CN109966487A

CN109966487A - 一种包含抗pd-l1单克隆抗体的药物配制剂

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Publication number: CN109966487A
Application number: CN201711459584.9A
Authority: CN
Inventors: 姜伟东; 钟子洋; 韩冬梅; 方源
Original assignee: Shanghai Fugrand Hilink Biotechnology Ltd By Share Ltd; Shanghai Fu Hong Han Lin Bio Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Fugrand Hilink Biotechnology Ltd By Share Ltd; Shanghai Fu Hong Han Lin Bio Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2017-12-28
Filing date: 2017-12-28
Publication date: 2019-07-05
Anticipated expiration: 2037-12-28
Also published as: CN109966487B

Abstract

本发明提供了一种包含抗PD‑L1单克隆抗体的药物配制剂，所述药物配制剂包括：抗PD‑L1单克隆抗体、缓冲液、等渗调节剂、蛋白保护剂和表面活性剂等成分。本品经反复冻融，主要检测指标均无明显变化；本品在室温条件或低温及冷冻条件下存储一定时间，经检测表明，主要检测项均无明显变化，且所有检测结果均符合本品现行质量标准要求，表现出良好的稳定性。

Description

一种包含抗PD-L1单克隆抗体的药物配制剂

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种包含抗PD-L1单克隆抗体的药物配制剂。

背景技术

程序性死亡受体-配体1(PD-L1)是大小为40kDa的第一型跨膜蛋白，其受体程序性死亡受体-1(PD-1)是一种重要的免疫抑制分子，为CD28超家族成员。PD-1受体及其配体PD-L1/L2是重要的T细胞负向调控免疫检查位点，肿瘤表达PD-L1配体与T细胞表面的PD-1受体结合会抑制T细胞并阻断抗肿瘤免疫应答(江汇源，姜斌，刘峰等，肿瘤免疫检查点疗法的研究进展[J]，现代肿瘤医学，2017年03月，第25卷第06期)。免疫治疗中的PD-1/PD-L1抗体属于免疫检查点阻断药物，通过克服患者体内的免疫抑制，重新激活患者自身的T细胞来杀伤肿瘤，是一种全新的抗肿瘤治疗理念。临床研究证实，PD-L1表达于多种肿瘤细胞表面，包括黑色素瘤、非小细胞肺癌、头颈部肿瘤、结直肠癌、胃癌等(Luke JJ,Ott P.PD-1pathwayinhibitors:the next generation of immunotherapy for advanced melanoma[J].Oncotarget,2015,6(8):3479-3492.)。在肿瘤患者体内PD-1与PD-L1的结合可使肿瘤局部微环境的T细胞免疫杀伤作用降低，从而导致肿瘤细胞免疫逃逸，促进肿瘤生长(PatsoukisN,Brown J,Petkova V,et al.Selective effects of PD-1on Akt and Ras pathwaysregulate molecular components of the cell cycle and inhibit T cellproliferation[J].Sci Signal,2012,5(230):ra46.)肿瘤免疫疗法具有特异性强，起效慢，作用持久和副作用小等优点，被认为是治愈肿瘤的终极手段。

PD-L1蛋白主要表达于肿瘤细胞、抗原提呈细胞(APC)、活化T细胞、B细胞、巨噬细胞、心肌内皮和胸腺皮质上皮细胞。在许多人类肿瘤组织中均可检测到PD-L1蛋白的表达，癌组织较正常组织中的PD-L1表达水平明显上调。肿瘤细胞及肿瘤微环境中APCs表达的PD-L1可通过PD-1/PD-L1信号通路抑制抗肿瘤特异性T细胞的活化，诱导T细胞凋亡与耗竭，从而启动肿瘤免疫逃逸，有利于肿瘤的发生和生长(Smyth MJ,Ngiow SF,Ribas A,etal.Combination cancer immunotherapies tailored to the tumourmicroenvironment.Nat Rev Clin Oncol 2016Mar；13(3):143-58)。抗PD-L1单克隆抗体通过与PD-1竞争结合PD-L1的机制，阻止肿瘤细胞表面PD-L1与T细胞表面PD-1的相互识别，可以重启抗肿瘤T细胞的免疫杀伤作用，从而恢复免疫系统至正常状态，达到杀伤肿瘤的目的。

抗PD-L1抗体激活T细胞免疫应答，T细胞活化需要两种信号同时存在，首先肿瘤细胞表面抗原被APC提呈后形成抗原肽-主要组织相容性复合体复合物，被T细胞受体识别并结合，形成第一信号；同时，APC细胞上的粘附分子B7(配体)与T细胞表面的膜蛋白分子CD28相结合，形成第二信号。T细胞的活化完全依赖于该双信号的刺激。而APC细胞上同时也存在PD-L1分子，其为T细胞表面膜蛋白分子PD-1(为B7-CD28家族成员)的配体，与之结合后可激活负向调控信号通路，形成抑制T细胞活化的信号。因此，当抗PD-L1抗体与肿瘤细胞表面的PD-L1结合后，即可阻止PD-1与PD-L1结合的负向信号通路，阻断肿瘤免疫逃逸的识别，激活肿瘤特异性T细胞，从而增强免疫应答，恢复免疫系统的抗肿瘤活性。同时，有研究表明，PD-1/PD-L1抗体还可能通过激活浸润在肿瘤组织中的巨噬细胞，促使其吞噬消灭肿瘤细胞，显示出PD-L1抗体更广泛的肿瘤杀伤能力(Sydney R.Gordon,Roy L.Maute,Ben W.Dulken etal.PD-1expression by tumour-associated macrophages inhibits phagocytosis andtumour immunity.Nature,Published online 17May 2017)。国内尚无抗PD-L1单克隆抗体药物被批准上市，存在巨大的医疗需求。

蛋白质(单克隆抗体等)类药物制剂适合于非肠道给药，包括静脉内、肌肉内、腹膜内或皮下注射等给药方式。液体制剂中蛋白易形成聚体或颗粒，这一直是蛋白类药物制剂的一个难题。通常的药物制剂中，包含的蛋白质特别施单克隆抗体类药物，很难在储藏期内，保持良好的物理稳定性、化学稳定性和生物稳定性。因此，目前缺乏满足制药工业需求的稳定的蛋白制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种包含抗PD-L1单克隆抗体的药物配制剂。

本发明通过高通量筛选和配方优化研究，制备稳定的蛋白制剂。确定使用组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液体系。

筛选缓冲液体系，考察其对蛋白稳定性的影响。设计单因素试验，考察不同离子强度、蛋白质浓度、pH值以及稳定剂种类、表面活性剂种类、对蛋白稳定性的影响。

检测分析各配方产品，检测项目包括：外观、蛋白质浓度(A280)、渗透压、纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)、蛋白粒径以及PdI(DLS)以及亚可见颗粒数(Flowcam)。

最终得到本发明优选的药物配制剂，包括：抗PD-L1单克隆抗体、缓冲液、稳定剂和表面活性剂、以及可选地包含等渗调节剂等成分。

其中所述“药物配制剂”，为本领域常规药物配制剂，一般是指如下形式的制备物，使得允许活性组分的生物学活性有效，受试者适应性好，满足临床需求且不会引起不良反应，此类配制剂是无菌的。所述药物配制剂还可能包括药学可接受的赋形剂(媒介，添加剂)，药学可接受的赋形剂为那些可合理施用于受试哺乳动物以提供有效剂量的辅料组分。

所述药物配制剂的剂型为本领域常规剂型，较佳地包括注射用液体制剂或冻干制剂等等。所述注射用液体制剂较佳地包括皮下注射制剂、静脉注射制剂、腹腔给药制剂、肌肉注射制剂、静脉/皮下注射制剂或玻璃体注射制剂等。所述注射用液体制剂较佳地包括水针注射制剂、预充针注射制剂等，优选地为水针注射制剂，该水针注射制剂可以用于静脉注射。

其中所述抗PD-L1单克隆抗体为本领域常规抗PD-L1单克隆抗体，更佳地为重组的抗PD-L1全人单克隆抗体，所述抗PD-L1单克隆抗体的含量较佳地为5-50mg/mL，更佳地为8-30mg/mL，优选地为10.0mg/mL。

其中所述缓冲液为本领域常规缓冲液，一般是指，“缓冲液”指通过其酸-碱配合成分的作用来抵抗pH变化的缓冲溶液。较佳地，本发明所述缓冲液包括：枸橼酸-枸橼酸钠、组氨酸-盐酸组氨酸、醋酸-醋酸钠或枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液体系等中的一种；更佳地为枸橼酸-枸橼酸钠或组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液体系；最优选地为组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液体系。

其中，所述药物配制剂的pH值较佳地为：pH 5.0-6.5，更佳地为：pH 5.5～6.5优选地为：pH 5.8。

该缓冲液体系中，所述枸橼酸-枸橼酸钠的浓度较佳地为10-50mM，更佳地为15-30mM，优选地为20mM；所述组氨酸-盐酸组氨酸的浓度较佳地为5-50mM，更佳地为8-30mM，优选地为10mM；所述醋酸-醋酸钠的浓度较佳地为10-50mM，更佳地为15-30mM，优选地为20mM；所述枸橼酸-磷酸氢二钠的浓度较佳地为10-50mM，更佳地为15-30mM，优选地为20mM。

本发明配制剂中可以根据需要含有或不含有等渗条件剂，其中所述等渗调节剂为本领域常规等渗调节剂，较佳地为葡萄糖或氯化钠，更佳地为氯化钠。

其中所述蛋白保护剂为本领域常规蛋白保护剂，所述蛋白保护剂能够保护蛋白质药物的稳定性，并保护蛋白质药物的功能不受条件变化的影响(例如：冷冻、冻干或其他制备条件的变化)。蛋白保护剂较佳地包括：糖类、蛋白质、氨基酸、聚合物、盐、胺、表面活性剂等，更佳地包括：蔗糖、海藻糖、甘露醇、盐酸精氨酸或甘氨酸中的一种或多种；优选地为盐酸精氨酸。所述蛋白保护剂的含量较佳地为：10-300mM；更佳地为：50-200mM；优选地为：95mM。

其中所述表面活性剂为本领域常规表面活性作用剂，较佳地为非离子型表面活性剂。本文中的表面活性剂的例子较佳地包括：聚山梨酯(例如聚山梨20和聚山梨酯80)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；Triton；十二烷基硫酸钠(SDS)；月桂基硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基-，肉豆蔻基-，亚油基-，或硬脂酰基-磺基甜菜碱；月桂基-，肉豆蔻基-，亚油基-，或硬脂酰基-肌氨酸；亚油基-，肉豆蔻基，或鲸蜡基-甜菜碱；月桂酰氨基丙基-，椰油酰氨基丙基-，亚油酰氨基丙基-，肉豆蔻酰氨基丙基-，棕榈酰氨基丙基-，或异硬脂酰氨基丙基-甜菜碱(例如月桂酰氨基丙基)；肉豆蔻酰氨基丙基-，棕榈酰氨基丙基-，或异硬脂酰氨基丙基-二甲胺；甲基椰油基牛磺酸钠或甲基油基牛磺酸二钠；和MONAQUATTM系列(Mona Industries，Inc.，Paterson，N.J.)；聚乙二醇，聚丙二醇，及乙二醇和丙二醇共聚物(例如Pluronics，PF68等。其中，更佳地为聚山梨酯，优选地为聚山梨酯20。所述表面活性剂的含量较佳地为0.005％-0.05％，更佳地为0.01％-0.03％，优选地为0.02％。

基于单因素研究结果，确定了HLX20制剂处方，其组成为：10mmol/L组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系，pH值为5.8，2％盐酸精氨酸，0.02％吐温20。

制备成品，进行长期稳定性研究、加速稳定性研究和反复冻融稳定性研究，验证本发明制剂配方的稳定性。

本发明制备所得药物配制剂经过反复冻融，主要检测指标均无明显变化；本品在室温条件或低温及冷冻条件下存储一定时间，经检测表明，各项主要检测均无明显变化，较为稳定，且所有检测结果均符合本品现行质量标准要求，表现出良好的稳定性。

有益效果：本发明的重组抗PD-L1全人单克隆抗体的药物配制剂，很好地解决了蛋白稳定性问题，其在不高于-65℃的冷冻条件下以及2～8℃低温储存条件下，可以保证2年的效期。

附图说明

图1：HLX20制剂辅料筛选研究加速稳定性试验(40±2℃)外观比较图；

其中，图1(A)为0周结果，图1(B)为1周结果，图1(C)为2周结果，图1(D)为3周结果，图1(E)为4周结果。

图2：HLX20的轻链和重链的表达载体；

其中，(A)为1019AS-puro-PL2#3HC质粒图谱，含有重链，(B)为1019AS-puro-PL2#3LC质粒图谱，含有轻链。

具体实施方式

以下的实施例用于为本领域中的普通技术人员提供有关如何实施和使用本发明的完整披露和描述，并且这些例子并非意在对发明人所认为的发明范围进行限制，亦非意指下文的实验是被实施的全部实验而且是仅可实施的实验。

实验例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件，实施例中所用化学试剂均为分析纯试剂，其中组氨酸、一水合盐酸组氨酸等缓冲液体系组分购买自上海协和氨基酸有限公司，盐酸精氨酸等蛋白保护剂购买自天津天药药业股份有限公司，聚山梨酯20等表面活性剂购买自南京威尔化工有限公司，重组抗PD-L1全人单克隆抗体可以是按照目前已知任何的方法制备的单抗，以下示例性的抗体制备方法由上海复宏汉霖生物技术股份有限公司提供，该单克隆抗体的名称为：HLX20蛋白，该示例性方法并不限制本发明。

HLX20配方制剂产品的制备方法：

将除病毒过滤后的抗PD-L1单克隆抗体样品(HLX20蛋白)，使用超滤浓缩换液，根据缓冲液配方，计算需要补加的置换液，完成稀配，密度默认为1.0g/mL，该制剂的名称为：HLX20制剂。

将稀配后的药液经0.22μm除菌过滤器过滤后，无菌分装至20mL西林瓶中，加20mm氯化丁基橡胶塞，轧20mm铝塑组合盖。该配方制剂产品用于下文的，长期稳定性试验、加速稳定性试验以及单因素影响试验考察成品的稳定性，确定储存和运输条件。

实施例1HLX20抗体蛋白的制备

HLX20抗体蛋白的信息如下：

轻链基因序列

CAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCAATGTCAGCGGCCCCAGGACAGAGAGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCTACATTGAAAGTTCTTACGTCGGGTGGTACCAGCAACTCCCAGGAACAGCCCCCAGACTCCTCATTTATGACGATGATATGCGACCCTCAGGGATCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGCCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGAGATATGGCGGAGCGGCCTGGGAGGCGTCTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAAGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCACCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCCTGGAAGGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTACCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAAAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAGGACAGTGGCCCTTACAGAATGT(SEQ NO:1)

轻链氨基酸序列

QSVVTQPPSMSAAPGQRVTISCSGSSSYIESSYVGWYQQLPGTAPRLLIYDDDMRPSGIPDRFSGSKSGTSATLAITGLQTGDEADYYCEIWRSGLGGVFGGGTKLTVLSQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHKSYSCQVTHEGSTVERTVALTEC(SEQ NO:2)

重链基因序列

GAGGTTCAGCTGGTACAATCTGGGGGAGGCCTGGTCAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGTTATACTATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCTCATCCATTAGTAGTGGTAGTGATTACTTATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAAACGAACTACGGTGGTATCCACAAGCAGGTGCTTTTGATCGATGGGGCCAAGGGACAATGGTCACCGTCTCAAGCGCTAGCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACCGTGTCGTGGAACTCAGGCGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCTGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACCGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAAAGTGGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCATCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACGCCAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTACACCCTGCCCCCATCCCGGGAAGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACCTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAATGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTACAGCAAGCTCACCGTGGACAAGAGCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCAGGTAAA(SEQ NO:3)

重链氨基酸序列

EVQLVQSGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSSYTMNWVRQAPGKGLEWVSSISSGSDYLYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARNELRWYPQAGAFDRWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ NO:4)

1.1轻链及重链表达载体构建

构建过程中选用了适合CHO细胞的表达质粒1019AS-puro-SceI。该质粒具有遍在染色质开放表达元件(Ubiquitous Chromatin Opening Element，UCOE，由Millipore技术转让)，能开放染色质或使其保持开放状态，可以使目的基因在两种以上宿主细胞中表达。该质粒的其他元件还有：Promoter A(目的基因表达的启动子)、NgoMIV、SnaBI(酶切位点)、SV40pA early(多聚腺苷酰化信号序列)、mPGK(抗性基因启动子)、Puromycin(嘌呤霉素抗性基因)、C2pA(多聚腺苷酰化信号序列)、AmpR Promoter(氨苄抗性基因启动子)、Ampicilin(氨苄抗性基因)、ori(pMB1)(复制起点)、I-SceI位点(线性化酶切位点)。

PCR分别扩增轻链(PL2#3LC)和重链(PL2#3HC)基因，NgoMIV和SnaBI内切酶进行消化，分别与1019AS-puro-SceI载体连接，获得1019AS-puro-PL2#3LC和1019AS-puro-PL2#3HC质粒，如图2所示。

1.2生产用细胞株的构建

宿主细胞CHO-K1(Sigma-Aldrich，Cat#85051005)，复苏后进行两次传代培养，收集处于对数生长期的细胞，1000rpm离心5min后，PBS洗涤一次，用缓冲液R重悬至细胞密度为8.0×10⁷cells/mL。将12.5μg线性化重链表达载体DNA和轻链表达载体DNA(4.2μg1019AS-puro-PL2#3HC和8.3μg1019AS-puro-PL2#3LC)同时加入含有100μL重悬CHO-K1细胞的无菌离心管中，用移液器轻柔吹吸混合。

将线性化的重链及轻链表达载体DNA进行共转染：按照Neon电转染系统(Invitrogen，现Life Technology公司)操作说明书，设定各参数(脉冲电压为1700V，脉冲幅度为20ms，脉冲次数为1)，电穿孔转染。电转后立刻将细胞移入含有2mL 37℃预热培养基(CD-CHO培养基+4mmol/L谷氨酰胺)的六孔培养板中，轻微晃动混匀细胞，放入37℃、5％CO2培养箱培养。转染2天后，细胞密度为3.01×10⁶cells/mL，细胞活率为79.6％，使用HPLC方法对上清液进行抗体浓度检测，检测结果显示抗体浓度为27μg/mL。

1.3细胞株的培养和产物收集

将所得细胞克隆接种到0.5L反应器，生长培养基为400mL的HM004(购买自IrvineScientific)，接种密度为8.0×10⁵cells/mL，补料方式为：第二天补加4.0mmol/L的谷氨酰胺，第3、5、7、9、11天补加5％的HF001(购买自HyClone)；pH超过6.9±0.1时调整pH，在细胞密度达到8.0×10⁶时补加1mmol/L的丁酸钠并降低温度为33℃。每天检测抗体表达量、细胞活率、细胞密度等。为了保证在0.5L反应器中的数据有较好重复性，使用相同条件对这3个亚克隆进行重复实验。在0.5L反应器中，48-7-4克隆表现出最高的表达量和细胞活率。结合初步细胞株稳定性结果，我们选择48-7-4克隆作为生产细胞株。3个细胞亚克隆(27-3-1，48-7-4和82-9-6)接种到0.5L反应器，生长培养基为400mL的HM004，接种密度为8.0×10⁵cells/mL，补料方式为：第二天补加4.0mmol/L的谷氨酰胺，第3、5、7、9、11天补加5％的HF001；pH超过6.9±0.1时调整pH，在细胞密度达到8.0×10⁶时(一般在第4天)补加1mmol/L的丁酸钠并降低温度为33℃。每天检测抗体表达量、细胞活率、细胞密度等，当细胞活率低于50％时停止培养，并收集细胞培养液。

1.4抗体的分离纯化和鉴定

利用常规的ProeinA亲和层析、阳离子交换层析等方法，对细胞培养液进行纯化，得到产物。利用Protein A亲和色谱法进一步分析产物，方法如下所述：流动相A为0.01mol/L盐酸+0.0027mol/L氯化钾+0.137mol/L氯化钠，pH 7.4，流动相B为12mmol/L盐酸+0.15mol/L氯化钠，pH 2.0～3.0，色谱柱为PA ImmunoSensor Cartridge(2.1mmD×30mmL)，柱温为室温，流速为2mL/min，进样量为20μL，稀释被检测样品，使其浓度落在标准曲线的线性范围内。

采用ELISA法检测产物的IgG含量，方法如下所述：30μL羊抗人Fd抗体(2.0μg/mL)包被96孔高亲和力板(Costar，货号3690)，4℃保存备用。使用时，PBST(PBS+0.05％聚山梨酯20)洗板2次，每孔加50μL 5％脱脂牛奶封闭1h。封闭结束时，PBST再次洗板2次，每孔加入30μL梯度稀释的标准品(IgG)、供试品(每个样品分别进行20倍和400倍稀释)，室温孵育1h；PBST再次洗板4次，每孔加入30μL羊Fab抗人Kappa-HRP(1:8000)，室温孵育1h；PBST洗板4次，每孔加入30μLTMB显色底物，室温孵育5min，显色，后加入30μL的2mol/L硫酸以终止反应，酶标仪450nm波长下读取吸光值，分析产物浓度。

实施例2：缓冲体系的筛选

2.1缓冲液的首轮筛选：

通过高通量筛选方法初步筛选出有助于蛋白稳定的潜在缓冲体系类型及pH值范围。该轮筛选选择枸橼酸-枸橼酸钠、组氨酸-盐酸组氨酸、醋酸-醋酸钠以及枸橼酸-磷酸氢二钠4种常用的缓冲体系类型，共18种制剂缓冲液(以下分别称为B1～B18)。其中B1～B6为20m mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲体系，pH值分别为4.8、5.0、5.5、6.0、6.5及7.0，以下简称为C48、C50、C55、C60、C65以及C70。B7～B10为20m mol/L组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系，pH值分别为5.0、5.5、6.0以及6.5，以下简称为H50、H55、H60以及H65；B11～B14为20m mol/L醋酸-醋酸钠缓冲体系，pH值分别为5.0、5.5、6.0以及6.5，以下简称为A50、A55、A60以及A65；B15～B18为20m mol/L枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲体系，pH值为5.0、5.5、6.0以及6.5，简称为CP50、CP55、CP60以及CP65。首轮研究的蛋白药物浓度暂定为1.0mg/m L。HLX20高通量缓冲体系筛选研究备选缓冲液信息见表1。

表1.HLX20制剂高通量缓冲体系筛选研究备选缓冲液信息

取实施例1的蛋白产物，制备成表1处方，放置于恒温摇床中，40±2℃、200rpm条件下振摇3天，于第0、3天分别取样，检测分析。检测项目包括浊度(A350)、分子异构体(SEC-HPLC)以及蛋白平均粒径和PdI(DLS)。HLX20制剂高通量筛选研究考察条件详见表2。

表2.HLX20制剂高通量筛选研究考察条件

表3.HLX20制剂高通量筛选研究(40±2℃，200rpm)数据汇总

从表3结果可以看出，0天时各缓冲体系平均粒径为11.34～21.97nm，PdI为0.005～0.631。40±2℃、200rpm条件下振摇3天后各样品的平均粒径和PdI均有不同程度增加，平均粒径增加至11.56～26.82nm，PdI则变化为0.034～0.556。由上述结果可知，当缓冲液pH值低于5.0或高于7.0时，蛋白粒径显著增加，呈多分散性，粒度分布不均一，说明非特异性蛋白聚体显著增加。因此，4组缓冲体系结果均显示有利于蛋白稳定的pH值范围为5.5～6.5，当pH值为5.5时，蛋白稳定性最好。

虽然首轮研究显示在有助于蛋白稳定的pH范围内(5.5～6.5)，4种缓冲体系类型无显著差异，但是醋酸体系容易挥发，且pKa为4.8，在5.5～6.5的pH范围内缓冲能力较弱；枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲体系中磷酸氢二钠在冷冻过程中容易导致pH值下降，故下一轮研究，对于上述两种缓冲体系，我们仅选择稳定性较好的pH值(A55及CP55)作为对照缓冲体系。而枸橼酸-枸橼酸钠、组氨酸-盐酸组氨酸这两种常用的缓冲体系，pH值的筛选范围则固定为5.5～6.5。

2.2第二轮筛选

首轮制剂研究通过高通量筛选方法初步筛选出有助于蛋白稳定的候选缓冲液类型及pH值范围。在此基础上，本轮研究通过高温加速试验，采用完整的理化分析手段进一步确定HLX20缓冲体系。

根据首轮研究的结果，本轮研究共选择8种缓冲液(以下分别称为B′1～B′8)，目标蛋白浓度为10.0mg/mL。其中B′1～B′3为20m mol/L枸橼酸-枸橼酸钠缓冲体系，pH值为5.5、6.0及6.5，分别简称为C55、C60以及C65；B′4～B′6为20m mol/L组氨酸-组氨酸盐酸缓冲体系，pH值为5.5、6.0及6.5，分别简称为H50、H55以及H60；B′7和B′8为对照缓冲体系，分别为20m mol/L醋酸-醋酸钠和20m mol/L枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲体系，pH值均为5.5，分别简称为A55以及CP55。HLX20制剂缓冲体系筛选研究备选缓冲液信息如表4所示。

表4.HLX20制剂缓冲体系筛选研究备选缓冲液组成

取实施例1蛋白产物制备成表4处方。在生物安全柜内采用0.22μm一次性无菌过滤器过滤样品，然后无菌分装至2mL西林瓶中，加13mm胶塞，轧13mm铝塑组合盖。将分装后样品放置于40±2℃恒温药用保存箱内正置4周，于第0、1、2和4周分别取样，检测分析，检测项目包括外观、浓度(A280)、浊度(A350)、pH值、Tm值(DSC)、分子异构体(SEC-HPLC、SDS-PAGE)、蛋白粒径和PdI(DLS)、电荷异构体(CEX-HPLC)等。HLX20制剂缓冲体系筛选研究考察条件见表5。

表5.HLX20制剂缓冲体系筛选研究考察条件

如表6和表7所示，0周时所有备选缓冲液外观均为无色微乳光液体，无明显可见异物；浓度在9.0～11.0mg/mL范围内；浊度为0.017～0.027；SEC主峰含量约为93.2％～93.6％，聚体含量为1.7％～2.0％，片段含量为4.6％～4.9％；CEX主峰含量为38.2％～39.5％，酸性峰含量为23.6％～24.8％，碱性峰含量为36.1％～37.6％。基础理化检测结果显示，0周时各缓冲体系无明显差别。

由表6可知，在40±2℃的加速条件下放置4周后，蛋白浓度以及pH值与0周对比，无明显变化。但是在加速条件下放置1周后，C60、C65以及H65产生了肉眼可见的絮状颗粒，且随着放置时间增加，颗粒数明显增多；4周后，除C55无颗粒外，其余缓冲体系均有肉眼可见的蛋白颗粒物，并且浊度明显增加。外观和浊度结果显示组氨酸缓冲体系明显优于枸橼酸体系，且可见颗粒数随着pH的升高而增加。

在40±2℃的加速条件下放置4周后，各缓冲液SEC主峰含量不同程度下降(下降范围：9.1％～56.8％)，片段含量显著增加(增加范围：8.3％～57.2％)，而聚体含量变化较小(增加范围：0.1％～1.0％)(见表7)。SEC显示的各样品纯度变化趋势与SDS-PAGE结果一致。由SDS-PAGE电泳结果及SEC纯度趋势可知组氨酸体系稳定性最好，且pH值越高，SEC主峰含量越高，片段含量越低，但聚体含量随pH值的升高而升高。根据分子异构体含量，各缓冲体系优劣排序为H65>H60>C65>C60>A55>H55>CP55>C55。

根据表7CEX数据，40±2℃加速条件下放置4周，各缓冲体系主峰含量降低12.1％～24.9％，酸性峰含量增加18.4％～45.1％，碱性峰降低5.3％～18.0％。根据上述结果，各缓冲体系优劣排序为H60、H65>C65>C60、A55、H55>C55、CP55。

由表7可知，0周时各缓冲液的蛋白粒径和PdI分别在14.17～21.39nm及0.062～0.184范围内，蛋白PdI随pH的升高而增大，呈多分散性，蛋白颗粒不均一，说明pH越高越容易产生聚体。

根据表6，B1～B8缓冲液初始变性温度(Tm onset)为41.6～57.1℃，组氨酸缓冲体系的热稳定性优于枸橼酸缓冲体系，Tm onset随pH值的升高而略有升高，说明在pH 5.5～6.5范围内，pH值越高，蛋白结构热稳定性越好，构象越稳定。

表6.HLX20制剂缓冲体系筛选研究加速稳定性试验(40±2℃)基本理化性质数据汇总表

表7.HLX20缓冲体系筛选研究加速稳定性试验(40±2℃)纯度和颗粒数据汇总表

综上所述，根据HLX20缓冲体系筛选研究40±2℃加速稳定性试验结果，组氨酸缓冲体系稳定性较好，虽然pH值为6.5时，SEC主峰含量最高，降解片段最少，但是高pH值容易形成聚体，蛋白颗粒不均一，并且外观方面出现了严重的颗粒问题，外观及可见异物为制剂筛选时首要参考指标，故我们选择20mmol/L pH 6.0的组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系(H60)进行下一轮的研究。

实施例3 HLX20制剂配方筛选研究和结果

本轮研究通过单因素试验设计筛选辅料体系，考察不同离子强度、蛋白质浓度、pH值以及稳定剂种类、表面活性剂种类对蛋白稳定性的影响。我们选择了pH6.0的组氨酸-盐酸组氨酸体系，作为本产品的备选缓冲体系。共设计12个备选处方(以下分别称为F1～F12)，其中F12为对照处方，缓冲体系为此前研究筛选出的20mmol/L组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系，pH值为6.0，含有0.3％氯化钠，3％蔗糖以及0.02％吐温80。备选处方中离子强度分别为10mmol/L以及20mmol/L，考察不同离子强度对蛋白稳定性影响；单因素设计备选处方F6及F7，蛋白浓度分别为10mg/ml及20mg/ml，确定目标蛋白浓度；单因素设计备选F1、F6及F11，pH值分别5.8、6.0以及6.2，确定目标pH值及范围；单因素设计备选处方F2及F3(3％和5％蔗糖)，F4和F6(3％及5％海藻糖)，F8、F9及F10(3％甘露醇、1％甘氨酸以及100mmol/L(2％)盐酸精氨酸)，F5及F6(0.02％吐温20及0.02％吐温80)，确定有助于蛋白稳定的辅料种类及含量。本材料中辅料浓度百分比均指代质量体积比(w/v)。HLX20辅料筛选研究备选处方信息见表8。

表8.HLX20制剂筛选研究备选处方组成

制备方法：生物安全柜内采用0.22μm一次性无菌过滤器过滤样品，无菌分装至2mL西林瓶中，加13mm胶塞，轧13mm铝塑组合盖。将分装后样品放置于40±2℃的恒温药用保存箱内正置4周。于第0、1、2、3、4周分别取样，检测分析，检测项包括外观、蛋白质浓度(A280)、渗透压、纯度(SEC-HPLC、CEX-HPLC)、蛋白粒径以及PdI(DLS)以及亚可见颗粒数(Flowcam)。所得结果如图1和表9所示。图1为HLX20制剂辅料筛选研究加速稳定性试验(40±2℃)外观结果，其中，图1(A)为0周结果图，图1(B)为1周结果图，图1(C)为2周结果图，图1(D)为3周结果图，图1(E)为4周结果图。

表9.HLX20制剂辅料筛选研究加速稳定性试验(40±2℃)数据汇总表

通过制剂处方开发，我们筛选出了有助于HLX20蛋白稳定的缓冲体系和辅料，确定了HLX20制剂处方组成为：10mmol/L组氨酸-盐酸组氨酸缓冲体系，pH值为5.8，2％盐酸精氨酸，0.02％吐温20。

实施例4 HLX20制剂成品长期稳定性研究

根据实施例1所述内容，制备获得三批HLX20制剂成品(名称为：L20170101、L20170302、L20170303)，置于≤-60℃的超低温冰箱中36个月，目前完成至6个月的时间点。分别在0、3个月和6个月的时间点取样，进行外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、细菌内毒素、渗透压摩尔浓度、pH和cIEF的检测，考察成品在长期保存条件下与0时数据比较的变化情况，为药物配制剂的有效期确定提供依据。所得结果汇总如表10所示。

表10.成品长期稳定性研究结果(≤-60℃)

表10的结果表明，三批成品(L20170101、L20170302、L20170303)在≤-60℃条件下保存6个月时，外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS(还原型)、CE-SDS(非还原型)、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、渗透压摩尔浓度、细菌内毒素、pH和cIEF等检项均无明显变化，各检测结果未因时间推移而呈现趋势，较为稳定，且均符合本品现行质量标准草案要求。成品长期稳定性已有的结果显示，成品在≤-60℃保存条件下，具有良好的稳定趋势。

实施例5HLX20制剂成品加速稳定性研究

取HLX20制剂三批成品(L20170101、L20170302、L20170303)，置于5±3℃的药品保存箱中6个月，在0、2周(0.5个月)、1个月、2个月和3个月的时间点分别取样，目前完成至3个月的时间点。分别在0、2周(0.5个月)、1个月、2个月和3个月的时间点取样，进行外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、细菌内毒素、pH、渗透压摩尔浓度和cIEF等项目的检测，考察成品在5±3℃加速条件下与0时数据相比的变化情况，所得结果数据汇总如表11所示。

表11.成品加速稳定性研究结果(5±3℃)

结果表明，三批成品(L20170101、L20170302、L20170303)在5±3℃条件下保存3个月，外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS(还原型)、CE-SDS(非还原型)、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、细菌内毒素、pH、渗透压摩尔浓度和cIEF均未见明显变化趋势，检测结果未因时间推移而呈现趋势，其他项目检测结果也无明显变化，均符合本品现行质量标准草案要求。

三批成品(L20170101、L20170302、L20170303)在≤-60℃条件下保存6个月，外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS(还原型)、CE-SDS(非还原型)、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、渗透压摩尔浓度、细菌内毒素、pH和cIEF等检项检测结果未因时间推移而呈现趋势，较为稳定，也均符合本品现行质量标准草案要求，表现出良好的稳定趋势。三批成品在5±3℃的加速条件下，各项检测在3个月时均无明显变化，具有良好的稳定趋势。成品加速稳定性试验仍在进行中。

综上，成品在≤-60℃的长期保存条件下和在5±3℃的加速保存条件下，试验结果均表现出一致且良好的稳定性。

实施例6HLX20制剂成品反复冻融稳定性研究

取本品一批代表性成品(L20170303)，置于≤-60℃超低温冰箱中冻存至少24h，置于室温复融作为1次冻融。分别冻融1、3、5次后取样，进行外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、细菌内毒素、渗透压摩尔浓度、pH、cIEF和不溶性微粒的检测，并与冻融前的数据比较，提供反复冻融对本品质量影响的数据信息，所得结果如表12所示。

表12.成品反复冻融稳定性研究结果

结果表明，本品成品(L20170303)反复冻融5次，仅SEC所测单体含量有小幅度下降，其他各项检测指标均无明显变化，且所有检测结果均符合本品成品现行质量标准草案的要求。此结果表明，成品经小于等于5次的反复冻融后，稳定性不受影响。因此本品可承受5次以内的反复冻融。

实施例7 HLX20制剂成品室温稳定性研究

取本品一批代表性成品(L20170303)，置于25±2℃、湿度60％±5％恒温恒湿箱中，在0、第1天、第4天和第7天取样。分别进行外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、细菌内毒素、渗透压摩尔浓度、pH、cIEF和不溶性微粒的检测，考察样品在加速条件下与0时数据相比的变化情况，所得结果如表13所示。

表13.成品室温稳定性研究结果(25±2℃)

结果表明，本发明所得HLX制剂成品(L20170303)在25±3℃条件下保存7天，外观、可见异物、蛋白质含量、SEC、CE-SDS(还原型)、CE-SDS(非还原型)、CEX、PD-1/PD-L1活性抑制能力、细菌内毒素、pH、渗透压摩尔浓度、cIEF和不溶性微粒均未见明显变化趋势，检测结果未因时间推移而呈现趋势，其他项目检测结果也无明显变化，均符合本品现行质量标准草案要求，表明HLX制剂成品在25±2℃条件下可至少放置7天。

应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 上海复宏汉霖生物制药有限公司

上海复宏汉霖生物技术股份有限公司

<120> 一种包含抗PD-L1单克隆抗体的药物配制剂

<130> SH1903-17P121829

<160> 4

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 642

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 轻链基因序列

<400> 1

cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcaatg tcagcggccc caggacagag agtcaccatc 60

tcctgctctg gaagcagctc ctacattgaa agttcttacg tcgggtggta ccagcaactc 120

ccaggaacag cccccagact cctcatttat gacgatgata tgcgaccctc agggatccct 180

gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tggccatcac cggactccag 240

actggggacg aggccgatta ttactgcgag atatggcgga gcggcctggg aggcgtcttc 300

ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaagt cagcccaagg ctgccccctc ggtcactctg 360

ttcccaccct cctctgagga gcttcaagcc aacaaggcca cactggtgtg tctcataagt 420

gacttctacc cgggagccgt gacagtggcc tggaaggcag atagcagccc cgtcaaggcg 480

ggagtggaga ccaccacacc ctccaaacaa agcaacaaca agtacgcggc cagcagctac 540

ctgagcctga cgcctgagca gtggaagtcc cacaaaagct acagctgcca ggtcacgcat 600

gaagggagca ccgtggagag gacagtggcc cttacagaat gt 642

<210> 2

<211> 214

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 轻链氨基酸序列

<400> 2

Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Tyr Ile Glu Ser Ser

20 25 30

Tyr Val Gly Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Arg Leu Leu

35 40 45

Ile Tyr Asp Asp Asp Met Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln

65 70 75 80

Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Glu Ile Trp Arg Ser Gly Leu

85 90 95

Gly Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro

100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu

115 120 125

Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro

130 135 140

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala

145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala

165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Lys

180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Arg Thr

195 200 205

Val Ala Leu Thr Glu Cys

210

<210> 3

<211> 1359

<212> DNA

<213> Artificial

<220>

<223> 重链基因序列

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cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840

ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900

cagtacgcca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960

aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020

accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080

cgggaagaga tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140

agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200

cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260

agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320

cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccaggtaaa 1359

<210> 4

<211> 453

<212> PRT

<213> Artificial

<220>

<223> 重链氨基酸序列

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Gly Ser Asp Tyr Leu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asn Glu Leu Arg Trp Tyr Pro Gln Ala Gly Ala Phe Asp Arg

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu

225 230 235 240

Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

245 250 255

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

260 265 270

Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

275 280 285

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser

290 295 300

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

305 310 315 320

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala

325 330 335

Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

340 345 350

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

355 360 365

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

370 375 380

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

385 390 395 400

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu

405 410 415

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420 425 430

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

435 440 445

Leu Ser Pro Gly Lys

450

Claims

1.一种包含抗PD-L1单克隆抗体的药物配制剂，其特征在于，所述药物配制剂包括：抗PD-L1单克隆抗体、缓冲液、蛋白保护剂和表面活性剂；并且可选地包含等渗调节剂；其中：

所述缓冲液选自枸橼酸-枸橼酸钠缓冲液、组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液和枸橼酸-磷酸氢二钠缓冲液中的一种或多种；

所述蛋白保护剂选自蔗糖、海藻糖、甘氨酸、甘露醇和盐酸精氨酸中的一种或多种；

所述表面活性剂选自聚山梨酯和泊洛沙姆中的一种或二种；

所述等渗调节剂选自氯化钠和葡萄糖中的一种或二种。

2.如权利要求1所述的药物配制剂，其特征在于，所述缓冲液为组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液，其浓度为10-30mM。

3.如权利要求2所述的药物配制剂，其特征在于，所述缓冲液为组氨酸-盐酸组氨酸，其浓度为10mM。

4.如权利要求1所述的药物配制剂，其特征在于，所述蛋白保护剂为盐酸精氨酸，其含量为50-200mM。

5.如权利要求1所述的药物配制剂，其特征在于，所述表面活性剂为聚山梨酯20，所述聚山梨酯20的含量为体积比0.01％-0.05％。

6.如权利要求5所述的药物配制剂，其特征在于，所述聚山梨酯20的含量为体积比0.01％-0.03％。

7.如权利要求1所述的药物配制剂，其特征在于，所述药物配制剂的pH值为5.0-6.5。

8.如权利要求1所述的药物配制剂，其特征在于，所述抗PD-L1单克隆抗体的蛋白浓度在5-50mg/ml。

9.如权利要求1～8任一项所述的药物配制剂，其特征在于，所述配制剂含有：10mmol/L组氨酸-盐酸组氨酸缓冲液，质量百分比为2％的盐酸精氨酸，体积百分比为0.02％的吐温20，pH5.8。

10.如权利要求1～9任一项所述的药物配制剂，其特征在于，所述配制剂为注射用液体制剂或冻干制剂。