盒的形式提供。这样的试剂盒可以包括，例如分别针对(例如包含或含有)用于本发明的组合冲击波治疗的活性剂和另外的或补充的药物或药剂的容器，任选地与使用说明书一起。

例如，可以看出本发明提供了包含以下内容的试剂盒或产品：

(i)DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物；和

(ii)用于动员干细胞的药理学药剂，例如甲状旁腺激素或其片段，或包含所述药理学药剂和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物；和任选地

(iii)另外的药剂，例如，用于治疗心力衰竭的药剂或葡萄糖，或包含所述另外的药剂和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

在一些实施方案中，上述试剂盒或产品的(i)-(iii)中定义的组分作为组合制剂提供，以同时、依次或单独用于在受试者中：

(a)治疗或预防心力衰竭；或者

(b)治疗心脏缺血再灌注损伤，

其中所述受试者已经施用了体外心脏冲击波疗法，并且其中所述(i)、(ii)和任选的(iii)用于在施用所述冲击波疗法之前、同时和/或之后施用。

为避免疑义，本文所用的术语“本发明的冲击波疗法”指的是单独施用体外心脏冲击波疗法的治疗以及组合治疗(即体外心脏冲击波治疗与DPP-4抑制剂和/或干细胞的动员剂(例如PTH和/或干细胞)的组合)，除非另有说明。

附图说明

结合以下附图，参考以下非限制性实施例进一步描述本发明，其中：

图1显示了显示在各种处理条件下大鼠心肌细胞存活百分比的条形图(误差条代表标准差，****p≤0.001，“ns”无意义)。

图2显示各种冲击波处理后4小时在人心室组织中(A)SDF-1基因表达和(B)MCP-1基因表达相对量(倍数变化)的条形图(*p＞0.05，**p≤0.05，***p≤0.001，且****p≤0.0001)。

图3显示各种冲击波治疗后4小时在人心室组织中(A)ANGP-1(血管生成素)基因表达和(B)VEGFA(血管内皮生长因子A)基因表达的相对量(倍数变化)的条形图(*p＞0.05，**p≤0.05，***p≤0.001且****p≤0.0001)。

图4显示各种冲击波处理后4小时在人心室组织中(A)NOS-3(一氧化氮合酶3)基因表达和(B)TAC-1(速激肽前体1)基因表达的相对量(倍数变化)的条形图(*p＞0.05，**p≤0.05，***p≤0.001且****p≤0.0001)。

图5显示各种冲击波处理后在(A)人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和(B)人心脏成纤维细胞中SDF-1基因表达随时间的相对量(倍数变化)的图(*p＞0.05，**p≤0.05，***p≤0.001且****p≤0.0001)。

图6显示各种冲击波处理后在人心脏成纤维细胞中(A)VEGFA基因表达和(B)MCP-1(单核细胞趋化蛋白1)基因表达随时间的相对量(倍数变化)的图(*p＞0.05，**p≤0.05，***p≤0.001且****p≤0.0001)。

图7显示在各种条件下大鼠心肌细胞中AKT磷酸化的相对量(倍数变化)的条形图，其中(A)显示了标准化p-AKT308的相对变化，(B)显示了p-AKT308和未磷酸化的AKT的比例的相对变化。

图8显示各种冲击波处理后4小时大鼠心肌细胞中(A)SDF-1基因表达和(B)VEGFA基因表达的相对量(倍数变化)的条形图。

图9显示经过以下处理的大鼠心脏的冷冻组织切片的显微照片：(A)未处理；(B)体外心脏冲击波治疗和每日水管饲(gavage)；(C)体外心脏冲击波治疗和每日DPP4i管饲；和(D)每日DPP4i管饲，如实施例7中所述。圈出部分显示棕色沉积区域，其是SDF-1存在的证据。

图10显示经过以下处理的固定大鼠心脏的照片：(A)未处理；(B)体外心脏冲击波治疗和每日水管饲；(C)体外心脏冲击波治疗和每日DPP4i管饲；和(D)每日DPP4i管饲，如实施例7中所述。

图2-6和8中的误差条表示95％置信区间(CI)。

具体实施方式

实施例

实施例1：冲击波处理对缺氧诱导的大鼠心肌细胞凋亡的影响

使用Langendorff方法分离原代大鼠心肌细胞，其中通过主动脉用氧化低钙溶液和胶原酶溶液逆行灌注外植心脏。然后将心脏切成小块并在胶原酶溶液中搅拌以释放细胞。洗涤细胞，然后使用低速离心和粘附于层粘连蛋白包被的培养板(培养皿)阳性选择心肌细胞。

将大鼠心肌细胞暴露于严重缺氧环境30分钟(0％O₂,100％N₂)。接受冲击波治疗(1巴或2巴，1000个脉冲)的组在恢复常氧后立即进行治疗。通过Swiss Dolarclast(EMS)冲击波系统的手持部上的冲击波施用器与超声凝胶之间的直接接触，从培养皿下方传递冲击波。值得注意的是，接受外源性SDF的组在恢复常氧后未接受冲击波处理。通过在冲击波或SDF处理后24小时一式三份地计数棒状和圆形细胞(其中棒状细胞为活细胞)的数量来评估细胞的存活力。结果显示在图1中，证明缺氧后立即使用冲击波处理相对于未处理对照组可增加心肌细胞活力，这表明冲击波治疗可以减轻缺血性再灌注损伤。

实施例2：冲击波处理对人心室组织中基因表达的影响

将外植的人心室组织切成小块并在M 199培养基中的24孔板中单独培养。通过将组织块暂时放置在1.5ml Eppendorf管中于M 199培养基中来进行暴露于各种冲击波条件。冲击波施用器描述于实施例1，其使用超声凝胶直接偶联到管上。然后将组织块在培养箱(37℃和5％CO₂)中返回其各自的培养基中4小时的时间点，然后在-80℃的RNA-Later中储存。使用功率均化器在Trizol中将样品分批完全均化。使用氯仿和商业离心柱纯化RNA。使用Nanodrop分光光度计检查RNA的质量并进行逆转录反应。在Applied Biosystems^TM7900HT快速实时PCR系统上，在使用GAPDH标准化的TaqMan Gene Expression Master Mix中使用TaqMan探针评估SDF1(基质衍生因子1)、VEGFA(血管内皮生长因子A)、MCP1(单核细胞趋化蛋白1)、ANGP1(血管生成素)、TAC1(速激肽前体1)和NOS3(一氧化氮合酶3)的基因表达。使用ΔΔCΤ方法计算倍数变化。结果显示在图2-4中，证明未处理对照组与所测量的所有基因的4小时时间点之间存在统计学显著性差异。

实施例3：冲击波处理对内皮细胞和人心脏成纤维细胞中SDF-1基因表达的影响

使用胶原酶解离人心室组织，并且单细胞悬浮液经洗涤、铺板并在补充10％FCS的DMEM中培养。从人脐带收获HUVEC并在EGM2中培养。细胞传代3-5代用于实验。

如实施例1中所述对人心脏成纤维细胞和HUVEC进行冲击波处理，并在达到时间点时，除去培养基并用Trizol裂解细胞。根据实施例2中描述的方法，在冲击波处理后的不同时间点测量SDF1基因表达。结果如图5所示。

在人心脏成纤维细胞中，SDF1基因表达在24小时时间点继续增加，而SDF1基因表达在HUVEC中在2-6小时之间达到最大表达，并且在冲击波处理后24小时内恢复至基线水平。这些结果表明，冲击波治疗特异性地在心脏成纤维细胞中诱导持续的SDF1基因表达。

实施例4：冲击波处理对人心脏成纤维细胞中基因表达的影响

根据实施例3中描述的方法获得人心脏成纤维细胞，并如实施例1中所述进行冲击波处理。根据实施例2中描述的方法，在冲击波处理后的不同时间点测量VEGFA和MCP1基因表达。结果显示在图6中，显示VEGFA和MCP1基因表达与SDF1相反，在3小时时间点快速增加并在24小时时间点恢复至基线水平。该数据表明成纤维细胞中SDF1的表达在24小时后滞后于内皮细胞的SDF1表达，产生从血管内到心脏组织的时间和空间梯度。

实施例5：冲击波处理对大鼠心肌细胞中AKT磷酸化的影响

在标准条件下培养大鼠心肌细胞，并用以下物质处理：冲击波(1000个脉冲，1巴)；外源性SDF；或PI3激酶抑制剂(LY294002)。通过使用pan-AKT和COX IV作为上样对照标准化的蛋白质印迹在不同时间点测量AKT磷酸化。

结果显示在图7中，显示在冲击波处理的细胞中AKT磷酸化增加。然而，PI3激酶抑制剂(LY294002)未阻断该作用，表明通过冲击波的AKT的磷酸化作用不依赖于作为AKT途径的激活剂的磷脂酰肌醇3-激酶。

实施例6：冲击波处理对大鼠心肌细胞中SDF-1基因表达的影响

根据实施例1中的方法培养大鼠心肌细胞，并用冲击波(1000个脉冲，1巴或2巴)进行处理。如实施例2中所述，在处理后4小时测量SDF1和VEGFA基因表达。结果显示在图8中，证明未处理的对照组和冲击波条件之间对于SDF1和VEGFA基因表达没有统计学上的显著性差异。这表明冲击波对心肌细胞的抗细胞凋亡作用不依赖于抗凋亡因子如SDF1和VEGFA。

实施例7：冲击波和DPP-4抑制剂(DPP4i)处理对大鼠心脏的作用

将雄性Lewis大鼠(250-275g)进行持续4天的以下处理：(1)不处理；(2)4天的第2天进行体外心脏冲击波处理和每日水口服管饲；(3)4日的第2天体外心脏冲击波处理和每日DPP4i口服管饲；(4)每日DPP4i口服管饲。

在全身麻醉下(1.5-2％异氟烷，100％O₂)施用冲击波处理(使用Storz MedicalSD1装置在4Hz下0.25mJ/mm²×1000个脉冲)。冲击波持续进行并靶向心脏，其使用手指触诊和偶联超声凝胶的超声心动图定位。

将DPP4抑制剂(利格列汀，每只大鼠3mg，以1mg/ml溶液形式递送)或水通过管饲针(gavage needle)直接施用于胃。

剔除动物并在实验开始后4天将心脏外植。用磷酸盐缓冲盐水将血液从心脏洗掉，在4％多聚甲醛中固定过夜，在30％蔗糖中冷冻保护过夜，然后包埋在OCT中，用Cryostat进行冷冻切片。

使用兔抗大鼠SDF1一抗和山羊抗兔HRP缀合的(辣根过氧化物酶缀合的)二抗，对在Tris缓冲盐水+吐温中用1％BSA封闭的切片进行免疫组织化学。使用苏木精对组织切片进行复染，并使用3,3'-二氨基联苯胺(DAB)底物进行HRP的显色检测。DAB在HRP存在下产生棕色不溶产物。使用乙醇系列将切片脱水，使用DPX-new和二甲苯替代物作为溶剂进行封片。使用明视场(bright-field)光学显微镜观察切片。

结果显示在图9中，其中处理1-4分别显示在图9A-D中。为便于参考，棕色不溶性反应产物的沉积物被圈出，其是SDF-1存在的证据。观察到SDF-1是通过体外冲击波治疗诱导的(见图9B和9C)；在未处理的大鼠(图9A)或仅用DPP4i处理的大鼠的心脏组织中未观察到棕色沉积物(图9D)。此外，与仅用冲击波或DPP4i处理的大鼠相比，用DPP4i处理的大鼠显示SDF-1显著增加。这些结果表明冲击波和DPP4i处理的组合对心脏组织中SDF-1的存在产生了超过加和的影响。

图10显示了用4％多聚甲醛过夜孵育后大鼠心脏的外观：A)未处理的正常对照，B)仅冲击波；C)冲击波和DPP4i，以及D)仅DPP4i。观察到来自用冲击波和DPP4i处理的大鼠的心脏与仅用冲击波处理的大鼠的心脏相比具有非常显著的血管。来自未处理的大鼠和仅用DPP4i处理的大鼠的心脏非常相似。结论是DPP4i增强了由冲击波诱导的血管生成过程，DPP4i本身具有中性作用。

Claims (50)

1.一种二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制剂或含有所述抑制剂的药物组合物，在受试者中用于：

(a)治疗或预防心力衰竭；或者

(b)治疗心脏缺血性再灌注损伤，

其中所述受试者已经进行了体外心脏冲击波治疗，并且其中，在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用所述抑制剂。

2.根据权利要求1所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述抑制剂或组合物与适于动员干细胞的药理学药剂作为组合制剂提供，以单独、同时或依次使用或给药。

3.根据权利要求2所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述适于动员干细胞的药理学药剂是甲状旁腺激素或其片段。

4.根据权利要求3所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述甲状旁腺激素片段包含特立帕肽。

5.根据权利要求1-4中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述抑制剂或组合物用于在所述冲击波治疗施用之前施用，并在冲击波治疗的整个过程中持续施用。

6.根据权利要求2-5中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述适于动员干细胞的药理学药剂用于在所述冲击波治疗前至少8小时施用。

7.根据权利要求1所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述抑制剂与干细胞作为组合制剂提供，用于单独、同时或依次使用或给药。

8.根据权利要求7所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述干细胞衍生自或包含骨髓衍生的单核细胞。

9.根据权利要求6或7所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述干细胞在所述冲击波治疗前至少8小时施用。

10.根据权利要求1-9中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述DPP-4抑制剂是西他列汀、利格列汀、维达列汀、吉格列汀、安奈格列汀、替格列汀、曲格列汀、度格列汀、奥格列汀、羽扇豆醇或其组合。

11.根据权利要求1-10中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述心力衰竭是慢性心力衰竭或梗塞后心力衰竭。

12.根据权利要求1-10中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述冲击波治疗包括施用能量为约0.05-0.25mJ/mm²的冲击波脉冲。

13.根据权利要求1-12中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述冲击波治疗包括施用至少约500个冲击波脉冲，优选至少约1000个冲击波脉冲。

14.根据权利要求1-13中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述冲击波治疗包括施用约500-2000个冲击波脉冲的剂量。

15.根据权利要求1-14中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述冲击波治疗包括在心动周期的等容收缩期和/或等容舒张期期间施用冲击波脉冲。

16.根据权利要求1-15中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中所述冲击波脉冲的焦点靶向心脏的特定区域。

17.根据权利要求16所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中通过超声心动图(回波)可视化和/或心电图(ECG)模式识别来确定待靶向的心脏区域。

18.根据权利要求16所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中通过核磁共振成像来确定待靶向的心脏区域。

19.根据权利要求16-18中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中待靶向的心脏特定区域包括瘢痕组织。

20.根据权利要求1-19中任一项所述使用的DPP-4抑制剂或组合物，其中在多于一个疗程中施用所述剂量的冲击波脉冲。

21.一种治疗或预防心力衰竭或治疗心脏缺血性再灌注损伤的方法，包括向有需要的受试者施用体外心脏冲击波治疗和DPP-4抑制剂或包含所述抑制剂的药物组合物，其中所述抑制剂或组合物在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用。

22.根据权利要求21所述的方法，还包括向所述受试者施用适于动员干细胞的药理学药剂，其中所述药剂与所述抑制剂或组合物单独地、同时地或依次地施用。

23.根据权利要求22所述的方法，其中适于动员干细胞的所述药理学药剂是甲状旁腺激素或其片段。

24.根据权利要求23所述的方法，其中所述甲状旁腺激素片段包含特立帕肽。

25.根据权利要求21-24中任一项所述的方法，其中所述抑制剂或组合物在所述冲击波治疗之前施用，并且在整个所述冲击波治疗过程中连续施用。

26.根据权利要求21-25中任一项所述的方法，其中所述适于动员干细胞的药理学药剂在冲击波治疗前至少8小时施用。

27.根据权利要求21所述的方法，还包括向所述受试者施用干细胞，其中所述干细胞与所述抑制剂或组合物单独地、同时地或依次地施用。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述干细胞在所述冲击波治疗前至少8小时施用。

29.根据权利要求27或28所述的方法，其中所述祖细胞衍生自或包含骨髓衍生的单核细胞。

30.根据权利要求21-29中任一项所述的方法，其中所述DPP-4抑制剂是西他列汀、利格列汀、维达列汀、吉格列汀、安奈格列汀、替格列汀、曲格列汀、度格列汀、奥格列汀、羽扇豆醇或其组合。

31.根据权利要求21-30中任一项所述的方法，其中所述心力衰竭是慢性心力衰竭或梗塞后心力衰竭。

32.根据权利要求21-31中任一项所述的方法，其中所述冲击波治疗包括施用能量为约0.05-0.25mJ/mm²的冲击波脉冲。

33.根据权利要求21-32中任一项所述的方法，其中所述冲击波治疗包括施用至少约500个冲击波脉冲，优选至少约1000个冲击波脉冲。

34.根据权利要求21-33中任一项所述的方法，其中所述冲击波治疗包括施用约500-2000个冲击波脉冲的剂量。

35.根据权利要求21-34中任一项所述的方法，其中所述冲击波治疗包括在心动周期的等容收缩和/或等容舒张期期间施用冲击波脉冲。

36.根据权利要求21-35中任一项所述的方法，包括将所述冲击波的焦点靶向心脏的特定区域。

37.根据权利要求36所述的方法，还包括通过超声心动图(回波)可视化和/或心电图(ECG)模式识别来确定待靶向的心脏区域。

38.根据权利要求36所述的方法，还包括通过核磁共振成像确定来确定待靶向的心脏区域。

39.根据权利要求36-38中任一项所述的方法，其中待靶向的心脏特定区域包括瘢痕组织。

40.根据权利要求21-39中任一项所述的方法，包括在多于一个疗程中施用所述剂量的冲击波脉冲。

41.一种治疗心脏缺血性再灌注损伤的方法，包括对有此需要的受试者施用体外心脏冲击波治疗。

42.根据权利要求41所述的方法，其中所述冲击波治疗包括施用能量为约0.05-0.25mJ/mm²的冲击波脉冲。

43.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述冲击波治疗包括施用至少约500个冲击波脉冲，优选至少约1000个冲击波脉冲。

44.根据权利要求41-43中任一项所述的方法，包括在心动周期的等容收缩或等容舒张期期间施用冲击波脉冲。

45.根据权利要求41-44中任一项所述的方法，包括将所述冲击波的焦点靶向心脏的特定区域。

46.根据权利要求45所述的方法，还包括通过超声心动图(回波)可视化和/或心电图(ECG)模式识别来确定待靶向的心脏区域。

47.根据权利要求41-46中任一项所述的方法，包括在多于一个疗程中施用所述剂量的冲击波脉冲。

48.一种试剂盒或产品，其包含：

(i)包含所述抑制剂的DPP-4抑制剂或组合物；和

(ii)用于动员干细胞的药理学药剂例如甲状旁腺激素或其片段，或包含所述药理学药剂和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物；且任选地

(iii)另外的药剂例如用于治疗心力衰竭的药剂或葡萄糖，或包含所述另外的药剂和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的药物组合物。

49.根据权利要求48所述的试剂盒或产品，其中(i)、(ii)和任选的(iii)作为组合制剂提供，用于同时、依次或单独在受试者中用于：

(a)治疗或预防心力衰竭；或

(b)治疗心脏缺血性再灌注损伤，

其中所述受试者已经进行了体外心脏冲击波治疗，并且其中，在施用所述冲击波治疗之前、同时和/或之后施用所述抑制剂和/或激素。

50.根据权利要求49所述的试剂盒或产品，其中所述DPP-4抑制剂、用于动员干细胞的药理学药剂和/或冲击波治疗根据任一前述权利要求中所定义。