CN109925283B - 一种替莫唑胺药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物制剂领域，涉及一种替莫唑胺的药物组合物及其制备方法，所述药物组合物的制备方法为：(a)称取甘露醇、聚山梨酯80、枸橼酸及其钠盐置容器中；(b)加入水，搅拌溶解；(c)用pH调节剂调节药液pH值；(d)加入替莫唑胺，搅拌使之溶解，可选地用pH调节剂调节药液pH值；(e)除菌过滤，灌装，冷冻干燥。与现有市售制剂相比，本发明的替莫唑胺药物组合物的特点是工艺过程简便，复溶速度快，有关物质少，质量稳定，适合工业化生产。

Description

一种替莫唑胺药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于药品领域，涉及一种包含抗肿瘤药替莫唑胺药物组合物及其制备方法。

背景技术

替莫唑胺(temozolomide)化学名：3,4-二氢-3-甲基-4-氧代咪唑并[5,1-d]-1,2,3,5-四嗪-8-酰胺，属于烷化剂类药物，是一种新型的二代烷化剂咪唑四嗪类衍生物，化学结构式如下：

本品具有较宽的抗肿瘤谱、可口服、易于透过血脑屏障、安全、与其它药物没有叠加毒性、可用于对亚硝基脲耐药的患者，目前认为DNA甲基化和错配修复失败是替莫唑胺细胞毒性的主要作用机制。替莫唑胺由先灵葆雅公司开发，于1998年在欧盟首先上市，随后1999年经FDA批准在美国上市。主要用于治疗：(1)新诊断的多形性胶质母细胞瘤，开始先与放疗联合治疗，随后作为辅助治疗；(2)常规治疗后复发或进展的多形性胶质母细胞瘤或间变性星形细胞瘤。

国内上市的替莫唑胺制剂为胶囊，口服制剂存在恶心、呕吐等副作用，易导致药物吸收不全；注射剂型具有剂量准确，起效快等特点，且适用于不便口服的患者。因此，开发替莫唑胺可注射用的药物组合物非常有必要。但是替莫唑胺在pH<7下稳定，pH>7时易分解，在中性和碱性pH值时可迅速水解为活性5-(3-甲基三嗪-1-基)咪唑-4-酰胺(MTIC)，在碱性条件下水解反应甚至更快。因此将替莫唑胺制备成为常规的静脉注射液不能保证长期稳定性，因此考虑将其通过冷冻干燥固化而制备成为冻干药物组合物，使用前用注射用的稀释剂复溶，得到替莫唑胺注射剂，对改善替莫唑胺的稳定性是一个良好的突破。

目前公开的文献报道对替莫唑胺注射用药物组合物的研究主要有以下几个方面：

1.美国专利US6251886中公开了一种以微粒化的悬浮液给药的替莫唑胺注射剂，但是该悬浮制剂并不理想，它可以导致血管堵塞。

2.美国专利US6987108(中国同族专利CN1635871A)公开了一种替莫唑胺冻干粉针剂，该制剂含有替莫唑胺，以及至少一种足以溶解替莫唑胺的增溶剂，所述增溶剂是脲、L-组氨酸、L-苏氨酸、L-天冬酰胺酸、L-丝氨酸、L-谷氨酰胺或它们的混合物。该冻干制剂方法缩短了替莫唑胺的溶解时间，一定程度上减少了主药的降解，增加了替莫唑胺溶液的稳定性。

3.中国专利CN101984968A中公开了一种替莫唑胺冻干粉剂，该制剂包含替莫唑胺以及至少一种足以实质上溶解所述替莫唑胺的增溶剂，所述增溶剂是硫脲、L-精氨酸、L-甘氨酸、L-丙氨酸、L-酪氨酸等。该冻干制剂制备方法中精氨酸自身pH为10.5～12.0，试验中需要加入大量的pH调节剂来调节药液值，在生产中可操作性不强，很难实现工业化生产。

鉴于现有的替莫唑胺冻干药物组合物存在上述缺点，本发明对药物组合物的处方和制备工艺进行了更深一步的研究和改进。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，通过处方筛选、制备工艺研究，确定替莫唑胺药物组合物的处方和制备工艺，并对注射用替莫唑胺药物组合物的质量进行考察，最终制备出了一种水溶性的、质量稳定的替莫唑胺药物组合物，该组合物成型性良好，冻干前溶液外观澄明，冻干品复溶性好，复溶后的澄明度好，杂质含量低，水分含量低，稳定性好，质量可控，适合工业化大生产。

为此，本发明第一方面提供了一种药物组合物，由替莫唑胺、枸橼酸及其钠盐、聚山梨酯80、甘露醇、渗透压调节物质、pH调节剂组成。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，渗透压调节物质优选为氯化钠。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，所述替莫唑胺与枸橼酸及其钠盐的质量比为1：(2～5)，优选地为1：(2.8～4.3)；所述替莫唑胺与聚山梨酯80的质量比为1：(1～2)，优选地为1：(1.1～1.4)；所述替莫唑胺与甘露醇的质量比为1：(4～9)，优选地为1：(5～7)。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，所述pH调节剂为盐酸和/或氢氧化钠。所述药物组合物溶于水中，替莫唑胺的浓度为2.5mg/mL时，溶液pH为2.0～6.0，优选为2.5～4.5，最优选为3.0～4.0。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其是冷冻干燥的药物组合物。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，其是冷冻干燥的可用于注射的粉针剂。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，通过润湿剂聚山梨酯80的加入，改善了替莫唑胺因为水难溶性，难以被水润湿溶解的特点，增加了替莫唑胺的溶解速率，减少了整个溶液的配制时间，减少了替莫唑胺受热降解的时间，从而减少了替莫唑胺的降解。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，通过填充剂甘露醇的加入，保证了替莫唑胺冻干粉针剂最后的成形性，并且有赋形剂的保护支撑作用，使替莫唑胺冻干粉针剂重建为适宜患者给药的制剂的时间，大大减少。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，通过缓冲剂和pH调节剂的加入，保证了替莫唑胺在溶液状态时在一个比较低的pH环境和一定的缓冲体系中，降低了其的降解速率。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，通过渗透压调节剂氯化钠的加入，保证了替莫唑胺注射液临床使用的安全性，提高了本品的渗透压，使其接近人体的渗透压。

根据本发明第一方面任一实施方案的药物组合物，通过枸橼酸的加入，令人惊喜的得到了既稳定又在和加速条件下不发生颜色变化的替莫唑胺冻干粉针剂，得到的替莫唑胺冻干粉针剂保持白色疏松状的冻干粉外观。

进一步地，本发明第二方面提供了替莫唑胺组合物的制备方法，包括下列步骤：

(a)称取甘露醇、聚山梨酯80、枸橼酸钠、枸橼酸及其钠盐置容器中；

(b)加入水，搅拌溶解；

(c)用pH调节剂调节药液pH值；

(d)加入替莫唑胺，搅拌使之溶解，可选地用pH调节剂调节药液pH值；

(e)除菌过滤，灌装，冷冻干燥；

步骤(d)中加入替莫唑胺之前或之后，补加水至药液配液总体积；

在步骤(a)或步骤(b)或步骤(c)或步骤(d)中加入渗透压调节物质，优选的在步骤(a)中加入渗透压调节物质。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(a)不采用活性炭过滤。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(a)对原辅料细菌内毒素及无菌进行控制，采用注射级辅料。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(b)中水的加入量为药液配液总体积的70～95％，优选的为90％。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(c)中调节pH至2.0至6.0，优选2.5至4.5，最优选在3.0至4.0的范围内。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(d)中加入替莫唑胺控制药液pH至2.0至6.0，优选2.5至4.5，最优选在3.0至4.0的范围内。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(d)中控制药液的温度在0～40℃之间，优选15～25℃。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(e)中采用尼龙膜进行过滤除菌。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(e)中药液温度在冷冻干燥前控制在0～40℃之间，优选15～25℃，最优选15℃。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(e)冻干后产品不采用惰性气体储存。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，其中步骤(e)冷冻干燥主要包括两个阶段：

预冻阶段：灌装后药液进箱后，调节导热油温度至-50～-35℃时，保温2～4小时；

干燥阶段：设定导热油温度在1.5小时内升温至-2～2℃，保温64～80小时；然后设定导热油温度在1小时内升温至13～17℃，保温18～24小时；最后设定导热油温度在1小时内升温至32～38℃，保温6～12小时；干燥保温结束后，压塞，出箱。

根据本发明第二方面任一实施方案的方法，适当的控制温度，可以增加替莫唑胺的溶解速度，并降低其降解，保证了溶液在放置过程中保持稳定。

本发明的制剂解决了冻干制剂溶解速度慢、复溶性差、操作繁琐、溶液澄清度不合格的缺点，具有如下技术效果：

1)本发明的制剂，复溶性好，冻干制剂加水稍许振摇(1分钟之内)，固体即全部溶解为澄清无色；该制剂经稳定性考察试验，本品有关物质、含量及PH均未见明显变化，质量稳定；

2)本发明采用冷冻干燥技术制备得到的替莫唑胺冻干粉针剂，增加了替莫唑胺的稳定性，而在临用前使用水性稀释剂重建，稳定性好，副作用小，能够实现非胃肠道给药，满足了那些难以口服给药病人了需要且给药前无需服用止吐药，使病人容易接受，方便了临床用药。

3)针对替莫唑胺的特点及替莫唑胺药物组合物处方的特点，对替莫唑胺冻干粉剂的制备工艺进行了大量的研究，提供的制备工艺简单、方便可行、重复性好，很容易实现工业化大生产，并且冻干时间短，节约人力，可以产生可观的经济和社会效益。

具体实施方式

下面通过实施例和实验例来进一步说明本发明。应该正确理解的是：本发明的实施例、实验例中的方法仅仅是用于说明本发明而给出，而不以任何方式限制本发明的范围。所以，在本发明的方法前提下对本发明所作的任何修改、等同替换、简单改进均属本发明要求保护的范围。

实验例1替莫唑胺冻干粉针剂的渗透压研究

本品临床使用时直接用注射用水复溶后静脉滴注，因此要求其复溶药液的渗透压等于或接近人体的渗透压。为了方便临床使用，保证产品的安全性，试验中在处方中加入渗透压调节剂氯化钠。参考实施例1的处方配制两份溶液，一份含有氯化钠，一份不含氯化钠，对两份药液的渗透压分别进行测定并在室温下进行稳定性考察，结果见表1。

表1渗透压研究结果

由结果可知，不含有氯化钠的处方药液渗透压约为200.6mOsmol，为低渗溶液，在处方中加入NaCl时，其渗透压为286.3mOsmol，达到等渗，添加氯化钠的药液与未添加氯化钠的药液在室温条件下放置8小时药液一直为无色澄清溶液，渗透压无明显变化，有关物质略微增加，两种溶液稳定性无明显差异。本发明在处方中加入氯化钠，以保证临床用药的安全。

实验例2pH值的确定

参考实施例1的处方配制浓度为2.5mg/ml的替莫唑胺溶液，其完全溶解后药液pH值约在5.30左右，使用盐酸溶液调节溶液pH至一定值，测定有关物质。对既定处方考察了pH2.0、pH3.0、pH3.7及pH4.5溶液在温度(15℃以下)环境下放置，于0、4、6、8、14h取样有关物质的变化情况。结果见表2。

表2替莫唑胺溶液pH的选择

结果表明，替莫唑胺溶液在pH2.0～4.5范围内较稳定。

实验例3配液温度的确定

替莫唑胺溶液在低温和酸性条件下稳定性良好，而在碱性或高温条件下不稳定，因此参考实施例1的处方，对酸性条件下不同温度的药液稳定性进行考察。主要包括对pH值、有关物质及主药溶解时间等指标进行考察，考察温度包括40℃、25℃及15℃，实验结果见表3。

表3溶液稳定性试验结果

由试验结果可知，随着放置时间的延长，40℃配制药液有关物质增长明显，而25℃、15℃配制药液有关物质增长较慢，且15℃配制的药液稳定性较好；主药溶解时间上可以得出温度越高主药溶解时间越快，15℃配制时主药溶解时间最长。因此，确认配制温度控制在25℃以下，放置温度控制在15℃以下，保证在大生产时主药能够较快的溶解，且溶液在放置过程中保持稳定。

实验例4脱炭工艺的考察

注射剂在配制时通常加入0.01％～0.5％的针用活性炭，活性炭具有吸附热原、杂质和色素的作用，并可以作助滤剂，但活性炭在吸附热原、杂质和色素的同时也会吸附主药，所以在注射剂配制过程中时要注意活性炭对主药含量的影响。参考实施例1的处方，在药液中加入0.05％、0.1％、0.3％(W/V)的活性炭，搅拌15分钟和30分钟后进行吸附过滤，考察药液的性状、pH值、含量及细菌内毒素，结果见表4。

表4活性炭用量对药液影响考察结果

结果表明，采用不同用量活性炭，药液在搅拌15分钟或30分钟脱炭工艺处理后，外观及pH值无明显变化，但溶液含量明显下降，并且随活性炭用量的增大，含量降低更显著，说明活性炭对主药具有较强的吸附作用，因此工艺中确定不采用脱炭工艺。

实验例5滤膜的选择

注射用替莫唑胺配制过程中采用注射用水作为溶剂，溶液配制pH在3.0-4.5范围内，因此无菌过滤用的滤膜应采用亲水性的膜片。本实验考察由PALL公司生产的亲水性聚醚砜膜、尼龙膜及亲水性氟化物膜对替莫唑胺处方溶液的影响，确定工艺中无菌过滤使用的膜片，具体结果见表5。

表5不同滤膜过滤前后替莫唑胺药液及滤膜的变化情况

结果表明，采用尼龙膜过滤后溶液的相对含量、浸泡24小时后溶液有关物质均优于其他材质滤膜，与药液相容性最佳，因此本制剂在生产中药液过滤时确定采用常用的尼龙材质滤器。

实验例6冻干工艺参数的确定

本品在进行冻干工艺研究时设计3种冻干工艺，对制品的各项指标考察。结果见表6。

表6冻干工艺的比较

由结果可知，冻干曲线三制备的注射用替莫唑胺质量最佳。优选的冻干工艺为：制品-50～-35℃，预冻2～4h；导热油升温至-2～2℃，约64～80小时；导热油升温至13～17℃，约18～24小时；最终制品32～38℃，保温6～12h出箱。

实验例7充氮工艺考察

实施例1的样品，在冻干结束后，向箱体充入经无菌过滤氮气，再压紧胶塞，之后样品出箱扎盖。通过对充氮产品与不充氮产品进行40℃条件下影响因素试验，结果见表7。

表7充氮与不充氮的注射用替莫唑胺样品放置稳定性

由结果得知，注射用替莫唑胺的充氮与不充氮样品40℃放置10天后，充氮产品与不充氮产品的pH值、含量无明显差异，充氮样品的质量并不优于不充氮样品。

实验例8替莫唑胺冻干粉针剂工艺放大生产结果

以实施例1的生产工艺，进行了放大样品生产，制备样品3批，替莫唑胺冻干粉针剂生产结果及样品检验结果分别见表8。

表8注射用替莫唑胺3批生产结果

结论：在经过验证的车间生产的注射用替莫唑胺3批样品，工艺稳定，质量可控，药品的安全性能有效地得到保障。

实验例9考察实施例1、对比例1～2的制备过程中替莫唑胺的溶解速度，配制过程 中溶液的稳定性

依照实施例1、对比例1～2的冻干制剂制备方法，观察替莫唑胺冻干制剂的外观，在溶液配制过程中考察替莫唑胺固体的溶解速度、PH变化，通过高效液相色谱法(HPLC)来测定冻干制剂复溶后在室温放置14小时后(参照市售制剂说明书中的规定，14小时内完成滴注)的有关物质和澄清度变化情况。

研究结果如表9所示：

表9实施例1、对比例1～2的制备过程中替莫唑胺的性状、溶解速度、冻干前后PH变化以及配制过程中溶液的稳定性对比

结论：从以上研究结果可知，本发明的替莫唑胺冻干制剂(实施例1)的制备过程中，加入的枸橼酸可有效的加快替莫唑胺在溶液中的溶解速度，减少配制时间和溶液的存储时间，降低了主成分替莫唑胺的降解，有关物质较小；另外本发明所配制的溶液在放置过程中明显比现有技术(对照例1、2)的溶液稳定性好，澄清度好，有关物质低，这对放大生产是相当有利的，因为批量生产时由于批量大，往往配制的溶液需要较长的时间才能灌装完毕，本制备工艺解决了制备灌装过程中析晶和澄清度不合格的问题。

实验例10考察(自研制剂)实施例1与(市售制剂)对比例1的稳定性

根据以上确定的处方工艺制备的样品与市售制剂处方制备一批样品，同时进行影响因素考察，试验结果见表10。

表10市售处方制剂与自研制剂的比较

由表10可以看出，经过10天的影响因素考察，本发明制剂的外观、PH值、溶液颜色和澄清度、可见异物均符合规定，无明显变化。在光照条件下，自研制剂相关物质检测结果与市售处方制剂检测结果基本一致，40℃与60℃条件下自研制剂处方明显优于市售处方制剂。

实施例1：制备替莫唑胺冻干粉针剂

处方：

制备工艺：

称取处方量的甘露醇、聚山梨酯80、枸橼酸钠、枸橼酸和氯化钠，先将各辅料置无菌容器中，加入约处方量90％的注射用水，搅拌溶解后，用浓盐酸调节药液pH值至3.0～4.0之间，加注射用水至全量，搅拌均匀后，再加入处方量的替莫唑胺，搅拌使之溶解，控制药液pH值为3.0～4.0，继续对药液温度进行控制，将其温度降至15℃左右，尼龙膜过滤，分装，冷冻干燥，得到替莫唑胺冻干粉针剂。

实施例2

处方：

制备工艺：

替莫唑胺冻干粉制备方法同实施例1。

实施例3

处方：

制备工艺：

替莫唑胺冻干粉制备方法同实施例1。

实施例4

处方：

制备工艺：

替莫唑胺冻干粉制备方法同实施例1。

实施例5

处方：

制备工艺：

替莫唑胺冻干粉制备方法同实施例1。

对比例1：制备注射用替莫唑胺冻干制剂(原研市售制剂，参照专利CN03804363.7 公开的制备方法)

处方：

制备方法：

称取处方量的L-苏氨酸、聚山梨酯80、甘露醇、枸橼酸钠、盐酸，按顺序搅拌加入80％注射用水中，搅拌约5分钟后，固体全部溶解澄清，加入处方量的替莫唑胺，搅拌直至固体全部溶解澄清，加注射用水使批料达到最终的体积，搅拌混合均匀，经0.22μm的过滤器消毒过滤，溶液放置8小时，再次通过0.22μm微孔滤膜除菌过滤，将溶液分装于西林瓶中，放入冻干箱，冷冻干燥形成一种冻干制剂。

对比例2：制备注射用替莫唑胺冻干制剂(参照中国专利CN201010526612.6方法制 备)

Claims (12)

1.一种制备替莫唑胺药物组合物的方法，所述药物组合物由替莫唑胺、枸橼酸及其钠盐、聚山梨酯80、甘露醇、渗透压调节物质、pH调节剂组成；pH调节剂为盐酸和/或氢氧化钠；所述药物组合物是冷冻干燥的组合物；替莫唑胺与枸橼酸及其钠盐的质量比为1：(2.8～4.3)；替莫唑胺与聚山梨酯80的质量比为1：(1～2)；替莫唑胺与甘露醇的质量比为1：(4～9)；所述药物组合物溶于水中，替莫唑胺的浓度为2.5mg/mL时，溶液pH为3.0～4.0；

包括下列步骤：

(a)称取甘露醇、聚山梨酯80、枸橼酸及其钠盐置容器中；

(b)加入水，搅拌溶解；

(c)用pH调节剂调节药液pH值；

(d)加入替莫唑胺，搅拌使之溶解，可选地用pH调节剂调节药液pH值；

(e)除菌过滤，灌装，冷冻干燥；

步骤(d)中加入替莫唑胺之前或之后，补加水至药液配液总体积；

在步骤(a)或步骤(b)或步骤(c)或步骤(d)中加入渗透压调节物质。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述药物组合物是冷冻干燥的可用于注射的粉针剂。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，渗透压调节物质为氯化钠。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，替莫唑胺与聚山梨酯80的质量比为1：(1.1～1.4)。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，替莫唑胺与甘露醇的质量比为1：(5～7)。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)中水的加入量为药液配液总体积的70～95％。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(c)中调节pH至3.0至4.0的范围内。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(d)中调节pH至3.0至4.0的范围内。

9.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(d)中药液温度控制在15～25℃。

10.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(e)中采用尼龙膜进行过滤除菌。

11.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(e)中药液温度在冷冻干燥前控制在15～25℃。

12.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤(e)中药液温度在冷冻干燥前控制在15℃。