CN109884326A - 血小板聚集功能检测试剂盒 - Google Patents

Abstract

本发明提出了血小板聚集功能检测试剂盒，包含：纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂。利用本发明的试剂盒可以准确地确定被抗血小板药物抑制的血小板比例，从而评估抗血小板药物的作用效果，具有广泛的应用前景。

Description

血小板聚集功能检测试剂盒

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及血小板聚集功能检测及其应用，尤其涉及血小板聚集功能检测试剂盒及确定抗血小板药物有效性的方法。

背景技术

血小板聚集是血小板参与生理止血的重要环节，在许多病理性血栓形成过程中血小板聚集发挥着先导而关键的作用。因此，血小板聚集功能的检测对临床出血与血栓性疾病的诊断及疗效监测有指导意义，已广泛应用于抗血小板聚集药物的治疗监测中。

目前光学比浊法(以下简称传统方法)因其操作简便、快速，易于掌握且经济实用，作为“金标准”试验用于临床血小板聚集功能的检测中。该方法的操作参见《全国临床检验操作规程》(第三版)。但是，其操作复杂，影响结果的因素众多，即使在同一实验室因实际操作不同，结果也会不同，稳定性较差，可比性不强。而且，血液经过反复离心会严重破坏血小板的聚集功能，因此重复测定结果准确性差。

因此，目前血小板聚集功能检测方法仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题至少之一。

本发明提出了一种血小板聚集功能检测试剂盒。根据本发明的实施例，所述试剂盒包含：纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂。内源性凝血激活试剂可以启动凝血通路，在纤维蛋白原和血小板聚集两者共同的作用下实现凝血效果。纤维蛋白原激活试剂可以使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，后者经聚合形成互相交织的纤维蛋白网，使红细胞、白细胞和血小板包罗其中而形成血块。血小板激活剂会激活未被抗血小板药物抑制的血小板，并与纤维蛋白联结形成血凝块，此时检测血凝块强度反映纤维蛋白和活化的血小板共同作用效果。由此，利用纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂可以准确地确定出被抗血小板药物抑制的血小板比例，从而评估抗血小板药物的作用效果，具有临床意义，应用前景广泛。

根据本发明的实施例，所述血小板聚集功能检测试剂盒还可以具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述纤维蛋白原激活剂包括巴曲酶和XIIIa因子。

根据本发明的实施例，所述巴曲酶的浓度为10～100BU/mL、XIIIa因子的浓度为0.1～10mg/mL。

根据本发明的实施例，所述纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂各自独立地进一步包括缓冲盐、保护剂和防腐剂。

根据本发明的实施例，所述保护剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白中的至少之一。

根据本发明的实施例，所述保护剂的浓度为1～20mg/mL。

根据本发明的实施例，所述缓冲盐中包括缓冲液和盐分；所述缓冲液选自Tris、HEPES、PBS、甘氨酸和MOPS中的至少之一；所述盐分选自氯化钠、氯化钾和氯化钙中的至少之一。

根据本发明的实施例，所述缓冲液的浓度为10～100mmol/L，所述盐分的含量为0.1～1质量％。

根据本发明的实施例，所述缓冲液的浓度为10～100mmol/L。

根据本发明的实施例，所述防腐剂选自Proclin300、山梨酸钾和对羟基苯甲酸甲酯的至少之一。

根据本发明的实施例，所述防腐剂的浓度为0.01～0.1质量％。

根据本发明的实施例，所述内源性凝血激活试剂包括高岭土、鞣花酸、白陶土和硅藻土中的至少之一。

根据本发明的实施例，所述内源性凝血激活剂浓度为0.5～10mg/mL。

根据本发明的实施例，所述血小板诱导剂包括二磷酸腺苷、二磷酸腺苷钠盐、二磷酸腺苷钾盐、花生四烯酸、花生四烯酸钠盐和花生四烯酸钾盐的至少之一。

根据本发明的实施例，所述血小板诱导剂的浓度为0.01～10mg/mL。

根据本发明的实施例，所述试剂盒进一步包括氯化钙溶液。

根据本发明的实施例，所述氯化钙溶液的浓度为0.1～1mol/L。

根据本发明的实施例，所述试剂盒进一步包括样品杯。

根据本发明的实施例，所述试剂盒用于血栓弹力图仪凝血检测。

根据本发明的实施例，所述的试剂盒中所有试剂均以冻干形式密闭保存于样品杯中。

在本发明的又一方面，本发明提出了一种利用前面所述血小板聚集功能检测试剂盒确定抗血小板药物有效性的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：将血液样品与所述内源性凝血激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作A值；将血液样品与纤维蛋白原激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作B值；将血液样品、待测药物与血小板诱导剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作C值；当(A-C)/(A-B)>50％时，是所述待测药物有效的指示。

根据本发明的实施例，所述抗血小板药物选自阿司匹林、氯吡格雷或者替罗非班。

本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

图1为根据本发明的一个实施例提供的试剂盒检测流程示意图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

需要说明的是，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说明，“多个”的含义是两个或两个以上。

本发明提出了血小板聚集功能检测试剂盒及确定抗血小板药物有效性的方法，下面将分别对其进行详细描述。

血小板聚集功能检测试剂盒

在本发明的一个方面，本发明提出了一种血小板聚集功能检测试剂盒。根据本发明的实施例，该试剂盒包含：纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂。内源性凝血激活试剂可以启动凝血通路，在纤维蛋白原和血小板聚集两者共同的作用下实现凝血效果。纤维蛋白原激活试剂可以使纤维蛋白原转变为纤维蛋白，后者经聚合形成互相交织的纤维蛋白网，使红细胞、白细胞和血小板包罗其中而形成血块。血小板激活剂花生四烯酸(AA)或二磷酸腺苷(ADP)后，会激活未被抗血小板药物抑制的血小板，并与纤维蛋白联结形成血凝块，此时检测血凝块强度反映纤维蛋白和活化的血小板共同作用效果。由此，利用纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂可以准确地确定出被抗血小板药物抑制的血小板比例(即被抑制的血小板量占总血小板量的比例)，从而评估抗血小板药物的作用效果，具有临床意义，应用前景广泛。

为了方便理解，下面简要说明采用血栓弹力图测定被抗血小板药物抑制的血小板比例的过程：

将血液样品与内源性凝血激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作A值；

将血液样品与纤维蛋白原激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作B值；

将血液样品、待测药物与血小板诱导剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作C值；

被抗血小板药物抑制的血小板比例(％)＝(A-C)/(A-B)。

根据本发明的实施例，纤维蛋白原激活剂包括巴曲酶和XIIIa因子。目前已被发现可以分解纤维蛋白原的物质很多，但是，发明人发现，相比于其他物质，巴曲酶能够特异性识别纤维蛋白原，促使难溶性的纤维蛋白交联成网状，从而增强血块强度，使出血部位的血栓形成和止血。并且，反应迅速，效率高。

根据本发明的实施例，巴曲酶的浓度为10～100BU/mL。由此，能够进一步充分分解纤维蛋白原，进而交联聚合成难溶性纤维蛋白，促使出血部位的血栓形成和止血。

根据本发明的实施例，XIIIa因子的浓度为0.1～10mg/mL。由此，使难溶性的纤维蛋白交联成网状，从而增强血块强度。

根据本发明的实施例，纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂各自独立地进一步包括缓冲盐、保护剂和防腐剂。保护剂的添加为体系提供一个稳定环境，以保护体系组分不被氧化或者造成基团失活。缓冲液的添加为凝血提供适宜的环境，可以有效地保证凝血的功能，确保检测结果的准确性。防腐剂的添加可以提高体系的稳定性，延长保质期。

根据本发明的实施例，保护剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白中的至少之一。根据本发明的又一实施例，保护剂的浓度为1～20mg/mL。由此，以便进一步保护体系的稳定性，避免出现氧化或者基团失效。

根据本发明的实施例，缓冲盐中包括缓冲液和盐分；缓冲液选自Tris、HEPES、PBS、甘氨酸和MOPS中的至少之一；盐分选自氯化钠、氯化钾和氯化钙中的至少之一。根据本发明的又一实施例，缓冲液的浓度为10～100mmol/L，盐分的含量为0.1～1质量％。由此，以便进一步有效地保证凝血的功能，确保检测结果的准确性。

根据本发明的实施例，防腐剂选自Proclin300、山梨酸钾和对羟基苯甲酸甲酯的至少之一。根据本发明的又一实施例，防腐剂的浓度为0.01～0.1质量％。由此，以便进一步提高体系的稳定性，延长保质期。

根据本发明的实施例，内源性凝血激活试剂包括高岭土、鞣花酸、白陶土和硅藻土中的至少之一。根据本发明的又一实施例，内源性凝血激活剂浓度为0.5～10mg/mL。由此，以便快速、特异性地激活凝血通路，促进凝血。

根据本发明的实施例，血小板诱导剂包括二磷酸腺苷、二磷酸腺苷钠盐、二磷酸腺苷钾盐、花生四烯酸、花生四烯酸钠盐和花生四烯酸钾盐的至少之一。目前，不同血小板诱导剂对于不同抗血小板药物的敏感程度所有差异，例如，阿司匹林对花生四烯酸(AA)通道具有抑制效果。因此，添加花生四烯酸、花生四烯酸钠盐和/或花生四烯酸钾盐血小板诱导剂，可以诱导未被阿司匹林抑制的血小板。氯吡格雷对二磷酸腺苷(ADP)通道具有抑制效果。因此，添加二磷酸腺苷、二磷酸腺苷钠盐和/或二磷酸腺苷钾盐血小板诱导剂，可以诱导未被氯吡格雷抑制的血小板。

根据本发明的又一实施例，血小板诱导剂的浓度为0.01～10mg/mL。由此，能够有效地激活未被抗血小板药物抑制的血小板，并与纤维蛋白联结形成血凝块。

根据本发明的实施例，该试剂盒进一步包括氯化钙溶液。根据本发明的又一方面，氯化钙溶液的浓度为0.1～1mol/L。由此，以便有效地激活血液凝固。

根据本发明的实施例，试剂盒进一步包括样品杯。由此，可以用来装载检测样品，方便检测。

根据本发明的实施例，试剂盒用于血栓弹力图仪凝血检测。利用本发明的试剂盒进行血栓弹力图仪血小板聚集功能检测，整个测试过程需要约20min。采用本发明的试剂盒可以配合已有的血栓弹力图仪进行检测，例如可以配合UD-T5000血栓弹力图仪进行检测，方便快捷。

根据本发明的实施例，试剂盒中所有试剂均以冻干形式密闭保存于样品杯中。现有试剂盒在检测时通常需要将试剂进行复溶后吸取试剂加入到检测杯中后再加入样本，这样的步骤极为繁锁，不仅增加了临床检验时耗费的时间，可能因为操作错误的问题导致结果的准确性不够，同时因为试剂复溶后稳定性会下降，导致检测结果的重复性不好。本发明通过将所有试剂均以冻干形式密闭保存于样品杯中，无需进行复溶，可以直接使用，提高了检测结果的准确性，并且操作简便，适于广泛应用。

需要说明的是，本发明的所有试剂并非是保存于同一样品杯中，而是保存于各自的样品杯中，后续直接加入血液样品或者抗血小板药物并放在仪器上进行检测，例如，纤维蛋白原激活试剂保存于纤维蛋白原激活试剂杯中，内源性凝血激活试剂保存于内源性凝血激活试剂杯中，血小板诱导剂保存于血小板诱导剂杯中。

为了方便理解，下面简要说明试剂盒的制备方法：

根据本发明的实施例，纤维蛋白原激活剂的制备方法包括如下步骤：

配制缓冲液；

向缓冲液中加入盐分和保护剂，搅拌均匀；

加入巴曲酶与XIIIa因子，搅拌均匀；

加入防腐剂，搅拌均匀后分装至样品杯并冻干，冻干完成后密封保存在2-8℃环境。

根据本发明的实施例，内原性凝血激活剂溶液的制备方法包括如下步骤：

配制的缓冲溶液，调节pH值至6-8；

加入盐分和保护剂，搅拌均匀；

加入高岭土；

加入防腐剂，搅拌均匀后分装至样品杯(普通杯)并冻干，冻干完成后密封保存在2-8℃环境。

根据本发明的实施例，血小板诱导剂溶液的制备方法包括如下步骤：

配制缓冲溶液，调节pH值至6-8；

加入盐分和保护剂，搅拌均匀；

加入血小板诱导剂；

加入防腐剂，搅拌均匀后分装至样品杯至并冻干，冻干完成后密封保存在2-8℃环境。

确定抗血小板药物有效性的方法

在本发明的另一方面，本发明提出了一种利用前面所述血小板聚集功能检测试剂盒确定抗血小板药物有效性的方法。根据本发明的实施例，该方法包括：将血液样品与内源性凝血激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作A值；将血液样品与纤维蛋白原激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作B值；将血液样品、待测药物与血小板诱导剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作C值；当(A-C)/(A-B)>50％时，是待测药物有效的指示。

被抗血小板药物抑制的血小板比例(亦可理解为抑制率)大于50％，则表明该药物对血小板聚集有效，起到明显抑制效果。当该值小于50％，则表明抑制效果不明显，需要从药物选择或给药剂量等方面进行优化分析。

根据本发明的实施例，抗血小板药物选自阿司匹林、氯吡格雷或者替罗非班。

本领域技术人员能够理解的是，前面针对血小板聚集功能检测试剂盒所描述的特征和方法，同样适用于该利用血小板聚集功能检测试剂盒确定抗血小板药物有效性的方法，在此不再赘述。

下面将结合实施例对本发明的方案进行解释。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1

本实施例提供了按照如下配方配制凝血激活剂，包括如下各组：

实验组：按照如下步骤制备得到血小板聚集功能检测试剂盒：

试剂A配制

步骤(1)：Tris缓冲液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷2.4g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入1000mL纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至7.0；

步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入15g牛血清白蛋白，搅拌使其充分溶解；

步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入巴曲酶50000BU，重组XIIIa1g，搅拌使其充分溶解，调节pH为7.0-7.4；

步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成试剂A。

试剂B配制

步骤(1)：Tris缓冲液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷2.4g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入1000mL纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至7.0；

步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入15g牛血清白蛋白，搅拌使其充分溶解；

步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入二磷酸腺苷钠0.01g，搅拌使其充分混匀，调节pH为7.0-7.4；

步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成试剂B。

试剂C配制

步骤(1)：Tris缓冲液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷2.4g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入1000mL纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至7.0；

步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入15g牛血清白蛋白，搅拌使其充分溶解；

步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入花生四烯酸5g，搅拌使其充分混匀，调节pH为7.0-7.4；

步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成试剂C。

试剂1配制

步骤(1)：Tris缓冲液的制备：称取三羟甲基氨基甲烷2.4g，氯化钠8g，氯化钾0.2g，加入1000mL纯化水，搅拌使其充分溶解，调节pH值至7.0；

步骤(2)：在步骤(1)的缓冲液中加入15g牛血清白蛋白，搅拌使其充分溶解；

步骤(3)：在步骤(2)的溶液中加入高岭土5g，搅拌使其充分混匀，调节pH为7.0-7.4；

步骤(4)：在步骤(3)中的溶液中加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成试剂1。

试剂2配制

称取22.2g氯化钙加入到1000mL生理盐水中，搅拌使其充分溶解，配成终浓度为0.2M的氯化钙溶液，加入Proclin300 1.0g和0.5g庆大霉素，搅拌使其充分溶解，制成试剂2。

将试剂A按10μL加入到巴曲酶杯、二磷酸腺苷杯、花生四烯酸杯中；

将试剂B按10μL加入到二磷酸腺苷杯中；

将试剂C按10μl加入到花生四烯酸杯中；

将试剂1按10μL、试剂2按20μL加入到普通杯中；

将以上试剂杯放入到冻干机中进行冻干保存，冻干完成后对样品杯进行密封包装后放置于4度进行储存。

实施例2血小板聚集功能检测试剂盒线性检测

选取不同新鲜全血样本(肝素抗凝全血)，分别用本发明实施例1制备得到的试剂盒对正常人样本进行测定。

针对实施例2中获得的试剂盒，采用如下流程进行检测：

S1.将冷藏的试剂常温放置，恢复至室温。

S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中分别选择“ADP”、“AA”。

S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载对应的样品杯。

S4.在普通杯中加入360μL枸橼酸钠抗凝全血。在巴曲酶杯、二磷酸腺苷杯、花生四烯酸杯中均加入360μL肝素抗凝全血与一定浓度的抗血小板药物替罗非班。

S5.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。

测定血块强度MA值，测定血块强度MA值，同一样本分为7份，每份添加不同替罗非班浓度，结果参见表1。

表1血小板聚集功能检测试剂的准确性性检测结果

替罗非班浓度	二磷酸腺苷杯MA(mm)	花生四烯酸杯MA(mm)
			0μmol/L	54.2	50.3
1μmol/L	48.5	43.2
			2μmol/L	43.8	40
3μmol/L	37.5	35.5
			4μmol/L	30.2	28.8
5μmol/L	20.3	24.8
			6μmol/L	18.8	18.5

从表1中，可以看出本发明试剂检测时在正常人血液样本时MA与加入的抗血小板药物呈正相关性，说明本发明血小板聚集功能检测试剂盒可有效检测血小板聚集功能并具有良好的对应关系，可以准确评估患者服用药物的效果，同时指导临床用药剂量。

实施例3血小板聚集功能检测试剂的精密度测试

取本发明的三个试剂盒分别重复测试同一样本10次，计算本发明的试剂盒测试精密度。

针对实施例1制备得到的试剂盒，采用如下流程进行检测：

S1.将冷藏的试剂常温放置，恢复至室温。

S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中分别选择“CK”“Activated”、“ADP”、“AA”。

S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载对应的样品杯。

S4.在普通杯中加入360μL枸橼酸钠抗凝全血。在巴曲酶杯、二磷酸腺苷杯、花生四烯酸杯中加入360μL肝素抗凝全血。

S5.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。

样本的检测结果如表2。

表2血小板聚集功能检测试剂的精密度测试结果

从表2中，可以看出本发明的试剂盒样本检测的MA值的CV都在10％以内，说明本发明血小板聚集功能检测试剂盒检测精密度良好。

实施例4血小板聚集功能检测试剂的加速稳定性测试

针对实施1制备得到的试剂盒一，分别在37℃恒温箱中加速0、2、4、6、8、10天，取同一样本用加速后的试剂进行血栓弹力图测试。

取本发明的三个试剂盒分别重复测试同一样本10次，计算在不同样本本发明的试剂盒测试精密度。

针对实施例1制备得到的试剂盒，如前所述，测定流程参照图1所示，具体如下：

S1.将加速后的试剂常温放置，恢复至室温。

S2.打开UD-T5000的相应软件，输入测试样本信息，并在测试类型中分别选择“CK”“Activated”、“ADP”、“AA”。

S3.在血栓弹力图仪测试通道上装载对应的样品杯。

S4.在普通杯中加入360μL枸橼酸钠抗凝全血。在巴曲酶杯、二磷酸腺苷杯、花生四烯酸杯中加入360μL肝素抗凝全血。

S5.将样品杯推至测试位置，测试杆拨至测试位，并在软件上点击“开始”按钮进行测试。

样本的检测结果如表3。

表3血小板聚集功能检测试剂的加速稳定性测试结果

从表3中，可以看出本发明试剂的测试MA值在加速10天后，结果相对极差都在10％以内，说明本发明血小板聚集功能检测试剂盒加速稳定性良好。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims (10)

1.一种血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，包含：纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂。

2.根据权利要求1所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述纤维蛋白原激活剂包括巴曲酶和XIIIa因子；

任选地，所述巴曲酶的浓度为10～100BU/mL、XIIIa因子的浓度为0.1～10mg/mL。

3.根据权利要求2所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述纤维蛋白原激活试剂、内源性凝血激活试剂和血小板诱导剂各自独立地进一步包括缓冲盐、保护剂和防腐剂。

4.根据权利要求3所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述保护剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、人血清白蛋白中的至少之一；

任选地，所述保护剂的浓度为1～20mg/mL；

任选地，所述缓冲盐中包括缓冲液和盐分；所述缓冲液选自Tris、HEPES、PBS、甘氨酸和MOPS中的至少之一；所述盐分选自氯化钠、氯化钾和氯化钙中的至少之一；

任选地，所述缓冲液的浓度为10～100mmol/L，所述盐分的含量为0.1～1质量％。

5.根据权利要求3所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂选自Proclin300、山梨酸钾和对羟基苯甲酸甲酯的至少之一；

任选地，所述防腐剂的浓度为0.01～0.1质量％。

6.根据权利要求1所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述内源性凝血激活试剂包括高岭土、鞣花酸、白陶土和硅藻土中的至少之一；

任选地，所述内源性凝血激活剂浓度为0.5～10mg/mL。

7.根据权利要求1所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述血小板诱导剂包括二磷酸腺苷、二磷酸腺苷钠盐、二磷酸腺苷钾盐、花生四烯酸、花生四烯酸钠盐和花生四烯酸钾盐的至少之一；

任选地，所述血小板诱导剂的浓度为0.01～10mg/mL。

8.根据权利要求1所述的血小板聚集功能检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒进一步包括氯化钙溶液，

任选地，所述氯化钙溶液的浓度为0.1～1mol/L；

任选地，所述试剂盒进一步包括样品杯；

任选地，所述试剂盒用于血栓弹力图仪凝血检测；

任选地，所述的试剂盒中所有试剂均以冻干形式密闭保存于所述样品杯中。

9.一种利用权利要求1～8任一项所述血小板聚集功能检测试剂盒确定抗血小板药物有效性的方法，其特征在于，包括：

将血液样品与所述内源性凝血激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作A值；

将血液样品与纤维蛋白原激活试剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作B值；

将血液样品、待测药物与血小板诱导剂接触，测定形成的第一块血块的血块强度，记作C值；

当(A-C)/(A-B)>50％时，是所述待测药物有效的指示。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述抗血小板药物选自阿司匹林、氯吡格雷或者替罗非班。