CN109985251A - Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法 - Google Patents
Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域，公开了一种Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，采用精氨酸诱导法制作胰源性糖尿病模型，350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周，期间小鼠普通饮食建立胰源性糖尿病组；同时采用配方饲料开放饮食建立高脂饮食组；阴性对照组：普通饮食饮水喂养6周；采用普通病理、酶联免疫吸附试验、Real‑Time PCR法、腹腔注射葡萄糖耐量试验检测；所有检测数据按平均数±标准差表示，正态分布用ShapiroWilk检验进行检验；组间比较使用单因素方差分析，若不符合正态分布按Mann‑Whitney U检验比较；以P＜0.05为差异有统计学意义；应用SPSS 22.0for Windows软件实施全部检验过程。
Description
技术领域
本发明属于借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料技术领域，尤其涉及一种Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法。
背景技术
目前，最接近的现有技术：
目前胰岛素抵抗的动物模型最常用的是通过高脂高糖饮食来诱导，但该技术胰岛素抵抗模型诱导成功率低，诱导成功的时间长短不一，可控性差。模型不稳定，发生胰岛素抵抗的病情轻重程度不一，在动物实验中会导致较大偏差，采用该方法诱导的动物模型来研究chemerin等蛋白的调控作用机制研究可靠性较差，且需要大样本量才能有效降低实验偏移。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)模型诱导成功率低。
(2)模型不稳定，诱导出来的胰岛素抵抗病情轻重不一。
(3)采用该类技术的动物模型来研究chemerin等蛋白调控作用机制研究可靠性差，且需要大量样本才能降低实验偏移，实验效率低下，可重复性差。
解决上述技术问题的难度：
因此让动物自由进食高脂高糖饮食来诱导胰岛素抵抗的方法可控性差，该领域急需找到一种相对标准、可控性好、诱导成功率高、诱导技术简单易操作的方法来替代。但存在较大的技术难度，经口进食诱导方法不可取，需设计研究其他路径和其他药物进行诱导。
解决上述技术问题的意义：
如发明新的胰岛素抵抗诱导方法，将大力提升模型诱导成功率和模型稳定性，极大帮助研究chemerin等相关蛋白对胰岛素抵抗的调控作用，并且可以进一步研究CMKLR1激动剂对其的干预作用，更深层次地研究胰岛素抵抗的发生机制，并找到可能干预靶点。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法。
本发明是这样实现的，一种Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，所述Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法包括：
第一步，采用精氨酸诱导法制作胰源性糖尿病模型，350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周，期间小鼠普通饮食建立胰源性糖尿病组；同时采用配方饲料开放饮食建立高脂饮食组；阴性对照组：普通饮食饮水喂养6周；
第二步，采用普通病理进行胰腺组织病理评分；酶联免疫吸附试验检测血糖、血胰岛素、IL-1、TNF-α、chemerin；Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1mRNA和GLUT2mRNA的表达PDX-1mRNA；腹腔注射葡萄糖耐量试验小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值等测定采用腹腔注射葡萄糖耐量；
第三步，所有检测数据按平均数±标准差表示，正态分布用ShapiroWilk检验进行检验；组间比较使用单因素方差分析，若不符合正态分布按Mann-Whitney U检验比较；以P＜0.05为差异有统计学意义；应用SPSS 22.0forWindows软件实施全部检验过程。
进一步，所述第一步的胰源性糖尿病模型的每组小鼠在造模前、造模后3周和6周共3个时间点进行取血检测，采用眼内眦方法取血；并行腹腔注射葡萄糖耐量试验，检测空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素、餐后2小时胰岛素等值，并计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR值；到达造模后6周终点时，予以腹腔注射1％戊巴比妥钠50ml/kg进行麻醉，然后摘除眼球采集血液标本；
所有血液标本于4℃冰箱内静置1小时，后进行离心，离心完毕后收集上清，保存于-80℃待测。缺血完毕后打开胸腔并暴露心脏，剪开右心耳，将装有预冷PBS溶液输液器的针尖插入左心室内进行灌注至肝脏变白；灌注完毕后采集胰头部组织，用PBS溶液洗涤后置于4％多聚甲醛中固定，固定2-3天后进行石蜡包埋。
进一步，所述第二步的普通病理的检测方法包括：将石蜡包埋的胰腺组织用石蜡切片机切成6μm厚的切片，于热水中烫平，固定于载玻片上，放入45℃恒温箱中烘干；普通病理采用苏木精和伊红染色；将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，酸水及氨水中分色，各数秒钟，流水冲洗1小时后再入蒸馏水片刻，后于70％和90％酒精中脱水各10分钟，最后入酒精伊红染色液染色2～3分钟；染色后由病理科医师在光镜下观察结果并行胰腺组织病理评分。
进一步，所述第二步的酶联免疫吸附试验的检测方法包括：根据试剂盒推荐的步骤进行，待检测的血样分为两份，每个样本检测时做一个复孔，浓度通过使用试剂盒所提供的标准品制成的标准曲线来比较确定。
进一步，所述第二步的Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1mRNA和GLUT2mRNA的表达PDX-1mRNA具体包括：
取2μg mRNA逆转录为cDNA，进行PCR扩增，反应条件：95℃ 5min、95℃ 15s、62℃30s，40个循环，62℃ 30s收集荧光信号；融解曲线分析：温度60～95℃；PDX-1mRNA的引物由南京金斯瑞科技有限公司合成，上游引物：5’-GCGAGATGCTGGCAGACCTCT-3’下游引物：5’-GGCAGACCTGGCGGTTCACAT-3’；PCR反应条件：95℃5min、95℃15s、62℃ 30s，40个循环，62℃30s收集荧光信号；融解曲线分析：温度60～95℃。RTPCR反应结束后，DNA扩增仪自动分析并计算结果；
GLUT2mRNA：取小鼠胰腺组织提取中RNA，以此为为模板反转录合成cDNA第一链，进行PCR扩增，引物序列：GLUT2上游引物5'-CAATTTCATCATCGCCCTCT-3'，下游引物5'-TGCAGCAATTTCGTCAAAAG-3'；β-actin上游引物5'-TCACTGAGGATGAGGTGGAAC-3'，下游引物5'-TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG-3'；扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳。
进一步，所述第二步的腹腔注射葡萄糖耐量试验小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值测定采用腹腔注射葡萄糖耐量试验方法；小鼠禁食不禁水16小时，内眦静脉取血，测空腹血糖和空腹胰岛素水平，50％葡萄糖剂量腹腔注射，120min后取血检测餐后2小时血糖和胰岛素值。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
(1)本发明解决了人们一直渴望解决、但始终未能获得成功的技术难题，发明了350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周的胰岛素抵抗模型诱导方法，模型成功率高且稳定。
(2)本发明克服了技术偏见，以往学界普遍认为胰岛素抵抗常规通过高脂高糖饮食诱导，而认为其他方法更多的是诱导慢性胰腺炎模型，然而我们的实验则证实了精氨酸持续腹腔注射可诱导稳定的胰岛素抵抗模型。
(3)本发明取得了预料不到的技术效果，我们的实验不仅成功的诱导出了胰岛素抵抗模型，而且采用该模型进行了chemerin的调控作用研究和CMKLR1激动剂干预研究，表现出了良好的模型稳定性，同时将该新型造模方法与传统的高脂高糖饮食诱导方法进行对比，直观比较了两个模型的差异，新技术方法造模成功率高，胰岛素抵抗发生明显，模型稳定，造模所需时间固定统一。
(4)本发明填补了国内外空白，经文献查询研究，未发现采用精氨酸腹腔注射诱导胰岛素抵抗模型的报道，更未发现采用该造模方法用来研究chemerin对胰岛素抵抗的调控作用及CMKLR1激动剂对胰岛素抵抗的干预作用。下列是采用该技术与原有高脂高糖饮食诱导技术在chemerin调控作用及CMKLR1激动剂干预作用研究结果的对比图表，包括胰腺病理切片、空腹血糖、餐后2小时血糖、葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)和PDX-1等表达的差异。
附图说明
图1是本发明实施例提供的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法流程图。
图2是本发明实施例提供的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法实现流程图。
图3是本发明实施例提供的精氨酸注射方法诱导的小鼠胰腺病理提示较典型的胰腺慢性炎症特征，而高脂高糖饮食方法诱导的小鼠胰腺慢性炎症特征不明显。
图4是本发明实施例提供的造模后42天，新技术较高脂高糖法诱导的胰岛素抵抗更明显且时间更持久，新方法诱导的小鼠空腹血糖和餐后2小时血糖水平较高脂高糖法高。
图5是本发明实施例提供的新技术模型小鼠的chemerin水平和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2mRNA)、PDX-1值低于高脂高糖法小鼠，提示新技术诱导的胰岛素抵抗模型稳定，使用该模型研究可以显示chemerin在胰岛素抵抗中起重要调控作用，且可能与GLUT2及PDX-1的作用有关。
图6是本发明实施例提供的CMKLR1激动剂干预后空腹血糖、餐后2小时血糖、胰岛素抵抗指数等指标明显好转，证实chemerin蛋白在胰岛素抵抗中起重要调控作用，同时也证实了该新技术诱导的胰岛素抵抗模型具有良好的稳定性与可靠性。
图7是本发明实施例提供的CMKLR1激动剂干预后模型动物血chemerin值升高，胰腺GLUT2mRNA和PDX-1表达升高，再次证实了chemerin对胰岛素抵抗的重要调控作用和其可能的调控机理。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法包括以下步骤：
S101：采用精氨酸诱导法制作胰源性糖尿病模型，350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周，期间小鼠普通饮食建立胰源性糖尿病组；同时采用配方饲料开放饮食建立高脂饮食组；阴性对照组：普通饮食饮水喂养6周；
S102：采用普通病理(HE染色)进行胰腺组织病理评分；酶联免疫吸附试验检测血糖、血胰岛素、IL-1、TNF-α、chemerin；Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1mRNA和GLUT2mRNA的表达PDX-1mRNA；腹腔注射葡萄糖耐量试验小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值等测定采用腹腔注射葡萄糖耐量；
S103：所有检测数据按平均数±标准差(mean±SD)表示，正态分布用ShapiroWilk检验进行检验；组间比较使用单因素方差分析，若不符合正态分布按Mann-Whitney U检验比较；以P＜0.05为差异有统计学意义。应用SPSS22.0forWindows(IBMAnalytics，Armonk，NY)软件实施全部检验过程。
下面结合实验对本发明的应用原理作进一步的描述。
1、实验动物
选用健康清洁级雄性C57BL/6J小鼠，8周龄，体重18-22g，实验动物由医院动物实验中心提供，动物健康状况满足国家规定的实验动物健康标准。研究方案得到医院动物研究伦理委员会批准，所有实验操作都按照NIH1985发布的“实验动物关爱原则(PrinciplesofLaboratoryAnimal Care)”进行操作。
2、实验分组
实验分胰源性糖尿病组(G1)、高脂饮食组(G2)和阴性对照组(G3)共3组，随机分组，每组8只共24只。
3、主要实验试剂和设备
表1主要实验试剂和设备一览表
4、主要溶液的配置
4.1磷酸盐缓冲液(PBS)：用天平精确称量8.0g的NaCl，200mg的KCl，240mg的KH2PO4以及2.896g的Na2HPO4·12H2O将所有的试剂溶于800ml双蒸水中，用pH计调节至pH值为7.4，最后继续加双蒸水定容至1000ml即可。
4.2精氨酸溶液：取100mg精氨酸(arginine)溶于10ml的PBS中，充分混匀使之溶解即为10×精氨酸母液，保存于-20℃。临用前取200ul母液加1800ul PBS稀释10倍即可。
4.31％戊巴比妥钠溶液：取100mg的戊巴比妥钠溶于10ml双蒸水中，充分混匀使之溶解即可。
4.4 4％多聚甲醛溶液：取8g的多聚甲醛及150ml PBS置于大烧杯中，水浴加热同时充分搅拌，待其完全溶解后，用PBS定容至200ml并用直径为0.22μm的滤器过滤除菌即可。
5、造模方法：
(1)胰源性糖尿病组(G1)：采用精氨酸诱导法制作胰源性糖尿病模型，350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周，期间小鼠普通饮食。
(2)高脂饮食组(G2)：本组小鼠采用下列配方饲料开放饮食，持续6周，配方情况具体见下表2：
表2实验饲料配方表(g.100g-1)
(3)阴性对照组(G3)：普通饮食饮水喂养6周。
6、取材和检测时间点：
每组小鼠在造模前、造模后3周和6周共3个时间点进行取血检测，采用眼内眦方法取血。并行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)，检测空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素、餐后2小时胰岛素等值，并计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR值。到达造模后6周终点时，予以腹腔注射1％戊巴比妥钠(50ml/kg)进行麻醉，然后摘除眼球采集血液标本。所有血液标本于4℃冰箱内静置1小时，后进行离心(3000转/分，15分钟)，离心完毕后收集上清，保存于-80℃待测。缺血完毕后打开胸腔并暴露心脏，剪开右心耳，将装有预冷PBS溶液输液器的针尖插入左心室内进行灌注至肝脏变白。灌注完毕后采集胰头部组织，用PBS溶液洗涤后置于4％多聚甲醛中固定，固定2-3天后进行石蜡包埋。
7、检测指标：
Chemerin。
炎症指标：IL-1、TNF-a。
葡萄糖代谢指标：空腹血糖、空腹胰岛素、餐后2小时血糖和胰岛素值。
胰岛素抵抗指标HOMA-IR值：根据上述葡萄糖代谢指标计算HOMA-IR值。
胰岛β细胞增生及相关葡萄糖代谢分子指标：PDX-1、GLUT2。
胰腺病理。
8、检测方法
8.1普通病理(HE染色)
将石蜡包埋的胰腺组织用石蜡切片机切成约6μm厚的切片，于热水中烫平，固定于载玻片上，放入45℃恒温箱中烘干。普通病理采用苏木精和伊红(Hematoxylin and eosin，HE)染色。将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，酸水及氨水中分色，各数秒钟，流水冲洗1小时后再入蒸馏水片刻，后于70％和90％酒精中脱水各10分钟，最后入酒精伊红染色液染色2～3分钟。染色后由病理科医师在光镜下观察结果并行胰腺组织病理评分。胰腺病理评分标准如下表3所示。
表3胰腺病理评分-Schmidt法
8.2酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)
本实验中血糖、血胰岛素、IL-1、TNF-α、chemerin均通过ELISA试剂盒进行检测。测定过程根据试剂盒推荐的步骤进行，待检测的血样分为两份，每个样本检测时做一个复孔，其浓度通过使用试剂盒所提供的标准品制成的标准曲线来比较确定。
8.3Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1mRNA和GLUT2mRNA的表达PDX-1mRNA：取2μg mRNA逆转录为cDNA，进行PCR扩增(反应条件：95℃ 5min、95℃ 15s、62℃ 30s，40个循环，62℃ 30s收集荧光信号)；融解曲线分析：温度60～95℃。PDX-1mRNA的引物由南京金斯瑞科技有限公司合成，上游引物：5’-GCGAGATGCTGGCAGACCTCT-3’下游引物：5’-GGCAGACCTGGCGGTTCACAT-3’。PCR反应条件：95℃5min、95℃15s、62℃ 30s，40个循环，62℃30s收集荧光信号；融解曲线分析：温度60～95℃。RTPCR反应结束后，DNA扩增仪自动分析并计算结果。
GLUT2mRNA:取小鼠胰腺组织提取中RNA，以此为为模板反转录合成cDNA第一链，进行PCR扩增，引物序列：GLUT2上游引物5'-CAATTTCATCATCGCCCTCT-3'，下游引物5'-TGCAGCAATTTCGTCAAAAG-3'(154bp)。β-actin上游引物5'-TCACTGAGGATGAGGTGGAAC-3'，下游引物5'-TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG-3'(180bp)。扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳，TM4.0统计软件测得目的基因与内参照的灰度比值，计算二者比例。
8.4腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT,Intraperitoneal glucose tolerancetest)小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值等测定采用腹腔注射葡萄糖耐量试验方法,小鼠禁食不禁水16小时，内眦静脉取血，测空腹血糖和空腹胰岛素水平，50％葡萄糖(1-1.5g/kg)剂量腹腔注射，120min后取血检测餐后2小时血糖和胰岛素值。
9、统计学方法
所有检测数据按平均数±标准差(mean±SD)表示，正态分布用ShapiroWilk检验进行检验。组间比较使用单因素方差分析，若不符合正态分布按Mann-Whitney U检验比较。以P＜0.05为差异有统计学意义。应用SPSS 22.0for Windows(IBMAnalytics，Armonk，NY)软件实施全部检验过程。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法包括：
第一步，采用精氨酸诱导法制作胰源性糖尿病模型，350mg/kg精氨酸腹腔注射，一日一次，持续6周，期间小鼠普通饮食建立胰源性糖尿病组；同时采用配方饲料开放饮食建立高脂饮食组；阴性对照组：普通饮食饮水喂养6周；
第二步，采用普通病理进行胰腺组织病理评分；酶联免疫吸附试验检测血糖、血胰岛素、IL-1、TNF-α、chemerin；Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1 mRNA和GLUT2 mRNA的表达PDX-1 mRNA；腹腔注射葡萄糖耐量试验小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值测定采用腹腔注射葡萄糖耐量；
第三步，所有检测数据按平均数±标准差表示，正态分布用ShapiroWilk检验进行检验；组间比较使用单因素方差分析，若不符合正态分布按Mann-Whitney U检验比较；以P＜0.05为差异有统计学意义；应用SPSS 22.0for Windows软件实施全部检验过程。
2.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第一步的胰源性糖尿病模型的每组小鼠在造模前、造模后3周和6周共3个时间点进行取血检测，采用眼内眦方法取血；并行腹腔注射葡萄糖耐量试验，检测空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素、餐后2小时胰岛素等值，并计算胰岛素抵抗指数HOMA-IR值；到达造模后6周终点时，予以腹腔注射1％戊巴比妥钠50ml/kg进行麻醉，然后摘除眼球采集血液标本；
所有血液标本于4℃冰箱内静置1小时，后进行离心，离心完毕后收集上清，保存于-80℃待测；缺血完毕后打开胸腔并暴露心脏，剪开右心耳，将装有预冷PBS溶液输液器的针尖插入左心室内进行灌注至肝脏变白；灌注完毕后采集胰头部组织，用PBS溶液洗涤后置于4％多聚甲醛中固定，固定2-3天后进行石蜡包埋。
3.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第二步的普通病理的检测方法包括：将石蜡包埋的胰腺组织用石蜡切片机切成6μm厚的切片，于热水中烫平，固定于载玻片上，放入45℃恒温箱中烘干；普通病理采用苏木精和伊红染色；将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟，酸水及氨水中分色，各数秒钟，流水冲洗1小时后再入蒸馏水片刻，后于70％和90％酒精中脱水各10分钟，最后入酒精伊红染色液染色2～3分钟；染色后由病理科医师在光镜下观察结果并行胰腺组织病理评分。
4.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第二步的酶联免疫吸附试验的检测方法包括：根据试剂盒推荐的步骤进行，待检测的血样分为两份，每个样本检测时做一个复孔，浓度通过使用试剂盒所提供的标准品制成的标准曲线来比较确定。
5.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第二步的Real-Time PCR法检测胰腺组织PDX-1 mRNA和GLUT2 mRNA的表达PDX-1 mRNA具体包括：
取2μg mRNA逆转录为cDNA，进行PCR扩增，反应条件：95℃5min、95℃15s、62℃30s，40个循环，62℃30s收集荧光信号；融解曲线分析：温度60～95℃；PDX-1mRNA的引物由南京金斯瑞科技有限公司合成，上游引物：5’-GCGAGATGCTGGCAGACCTCT-3’下游引物：5’-GGCAGACCTGGCGGTTCACAT-3’；PCR反应条件：95℃5min、95℃15s、62℃30s，40个循环，62℃30s收集荧光信号；融解曲线分析：温度60～95℃；RTPCR反应结束后，DNA扩增仪自动分析并计算结果；
GLUT2 mRNA：取小鼠胰腺组织提取中RNA，以此为为模板反转录合成cDNA第一链，进行PCR扩增，引物序列：GLUT2上游引物5'-CAATTTCATCATCGCCCTCT-3'，下游引物5'-TGCAGCAATTTCGTCAAAAG-3'；β-actin上游引物5'-TCACTGAGGATGAGGTGGAAC-3'，下游引物5'-TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG-3'；扩增产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳。
6.如权利要求1所述的Chemerin对胰岛素抵抗的调控与CMKLR1激动剂的干预作用测定方法，其特征在于，所述第二步的腹腔注射葡萄糖耐量试验小鼠空腹血糖、餐后两小时血糖、空腹胰岛素和餐后2小时胰岛素、HOMA-IR值测定采用腹腔注射葡萄糖耐量试验方法；小鼠禁食不禁水16小时，内眦静脉取血，测空腹血糖和空腹胰岛素水平，50％葡萄糖剂量腹腔注射，120min后取血检测餐后2小时血糖和胰岛素值。
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Cited By (2)
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| CN110361246A (zh) * | 2019-08-14 | 2019-10-22 | 南京农业大学 | 一种组织学切片染色方法 |
| CN113424795A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-09-24 | 四川大学华西医院 | 一种急性胰腺炎动物模型的构建方法和用途 |
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| 涂建锋: "急性胰腺炎后新发糖尿病危险因素及其发生机制研究", 《中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
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| CN113424795A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-09-24 | 四川大学华西医院 | 一种急性胰腺炎动物模型的构建方法和用途 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20190709 |