CN109924339B - 一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法 - Google Patents
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:S1、以鱼肉为原料制备鱼肌原纤维蛋白溶液;S2、以8~16g、浓度为35~100mg/ml的鱼肉肌原纤维蛋白为基准,添加30μmol~220μmol的儿茶素混合;S3、添加多酚氧化酶;S4、冷藏静置,得半成品;S5、采用一段式水浴加热,得凝胶;S6、经冷却平衡得到具有较高凝胶强度的鱼肌原纤维蛋白胶制品,本发明提供的方法适于工业化生产,能起到有效改善鱼肌原纤维蛋白凝胶强度的作用。
Description
技术领域
本发明属于水产品深加工技术领域,具体涉及一种增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的生产方法,尤其涉及一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法。
背景技术
肌原纤维蛋白凝胶特性(Myofibrillar protein gel properties)是形成肉制品独特的质构、保水性、乳化性以及感官特性的决定性因素。肌原纤维蛋白质是肌肉中一类重要的结构蛋白质群,它对于肉食制品的品质和特性具有非常重要的影响,直接影响蛋白的感官性质(肉制品的弹性、多汁性、口感等)。肌原纤维蛋白凝胶特性差会导致产品的品质、感官性质等不稳定,从而影响产品质量及产品货架期等。因此,提高肉制品肌原纤维蛋白的凝胶强度是改善肉制品品质的关键。
儿茶素(Catechin)是从茶叶等天然植物中提取出来的一类酚类活性物质。儿茶素相对分子质量为290.28,其具有抗肿瘤、抗氧化、抗病菌以及保护心脑器官等多种作用,儿茶素具有明显的酚的特性,能使重金属和蛋白质沉淀。多酚氧化酶(PPO)是一类含铜的氧化还原酶,多酚氧化酶可以催化多酚氧化为醌。
发明内容
本发明的目的是提供一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合的方法,以提高鱼肌原纤维蛋白凝胶强度。
本发明提供了一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取鱼肉,制备鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取步骤S1所述鱼肌原纤维蛋白溶液添加儿茶素混匀,得混合物;其中,每8~16g、浓度为35~100mg/ml的鱼肌原纤维蛋白溶液添加30μmol~220μmol的儿茶素;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,30~50℃静置1~5h,得混合物2;以步骤S2所述肌原纤维蛋白溶液的添加量为基准,每8~16g、浓度为35~100mg/ml的肌原纤维蛋白溶液添加多酚氧化酶1000U~10000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2冷藏静置,分装,得半成品;其中,所述分装为将冷藏静置后的混合物2分装成小份,是否进行分装,并不影响所得鱼肌原纤维蛋白胶制品的凝胶特性;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于40~100℃加热5~30min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶冷却平衡,得鱼肌原纤维蛋白胶制品。
优选方式下,步骤S1所述鱼肉为罗非鱼肉;所述制备鱼肌原纤维蛋白溶液具体为:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀1;
S12:将步骤S11所得沉淀1按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀2;
S13:将步骤S12所得沉淀2按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀3;
S14:将步骤S13所得沉淀3按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀4;
S15:将步骤S14所得沉淀4按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀5;
S16:将步骤S15所得沉淀5按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白;用25mM磷酸盐缓冲液将肌原纤维蛋白稀释成肌原纤维蛋白溶液;其中,所述肌原纤维蛋白浓度采用双缩脲法进行测定,称取0.3g肌原纤维蛋白加入4.7mL的水溶解,吸取1mL肌原纤维蛋白溶液,加入4mL双缩脲试剂后,剧烈摇匀,放在架上静置30分钟,然后用紫外分光光度计测吸光值,波长在540nm处。然后根据标准曲线求出肌原纤维蛋白的质量浓度。优选方式下,步骤S16所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6mol NaCl。
优选方式下,步骤S2所述儿茶素以儿茶素溶液的形式添加,所述儿茶素溶液为儿茶素的水溶液;所述儿茶素溶液的浓度为80~220μmol/mL。
优选方式下,步骤S3所述多酚氧化酶以固体粉末的形式添加。
优选方式下,步骤S4所述冷藏静置具体为:4℃,静置12~20h。
优选方式下,步骤S6所述冷却平衡具体为:0℃静置10~50min,然后置于20~30℃静置1~4h。
优选方式下,所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,制备成浓度为100mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取16g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液,添加1ml浓度为220μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,50℃静置5h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是10000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置20h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于100℃加热5min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却10min,然后置于20℃放置1h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀1;
S12:将步骤S11所得沉淀1按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀2;
S13:将步骤S12所得沉淀2按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀3;
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S15:将步骤S14所得沉淀4按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀5;
S16:将步骤S15所得沉淀5按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白;用25mM磷酸盐缓冲液将肌原纤维蛋白稀释成鱼肌原纤维蛋白溶液,所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6mol NaCl。
本发明的有益效果:
1、本发明通过儿茶素与多酚氧化酶结合的方法,有效的提高了鱼肌原纤维蛋白的凝胶强度。同时采用加入多酚氧化酶的方法可以更好的保持制品的色泽、原有风味和营养成分,并提高其食品功能性,对食用的安全性影响较小。经该方法处理得到的鱼肌原纤维蛋白的凝胶强度可提高40%~70%,且工艺简单易行,便于工业化生产。
2、本发明是在多次反复实验的基础上得出的,所述儿茶素和多酚氧化酶的添加量能够显著影响所得鱼肌原纤维蛋白胶制品的凝胶特性和品质。
附图说明
图1为基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的工艺流程图。
具体实施方式
以下结合附图和实施例,对本发明的具体实施方式进行更加详细的说明,以便能够更好地理解本发明的方案以及其各个方面的优点。然而,以下描述的具体实施方式和实施例仅是说明的目的,而不是对本发明的限制。
本发明提供了一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法。包括以下步骤:
步骤1,包括原料的预处理,将罗非鱼采肉,打浆,提取肌原纤维蛋白,制备鱼肌原纤维蛋白溶液。
步骤2,所述每8~16g鱼肉肌原纤维蛋白溶液浓度为35~100mg/ml,添加30μmol~220μmol的儿茶素溶液后继续匀浆混合。
步骤3,所述鱼肉肌原纤维蛋白加入多酚氧化酶30~50℃静置1~5h,多酚氧化酶的添加量是1000U~10000U。
步骤4,所述肌原纤维蛋白经4℃静置12-20h。
步骤5,将肌原纤维蛋白分装到容器中。
步骤6,所述制成样品进行水浴加热,加热温度40-100℃,加热时间5-30min。
步骤7,所述热处理后的样品立即放入冰浴中保存10-50min,20-30℃下平衡1-4h后进行凝胶强度检测。
步骤8,凝胶强度测定中,将平衡后的胶制品,采用TA.XT.Plus物性测试仪直接测定其破断力和破断距离。测定条件:直径为5mm的P5s球形探头,测试速度1mm/s,位移10mm。凝胶强度(g·cm)=破断力(g)×破断距离(cm)。
实施例1
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备35mg/ml罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取8g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.375ml浓度为80μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,30℃静置1h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是1000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置14h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于80℃加热8min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却40min,并27℃下静置平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为罗非鱼肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将罗非鱼肌原纤维蛋白稀释成浓度为35mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液。
将本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为0.83cm,凝胶强度为173.06g·cm。与对比例1相比较,本实施例所得肌原纤维蛋白胶制品的凝胶强度可提升31.296%。
实施例2
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为45mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取10g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.7ml浓度为100μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,35℃静置2h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是3000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置15h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于40℃加热30min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却50min,并25℃下静置平衡4h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为45mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶制品破断距离为0.99cm,凝胶强度为218.19g·cm。与对比例2相比较,本实施例所得肌原纤维蛋白胶制品的凝胶强度可提升41.614%。
实施例3
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为55mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取12g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.86ml浓度为150μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,40℃静置3h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是5000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置18h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于65℃加热25min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却35min,并28℃下静置平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为55mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶制品破断距离为1.13cm,凝胶强度为273.21g·cm。与对比例3相比较,本实施例所得肌原纤维蛋白胶制品的凝胶强度可提升51.146%。
实施例4
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为65mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取14g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.9ml浓度为200μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,45℃静置4h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是7000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置12h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于50℃加热12min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却20min,并30℃下平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述提罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为65mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为1.15cm,凝胶强度为287.71g·cm。与对比例4相比较,本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品的凝胶强度可提升70.004%。
实施例5
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,制备浓度为100mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取16g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加1ml浓度为220μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,50℃静置5h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是10000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置20h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于100℃加热5min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却10min,并20℃下平衡1h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为100mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为1.44cm,凝胶强度为374.95g·cm。与对比例5相比较,本实施例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品的凝胶强度可提升58.540%。
对比例1:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为35mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取8g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.375ml浓度为80μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、冷藏静置:将步骤S2所述混合物,4℃冷藏静置14h,分装,得半成品;
S4、热处理:将步骤S3所述半成品置于80℃加热8min,得凝胶;
S5、冷却平衡:将步骤S4所述凝胶0℃冷却40min,并27℃下平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为35mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本对比例所得鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为0.70cm,凝胶强度为131.81g·cm。
对比例2:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为45mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取10g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液,添加0.7ml浓度为100μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、冷藏静置:将步骤S2所述混合物,4℃冷藏静置15h,分装,得半成品;
S4、热处理:将步骤S4所述半成品置于40℃加热30min,得凝胶;
S5、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却50min,并25℃下平衡4h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为45mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本对比例所得鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为0.83cm,凝胶强度为154.07g·cm。
对比例3:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为55mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取12g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.86ml浓度为150μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、冷藏静置:将步骤S2所述混合物,4℃冷藏静置18h,分装,得半成品;
S4、热处理:将步骤S3所述半成品置于65℃加热25min,得凝胶;
S5、冷却平衡:将步骤S4所述凝胶0℃冷却35min,并28℃下平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品。
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为55mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本对比例所得鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为0.99cm,凝胶强度为180.76g·cm。
对比例4:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为65mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取14g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.9ml浓度为200μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、冷藏静置:将步骤S2所述混合物,4℃冷藏静置12h,分装,得半成品;
S4、热处理:将步骤S3所述半成品置于50℃加热12min,得凝胶;
S5、冷却平衡:将步骤S4所述凝胶0℃冷却20min,并30℃下平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为65mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本对比例所得鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为1.13cm,凝胶强度为169.23g·cm。
对比例5:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为100mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取16g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加1ml浓度为220μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、冷藏静置:将步骤S2所述混合物,4℃冷藏静置20h,分装,得半成品;
S4、热处理:将步骤S3所述半成品置于100℃加热5min,得凝胶;
S5、冷却平衡:将步骤S4所述凝胶0℃冷却10min,并20℃下平衡1h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后离心,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为100mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本对比例所得鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为1.31cm,凝胶强度为236.50g·cm。
对比例6:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备35mg/ml罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取8g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加0.3ml浓度为80μmol/mL的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,30℃静置1h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是1000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置14h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于80℃加热8min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却40min,并27℃下静置平衡2h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为35mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
将本对比例所得罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为0.63cm,凝胶强度为122.79g·cm。与实施例1相比较,凝胶强度较低。
对比例7:
一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强罗非鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,提取罗非鱼肌原纤维蛋白,制备浓度为100mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取16g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液添加1.5ml浓度为220μmol/ml的儿茶素溶液后匀浆混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,50℃静置5h,得混合物2;所述多酚氧化酶的添加量是10000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃冷藏静置20h,分装,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于100℃加热5min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却10min,并20℃下平衡1h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例在鱼肉加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S12:将步骤S11所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S13:将步骤S12所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S14:将步骤S13所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S15:将步骤S14所得沉淀按料液比1:3(重量:体积,g/ml)加入0.1M NaCl,8000rpm条件下匀浆1min,8000g条件下离心15min,取沉淀;
S16:将步骤S15所得沉淀按照料液比1:3(重量:体积,g/ml)的比例加入0.1MNaCl,过80目两层纱布后所得液体在8000g条件下离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白,用25mM磷酸盐缓冲液(含0.6mol NaCl)将肌原纤维蛋白稀释成浓度为100mg/ml的肌原纤维蛋白溶液。
本对比例所得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品进行凝胶强度检测,罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品破断距离为1.44cm,凝胶强度为375.22g·cm。与实施例5相比较凝胶强度没有显著提高,且颜色较深。
将实施例与对比例制备的罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品的凝胶特性进行比较,所得结果如表1所示:
表1 罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品凝胶特性
最后应说明的是:显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之中。
Claims (7)
1.一种基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取鱼肉,制备鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取步骤S1所述鱼肌原纤维蛋白溶液,添加儿茶素混合,得混合物;其中,每8~16g、浓度为35~100mg/ml的鱼肌原纤维蛋白溶液添加30μmol~220μmol的儿茶素;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入多酚氧化酶,30~50℃静置1~5h,得混合物2;以步骤S2所述鱼肌原纤维蛋白溶液的添加量为基准,每8~16g、浓度为35~100mg/ml的鱼肌原纤维蛋白溶液添加多酚氧化酶1000U~10000U;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2冷藏静置,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于40~100℃加热5~30min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶冷却平衡,得鱼肌原纤维蛋白胶制品;具体为:0℃静置10~50min,然后置于20~30℃静置1~4h。
2.根据权利要求1所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,步骤S1所述鱼肉为罗非鱼肉。
3.根据权利要求1所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,步骤S1所述制备鱼肌原纤维蛋白溶液,包括步骤:
S11:取鱼肉,按照料液比1:3g/ml加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g离心15min,取沉淀1;
S12:将步骤S11所述沉淀1按料液比1:3g/ml加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g离心15min,取沉淀2;
S13:将步骤S12所述沉淀2按料液比1:3g/ml加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g条件下离心15min,取沉淀3;
S14:将步骤S13所述沉淀3按料液比1:3g/ml加入0.1M NaCl,8000rpm匀浆1min,8000g离心15min,取沉淀4;
S15:将步骤S14所述沉淀4按料液比1:3g/ml加入0.1M NaCl,8000rpm匀浆1min,8000g离心15min,取沉淀5;
S16:将步骤S15所述沉淀5按料液比1:3g/ml加入0.1M NaCl,过80目两层纱布,所得液体在8000g离心15min,所得沉淀即为肌原纤维蛋白;用25mM磷酸盐缓冲液将肌原纤维蛋白稀释成鱼肌原纤维蛋白溶液。
4.根据权利要求3所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,步骤S16所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6mol NaCl。
5.根据权利要求1所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,步骤S2所述儿茶素以儿茶素溶液的形式添加,所述儿茶素溶液浓度为80~220μmol/mL。
6.根据权利要求1所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,步骤S4所述冷藏静置具体为:4℃,静置12~20h。
7.根据权利要求1所述基于儿茶素与多酚氧化酶结合增强鱼肌原纤维蛋白凝胶特性的方法,其特征在于,包括步骤:
S1、提取肌原纤维蛋白:取罗非鱼肉,制备成浓度为100mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;
S2、混合:取16g步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液,添加1ml浓度为220μmol/mL的儿茶素溶液后混合,得混合物;
S3、加酶:向步骤S2所述混合物中加入10000U多酚氧化酶,50℃静置5h,得混合物2;
S4、冷藏静置:将步骤S3所述混合物2,4℃静置20h,得半成品;
S5、热处理:将步骤S4所述半成品置于100℃加热5min,得凝胶;
S6、冷却平衡:将步骤S5所述凝胶0℃冷却10min,然后置于20℃放置1h,得罗非鱼肌原纤维蛋白胶制品;
其中步骤S1所述罗非鱼肌原纤维蛋白溶液的制备方法,包括步骤:
S11:取罗非鱼肉按照料液比1:3g/ml加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g离心15min,取沉淀1;
S12:将步骤S11所述沉淀1按料液比1:3g/ml加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g离心15min,取沉淀2;
S13:将步骤S12所述沉淀2按料液比1:3g/ml加入50mM、pH6.0的磷酸盐缓冲液,8000rpm匀浆2min,8000g离心15min,取沉淀3;
S14:将步骤S13所述沉淀3按料液比1:3g/ml加入0.1M NaCl,8000rpm匀浆1min,8000g离心15min,取沉淀4;
S15:将步骤S14所述沉淀4按料液比1:3g/ml加入0.1M NaCl,8000rpm匀浆1min,8000g离心15min,取沉淀5;
S16:将步骤S15所述沉淀5按照料液比1:3g/ml加入0.1M NaCl,过80目两层纱布,所得液体在8000g离心15min,所得沉淀即为罗非鱼肌原纤维蛋白;用25mM磷酸盐缓冲液将所述罗非鱼肌原纤维蛋白稀释成浓度为100mg/ml的罗非鱼肌原纤维蛋白溶液;其中,所述25mM磷酸盐缓冲液中含有0.6molNaCl。
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