CN109916898A - 一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及临床体外诊断试剂技术领域，特别涉及一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法。该干化学试剂片依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，其它组分选自辅助底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种。本发明所述干化学试剂片制备的方法，检测结果准确性高，精密度好，特异性好，稳定性好，保存期长，操作简便，适用范围广，无需专业人才等优点很好的补充了湿化学法的不足之处，其测定准确度和精密度已经接近湿化学测定方法，在临床快速检测领域提供了极大的便利。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外诊断试剂技术领域，特别涉及一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法。
背景技术
随着人民生活水平的日益提高，人们越来越关注自身健康安全，离不开医疗临床分析检验，这些以化学分析和生化分析方法的检测从以前的手工实验的方法正在朝着全自动分析仪器自动分析检测和现场检测发展，极大地方便了分析操作人员的工作负担。分析检验按分析试剂类型可以分为液体试剂和干化学试剂两种方法。采用湿化学方法有足够的准确度和精密度，但需昂贵的仪器和专业技术人才，并且操作繁琐、不能快速测定出结果，不适合现场检验；而干化学试剂以其操作简便、测定快速、灵活以及无需专业人才等优点很好的补充了湿化学法的不足之处，其测定准确度和精密度已经接近湿化学测定方法，提供了极大的便利。“干化学”是与传统的“湿化学”相对比较而言的。它是以被检测样品中的液体作为反应媒介，待测物直接与固化于载体上的干粉试剂反应的一种方式。它与传统湿化学的最大区别就在于参与化学反应的媒介不同。随着生物化学中酶的分离、提纯存储等技术的发展，传感器、光度计的进步，以及计算机应用的普及，干化学技术在近20年里得到了长足的进步。
比色方法的干化学试剂片发展较早，从开始的一层结构发展而来二层结构、三层结构和现在最新的多层结构。
一层到三层结构干化学试剂片均是由滤纸、纤维素片、多孔胶膜等一类片层物质预先固定全部试剂，两层和三层经过堆叠、粘合、冲压等处理结合。这种结构只能对待测成分进行定性或半定量测定，而且测量线性范围不大，遇到有使用药物情况下会干扰实验结果。有许多分析测试中的试剂不能预先混合，而且复杂测试液需要预处理，这就限制了干化学试剂片应用领域。
多层结构即干化学的多层膜试剂载体。以强生公司和富士公司为代表的多层膜干片法，利用感光胶片的涂层技术将试剂层、辅助试剂层、光漫射层和分布层等试剂涂布在透明支持层上，从支持层的反面测定光密度的变化。上述干化学试剂片虽能定量检测，但分布层或扩散层需用到有机试剂，对材料设备要求高，生产工艺复杂，并且对制备人员健康危害极大，污染环境。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法。该干化学试剂片可现场快速检测，用于定量分析，重复性好。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种干化学试剂片，依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；
试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，其它组分选自底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种；
显色层中的试剂包括色原和亲水性胶体。
作为优选，缓冲体系为Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS缓冲液、MOPSO缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在5.0～10.0；
激活剂为氯化钠、氯化镁、硫酸镁、醋酸钡、氯化钾、亚铁氰化钾或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠中的一种或几种；
生物酶为过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、尿酸酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸激酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、肌酐胺基水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、肌酐酶、尿素酶和碳酸酐酶中的一种或几种；
表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。
底物为三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、L-天门冬氨酸钠、磷酸肌酸、甘油、丙酮酸中的一种或几种。
辅酶为焦磷酸硫胺素、NAD+、NADP+、五磷酸吡哆醛、磷酸吡哆胺、维生素H、维生素B7、乙酰辅酶A中的一种或几种。
作为优选，螯合剂为EDTA、EGTA、磷酸三钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠；
作为优选，保护剂为蔗糖、海藻糖、甘露醇，牛血清白蛋白；
作为优选，稳定剂为聚乙二醇-6000、聚乙二醇-20000、环糊精、水溶性淀粉。
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠中的一种或多种。
作为优选，显色层中的试剂还包括表面活性剂。
作为优选，显色层中的试剂还包括表面活性剂和生物酶。
作为优选，扩散层包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂和颗粒物质。
本发明采用亲水性高分子聚合物与颗粒物质作为扩散层，已达到即能使叠层不可分割成为一个整体，实现快速准确的定量分析检测，提高检测精确度、灵敏度，又简化制备过程。
作为优选，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
作为优选，扩散层还包括缓冲体系、生物酶、底物、辅酶中的一种或几种。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
(1)操作过程简单，试剂无需配制，直接滴加样本检测。
(2)试剂层干燥无水分，试剂片稳定性良好。
(3)扩散层具有过滤功能，溶血、黄疸和脂浊样本对测定结果没有明显干扰。
(4)检测结果重复性好、准确性高，可进行定量检测，线性范围宽。
(5)制备过程简便，易操作，危害性、污染性小。
实验表明，本发明所述干化学试剂片制备的方法，检测结果准确性高，精密度好，特异性好，稳定性好，保存期长，操作简便，适用范围广，无需专业人才等优点很好的补充了湿化学法的不足之处，其测定准确度和精密度已经接近湿化学测定方法，在临床快速检测领域提供了极大的便利。
具体实施方式
本发明公开了一种用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
(一)定量测定葡萄糖浓度的干化学试剂片
本发明提供了一种定量测定葡萄糖浓度的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、激活剂、螯合剂和稳定剂；各组分用量为：
显色层中的试剂包括色原、亲水性胶体和表面活性剂。
作为优选，试剂层中，缓冲体系为MOPS或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～7.5；激活剂为氯化钠；螯合剂为EDTA；稳定剂为聚乙二醇-6000。作为优选，缓冲体系的pH值在7.1～7.3。
作为优选，试剂层中各组分用量为：
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，显色层中色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种或多种，显色层中各组分用量为：
色原 0.6～30mmol/m2；
亲水性胶体 10～100g/m2；
表面活性剂 0.1～5g/m2。
优选地，显色层中色原由4-氨基安替比林和3,5-二氯羟基苯磺酸钠组成，显色层中表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚，显色层中各组分用量为：
更优选地，显色层中各组分用量为：
作为优选，扩散层由亲水性高分子聚合物、表面活性剂和颗粒物质组成；扩散层中各组分用量为：
亲水性高分子聚合物 15～25g/m2；
表面活性剂 0.1～5g/m2；
颗粒物质 200～300g/m2。
作为优选，扩散层中，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
作为优选，支持层为聚对苯二甲酸乙二醇酯的聚合物，其厚度为50～300微米。
作为优选，支持层的表面经过紫外照射、电晕或涂覆底层处理。
本发明还提供了该干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
将显色液试剂、反应液试剂依次涂覆在支持层上，然后将扩散液试剂喷涂在支持层上，干燥，得到依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层的干化学试剂片。
作为优选，支持层的表面经过紫外照射、电晕或涂覆底层处理。
作为优选，显色层和试剂层的涂覆方法包含流平、挂流、滚粘、涂布等方式制备，作为优选，制备方式为涂布。
(二)定量测定甘油三酯浓度的干化学试剂片
本发明提供了一种定量测定甘油三酯浓度的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；所述试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、过氧化物酶、三磷酸腺苷、螯合剂、激活剂、表面活性剂；各组分用量为：
所述显色层中的试剂包括色原、亲水性胶体和表面活性剂。
作为优选，试剂层中，缓冲体系为Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～7.5；螯合剂为EDTA；激活剂为硫酸镁；表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。作为优选，缓冲体系的pH值在7.1～7.3。
作为优选，试剂层中各组分用量为：
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，显色层中色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种或多种，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。
作为优选，显色层中各组分用量为：
亲水性胶体 10～100g/m2；
表面活性剂 0.1～5g/m2；
色原 0.1～20mmol/m2。
优选地，显色层中色原由4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠组成，显色层中表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚，显色层中各组分用量为：
更优选地，显色层中各组分用量为：
作为优选，扩散层由缓冲体系、亲水性高分子聚合物、脂蛋白酯酶、表面活性剂、颗粒物质组成；扩散层中各组分用量为：
作为优选，扩散层中，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；亲水性高分子聚合物具有多孔结构，可以过滤掉样本中的干扰物质。
作为优选，表面活性剂为3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐；颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
本发明还提供了该干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
将显色液试剂、反应液试剂依次涂覆在支持层上，然后将扩散液试剂喷涂在支持层上，干燥，得到依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层的干化学试剂片。
(三)定量测定尿酸浓度的干化学试剂片
本发明提供了一种定量测定尿酸浓度的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；所述试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、尿酸酶、过氧化物酶、螯合剂、激活剂；各组分用量为：
所述显色层中的试剂包括色原、亲水性胶体和表面活性剂。
作为优选，试剂层中，缓冲体系为Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS或磷酸盐缓冲液，pH值在7.5～8.0；螯合剂为EDTA；激活剂为亚铁氰化钾，缓冲体系的pH值在7.5～7.7。
作为优选，试剂层中各组分用量为：
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，显色层中色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种或多种。作为优选，显色层中表面活性剂选自聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。
作为优选，显色层中各组分用量为：
亲水性胶体 10～200g/m2；
表面活性剂 0.1～5g/m2；
色原 0.5～30mmol/m2。
优选地，显色层中色原由4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠组成，显色层中表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚，显色层中各组分用量为：
更优选地，显色层中各组分用量为：
作为优选，扩散层由亲水性高分子聚合物、表面活性剂、颗粒物质组成；扩散层中各组分用量为：
亲水性高分子聚合物 10～100g/m2；
表面活性剂 0.1～5g/m2；
颗粒物质 10～400g/m2。
作为优选，扩散层中，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；作为优选，颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
本发明还提供了该干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
将显色液试剂、反应液试剂依次涂覆在支持层上，然后将扩散液试剂喷涂在支持层上，干燥，得到依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层的干化学试剂片。
(四)定量测定丙氨酸氨基转移酶活性的干化学试剂片
本发明提供了一种定量测定丙氨酸氨基转移酶活性的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、丙酮酸氧化酶、过氧化物酶、焦磷酸硫胺素、螯合剂、激活剂1、激活剂2、表面活性剂；各组分用量为：
显色层中的试剂包括色原、亲水性胶体和表面活性剂。
作为优选，试剂层中，缓冲体系为Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在6.5～7.5。作为优选，缓冲体系的pH值在7.0～7.2。
优选地，螯合剂为EDTA；激活剂1为黄素腺嘌呤二核苷酸二钠；激活剂2为硫酸镁。
作为优选，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。
作为优选，试剂层中各组分用量为：
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，显色层中色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种或多种。
作为优选，显色层中各组分用量为：
亲水性胶体 10～200g/m2；
表面活性剂 0.1～20g/m2；
色原 0.6～25mmol/m2；
优选地，显色层中色原由4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠组成，显色层中表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚，显色层中各组分用量为：
更优选地，显色层中各组分用量为：
作为优选，扩散层由缓冲体系、亲水性高分子聚合物、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、辅酶、表面活性剂、颗粒物质；扩散层中各组分用量为：
作为优选，扩散层中，缓冲体系为Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在6.5～7.5。
作为优选，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中一种或多种。作为优选，辅酶为二腺苷五磷酸。作为优选，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。作为优选，颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
本发明还提供该干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
将显色液试剂、反应液试剂依次涂覆在支持层上，然后将扩散液试剂喷涂在支持层上，干燥，得到依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层的干化学试剂片。
(五)定量测定肌酐浓度的干化学试剂片
本发明提供了一种定量测定肌酐浓度的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、过氧化物酶、保护剂、螯合剂、激活剂、表面活性剂；各组分用量为：
显色层中的试剂包括色原、肌酐胺基水解酶、亲水性胶体和表面活性剂。
作为优选，试剂层中，缓冲体系为Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～8.0。优选地，pH值在7.8～7.9。
作为优选，保护剂为蔗糖；螯合剂为EDTA；激活剂为亚铁氰化钾。
作为优选，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。
作为优选，试剂层中各组分用量为：
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，显色层中色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中的一种或多种。
作为优选，显色层中各组分用量为：
优选地，显色层中色原由4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠组成，显色层中表面活性剂为聚乙二醇对异辛基苯基醚，显色层中各组分用量为：
更优选地，显色层中各组分用量为：
作为优选，扩散层由缓冲体系、亲水性高分子聚合物、过氧化氢酶、表面活性剂、颗粒物质。
作为优选，扩散层中各组分用量为：
作为优选，扩散层中，缓冲体系为Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～8.0。
作为优选，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；亲水性高分子聚合物具有多孔结构，可以过滤掉样本中的干扰物质。
作为优选，表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；
作为优选，颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
作为优选，支持层为聚对苯二甲酸乙二醇酯的聚合物，其厚度为50～300微米。
本发明还提供了该干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
将显色液试剂、反应液试剂依次涂覆在支持层上，然后将扩散液试剂喷涂在支持层上，干燥，得到依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层的干化学试剂片。
(六)定量测定总胆固醇浓度的干化学试剂片
本发明提供了一种定量测定总胆固醇浓度的干化学试剂片，包含四个叠层，依次为支持层、显色层、试剂层和扩散层；试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、过氧化物酶、激活剂、表面活性剂、稳定剂；各组分用量为：
显色层中的试剂包括色原、亲水性胶体。
作为优选，试剂层中，缓冲体系为Tris缓冲液、MOPSO缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～8.0；优选7.1～7.3。
作为优选，激活剂为硫酸镁；稳定剂为聚乙二醇-6000；表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种。
作为优选，试剂层中各组分用量为：
作为优选，亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
作为优选，显色层中色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠、3,5-二氯羟基苯磺酸钠中一种或多种，显色层中各组分用量为：
亲水性胶体 10～100g/m2；
色原 0.6～30mmol/m2。
优选地，显色层中色原由4-氨基安替比林和N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠组成，显色层中各组分用量为：
亲水性胶体 10～100g/m2；
4-氨基安替比林 0.1～5mmol/m2；
N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠0.5～20mmol/m2；
更优选地，显色层中各组分用量为：
亲水性胶体 20～40g/m2；
4-氨基安替比林 0.1～0.5mmol/m2；
N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠0.5～5mmol/m2。
作为优选，扩散层由缓冲体系、亲水性高分子聚合物、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、表面活性剂1、表面活性剂2、颗粒物质；扩散层中各组分用量为：
作为优选，扩散层中，缓冲体系为Tris缓冲液、MOPSO缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在7.0～8.0；
作为优选，亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；亲水性高分子聚合物具有多孔结构，可以过滤掉样本中的干扰物质；
作为优选，表面活性剂1为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；
作为优选，表面活性剂2为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；
作为优选，颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
作为优选，支持层为聚对苯二甲酸乙二醇酯的聚合物，其厚度为50～300微米。
作为优选，支持层的表面经过紫外照射、电晕或涂覆底层处理。
本发明还提供了该干化学试剂片的制备方法，包括如下步骤：
将显色液试剂、反应液试剂依次涂覆在支持层上，然后将扩散液试剂喷涂在支持层上，干燥，得到依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层的干化学试剂片。
本发明提供的用于检测液体样本的干化学试剂片的制备方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：本发明所述葡萄糖干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.20mm，长度为30cm，宽度为20cm。表面经过紫外照射处理，照射距离10cm，照射时间60分钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成12mm×12mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将10μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中葡萄糖的浓度。
(一)准确度分析
检测样品：20名体检者血样；
对比检测方法：用市售葡萄糖检测试剂盒(己糖激酶法)单一液体试剂在日立7080全自动生化分析仪上检测，由全自动生化分析仪加入2.5μL样本，250μL试剂，37℃反应10分钟，测定340nm的吸光度值，根据标准曲线计算样品中葡萄糖的浓度。
用实施例1检测方法和对比检测方法分别测定20例样品，检测结果见表1。
表1分析结果
结果显示，根据检测结果计算出的R2值为0.999，大于0.95，表明本发明所述方法检测结果与对比试剂盒检测结果无明显差异，具有较高准确度(符合度)。
(二)精密度分析
检测样品：任意一血清样品；
用实施例1检测方法对同一待测样品重复检测10次，检测结果见表2。
表2检测样品葡萄糖浓度(10次)及标准差率(变异系数)
结果显示，标准差率为0.62％，小于标准要求的10％，表明本发明所述方法具有高精密度。
(三)线性分析
检测样品：高浓度葡萄糖样品(30mmol/L)；
将葡萄糖样品稀释成7个不同的浓度，依次为0mmol/L、2.5mmol/L、5.0mmol/L、7.5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、30mmol/L，采用实施例1的检测方法对上述样品的每个浓度进行2次检测，计算相关系数R值，检测结果见表3。
表3线性试验结果
结果显示，根据实施例1检测方法得到的检测结果计算出的R值为0.9994，接近于1，表明本发明所述方法在0.0mmol/L-30.0mmol/L的范围内具有良好的线性度。
实施例2：本发明所述葡萄糖干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.20mm，长度为30cm，宽度为20cm。表面经过电晕处理，电晕强度900W，电晕时间5秒钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过电晕处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中烘干。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成10mm×10mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将10μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中葡萄糖的浓度。
(一)本发明所述方法的稳定性分析
储存条件：密封放置在2-8℃冰箱中。
检验周期：2-8℃0时、3月、9月、15月、18月、21月。
用实施例2的检测方法在上述检验周期时进行检测，计算准确度，精密度，线性范围，检测结果见表4。
表4稳定性试验结果
结果显示，根据实施例2检测方法得到的检测结果计算出的R2值均大于0.95，标准差率均小于标准要求的10％，R值均接近于1，表明本发明所述方法在2-8℃条件下储存21个月，试剂片仍具有良好的准确度，精密度，线性范围。
(二)抗干扰分析
检测样品：对照样本血清，对照样本血清中加入胆红素(20mg/dL),对照样本血清中加入抗坏血酸(3mg/dL)；
采用实施例2的检测方法对上述样品进行3次检测，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，检测结果见表5。
表5抗干扰试验结果
结果显示，根据实施例2检测方法得到的检测结果计算出的Dobs均小于Dc，未观察到临床显著性影响，表明本发明所述方法在20mg/dL浓度的胆红素和3mg/dL浓度的抗坏血酸对测定结果没有明显干扰。
实施例3：本发明所述甘油三酯干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.178mm，长度为30cm，宽度为20cm。表面经过紫外照射处理，照射距离10cm，照射时间60分钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成13mm×13mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将8μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中甘油三酯的浓度。
(一)准确度分析
检测样品：20名体检者血样；
对比检测方法：用市售甘油三酯检测试剂盒(GPO-PAP法)4:1液体试剂在日立7080全自动生化分析仪上检测，由全自动生化分析仪加入2μL样本，试剂一160μL，试剂二40μL，37℃反应10分钟，测定510nm的吸光度值，根据标准曲线计算样品中甘油三酯的浓度。
用实施例3检测方法和对比检测方法分别测定20例样品，检测结果见表6。
表6分析结果
结果显示，根据检测结果计算出的R2值为0.997，大于0.95，表明本发明所述方法检测结果与对比试剂盒检测结果无明显差异，具有较高准确度(符合度)。
(二)本发明所述方法的精密度分析
检测样品：任意一血清样品；
用实施例3检测方法对同一待测样品重复检测10次，检测结果见表7。
表7检测样品甘油三酯浓度(10次)及标准差率(变异系数)
结果显示，标准差率为1.95％，小于标准要求的10％，表明本发明所述方法具有高精密度。
(三)本发明所述方法的线性分析
检测样品：高浓度甘油三酯样品(9mmol/L)；
将甘油三酯样品稀释成6个不同的浓度，依次为0mmol/L、1.25mmol/L、2.5mmol/L、5.0mmol/L、7.5mmol/L、9mmol/L，采用实施例3的检测方法对上述样品的每个浓度进行2次检测，计算相关系数R值，检测结果见表8。
表8线性试验结果
结果显示，根据实施例3检测方法得到的检测结果计算出的R值为0.9996，接近于1，表明本发明所述方法在0.0mmol/L-9mmol/L的范围内具有良好的线性度。
实施例4：本发明所述甘油三酯干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.20mm，长度为30cm，宽度为30cm。表面经过电晕处理，电晕强度600W，电晕时间5秒钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，35℃烘干10分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成10mm×10mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将8μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中甘油三酯的浓度。
(一)本发明所述方法的稳定性分析
储存条件：密封放置在2-8℃冰箱中。
检验周期：2-8℃0时、3月、9月、15月、18月、21月。
用实施例4的检测方法在上述检验周期时进行检测，计算准确度，精密度，线性范围，检测结果见表9。
表9稳定性试验结果
结果显示，根据实施例4检测方法得到的检测结果计算出的R2值均大于0.95，标准差率均小于标准要求的10％，R值均接近于1，表明本发明所述方法在2-8℃条件下储存21个月，试剂片仍具有良好的准确度，精密度，线性范围。
(二)本发明所述方法的抗干扰分析
检测样品：对照样本血清，对照样本血清中加入胆红素(20mg/dL)，对照样本血清中加入抗坏血酸(3mg/dL)；
采用实施例4的检测方法对上述样品进行3次检测，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，检测结果见表10。
表10抗干扰试验结果
结果显示，根据实施例4检测方法得到的检测结果计算出的Dobs均小于Dc，未观察到临床显著性影响，表明本发明所述方法在20mg/dL浓度的胆红素和3mg/dL浓度的抗坏血酸对测定结果没有明显干扰。
实施例5：本发明所述尿酸干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.178mm，长度为20cm，宽度为20cm。表面经过紫外照射处理，照射距离5cm，照射时间20分钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成13mm×13mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将9μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中尿酸的浓度。
(一)本发明所述方法的准确度分析
检测样品：20名体检者血样；
对比检测方法：用市售尿酸检测试剂盒(氧化酶法)4:1液体试剂在日立7080全自动生化分析仪上检测，由全自动生化分析仪加入2.5μL样本，试剂一200μL，试剂二50μL，37℃反应10分钟，测定510nm的吸光度值，根据标准曲线计算样品中尿酸的浓度。
用实施例5检测方法和对比检测方法分别测定20例样品，检测结果见表11。
表11分析结果
结果显示，根据检测结果计算出的R2值为0.9978，大于0.95，表明本发明所述方法检测结果与对比试剂盒检测结果无明显差异，具有较高准确度(符合度)。
(二)精密度分析
检测样品：任意一血清样品；
用实施例5检测方法对同一待测样品重复检测10次，检测结果见表12。
表12检测样品尿酸浓度(10次)及标准差率(变异系数)
结果显示，标准差率为1.55％，小于标准要求的10％，表明本发明所述方法具有高精密度。
(三)线性分析
检测样品：高浓度尿酸样品(800μmol/L)；
将尿酸样品稀释成6个不同的浓度，依次为0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L，采用实施例5的检测方法对上述样品的每个浓度进行2次检测，计算相关系数R值，检测结果见表13。
表13线性试验结果
结果显示，根据实施例5检测方法得到的检测结果计算出的R值为0.9997，接近于1，表明本发明所述方法在0μmol/L-800μmol/L的范围内具有良好的线性度。
实施例6：本发明所述尿酸干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.170mm，长度为30cm，宽度为30cm。表面经过电晕处理，电晕强度600W，电晕时间20秒钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成11mm×11mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将10μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中尿酸的浓度。
(一)稳定性分析
储存条件：密封放置在2-8℃冰箱中。
检验周期：2-8℃0时、3月、9月、15月、18月、21月。
用实施例6的检测方法在上述检验周期时进行检测，计算准确度，精密度，线性范围，检测结果见表14。
表14稳定性试验结果
结果显示，根据实施例6检测方法得到的检测结果计算出的R2值均大于0.95，标准差率均小于标准要求的10％，R值均接近于1，表明本发明所述方法在2-8℃条件下储存21个月，试剂片仍具有良好的准确度，精密度，线性范围。
(二)抗干扰分析
检测样品：对照样本血清，对照样本血清中加入胆红素(20mg/dL),对照样本血清中加入抗坏血酸(3mg/dL)；
采用实施例6的检测方法对上述样品进行3次检测，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，检测结果见表15。
表15抗干扰试验结果
结果显示，根据实施例6检测方法得到的检测结果计算出的Dobs均小于Dc，未观察到临床显著性影响，表明本发明所述方法在20mg/dL浓度的胆红素和3mg/dL浓度的抗坏血酸对测定结果没有明显干扰。
实施例7：本发明所述丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.188mm，长度为30cm，宽度为30cm。表面经过紫外照射处理，照射距离5cm，照射时间60分钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成10mm×10mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将6μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5min，用反射式光度计测定3min到5min时反射率的变化率，根据标准曲线计算样品中丙氨酸氨基转移酶的活性。
(一)本发明所述方法的准确度分析
检测样品：20名体检者血样；
对比检测方法：用市售丙氨酸氨基转移酶检测试剂盒(丙氨酸底物法)2:1液体试剂在日立7080全自动生化分析仪上检测，由全自动生化分析仪加入2.5μL样本，试剂一160μL，试剂二80μL，在37℃反应6.5min到8min测定340nm的吸光度变化率，根据标准曲线计算样品中丙氨酸氨基转移酶的活性。
用实施例7检测方法和对比检测方法分别测定20例样品，检测结果见表16。
表16分析结果
结果显示，根据检测结果计算出的R2值为0.9999，大于0.95，表明本发明所述方法检测结果与对比试剂盒检测结果无明显差异，具有较高准确度(符合度)。
(二)精密度分析
检测样品：任意一血清样品；
用实施例7检测方法对同一待测样品重复检测10次，检测结果见表17。
表17检测样品丙氨酸氨基转移酶活性(10次)及标准差率(变异系数)
结果显示，标准差率为1.89％，小于标准要求的10％，表明本发明所述方法具有高精密度。
(三)线性分析
检测样品：高活性丙氨酸氨基转移酶样品(1000U/L)；
将丙氨酸氨基转移酶样品稀释成6个不同的活性，依次为0U/L、200U/L、400U/L、600U/L、800U/L、1000U/L，采用实施例7的检测方法对上述样品的每个活性进行2次检测，计算相关系数R值，检测结果见表18。
表18线性试验结果
结果显示，根据实施例7检测方法得到的检测结果计算出的R值为0.9996，接近于1，表明本发明所述方法在0U/L-1000U/L的范围内具有良好的线性度。
实施例8：本发明所述丙氨酸氨基转移酶干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.188mm，长度为20cm，宽度为20cm。表面经过电晕处理，电晕强度1000W，电晕时间20秒。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中烘干。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成10mm×10mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将6μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5min，用反射式光度计测定3min到5min时反射率的变化率，根据标准曲线计算样品中丙氨酸氨基转移酶的活性。
(一)稳定性分析
储存条件：密封放置在2-8℃冰箱中。
检验周期：2-8℃0时、3月、9月、15月、18月。
用实施例8的检测方法在上述检验周期时进行检测，计算准确度，精密度，线性范围，检测结果见表19。
表19稳定性试验结果
结果显示，根据实施例8检测方法得到的检测结果计算出的R2值均大于0.95，标准差率均小于标准要求的10％，R值均接近于1，表明本发明所述方法在2-8℃条件下储存18个月，试剂片仍具有良好的准确度，精密度，线性范围。
(二)抗干扰分析
检测样品：对照样本血清，对照样本血清中加入胆红素(20mg/dL)，对照样本血清中加入抗坏血酸(3mg/dL)；
采用实施例8的检测方法对上述样品进行3次检测，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，检测结果见表20。
表20抗干扰试验结果
结果显示，根据实施例8检测方法得到的检测结果计算出的Dobs均小于Dc，未观察到临床显著性影响，表明本发明所述方法在20mg/dL活性的胆红素和3mg/dL活性的抗坏血酸对测定结果没有明显干扰。
实施例9：本发明所述肌酐干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.150mm，长度为10cm，宽度为10cm。表面经过紫外照射处理，照射距离5cm，照射时间60分钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成10mm×10mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将6μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5min，在3min与5min两个时间点用反射式光度计进行测定，计算反射率差值，根据标准曲线计算样品中肌酐的浓度。
(一)准确度分析
检测样品：20名体检者血样；
对比检测方法：用市售肌酐检测试剂盒(肌氨酸氧化酶法)3:1液体试剂在日立7080全自动生化分析仪上检测，由全自动生化分析仪加入4μL样本，试剂一180μL，试剂二60μL，37℃反应10min，在5min与10min两个时间点测定546nm的吸光度值，计算吸光度差值，根据标准曲线计算样品中肌酐的浓度。
用实施例9检测方法和对比检测方法分别测定20例样品，检测结果见表21。
表21分析结果
结果显示，根据检测结果计算出的R2值为0.9969，大于0.95，表明本发明所述方法检测结果与对比试剂盒检测结果无明显差异，具有较高准确度(符合度)。
(二)精密度分析
检测样品：任意一血清样品；
用实施例9检测方法对同一待测样品重复检测10次，检测结果见表22。
表22检测样品肌酐浓度(10次)及标准差率(变异系数)
结果显示，标准差率为1.21％，小于标准要求的10％，表明本发明所述方法具有高精密度。
(三)线性分析
检测样品：高浓度肌酐样品(3000μmol/L)；
将肌酐样品稀释成6个不同的浓度，依次为0μmol/L、375μmol/L、750μmol/L、1500μmol/L、2250μmol/L、3000μmol/L，采用实施例9的检测方法对上述样品的每个浓度进行2次检测，计算相关系数R值，检测结果见表23。
表23线性试验结果
结果显示，根据实施例9检测方法得到的检测结果计算出的R值为0.9999，接近于1，表明本发明所述方法在0μmol/L-3000μmol/L的范围内具有良好的线性度。
实施例10：本发明所述肌酐干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.188mm，长度为20cm，宽度为20cm。表面经过电晕处理，电晕强度1000W，电晕时间20秒。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中烘干。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成8mm×8mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将6μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5min，在3min与5min两个时间点用反射式光度计进行测定，计算反射率差值，根据标准曲线计算样品中肌酐的浓度。
(一)稳定性分析
储存条件：密封放置在2-8℃冰箱中。
检验周期：2-8℃0时、3月、9月、15月、18月。
用实施例5的检测方法在上述检验周期时进行检测，计算准确度，精密度，线性范围，检测结果见表24。
表24稳定性试验结果
结果显示，根据实施例10检测方法得到的检测结果计算出的R2值均大于0.95，标准差率均小于标准要求的10％，R值均接近于1，表明本发明所述方法在2-8℃条件下储存18个月，试剂片仍具有良好的准确度，精密度，线性范围。
(二)抗干扰分析
检测样品：对照样本血清，对照样本血清中加入胆红素(20mg/dL)，对照样本血清中加入抗坏血酸(3mg/dL)；
采用实施例10的检测方法对上述样品进行3次检测，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，检测结果见表25。
表25抗干扰试验结果
结果显示，根据实施例10检测方法得到的检测结果计算出的Dobs均小于Dc，未观察到临床显著性影响，表明本发明所述方法在20mg/dL浓度的胆红素和3mg/dL浓度的抗坏血酸对测定结果没有明显干扰。
实施例11：本发明所述总胆固醇干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用聚对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.178mm，长度为30cm，宽度为20cm。表面经过紫外照射处理，照射距离10cm，照射时间60分钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，30℃烘干20分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成10mm×10mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将8μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中总胆固醇的浓度。
(一)准确度分析
检测样品：20名体检者血样；
对比检测方法：用市售总胆固醇检测试剂盒(GOD-PAP法)4:1液体试剂在日立7080全自动生化分析仪上检测，由全自动生化分析仪加入2.0μL样本，试剂一160μL，试剂二40μL，37℃反应10分钟，测定590nm的吸光度值，根据标准曲线计算样品中总胆固醇的浓度。
用实施例11检测方法和对比检测方法分别测定20例样品，检测结果见表26。
表26分析结果
结果显示，根据检测结果计算出的R2值为0.9933，大于0.95，表明本发明所述方法检测结果与对比试剂盒检测结果无明显差异，具有较高准确度(符合度)。
(二)精密度分析
检测样品：任意一血清样品；
用实施例11检测方法对同一待测样品重复检测10次，检测结果见表27。
表27检测样品总胆固醇浓度(10次)及标准差率(变异系数)
结果显示，标准差率为1.88％，小于标准要求的10％，表明本发明所述方法具有高精密度。
(三)线性分析
检测样品：高浓度总胆固醇样品(9mmol/L)；
将总胆固醇样品稀释成6个不同的浓度，依次为0mmol/L、1.25mmol/L、2.5mmol/L、5.0mmol/L、7.5mmol/L、9mmol/L，采用实施例11的检测方法对上述样品的每个浓度进行2次检测，计算相关系数R值，检测结果见表28。
表28线性试验结果
结果显示，根据实施例11检测方法得到的检测结果计算出的R值为0.9992近于1，表明本发明所述方法在0.0mmol/L-9mmol/L的范围内具有良好的线性度。
实施例12：本发明所述总胆固醇干化学试剂片的制备方法
透明支持层材料采用对苯二甲酸乙二醇酯材质，厚度为0.20mm，长度为30cm，宽度为30cm。表面经过电晕处理，电晕强度600W，电晕时间5秒钟。
显色液试剂的配方如下：
反应液试剂的配方如下：
显色层涂覆在经过紫外处理的聚对苯二甲酸乙二醇酯支持层上，试剂层经连续涂覆在显色层上，放入烘干箱中，35℃烘干10分钟。
扩散液试剂的配方如下：
将扩散液均匀的喷涂在试剂层上，放入烘干箱中烘干。用裁条机将其切割成12mm×12mm大小的试纸片，用铝箔袋密封保存。
检测方法：将8μL测试样本滴加于试剂片，37℃恒温条件下孵育5分钟，用反射式光度计进行测定，根据标准曲线计算样品中总胆固醇的浓度。
(一)稳定性分析
储存条件：密封放置在2-8℃冰箱中。
检验周期：2-8℃0时、3月、9月、15月、18月、21月。
用实施例12的检测方法在上述检验周期时进行检测，计算准确度，精密度，线性范围，检测结果见表29。
表29稳定性试验结果
结果显示，根据实施例12检测方法得到的检测结果计算出的R2值均大于0.95，标准差率均小于标准要求的10％，R值均接近于1，表明本发明所述方法在2-8℃条件下储存21个月，试剂片仍具有良好的准确度，精密度，线性范围。
(二)抗干扰分析
检测样品：对照样本血清，对照样本血清中加入胆红素(20mg/dL),对照样本血清中加入抗坏血酸(3mg/dL)；
采用实施例12的检测方法对上述样品进行3次检测，计算实验样本相对于对照样本测量结果所产生偏倚，检测结果见表30。
表30抗干扰试验结果
结果显示，根据实施例12检测方法得到的检测结果计算出的Dobs均小于Dc，未观察到临床显著性影响，表明本发明所述方法在20mg/dL浓度的胆红素和3mg/dL浓度的抗坏血酸对测定结果没有明显干扰。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种干化学试剂片，其特征在于，依次包括支持层、显色层、试剂层和扩散层；
所述试剂层中的试剂包括缓冲体系、亲水性胶体、生物酶、激活剂及其它组分，所述其它组分选自底物、辅酶、螯合剂、表面活性剂、保护剂、稳定剂中的一种或几种；
所述显色层中的试剂包括色原和亲水性胶体。
2.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述缓冲体系为Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、MOPS缓冲液、MOPSO缓冲液或磷酸盐缓冲液，pH值在5.0～10.0；
所述激活剂为氯化钠、氯化镁、硫酸镁、醋酸钡、氯化钾、亚铁氰化钾或黄素腺嘌呤二核苷酸二钠中的一种或几种；
所述生物酶为过氧化物酶、葡萄糖氧化酶、甘油激酶、磷酸甘油氧化酶、尿酸酶、丙酮酸氧化酶、丙酮酸激酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氧化酶、肌酐胺基水解酶、胆固醇氧化酶、胆固醇酯酶、脂蛋白酯酶、过氧化氢酶、抗坏血酸氧化酶、肌酐酶、尿素酶和碳酸酐酶中的一种或几种；
所述表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；
所述底物为三磷酸腺苷、二磷酸腺苷、一磷酸腺苷、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、L-天门冬氨酸钠、磷酸肌酸、甘油、丙酮酸中的一种或几种；
所述辅酶为焦磷酸硫胺素、NAD+、NADP+、五磷酸吡哆醛、磷酸吡哆胺、维生素H、维生素B7、乙酰辅酶A中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述螯合剂为EDTA、EGTA、磷酸三钠、酒石酸钾钠、柠檬酸钠；所述保护剂为蔗糖、海藻糖、甘露醇，牛血清白蛋白；所述稳定剂为聚乙二醇-6000、聚乙二醇-20000、环糊精、水溶性淀粉。
4.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述亲水性胶体选自聚乙烯醇、支链淀粉、纤维素酯、琼脂糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、羟丙基甲基纤维素、甲基乙烯基醚/马来酸酐共聚物中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述色原由A和B组成，所述A为4-氨基安替比林，B选自苯酚、对氯酚、对羟基苯甲酸、3,5-二氯羟基苯磺酸钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述显色层中的试剂还包括表面活性剂。
7.根据权利要求1所述的干化学试剂片，其特征在于，所述显色层中的试剂还包括表面活性剂和生物酶。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的干化学试剂片，其特征在于，所述扩散层包括亲水性高分子聚合物、表面活性剂和颗粒物质。
9.根据权利要求7或8所述的干化学试剂片，其特征在于，所述亲水性高分子聚合物选自聚氨酯、聚酰胺、羧甲基纤维素钠、聚乙烯醇、支链淀粉、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯树胶、桃胶、壳聚糖、聚乙烯乙酸酯中的一种或多种；
表面活性剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯80、胆酸钠、聚氧乙烯月桂醚、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐、聚乙二醇对异辛基苯基醚中的一种或几种；
所述颗粒物质选自颜料、微晶胶体、二氧化硅、树脂珠、玻璃珠、硅藻土、纤维素酯中的一种或多种。
10.根据权利要求8所述的干化学试剂片，其特征在于，所述扩散层还包括缓冲体系、生物酶、底物、辅酶中的一种或几种。
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