CN109975375B - 一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法。二苯基丙氨酸(FF)可自组装形成二肽,将FF与介孔二氧化硅(MPS)复合,形成介孔二氧化硅纳米球与二肽复合物用于传感平台的构筑,通过二肽与抗体之间的共价结合,作为基底固载抗体。半胱胺敏化的金红石相二氧化钛介观晶体(rTiO2 MCs)可显著增强光电化学响应,将含有大量抗体的Envision多聚体与rTiO2 MCs复合,形成Envision@rTiO2 MCs复合物作为二抗通过夹心型免疫反应识别玉米赤霉烯酮(ZEN),且多聚体功能化的金红石二氧化钛介晶可作为光电化学探针,随着玉米赤霉酮浓度的不断升高,光电信号不断增强。因此可实现对玉米赤霉烯酮浓度在10‑7‑10 ng/mL范围内的高灵敏检测。
Description
技术领域
本发明属于新型功能材料与生物传感检测技术领域,具体涉及一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法。
背景技术
光电化学(PEC)检测,是以光作为激发信号,以光电流作为检测信号,通过采用不同形式的能量作为激发信号和检测信号,使激发和检测信号互不干扰,因而背景信号较低,可获得较高的灵敏度。在光电化学传感器的构建过程中,光敏材料的选择对于信号的响应至关重要,目前所用的材料中,TiO2纳米材料因其独特的光催化活性、无毒性,优异的化学和物理稳定性,使其成为光催化和光电化学传感器的理想材料。TiO2介观晶体是晶体亚单元有序排列构成的,相比于传统的TiO2单晶,TiO2介观晶体具有更加优良的太阳能转换和催化性能,能显著提高PEC性能。然而,TiO2禁带宽度较大,只能被紫外光激发,因此在可见光区光电转换效率较低。半胱胺作为一种给电子体,可提供电子,抑制电子-空穴复合,促进电子的传递,提高光电流,在本实验中,将半胱胺与TiO2复合,可明显增强TiO2的光电响应。
玉米赤霉烯酮(ZEN),又称F-2毒素,是分布最广的真菌毒素之一,它主要来源于玉米赤霉菌的代谢产物。真菌毒素是各种真菌物种的二次代谢产物,被真菌毒素污染的农作物,对人体健康和经济带来很大问题。玉米赤霉烯酮是一种耐高温的真菌,其广泛分布于受污染的谷物及农副产品、奶制品中,尤其是玉米及其加工制品中,具有生殖发育毒性、免疫毒性及强烈的致畸毒性等,也可对内分泌造成影响,并且可能诱发肿瘤。因此开发一种玉米赤霉烯酮的灵敏检测方法已成为科研工作者们研究的方向。
以SiO2-FF复合物作为基底,修饰在电极界面,由于介孔SiO2具有大的比表面积,可为抗体的固定提供更多的活性位点,并且二苯基丙氨酸溶液能够自组装形成二肽,能够与抗体通过共价作用,使抗体更牢固地结合到修饰电极界面。半胱胺敏化的二氧化钛与单独的二氧化钛相比较,光电信号明显增强。此外,在本实验中,首次引入Envision试剂替代传统的二抗,相对于传统二抗,Envision试剂是一种含有大量二抗和辣根过氧化物酶(HRP)多聚体,具有优良的生物相容性和水溶性,因此,可以很好地与信号物质结合,将其与半胱胺敏化后的TiO2结合形成复合物,展现出更好的电化学和催化性能。将Envision复合物引入传感界面,通过夹心免疫模式固定到电极表面,产生光电信号变化,通过光电信号的变化,实现对玉米赤霉烯酮的灵敏检测。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮光电化学免疫分析方法。
为实现发明目的,本发明采用如下技术方案:一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法,包括如下步骤:
(1)GCE的预处理:GCE首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依序用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
(2)MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极的制备:将5mg二苯基丙氨酸(FF)粉末溶于1 mL六氟异丙醇(HFIP)溶液,再将3mg/mL介孔二氧化硅溶液(MPS)滴加到上述FF溶液中,使二者的浓度比为4:1得到混合溶液。然后,取3μL混合溶液滴涂于干净的玻碳电极表面,在烘箱中烘干,冷却至室温,将所获得的修饰电极浸泡于1 mg/mL 的玉米赤霉烯酮抗体(Ab1)水溶液 (购自无锡百奥森公司), 在4°C下孵育50 min,随后使用pH7.5的磷酸缓冲溶液去除多余的玉米赤霉烯酮抗体Ab1,再将电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1 h,封闭电极表面上非特异性活性位点,冲去表面残余液后,即得到MPS-FF/Ab1修饰电极;将电极浸入5 μL不同浓度的玉米赤霉烯酮(ZEN)标准溶液中(购自无锡百奥森公司)于冰箱中孵育40min;用pH 7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干,得到MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极;最后浸入5 μL Envision@rTiO2 MCs溶液中,于4°C下孵育50min,用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs;
(3)玉米赤霉烯酮的检测:采用三电极体系进行测定,以MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为辅助电极,利用光电化学工作站进行检测,设置电压为0.2V,每隔10s进行开关灯,氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤;在pH 7.5的 PBS缓冲溶液中,通过光电化学工作站进行检测1×10-7 ng/mL–10 ng/mL之间的一系列不同浓度的玉米赤霉烯酮标准溶液,通过记录开关灯前后产生的不同电流信号,绘制工作曲线;待测样品溶液代替玉米赤霉烯酮标准溶液进行检测,检测的结果通过工作曲线查得。
上述孔状SiO2介观晶体(MPS)材料的制备:
利用水热合成的方法合成 SiO2 介孔材料,以原硅酸四乙酯(TEOS) 作为硅的来源,三嵌段共聚物(P123 )和1-羧乙基-3-甲基咪唑硝酸盐离子液体( PIL )作为结构模板单元;首先,将 4g P123 和2.67gPIL 完全溶解在二次水中,用 2M 的 HCl 控制溶液的pH;然后,在不断搅拌的情况下,将 9gTEOS 缓慢加入到溶液中, 40°C 温度下搅拌 24h,得到胶状物质;随后,将其全部转移到四氟化钛不锈钢高压釜中在 120°C 的温度下老化48h,过滤产物,用乙醇和二次水清洗,再在烘箱中干燥一夜;最后,将得到的固体粉末在室温中煅烧 6h 去除模板,取3mg固体粉末溶于二次水中,配制成3 mg/mL介孔二氧化硅(MPS)水溶液。
上述Envision@rTiO2 MCs溶液的制备:
1) 金红石型TiO2介观晶体(rTiO2 MCs)材料的制备:0.5 g十二烷基苯磺酸钠(SDBS)溶解在25 mL 2.2 mol/mL HCl溶液中,搅拌15分钟;然后加入0.5mL异丙醇钛(IV),在80°C下搅拌48 h;随后,所得产物经离心、用超纯水、乙醇洗涤4-5次后,在60°C下干燥一昼夜;最后,将上述产物在400 °C 空气中煅烧1h以去除残留的有机物,制得金红石型TiO2介观晶体(rTiO2 MCs)。 2) 金红石型TiO2介观晶体(rTiO2 MCs)标记二抗(Envision@rTiO2MCs)溶液的制备:首先,将5mg rTiO2 MCs粉末用二次水分散均匀,得到浓度为5mg/mL的rTiO2 MCs悬浮液,并与0.013M的半胱胺溶液按照体积比为1:5的比例吸附30min,在5000rpm的转速下离心20min,将得到的固体用pH 7.5的PBS分散;然后,按照体积比为5:1的比例将复合后的rTiO2 MCs溶液与Envision(购自上海基因科技公司)溶液在冰箱中吸附3h,接着在6000rpm的转速下离心20min,所得固体用pH 7.5的PBS分散,再加入20 μL BSA溶液,放置冰箱中待用。
本发明所述的一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮的传感器,包括工作电极、铂丝电极为对电极和Ag/ AgCl为参比电极,其特征在于,所述的工作电极采用MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极,其由下述步骤的方法制备而成的1)玻碳电极的抛光:玻碳电极首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依序用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;2)MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极的制备:将5mg二苯基丙氨酸(FF)粉末溶于1 mL六氟异丙醇(HFIP)溶液,再将3mg/mL介孔二氧化硅溶液(MPS)滴加到上述FF溶液中,使二者的浓度比为4:1得到混合溶液;然后,取3μL混合溶液滴涂于干净的玻碳电极表面,在烘箱中烘干,冷却至室温,将所获得的修饰电极浸泡于1 mg/mL 的玉米赤霉烯酮抗体(Ab1)水溶液 (购自无锡百奥森公司),在4°C下孵育50 min,随后使用pH7.5的磷酸缓冲溶液去除多余的玉米赤霉烯酮抗体Ab1,再将电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1h,封闭电极表面上非特异性活性位点,冲去表面残余液后,即得到MPS-FF/Ab1修饰电极;将电极浸入5 μL不同浓度的玉米赤霉烯酮(ZEN)标准溶液中(购自无锡百奥森公司)于冰箱中孵育40min;用pH 7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干,得到MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极;最后浸入5 μL Envision@rTiO2 MCs溶液中,于4°C下孵育50min,用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs;
本发明所述的一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法,其特征在于,步骤如下:1)采用三电极体系进行测定,以MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为辅助电极,利用光电化学工作站进行检测,设置电压为0.2V,每隔10s进行开关灯,氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤;2)在pH7.5的 PBS缓冲溶液中,通过光电化学工作站进行检测1×10-7 ng/mL–10 ng/mL之间的一系列不同溶度的玉米赤霉烯酮标准溶液,通过记录开关灯前后产生的不同电流信号,绘制工作曲线。
本发明的显著优点为:
(1)以半胱胺敏化的金红石型TiO2介观晶体为标记物标记试剂盒,金红石型TiO2介观晶体具有较高的孔隙率,半胱胺的引入增强了电子的传输速度,与单独的传统TiO2单晶材料相比,有效提高光电转换效率及传感器的灵敏度。
(2)试剂盒Envision复合物,是一种含有大量二抗和辣根过氧化物酶聚合物的复合物,具有优良的生物相容性和水溶性,可以很好地与信号物质结合。将Envision复合物引入传感界面,通过夹心免疫模式固定到电极表面,产生光电信号变化,实现对玉米赤霉烯酮的灵敏检测。
(3)将介孔二氧化硅与二苯基丙氨酸结合作为基底,为抗体的固定提供更多位点,提高了传感器的灵敏度。
附图说明
图1为本发明所述的玉米赤霉烯酮的signal-on型光电化学传感器的制备过程示意图。
图2 A为不同浓度1×10-7 ng/mL–10 ng/mL(a-i)玉米赤霉烯酮标准溶液,传感电极的光电流响应图。
图2 B为传感电极的光电流响应与玉米赤霉烯酮标准溶液浓度的线性关系图。
具体实施方式
本发明用下列实施例来进一步说明本发明,但本发明的保护范围并不限于下列实施例。
实施例1
一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮光电化学免疫分析方法(如图1所示):
(1)玻碳电极的预处理:玻碳电极首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依序用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
(2)将5 mg二苯基丙氨酸(FF)粉末溶于1 mL六氟异丙醇(HFIP)溶液,再将 3mg/mL介孔二氧化硅(MPS)水溶液滴加到上述FF溶液中,使二者的浓度比为4:1得到混合溶液。然后,取3μL混合溶液滴涂于干净的玻碳电极表面,在烘箱中烘干,冷却至室温;
(3) 在修饰好的电极表面滴涂3μL巯基苯硼酸水溶液,孵育50min,用二次水洗去多余的溶液。将步骤(2)制得的修饰电极浸泡于1 mg/mL玉米赤霉烯酮抗体(Ab1)水溶液,在4°C下孵育50min,接着用pH 7.5的磷酸缓冲溶液洗去多余的Ab1,再将修饰电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1 h,封闭修饰电极表面上非特异性活性位点;冲去表面残余液后,用pH为7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干,制得MPS-FF/Ab1修饰电极;
(4)将步骤(3)制得的MPS-FF/Ab1修饰电极浸入5 μL不同浓度的玉米赤霉烯酮(ZEN)标准溶液中于冰箱中孵育40min;用pH 7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干,得到MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极;
(5) 最后将步骤(3)制得的MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极浸入5 μL Envision@rTiO2MCs溶液中,于4°C下孵育50min,用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs
最后浸入5 μL Envision@rTiO2 MCs溶液中,于4°C下孵育50min,用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs
实施例2
实施例1所用的介孔二氧化硅(MPS)材料的制备:
利用水热合成的方法合成 SiO2 介孔材料,以原硅酸四乙酯(TEOS) 作为硅的来源,三嵌段共聚物( P123,中文全称:聚环氧乙烷-聚环氧丙烷-聚环氧乙烷三嵌段共聚物)和1-羧乙基-3-甲基咪唑硝酸盐离子液体( PIL,购自兰州中科凯特工贸有限公司 )作为结构模板单元;首先,将 4g P123 和2.67gPIL 完全溶解在二次水中,用 2M 的 HCl 控制溶液的 pH;然后,在不断搅拌的情况下,将 9gTEOS 缓慢加入到溶液中, 40°C温度下搅拌24h,得到胶状物质;随后,将其全部转移到四氟化钛不锈钢高压釜中在120°C的温度下老化48h,过滤产物,用乙醇和二次水清洗,再在烘箱中干燥一夜;最后,将得到的固体粉末在室温中煅烧 6h 去除模板,取3mg固体粉末溶于二次水中,配制成3 mg/mL介孔二氧化硅(MPS)水溶液。
实施例3
实施例1所用的Envision@rTiO2 MCs溶液制备:
1)金红石型TiO2介观晶体(rTiO2 MCs)材料的制备:0.5 g十二烷基苯磺酸钠(SDBS)溶解在25 mL 2.2 mol/mL HCl溶液中,搅拌15分钟;然后加入0.5mL异丙醇钛(IV),在80°C下搅拌48 h;随后,所得产物经离心、用超纯水、乙醇洗涤4-5次后,在60°C下干燥一昼夜;最后,将上述产物在400 °C 空气中煅烧1h以去除残留的有机物,制得金红石型TiO2介观晶体(rTiO2 MCs)。
2)金红石型TiO2介观晶体(rTiO2 MCs)标记二抗(Envision@rTiO2 MCs)溶液的制备:首先,将5mg步骤1)制得的rTiO2 MCs粉末用二次水分散均匀,得到浓度为5mg/mL的rTiO2MCs悬浮液,并与0.013M的半胱胺水溶液按照体积比为1:5的比例吸附30min,在5000rpm的转速下离心20min,所得固体用pH 7.5的PBS分散得rTiO2 MCs溶液;然后,按照体积比为5:1的比例将复合后的rTiO2 MCs溶液与Envision(购自上海基因科技公司)溶液在冰箱中吸附3h,接着在6000rpm的转速下离心20min,所得固体用pH 7.5的PBS分散,再加入20 μL BSA溶液,获得Envision@rTiO2 MCs溶液,放置冰箱中待用。
实施例4
一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮光电化学免疫分析方法,步骤如下:
(1) 采用三电极体系进行测定,以实施例1制得的MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为对电极,利用光电化学工作站进行检测,设置电压为0.1V,每隔10s进行开关灯,氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤;
(2) 在pH 7.5的 PBS缓冲溶液中,通过光电化学工作站进行检测1×10-7 ng/mL–10 ng/mL一系列不同浓度的玉米赤霉烯酮标准溶液,通过记录开关灯前后产生的不同电流信号,绘制工作曲线。图2 A为不同浓度1×10-7 ng/mL–10 ng/mL(a-i)玉米赤霉烯酮标准溶液,传感电极的光电流响应。图2 B为传感电极的光电流响应与玉米赤霉烯酮标准溶液浓度的线性关系图。
将待测样品溶液代替玉米赤霉烯酮标准溶液进行检测,检测的结果可通过工作曲线查得。
Claims (4)
1.一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮检测方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1) 玻碳电极GCE的预处理:玻碳电极首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依序用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;
(2) MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极的制备:将5 mg的二苯基丙氨酸FF粉末溶于1 mL六氟异丙醇HFIP溶液,再将3 mg/mL介孔二氧化硅MPS溶液滴加到上述二苯基丙氨酸FF 溶液中,使二者的浓度比为4:1得到混合溶液,然后,取3μL混合溶液滴涂于干净的玻碳电极表面,在烘箱中烘干,冷却至室温,将所获得的修饰电极浸泡于1 mg/mL 的玉米赤霉烯酮抗体Ab1水溶液, 在4°C下孵育50 min,随后使用pH7.5的磷酸缓冲溶液去除多余的玉米赤霉烯酮抗体Ab1,再将电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1 h,封闭电极表面上非特异性活性位点,冲去表面残余液后,即得到MPS-FF/Ab1修饰电极;将电极浸入5 μL不同浓度的玉米赤霉烯酮ZEN标准溶液中于冰箱中孵育40min;用pH 7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干,得到MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极;
(3)MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极的制备: 将5mg金红石型TiO2介观晶体TiO2 MCs粉末用二次水分散均匀,得到浓度为5mg/mL的TiO2 MCs悬浮液,并与0.013M的半胱胺溶液按照体积比为1:5的比例吸附30min,在5000rpm的转速下离心20min,所得固体用pH 7.5的PBS分散,得到半胱胺功能化的金红石型TiO2介观晶体rTiO2 MCs;然后,将rTiO2MCs与Envision多聚体按照体积比为5:1的比例混合并吸附3h,接着在6000rpm的转速下离心20min,所得固体用pH 7.5的PBS分散,再加入20 μL BSA溶液,得到多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶Envision@rTiO2 MCs;最后将电极浸入5 μL Envision@rTiO2 MCs溶液中,于4°C下孵育50min,用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极;
(4)玉米赤霉烯酮的检测:采用三电极体系进行测定,以MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极为工作电极,Ag/AgCl为参比电极,铂丝电极为辅助电极,利用光电化学工作站进行检测,设置电压为0.2V,每隔10s进行开关灯,氙灯发射的单色光激发光源使用前由单色仪过滤;在pH 7.5的 PBS缓冲溶液中,通过光电化学工作站进行检测1×10-7 ng/mL–10 ng/mL之间的一系列不同浓度的玉米赤霉烯酮标准溶液,通过记录开关灯前后产生的不同电流信号,绘制工作曲线;待测样品溶液代替玉米赤霉烯酮标准溶液进行检测,检测的结果通过工作曲线查得。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的介孔二氧化硅MPS由下述方法制备的:利用水热合成的方法合成 SiO2 介孔材料,以原硅酸四乙酯TEOS作为硅的来源,三嵌段共聚物 P123和1-羧乙基-3-甲基咪唑硝酸盐离子液体PIL作为结构模板单元;首先, 将4gP123 和2.67gPIL 完全溶解在二次水中,用 2M 的 HCl 控制溶液的pH,然后,在不断搅拌的情况下,将 9gTEOS 缓慢加入到溶液中,40°C 温度下搅拌 24h,得到胶状物质;随后,将其全部转移到四氟化钛不锈钢高压釜中在 120°C的温度下老化 48h,过滤产物,用乙醇和二次水清洗,再在烘箱中干燥一夜;最后,将得到的固体粉末在室温中煅烧 6h 去除模板,取3mg固体粉末溶于二次水中,配制成3 mg/mL介孔二氧化硅MPS水溶液。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述的金红石型TiO2介观晶体TiO2 MCs由下述方法制备的:将0.5 g十二烷基苯磺酸钠SDBS溶解在25 mL 2.2 mol/mL HCl溶液中,搅拌15分钟;然后加入0.5mL四异丙醇钛,在80°C下搅拌48 h;随后,所得产物经离心、用超纯水、乙醇洗涤4-5次后,在60°C下干燥一昼夜;最后,将上述产物在400 °C 空气中煅烧1h以去除残留的有机物,制得金红石型TiO2介观晶体TiO2 MCs。
4.一种基于信号增强型多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶的玉米赤霉烯酮的传感器,包括工作电极、铂丝电极为对电极和Ag/ AgCl为参比电极,其特征在于,所述的工作电极采用MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极,所述的MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极由下述方法制备而成的:1)玻碳电极的抛光:玻碳电极首先在铺有氧化铝粉末的麂皮上机械打磨抛光,用二次水洗去表面残留粉末,再移入超声水浴中清洗,直至清洗干净,最后依序用乙醇,稀酸和水彻底洗涤;2)MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2 MCs修饰电极的制备:将5 mg二苯基丙氨酸FF粉末溶于1 mL六氟异丙醇HFIP溶液,再将3 mg/mL介孔二氧化硅溶液MPS滴加到上述FF溶液中,使二者的浓度比为4:1得到混合溶液;然后,取3μL混合溶液滴涂于干净的玻碳电极表面,在烘箱中烘干,冷却至室温,将所获得的修饰电极浸泡于1 mg/mL 的玉米赤霉烯酮抗体Ab1水溶液,在4°C下孵育50 min,随后使用pH7.5的磷酸缓冲溶液去除多余的玉米赤霉烯酮抗体Ab1,再将电极浸入浓度为1.0 wt.%的BSA 1 h,封闭电极表面上非特异性活性位点,冲去表面残余液后,即得到MPS-FF/Ab1修饰电极;将电极浸入5 μL不同浓度的玉米赤霉烯酮ZEN标准溶液中于冰箱中孵育40min;用pH 7.5的磷酸缓冲溶液冲洗电极表面并在室温条件下自然晾干,得到MPS-FF/Ab1/ZEN修饰电极;最后浸入5 μL 多聚体功能化金红石相二氧化钛介晶溶液Envision@rTiO2 MCs溶液中,于4°C下孵育50min,用pH7.5的磷酸缓冲溶液洗去残余液即得到MPS-FF/Ab1/ZEN/Envision@rTiO2MCs。
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