CN109985239A - 极光激酶抑制剂和甲病毒在制备抗肿瘤药物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药领域，涉及极光激酶抑制剂和甲病毒在制备抗肿瘤药物的应用。本发明首次发现极光激酶抑制剂可以用于制备甲病毒抗肿瘤增效剂。发明同时涉及一种包含极光激酶抑制剂以及甲病毒的药物组合物，包含极光激酶抑制剂及甲病毒的药品套装，以及极光激酶抑制剂与甲病毒在治疗肿瘤，特别是对所述甲病毒不敏感的肿瘤中的用途。

Description

极光激酶抑制剂和甲病毒在制备抗肿瘤药物的应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及极光激酶抑制剂与甲病毒的联合在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

溶瘤病毒(oncolytic virus)是一类选择性的感染并杀伤肿瘤细胞，而不损伤正常细胞的可复制病毒。溶瘤病毒疗法(oncolytic virotherapy)是一种创新的肿瘤靶向治疗策略，它利用天然的或经基因工程改造的病毒选择性的感染肿瘤细胞，并在肿瘤细胞中复制，达到靶向性溶解、杀伤肿瘤细胞的作用，但是对正常细胞没有损伤。

M1病毒(Alphavirus M1)属于甲病毒属(Alphavirus)，其在制备抗肿瘤药物方面具有较好的应用效果。例如中国发明专利申请201410425510.3公开了M1病毒能选择性引起肿瘤细胞死亡而不影响正常细胞存活，其在抗肿瘤方面具有非常好的应用前景。然而，不同肿瘤对M1病毒的敏感性不一，对于某些肿瘤，M1病毒单独用药时，溶瘤作用还不够理想。例如中国发明专利申请201410425510.3所记载的，M1作为抗肿瘤药物使用时，对于结直肠癌、肝癌、膀胱癌和乳腺癌的效果不如胰腺癌、鼻咽癌、前列腺癌和黑色素瘤明显；而胶质瘤、宫颈癌、肺癌则更其次；而胃癌则最不显著。

筛选增加溶瘤病毒肿瘤治疗效果的化合物有望增加溶瘤病毒的抗瘤谱及抗瘤强度。发明人此前申请的专利201510990705.7中，将大黄酚及其衍生生物作为溶瘤病毒的抗瘤增效剂，二者组合可以将肿瘤细胞的存活率降低至39.6％，但其抗癌强度存在很大的进步空间，此外，这种联合应用的作用机制尚不明确。

研究特定溶瘤病毒的增效途径并不简单。尽管已有众多已被报道的对某些溶瘤病毒具有抗肿瘤增效作用的物质。但是，不同属的溶瘤病毒往往在增效机制上表现各异。简单的挪用难以获得理想的效果。例如，作为被证实能协同增效溶瘤棒状病毒的HDAC抑制剂(Nguye,T.L.,et al.,Chemical targeting of the innate antiviral response byhistone deacetylase inhibitors renders refractory cancers sensitive to viraloncolysis.Proceedings of the national academy of sciences,2008.105(39):p.14981-14986.；Shulak,L.,et al.,Histone Deacetylase Inhibitors PotentiateVesicular Stomatitis Virus Oncolysis in Prostate Cancer Cells by ModulatingNF-kB-Dependent Autophagy.Journal of Virology,2014.88(5):p.2927-2940.；Bridle,B.W.,et al.,HDAC Inhibition Suppresses Primary Immune Responses,EnhancesSecondary Immune Responses,and Abrogates Autoimmunity During TumorImmunotherapy.Molecular therapy,2013.21(4):p.887-894.)，发明人却发现，其被用于与甲病毒联用后，却没有获得类似的增效效果。这也是溶瘤病毒增效剂开发难度大的其中一个原因。

极光激酶是丝氨酸/苏氨酸激酶，其功能是作用在有丝分裂和细胞分裂中的多方面的调节剂。有三种相关的哺乳动物极光激酶，分别是极光激酶-A(Aurora A)、极光激酶-B(Aurora B)和极光激酶-C(Aurora C)。这些激酶在许多癌症中过度表达，目前这些激酶已经被人发现作为癌症治疗的新靶点。

其中，极光激酶-A(Aurora A)是一个重要的有丝分裂调节因子。分别先后定位于中心体和纺锤体极，参与G2/M转换的调节，在早期有丝分裂事件中作用于中心体的成熟与分离及纺锤体的组装等。极光激酶-A的过度表达是极光激酶-A诱导肿瘤发生的必要特征。

其中，极光激酶-B(Aurora B)是负责调控细胞有丝分裂的一类重要的丝氨酸/苏氨酸激酶。近年来，随着Aurora B相关研究的不断深入，人们逐渐认识到Aurora B在细胞有丝分裂以及肿瘤形成中的重要作用。在细胞有丝分裂中，Aurora B参与了诸如中心体成熟分离、纺锤体组装和维持、染色体分离以及胞质分裂等多个事件。异常表达的Aurora B往往会导致细胞在有丝分裂的过程中出现大量的异常现象。此外，Aurora B还可能参与了肿瘤形成，已经发现一些靶向作用于极光的小分子具有显著的抑癌作用。

其中，极光激酶-C(Aurora C)是染色体过客蛋白(chromosome passengerprotein),它在有丝分裂早期与染色体集合，后期则转移到纺锤体中间区，最后在胞质分裂期定位于中间体。

CN 106535940A中报道了极光激酶抑制剂能够增效溶瘤病毒单纯疱疹病毒HSV1716。

发明内容

本发明的目的在于提供一种甲病毒抗肿瘤增效剂。

本发明的另一个目的在于提供能够选择性的增强甲病毒对肿瘤细胞的杀伤作用，而不影响正常细胞的抗癌增效剂。

本发明的另一个目的在于提供一种极光激酶抑制剂在制备甲病毒抗瘤增效剂方面的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种抗瘤药物组合物，其可以使得甲病毒发挥更好的抗瘤效果。

本发明的进一步目的在于提供一种针对甲病毒不敏感的肿瘤，安全有效的甲病毒增效药物。

发明通过以下技术方案实现上述目的：

发明人通过研究、筛选发现，极光激酶抑制剂可以增强甲病毒的溶瘤效果。

所述的极光激酶抑制剂为抑制极光激酶活性的物质、或降解极光激酶的物质、或降低极光激酶水平的基因工具、或它们的组合。

发明人通过抑制极光激酶可以显著增强甲病毒的溶瘤效应。发明人采用了抑制极光激酶活性的化合物Barasertib协同甲病毒作用于肿瘤细胞，实验结果发现，Barasertib可以协同及甲病毒增强抗肿瘤效应。

本发明首次发现，极光激酶抑制剂可以作为甲病毒的抗瘤增效剂/耐药逆转剂。

本发明提供了极光激酶抑制剂在制备甲病毒抗瘤增效剂/耐药逆转剂方面的应用。

耐药逆转剂是指，当采用一些甲病毒作为抗肿瘤药物用于治疗肿瘤时，存在着一些肿瘤对甲病毒并不太敏感，或者说这些肿瘤对甲病毒具有抗性，此时，可以采用与极光激酶代谢通路抑制剂(作为耐药逆转剂)联用甲病毒的方式，以逆转肿瘤对所述甲病毒的抗性

所述的极光激酶抑制剂包括但不限于选自以下化合物或其具有极光激酶抑制作用的衍生物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体：Barasertib、Hesperadin或CCT137690等抑制极光激酶蛋白活性的化合物。化合物的获取方式可选但不限于：自己化学分离或合成或者从商业途径购买。

在本发明一优选的实施例中，极光激酶蛋白抑制剂为Barasertib，其结构式如式1所示：

在本发明另一优选的实施例中，极光激酶蛋白抑制剂为Hesperadin，其结构式如式2所示：

在本发明另一优选的实施例中，极光激酶蛋白抑制剂为CCT137690，其结构式如式3所示：

在本发明一些优选的实施例中，极光激酶抑制剂还包括针对极光激酶基因表达抑制工具，包括但不限于基因干扰、基因沉默、以及基因编辑或基因敲除等工具手段。

作为一种可选的实施方式，所述极光激酶基因表达抑制工具选自DNA、RNA、PNA、DNA-RNA-杂合体中的一种或几种。它们可以是单链的或双链的。

极光激酶抑制剂可包括一些小的抑制核酸分子，例如短干扰RNA(siRNA)，双链RNA(dsRNA)，microRNA(miRNA)，核酶，以及小发夹RNA(shRNA)，这些都能减弱或消除极光激酶蛋白的表达。

这些小的抑制核酸分子可能包括第一、第二链，二者杂交彼此形成一个或多个双链区，每条链大约18～28个核苷酸的长度，大约18～23个核苷酸的长度，或者18，19，20，21，22个核苷酸的长度。另外，单链也可能包含能够相互杂交形成双链的区域，例如在shRNA分子中。

这些小的抑制核酸分子在保持这种减弱或消除极光激酶蛋白的表达的能力时，可能包括修饰性核苷酸。修饰性核苷酸可用于改善体外或体内特性，如稳定性、活性和/或生物利用度。这些修饰性核苷酸可能含有脱氧核苷酸、2’-甲基核苷酸、2’-脱氧-2’-氟核苷酸、4’-三核苷酸、锁核酸(LNA)核苷酸和/或2’-O-甲氧乙基核苷酸等。小的抑制核酸分子，如短干扰RNA(siRNA)，也可能含有5’-和/或3’-帽结构，以此来防止核酸外切酶对其降解。

在一些实施例中，小抑制核酸分子组成的双链核酸含有两端钝、或悬垂的核苷酸。其他核苷酸可能包括会导致错位、凸起、循环、或摆动碱基对的核苷酸。小抑制核酸分子可以设计配方以便施用，例如，通过脂质体包裹，或掺入其他载体(如可生物降解聚合物水凝胶，或环糊精)。

在本发明另一些优选的实施例中，所述的极光激酶抑制剂还包括抗体、抗体功能性片段、肽类、和拟肽类中的一种或几种。其中，所述的抗体可能是单克隆抗体，多克隆抗体，多价抗体，多特异性抗体(例如：双特异性抗体)，和/或连接在极光激酶上的抗体片段。该抗体可以是嵌合抗体、人源化抗体、CDR移植抗体或人型抗体。抗体片段可以是，例如，Fab，Fab’，F(ab’)2，Fv，Fd，单链Fv(scFv)，具二硫键的FV(sdFv)，或VL、VH结构域。抗体可能是一个共轭的形式，例如，结合一个标签、一个可检测标记，或一种细胞毒性剂。抗体可能是同型IgG(例如：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgA、IgM、IgE或IgD。

所述的甲病毒病毒选自M1病毒和/或盖塔病毒中的一种或多种。

本发明所说的甲病毒(M1病毒、盖塔病毒)可以尤其地指目前已有的病毒，但也不排除一些可能发生的自然变异或者进行了突变(自然突变、强制性突变、或选择性突变)、基因修饰、序列增加或删除或部分替换的病毒。这里所述的甲病毒包括已经进行了上述改变的病毒。最好是上述改变并不影响所说的甲病毒发挥本发明所述的作用。所说的极光激酶抑制剂为能起到敲低或影响极光激酶基因表达或者降低极光激酶蛋白量或蛋白活性的物质(例如化合物、或氨基酸序列、核苷酸序列等)或工具等。本领域技术人员可以对其抑制化合物或者基因工具进行修饰、替换、改变等，但只要起到上述抑制极光激酶作用的，则属于本发明的极光激酶抑制剂，属于上述物质、化合物或工具等的同质替换。

在一些实施例中，甲病毒是保藏编号CCTCC V201423(保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2014年7月17日)的M1病毒。作为很可能来源于同一毒株的病毒，GenbankAccession No.EF011023记录了一株M1的序列。盖塔病毒作为与M1病毒具有高达97.8％(Wen et al.Virus Genes.2007；35(3):597-603)同源性的病毒，两者具有很高的同一性，M1病毒也被一些文献归类为类盖塔病毒。可以预期二者具有相似的功效。

单个甲病毒株也可以施用。在其他实施方案中，也可使用多种菌株和/或类型的甲病毒。

本发明还提供一种用于治疗肿瘤的药物组合物，其包含极光激酶抑制剂以及甲病毒。本发明还提供用于治疗肿瘤的药品套装，其包含极光激酶抑制剂或其衍生物或它们的组合，以及甲病毒。药品套装区别于组合物的地方在于，极光激酶抑制剂不同于甲病毒的剂型，而是独立包装(例如：药丸、或胶囊、或药片或安剖瓶中，含有极光激酶抑制剂；另外的药丸、或胶囊、或药片或安剖瓶中，含有甲病毒)。在一些实施例中，甲病毒、极光激酶抑制剂，以及甲病毒和极光激酶抑制剂的组合，也可含一种或多种佐剂。所述的佐剂是指在药物组成中，可辅助药物疗效的成分。药品套装也可以包含独立包装的极光激酶抑制剂，以及独立包装的甲病毒。药物套装中极光激酶抑制剂，以及甲病毒的施用，可以是同时施用或者是以任意的前后顺序施用，例如在甲病毒之前施用极光激酶抑制剂，或者在甲病毒之后施用极光激酶抑制剂，或者两者同时施用。在各种实施例中，患者可以是哺乳动物。在一些实施例中，哺乳动物可以是人。

所述的极光激酶蛋白抑制剂包括但不限于Barasertib(式1)、Hesperadin(式2)或CCT137690(式3)这一类的抑制极光激酶蛋白活性的化合物。或者针对极光激酶基因表达抑制工具，包括但不限于基因干扰、基因沉默以及基因编辑或敲除等工具手段。

所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒的至少一种。

需要说明的是，本发明中，所述的激光激酶抑制剂包括极光激酶-A(AuroraA)抑制剂、极光激酶-B(Aurora B)抑制剂和极光激酶-C(Aurora C)抑制剂中的一种或几种。

在组合物或药品套装中，Barasertib、Hesperadin或CCT137690与甲病毒的配比可选地为：0.01～200mg:10³～10⁹PFU；优选0.1～200mg:10⁴～10⁹PFU；进一步优选0.1～100mg:10⁵～10⁹PFU。

优选使用剂量为：Barasertib、Hesperadin或CCT137690使用范围为0.01mg/kg至200mg/kg，同时甲病毒使用滴度为MOI从10³至10⁹(PFU/kg)；优选Barasertib、Hesperadin或CCT137690使用范围为0.1mg/kg至200mg/kg，同时甲病毒使用滴度为MOI从10⁴至10⁹(PFU/kg)；更优选Barasertib、Hesperadin或CCT137690使用范围为0.1mg/kg至100mg/kg，同时甲病毒使用滴度为MOI从10⁵至10⁹(PFU/kg)。

在一个实施方式中，所述肿瘤为实体瘤或血液瘤。在一个实施方式中，所述实体瘤为肝癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、胶质瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌、或胃癌。在优选的实施方式中，所述肿瘤为对甲病毒不敏感的肿瘤。在更优选的实施方式中，所述肿瘤为对M1病毒不敏感的肿瘤。

作为可选的实施方案，本发明所提供的Barasertib、Hesperadin或CCT137690可以是注射剂、片剂、胶囊、贴剂、试剂盒等。作为优选的实施方案，本发明的增效药物是注射剂；优选地，可采用静脉注射。

作为本发明进一步优选的实施方案：

本发明发现了极光激酶抑制剂，例如、尤其是Barasertib可以增加甲病毒的抗肿瘤效应，以提高甲病毒作为抗肿瘤药物时的治疗有效性。细胞学实验证明M1病毒和Barasertib联合应用，可显著引起肿瘤细胞的形态学病变，从而显著增强对肿瘤细胞的抑制作用。

我们联合Barasertib和M1病毒作用于人肝细胞癌Hep3B株，出人意料的发现Barasertib和M1病毒联合应用时，显著增加肿瘤细胞形态病变，显著降低肿瘤细胞生存率。例如在本发明的一个实施例中，当M1病毒(MOI＝0.001)单独处理肝癌细胞时，肿瘤细胞存活率为79.9％，而当以0.4μM的Barasertib与同样MOI的M1病毒联用时，肿瘤细胞存活率大幅下降至33.2％。与单用M1病毒的抗肿瘤效果相比，Barasertib与M1联用时，溶瘤效果显著提升。

发明人此前将大黄酚及其衍生物作为M1病毒的抗癌增效剂，经试验发现，50μM的大黄酚与(MOI＝0.001)M1病毒联用后，肿瘤细胞的存活率下降至39.6％，而本发明发现，将0.4μM的Barasertib与M1病毒联用后，肿瘤细胞的存活率显著下降至33.2％。与大黄酚及其衍生物相比，本发明的M1抗肿瘤增效剂显著提高了肿瘤的杀伤率。并且，在Barasertib联合M1病毒实现了上述的杀伤率时，其所需要的药物有效剂量上仅为大黄酚的不足百分之一，具备显著优越性。

本发明发现，Barasertib与甲病毒联合应用处理肿瘤细胞，对肿瘤细胞杀伤作用显著优于单用相同浓度的Barasertib，例如当同样例如以0.4μM的Barasertib处理肿瘤细胞时，肿瘤细胞存活率仍高达84.3％；M1病毒(MOI＝0.001)单独处理肝癌细胞时，肿瘤细胞存活率为79.9％。而当以0.4μM的Barasertib与M1(MOI＝0.001)病毒联用时，肿瘤细胞存活率大幅下降至33.2％。可见，Barasertib与M1联用时大幅提升的溶瘤效果，是得益于Barasertib与M1病毒之间的协同性机制，并非简单地通过Barasertib的抗肿瘤机制发挥作用。

附图说明

图1Barasertib与M1病毒联合处理显著降低人肝细胞癌株Hep3B生存率。

具体实施方式

以下实施方式是对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不局限于以下的实施例介绍，凡依照本发明的原理或理念所作的等同的变化或变通都应视为本发明保护的范畴。

在没有特别指明的情况下，本发明采用的材料及实验方法为常规材料及方法。

说明书中的“选自”连接着所选对象，可以理解为，例如：“X选自：A、B、C、……、E”或“X选自：A、B、C、……和E中的一种或多种”，等等，均可理解为，X包括了A、B、C、……E中的一种、或者两者的任意组合、或者多者的任意组合。此时不排除X还包括了一些其他类别的物质。

除了上述提及的极光激酶抑制剂，本发明的抑制剂还可以选自现有技术中已经公知的极光激酶抑制剂、或者经后续研究发现具备极光激酶抑制作用的物质。

实施例1Barasertib与M1病毒联合处理显著降低人肝细胞癌株Hep3B生存率材料：

人肝细胞癌Hep3B(购于ATCC)，M1病毒(保藏编号CCTCC V201423)，高糖DMEM培养基(购于Corning)，自动酶联检测酶标仪。

方法：

a)接种细胞、给药处理：选择对数生长期细胞，DMEM完全培养液(含10％胎牛血清、1％双抗)制成细胞悬液，以每孔4×10³/孔的密度接种在96孔培养板内。12小时后见细胞完全贴壁，实验分对照组，单独Barasertib组，M1感染组和Barasertib/M1联用组。所用剂量为：所用剂量为：M1病毒(MOI＝0.001)感染细胞；Barasertib为0.4μM。

b)MTT与细胞内的琥珀酸脱氢酶反应：培养至48h时，每孔加入MTT 20μl(5mg/ml)，继续孵育4小时，此时镜检可观察到、活细胞内形成的颗粒状蓝紫色甲臜结晶。

c)溶解甲臜颗粒：小心吸去上清，加DMSO 100μl/孔溶解形成的结晶，在微型振荡器上震荡5min，然后在酶联检测仪上用波长570nm检测各孔的光密度(OD值)。细胞存活率＝药物处理组OD值/对照组OD值×100％。

结果:

如图1所示，M1病毒(MOI＝0.001)单独处理对肿瘤细胞Hep3B具有较小的生存率抑制作用，肿瘤细胞存活率达到79.9％，0.4μM的Barasertib处理组肿瘤细胞存活率仍高达84.3％，然而，当同样的0.4μM的Barasertib与M1病毒(MOI＝0.001)联用(Barasertib+M1)时，肿瘤细胞存活率大幅下降至33.2％。

Claims (10)

1.极光激酶抑制剂在制备甲病毒抗肿瘤增效剂或耐药逆转剂方面的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的极光激酶抑制剂为抑制极光激酶活性的物质、或降解极光激酶的物质、降低极光激酶水平的基因工具、或它们的任意组合；

优选地，所述的极光激酶抑制剂选自化合物；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自以下化合物或其具有极光激酶抑制作用的衍生物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体：

Barasertib、Hesperadin或CCT137690；

更优选地，所述的Barasertib的结构式如式1所示：

更优选地，所述的Hesperadin的结构式如式2所示：

更优选地，所述的CCT137690的结构式如式3所示：

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自基因干扰、基因编辑、基因沉默或基因敲除材料；

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自DNA、RNA、PNA、DNA-RNA-杂合体中的一种或几种；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自siRNA、dsRNA、miRNA、shRNA、核酶中的一种或几种；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂为肿瘤靶向的极光激酶抑制剂。

4.一种治疗肿瘤的药物组合物，包含：

(a)极光激酶抑制剂；

优选地，所述的极光激酶抑制剂为抑制极光激酶活性的物质、或降解极光激酶的物质、或降低极光激酶水平的基因工具；

优选地，所述的极光激酶抑制剂选自化合物；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自以下化合物或其具有极光激酶抑制作用的衍生物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体：Barasertib、Hesperadin或CCT137690；

更优选地，所述的Barasertib的结构式如式1所示：

更优选地，所述的Hesperadin的结构式如式2所示：

更优选地，所述的CCT137690的结构式如式3所示：

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自基因干扰、基因编辑、基因沉默或基因敲除材料；

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自DNA、RNA、PNA或DNA-RNA-杂合体；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自siRNA、dsRNA、miRNA、shRNA或核酶；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂为肿瘤靶向的极光激酶抑制剂。

(b)甲病毒；优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种；

优选地，所述药物组合物还包含药学上可接受的载体；

更优选地，所述载体优选地选自冻干粉针、注射剂、片剂、胶囊、试剂盒或贴剂。

5.一种药品套装，包含：

(a)极光激酶抑制剂；

所述的极光激酶抑制剂为抑制极光激酶活性的物质、或降解极光激酶的物质、或降低极光激酶水平的基因工具、或它们的任意组合；

优选地，所述的极光激酶抑制剂选自化合物；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自以下化合物或其具有极光激酶抑制作用的衍生物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体：Barasertib、Hesperadin或CCT137690；

更优选地，所述的Barasertib的结构式如式1所示：

更优选地，所述的Hesperadin的结构式如式2所示：

更优选地，所述的CCT137690的结构式如式3所示：

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自基因干扰、基因编辑、基因沉默或基因敲除材料；

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自DNA、RNA、PNA、DNA-RNA-杂合体中的一种或多种；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自siRNA、dsRNA、miRNA、shRNA、核酶中的一种或多种；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂为肿瘤靶向极光激酶抑制剂；

(b)甲病毒；

优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种；

优选地，在所述的药品套装中，极光激酶抑制剂和甲病毒被分开包装。

6.极光激酶抑制剂及甲病毒的组合在制备治疗肿瘤药物中的应用；

优选地，所述的甲病毒选自M1病毒和盖塔病毒中的至少一种；

所述的极光激酶抑制剂为抑制极光激酶蛋白活性的物质、或降解极光激酶蛋白的物质、或降低极光激酶蛋白水平的基因工具、或它们的任意组合；

优选地，所述的极光激酶抑制剂选自化合物；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自以下化合物或其具有极光激酶抑制作用的衍生物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、互变异构体、同分异构体：Barasertib、Hesperadin或CCT137690；

更优选地，所述的Barasertib的结构式如式1所示：

更优选地，所述的Hesperadin的结构式如式2所示：

更优选地，所述的CCT137690的结构式如式3所示：

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂为基因干扰、基因编辑、基因沉默或基因敲除材料；

或者优选地，所述的极光激酶抑制剂选自DNA、RNA、PNA、DNA-RNA-杂合体中的一种或多种；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂选自siRNA、dsRNA、miRNA、shRNA、核酶中的一种或多种；

更优选地，所述的极光激酶抑制剂为肿瘤靶向的极光激酶抑制剂。

7.如权利要求1-6任一所述的应用/组合物/药品套装，其特征在于所述的极光激酶蛋白抑制剂为Barasertib、Hesperadin或CCT137690中的一种或几种。

8.如权利要求1-6任一所述的应用/组合物/药品套装，其特征在于所述的肿瘤为实体瘤或血液瘤；优选地，所述的实体瘤为肝癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、胶质瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌；

或者优选地，所述的肿瘤为对甲病毒不敏感的肿瘤；

更优选地，所述肿瘤为对甲病毒不敏感的肝癌、结直肠癌、膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、胶质瘤、黑色素瘤、胰腺癌、鼻咽癌、肺癌或胃癌。

9.如权利要求4或5任一所述的组合物/药品套装，其特征在于所述的Barasertib、Hesperadin或CCT137690与甲病毒的配比为：0.01～200mg:10³～10⁹PFU；优选0.1～200mg:10⁴～10⁹PFU；进一步优选0.1～100mg:10⁵～10⁹PFU；

进一步优选地，使用剂量为：Barasertib、Hesperadin或CCT137690使用范围为0.01mg/kg至200mg/kg，同时甲病毒使用滴度为MOI从10³至10⁹(PFU/kg)；

优选Barasertib、Hesperadin或CCT137690使用范围为0.1mg/kg至200mg/kg，同时甲病毒使用滴度为MOI从10⁴至10⁹(PFU/kg)；更优选Barasertib、Hesperadin或CCT137690使用范围为0.1mg/kg至100mg/kg，同时甲病毒使用滴度为MOI从10⁵至10⁹(PFU/kg)。

10.根据权利要求1-6任一所述的应用/组合物/药品套装，其中，所述的激光激酶抑制剂选自极光激酶-A抑制剂、极光激酶-B抑制剂和极光激酶-C抑制剂中的一种或几种。