CN109879937B

CN109879937B - 一种表皮细胞生长因子模拟肽及其应用

Info

Publication number: CN109879937B
Application number: CN201910262127.3A
Authority: CN
Inventors: 陈伟; 裴运林; 赵辉; 柳耀平; 郭朝万; 熊灿
Original assignee: Guangzhou Qizhuang Biotechnology Co ltd
Current assignee: Guangzhou Huike Biopharmaceutical Co.,Ltd.
Priority date: 2019-04-02
Filing date: 2019-04-02
Publication date: 2020-08-21
Anticipated expiration: 2039-04-02
Also published as: CN109879937A

Abstract

本发明提供了一种表皮细胞生长因子模拟肽及其应用。本发明通过噬菌体7肽随机肽库筛选得到所述的表皮细胞生长因子模拟肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述的模拟肽具有EGFR的高亲和力及类似EGF的激活EGFR信号通路的作用，可上调EGFR信号通路中pEGFR和pERK蛋白的水平，激活角质形成细胞、成纤维细胞的信号通路，显著促进角质形成细胞、成纤维细胞的增殖、分化，效果优于EGF；同时，对细胞无毒，热稳定性显著优于EGF，在EGFR相关药品或化妆品领域具有良好的应用前景。

Description

一种表皮细胞生长因子模拟肽及其应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，特别涉及一种表皮细胞生长因子模拟肽及其应用。

背景技术

表皮生长因子EGF(Epidermal growth factor,EGF)是一种6kDa蛋白，具有53个氨基酸残基和三个分子内二硫键；EGF通过与其受体EGFR(Epidermal growth factorreceptor,EGFR)结合，激活细胞内的信号通路，从而激活上皮细胞、成纤维细胞等细胞的增殖、分化；研究结果表明EGF在创伤修复、糖尿病足溃疡、肠道粘膜损伤等的治疗方面发挥了积极的作用(Hardwicke J.,et al.(2008).“Epidermal growth factor therapy andwound healing--past,present and future perspectives”.Surgeon,Jun；6(3):172-7.)。目前重组EGF蛋白类药物也已经SFDA批准广泛应用与皮肤创伤修复中，研究表明EGF能加速创面愈合的进程，国内重组EGF喷雾的多中心临床试验结果表明，用EGF治疗的1014例浅II度、深II度、刃厚供皮区和中厚供皮区等急性创面，较对照组相比，中期愈合率明显提高，综合有效率分别达到90.3％、94.9％、96.1％和81.8％，无不良反应。另外，EGF软膏对浅II度和深II度烧伤创面的治疗中，与对照组相比，EGF治疗组愈合时间均能提前2天左右(付小兵等(2004)，生长因子应用于临床创伤修复-十年的主要进展与展望)。国外批准的EGF药物有Easyef、Regen-D

Heberprot-

75，这些药物主要用于糖尿病足溃疡的治疗，能够增加肉芽组织的形成。

但是随着年龄的增长，人体内EGF的水平也不断降低；从70名不同年龄的健康受试者收集尿液样品，并通过放射免疫测定技术测量EGF。研究的尿样分为5个年龄组(3至10、11至20、21至20、61至70和71至80岁)。尿EGF分别随着年龄的增长而降低，年龄最大的组EGF含量最低(每毫克肌酐27.0±8.8纳克)。这些研究结果表明，所有70名受试者尿液中EGF含量随着年龄的增长而减少，尿EGF与他们各自的年龄之间存在相关性(P<0.001)(Chou,J.S.,et al.(1997)."Aging and urinary excretion of epidermal growth factor."AnnClin Lab Sci27(2):116-122.)。

EGF在护肤品领域应用也较为广泛，在韩国、日本和美国等国家均有以EGF作为主要功效物质的化妆品；目前认为EGF具有抗衰老和促进皮肤屏障功能修复的作用：(1)EGF促进角质细胞、成纤维细胞的增殖、分化，延缓皮肤衰老，一方面促进皮肤细胞的生长和分化，增强皮肤的修复能力；另一方面，加速皮肤新陈代谢，增进和加强对营养物质的吸收，可以使皮肤组织的整体年龄降低，改善皮肤的色素状况，达到美白、祛斑的目的，减少皱纹，改善肤质。(2)EGF具有修复皮肤屏障功能，一方面能够促进角质细胞增殖和分化，以及细胞外基质(如透明质酸盒糖蛋白等)的合成和分泌，使受损皮肤恢复正常的屏障功能；另一方面，促进细胞内其他许多与皮肤创伤修复等基因的表达，从而促进皮肤修复(Alexander,P.B.,etal.(2015)."EGF promotes mammalian cell growth by suppressing cellularsenescence."Cell Res 25(1):135-138.)。我国《已使用化妆品原料名称目录》(2015版)中未将EGF列入，主要是考虑到EGF分子量较大，正常皮肤屏障条件下较难被吸收，长期使用的安全性也需要考虑。

小分子肽类一般是少于20个氨基酸通过肽键连接而成的，由于其分子量小，性质稳定、特定的生物活性等优点，是生物制药领域研究的热点之一，目前广泛使用的肽类药物，例如催产素(9肽)、加压素(9肽)、脑啡肽(5肽)、β-内啡肽(31肽)、P物质(10肽)等。此外，小分子肽类近年来在护肤品中应用广泛，成为护肤品的主要功效物质之一，这些小肽由于无毒、高生物活性、特定的生化生理机制、与机体物质同源且易吸收的特点，能从本质上改善皮肤的一系列问题，例如寡肽-1、九肽-1、肌肽、乙酰基六肽-3等。近年来，利用已知细胞生长因子受体从肽库中筛选细胞因子模拟肽成为国内外研究的热点，国外目前已经筛选到了促红细胞生成素、人神经生长因子及白细胞介素-1等多种生长因子模拟肽；这些模拟肽具有细胞因子的活性，并且分子量小。细胞生长因子模拟肽能够与皮肤细胞表面的受体特异性的结合，从而促进皮肤细胞的增殖、促进胶原蛋白的分泌、促进皮肤细胞的修复与再生等功效，在化妆品中有广泛的应用前景(Schagen,S.K.(2017)."Topical peptidetreatments with effective anti-aging results."Cosmetics 4(2):16.)。

目前，具有新功能和特异性的蛋白质或肽可以通过三条途径获得：一是从自然界中存在的天然未知多肽中去寻找，二是从人工构建的多肽库中去筛选；三是改造现有的已知的天然蛋白质或肽。其中噬菌体展示技术(phage display technology,PDH)是将外源蛋白质基因序列插入到噬菌体外壳蛋白，而外源基因会随着噬菌体的重新组装而融合在噬菌体的表面，而编码外源基因的DNA则位于病毒粒子内；从而使大量多肽与其编码序列之间建立了直接联系，使各种靶分子(酶、细胞表面受体等)的多肽配体通过淘洗得以快速鉴定。

发明内容

本发明的第一目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种表皮细胞生长因子模拟肽。

本发明的第二目的在于提供一种核酸分子、重组工程细胞和重组工程细胞。

本发明的第三目的在于提供所述的表皮细胞生长因子模拟肽的制备方法。

本发明的第四目的在于提供一种药物，或化妆品原料，或化妆品成品。

本发明的第五目的在于提供所述的表皮细胞生长因子模拟肽的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种表皮细胞生长因子模拟肽，其氨基酸序列为NYLDEGY(SEQ ID NO.1)，所述的表皮细胞生长因子模拟肽可与EGFR结合，并上调EGFR信号通路中pEGFR和pERK蛋白的水平，激活角质形成细胞、成纤维细胞的信号通路，促进角质形成细胞、成纤维细胞的增殖、分化。

所述的表皮细胞生长因子模拟肽是由7个氨基酸组成的直链寡肽。

一种核酸分子，编码所述的表皮细胞生长因子模拟肽。

一种重组表达载体，含有所述的表皮细胞生长因子模拟肽的核酸分子。

一种重组工程细胞，含有所述的重组表达载体；该重组工程细胞可以表达所述的表皮细胞生长因子模拟肽。

一种制备所述的表皮细胞生长因子模拟肽的方法，所述的方法包括应用多肽化学合成方法合成如序列SEQ ID NO.1所示的模拟肽，例如已知的多肽化学合成方法；或者应用DNA重组技术，通过表达所述的核酸分子获得所述的模拟肽；优选为将所述的重组工程细胞在适合表达所述的核酸分子或重组表达载体的条件下进行培养，从而制备得到所述的表皮细胞生长因子模拟肽。

一种皮肤用药物，含有所述的表皮细胞生长因子模拟肽或其药学可接受的盐。

一种化妆品，含有所述的表皮细胞生长因子模拟肽或其化妆品上可接受的盐；所述的化妆品包括化妆品原料或化妆品成品。

所述的皮肤用药物或化妆品中，所述的表皮细胞生长因子模拟肽存在于药学或化妆品上可接受的递送系统和/或缓释系统中。

所述的递送系统和/或缓释系统包括脂质体、毫米级胶囊、微胶囊、纳米囊剂、海绵、囊泡、胶束、毫米级球体、微球体、纳米球体、毫米级粒子、微粒和纳米粒子。

所述的皮肤用药物或化妆品还可以包括一种或多种药学或化妆品上可接受的辅料。

所述的表皮细胞生长因子模拟肽在制备与EGFR相关的药物、化妆品或检测产品中的应用。

所述的EGFR相关药物优选为皮肤用药物；所述的EGFR相关药物或检测产品包括靶向制剂。

所述的皮肤用药物或化妆品优选为皮肤创伤修复的皮肤用药物或化妆品。

本发明通过噬菌体展示技术，以细胞生长因子受体EGFR为靶蛋白，筛选与EGFR相互作用的候选寡肽；进一步通过实验筛选获得能够显著刺激皮肤细胞增殖、促进胶原蛋白分泌的寡肽。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

1.本发明的模拟肽具有EGF类似的激活EGFR信号通路的作用，显著上调EGFR信号通路中pEGFR和pERK的蛋白水平，有效促进角质形成细胞、成纤维细胞的增殖、分化，效果优于EGF。

2.本发明的模拟肽没有细胞毒性，热稳定性显著优于EGF。

3.本发明的模拟肽与EGFR的亲和力高，且有效促进角质形成细胞、成纤维细胞的增殖、分化，在EGFR相关药品或化妆品领域具有良好的应用前景。

附图说明

图1是从噬菌体文库中筛选到的30个单克隆与EGFR的结合力鉴定结果分析图，红色虚线以上是阳性克隆。

图2是E9肽、E15肽和E20肽体外与EGFR的亲和力结果分析图。

图3是E9肽、E15肽和E20肽对HaCaT细胞的活力影响结果分析图。

图4是E9肽、E15肽和E20肽在细胞水平对EGFR信号通路中关键蛋白水平的影响结果图。

图5是E9肽和EGF在细胞水平对EGFR信号通路中关键蛋白水平的影响的蛋白芯片结果图。

图6是E9肽、E15肽和E20肽在不同浓度下促进BALB/c 3T3细胞增殖的结果分析图。

图7是E9肽和EGF的热稳定性结果分析图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

本发明实施例涉及的主要材料如下：筛选所用的M13噬菌体展示库Ph.D.-7^TM肽库试剂盒(7肽随机库)购自New England BioLabs；EGFR蛋白购自abcam公司(货号ab68104)；HaCaT细胞、BALB/c 3T3细胞购自ATCC；CCK-8试剂盒购自北京索莱宝生物科技有限公司(货号CA1210)；实施例4中所用一抗：EGFR(货号ab52894)、pEGFR(货号ab40815)、ERK1/2(货号ab17942)、pERK1/2(货号ab214362)购自abcam公司；实施例4中所用二抗：HPR-羊抗兔抗体(货号7074P2)购自Cell Signaling Technology公司。

实施例1M13噬菌体展示筛选EGFR结合肽

人EGFR蛋白以10μg/mL的浓度溶解在0.1mol/L NaHCO₃(pH 8.6)中，150μL包被ELISA板，4℃过夜包被后以5mg/mL BSA溶液封闭2h，0.1％TBST洗板6次。试剂盒提供的噬菌体展示库(input library)稀释100倍后加入100μL(10¹¹pfu/mL)到包被孔中室温孵育60min，弃孔中溶液，0.1％TBST洗板10次，加入100μL洗脱液[0.2mol/L Glycine-HCl(pH2.2)，1mg/mL BSA]，室温轻摇30min，吸出孔中溶液到新的离心管中，并加入15μL 1mol/LTris-HCl(pH 9.1)进行中和，该溶液为第一次筛选后的噬菌体。噬菌体洗脱液加入到20mLER2738培养物中培养6h，释放出的噬菌体在离心后的上清中，加入20％PEG/2.5mol/L NaCl使噬菌体沉淀并进行离心分离可得到扩大培养后的噬菌体。该噬菌体扩大培养后作为第2次筛选的input library，保持滴度为10¹¹pfu/mL，0.5％TBST洗板，以同样的方法进行第2次和第3次筛选(噬菌体富集程度见表1)。

挑取第3轮淘洗的出库平板中的单菌落，将蓝斑接种于10mL的LB培养液中，再加入过夜培养的ER2378大肠杆菌100μL，37℃、280rpm培养6h；离心后吸取离心后的上清，以此作为噬菌体储存液，储存于4℃冰箱，用于后续的ELISA检测及单链DNA提取时用。

上步骤中的噬菌体储存液用PEG/NaCl沉淀纯化后，取50μL悬液加入到包被有200ng/孔EGFR抗原的96孔板中，以任意3孔样品的混合液作为阳性对照，TBS作为阴性对照，将96孔板于37℃孵育1h。0.1％TBST洗板5次，anti-M13抗体(购自abcam公司，货号ab24229)(1μg/mL)，以100μL每孔加入到96孔板中，37℃孵育1h。0.1％TBST洗板5次，加入100μL/孔TMB显色液，37℃孵育15min，测量各孔在450nm波长处的吸光值OD₄₅₀，当筛选噬菌体OD值/阴性对照OD值高3倍以上时，界定为阳性克隆，挑选培养后，做质粒抽提。将阳性菌落抽提质粒送至生物工程(上海)股份有限公司进行测序。

表1噬菌体的富集程度

筛选轮数	输入噬菌体量(pfu)	输出噬菌体量(pfu)	得率
				1	1×10<sup>11</sup>	5.2×10<sup>5</sup>	5.2×10<sup>-6</sup>
2	1×10<sup>11</sup>	4.02×10<sup>5</sup>	4.02×10<sup>-6</sup>
				3	1×10<sup>11</sup>	6.12×10<sup>5</sup>	6.12×10<sup>-6</sup>

从第3轮淘洗的噬菌体平板上随机挑取30个，经扩增后，收集噬菌体液，用前述ELISA方法初步检测噬菌体单克隆与EGFR的结合能力。当噬菌体单克隆与EGFR结合的OD₄₅₀值为阴性对照组的3倍以上时，可认为该噬菌体对EGFR具有较高的亲和力，界定为阳性克隆。最后经过ELISA初步鉴定，共得到了22个阳性单克隆，从中挑选8个单克隆送测序(图1)。

我们对8个单克隆的测序结果进行了分析，发现其中有3个单克隆具有类似的氨基酸序列，并且在噬菌体单克隆与EGFR的亲和力实验中，这3个单克隆的亲和力也较高(表2)。

表2阳性克隆测序分析

实施例2 7肽和EGFR的亲和力测定

委托苏州强耀生物科技有限公司合成表2中的E9、E15和E20寡肽，通过ELISA方法比较寡肽和EGFR的亲和力。

(1)分别配制浓度为10μg/mL、1μg/mL和0.5μg/mL的EGFR包被液，以100μL/孔加入到96孔酶标板中，于4℃包被过夜。

(2)0.1％TBST洗板5次，每次3min。

(3)用5％BSA封闭，300μL/孔，37℃孵育2h。

(4)0.1％TBST洗板5次，每次3min。

(5)加入不同浓度的合成的肽-FITC，37℃孵育2h。

(6)0.1％TBST洗板5次，每次3min。

(7)加入HRP标记的anti-FITC单克隆抗体(购自abcam公司，货号ab19224)，以ABTS显色底物溶液进行显色，测定OD₄₁₀值。

如图2所示，结果表明我们合成的3个肽都与EGFR有亲和力，其中E9肽与EGFR的亲和力最高，E15肽和E20肽与EGFR的亲和力低于EGF。

实施例3 7肽细胞毒性测定

(1)HaCaT细胞接种于96孔细胞培养板中(5×10⁵个细胞/孔)，37℃，5％CO₂细胞培养箱培养24h。

(2)加入不同稀释浓度(0.1μM、1.0μM、10.0μM)的待检测寡肽(E9、E15、E20)，继续培养48～72h。

(3)每孔加入10μL CCK-8试剂，37℃，5％CO₂细胞培养箱孵育2h后取出。

(4)用酶标仪读取96孔板在450nm和630nm的吸光值，以630nm为参比波长，在450nm处测定吸光度，记录测定结果。

如图3所示，结果表明最大浓度为10μM时，7肽对HaCaT细胞没有毒性。

同时我们通过相同的方法也检测了7肽对BALB/c 3T3成纤维细胞的毒性，结果表明7肽在浓度为10μM范围内没有细胞毒性，而目前寡肽在实际使用时的浓度大多在10μM以下。

实施例4 7肽促进细胞增殖机制研究

(1)HaCaT细胞接种于6孔细胞培养板中(5×10⁵个细胞/孔)，37℃，5％CO₂细胞培养箱培养，待细胞密度达到70％左右时，更换为DMEM无血清细胞培养基；加入终浓度为10nM的合成7肽，同时EGF蛋白(终浓度10nM，购自abcam，货号ab9697)作为阳性对照。

(2)37℃，CO₂细胞培养箱继续培养16～24h。

(3)裂解细胞：细胞裂解缓冲液(20mM Trix HCl，150mM NaCl，2mM EDTA，5mMβglycerophosphate，1mM MgCl₂，1％Trixton-X100，10μg/mL蛋白酶抑制剂)收集HaCaT细胞，将收集细胞的离心管放置冰上30分钟之后，12000rpm，4℃离心10分钟，收集细胞裂解上清。

(4)蛋白电泳：BCA蛋白浓度测定试剂盒(购自赛默飞公司，货号23225)测定细胞裂解上清中的蛋白浓度，调整蛋白至相同浓度，加入5×蛋白上样缓冲液，100℃加热6分钟，样品经12％SDS-PAGE电泳。

(5)转膜：蛋白电泳结束后，转膜夹上依次放上海绵垫、滤纸、NC膜、蛋白胶、滤纸和海绵垫，蛋白胶靠近转膜槽阴极一端，250mA恒流转膜2小时。

(6)转膜结束后，NC膜用5％脱脂牛奶封闭1小时，加入对应的一抗(EGFR、pEGFR、ERK1/2、pERK1/2)，4℃孵育过夜；再用PBST洗膜3次，每次5分钟；加入HPR标记的二抗，室温孵育1小时，再用PBST洗膜3次，每次5分钟；ECL发光试剂盒(购自赛默飞，货号32209)显影，记录并分析实验结果。westernblot分析HaCaT细胞经不同序列的7肽处理之后EGFR信号通路相关蛋白的表达水平。

不同序列7肽对HaCaT细胞增殖信号通路的激活效果有明显差异，从噬菌体随机肽库中筛选的E9肽作用于HaCaT细胞之后，能够激活细胞的增殖信号，上调pEGFR和pERK1/2的蛋白水平，其激活细胞增殖的效果好于EGF，另外2个7肽与阴性对照相比，对pEGFR和pERK1/2的蛋白水平没有影响，不能激活EGFR信号通路(图4)。

实施例5蛋白芯片比较E9肽和EGF对HaCaT细胞EGFR信号通路蛋白水平的影响

(1)HaCaT细胞接种于6孔细胞培养板中(5×10⁵个细胞/孔)，37℃，5％CO₂细胞培养箱培养，待细胞密度达到70％左右时，更换为DMEM无血清细胞培养基；分别加入终浓度为10nM的E9肽和EGF蛋白(阳性对照)。

(2)37℃，CO₂细胞培养箱继续培养24h。

(3)细胞裂解缓冲液(PBS，1％Trixton-X100，10μg/mL蛋白酶抑制剂)收集HaCaT细胞，细胞裂解上清用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定浓度，按照瑞博奥AAH-PER-1试剂盒说明书的操作步骤，分析细胞裂解上清中EGFR信号通路中相关蛋白的水平。

HaCaT细胞经E9肽和EGF处理后，EGFR和磷酸化EGFR的蛋白水平无显著差异，说明我们筛选的E9肽具有EGF类似的激活EGFR信号通路的作用(图5)。

实施例6 7肽促成纤维细胞增殖能力测定

(1)BALB/c 3T3细胞接种于96孔细胞培养板中(5000个细胞/孔)，37℃，5％CO₂细胞培养箱培养24h。

(2)换用DMEM无血清培养基继续培养12h。

(3)分别加入EGF标准品、待检测样品以及PBS(阴性对照组)，继续培养48～72h。

(4)每孔加入10μL CCK-8试剂，37℃，5％CO₂细胞培养箱孵育2h后取出。

(5)用酶标仪读取96孔板在450nm和630nm的吸光值，以630nm为参比波长，在450nm处测定吸光度，记录测定结果。相对促细胞增殖率＝(实验组450nm吸光值-阴性对照组450nm吸光值)/阴性对照组450nm吸光值×100％。

结果如图6所示，E9肽对成纤维细胞增殖能力具有明显促进作用，效果优于EGF。

实施例7 7肽E9和EGF热稳定性比较

1.5mL离心管中含有100μL浓度为10μg/mL的EGF蛋白，100℃水浴1、2、3、4小时，蛋白样品经Trincine-SDS-PAGE电泳，兔抗EGF抗体(购自Abcam公司，货号ab184266)用于western blot检测。7肽E9浓度为0.5mg/mL的样品，水浴处理条件同EGF，RP-HPLC分别分析7肽E9、EGF的含量。

Western blot结果表明EGF经100℃处理4h之后，EGF含量只有处理前的2％(蛋白条带灰度分析结果图7B)，蛋白几乎完全降解；而7肽E9经100℃处理4h之后还是非常稳定，没有降解(图7D)。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 广州启鸣生物科技有限公司

<120> 一种表皮细胞生长因子模拟肽及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> E9肽氨基酸序列

<400> 1

Asn Tyr Leu Asp Glu Gly Tyr

1 5

<210> 2

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> E15肽氨基酸序列

<400> 2

Arg Glu Gly Asp Glu Gly Tyr

1 5

<210> 3

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> E20肽氨基酸序列

<400> 3

Gly Arg Pro Asp Glu Gly Tyr

1 5

Claims

1.一种表皮细胞生长因子模拟肽，其特征在于：

所述的表皮细胞生长因子模拟肽氨基酸序列为NYLDEGY。

2.一种核酸分子，其特征在于：

编码权利要求1所述的表皮细胞生长因子模拟肽。

3.一种重组表达载体，其特征在于：

含有编码权利要求1所述的表皮细胞生长因子模拟肽的核酸分子。

4.一种重组工程细胞，其特征在于：

含有权利要求3所述的重组表达载体。

5.一种制备所述的表皮细胞生长因子模拟肽的方法，其特征在于：

所述的方法包括应用多肽化学合成方法合成如序列SEQ ID NO.1所示的模拟肽，或者应用DNA重组技术，通过表达所述的核酸分子获得所述的模拟肽。

6.一种皮肤用药物或化妆品，其特征在于：

含有权利要求1所述的表皮细胞生长因子模拟肽或其药学或化妆品上可接受的盐。

7.根据权利要求6所述的皮肤用药物或化妆品，其特征在于：

所述的表皮细胞生长因子模拟肽存在于药学或化妆品上可接受的递送系统和/或缓释系统中；

所述的皮肤用药物或化妆品为皮肤创伤修复的皮肤用药物或化妆品；

所述的皮肤用药物或化妆品还包括一种或多种药学或化妆品上可接受的辅料；

所述的化妆品包括化妆品原料、化妆品成品。

8.根据权利要求7所述的皮肤用药物或化妆品，其特征在于：

9.权利要求1所述的表皮细胞生长因子模拟肽在制备与EGFR相关的药物、化妆品或检测产品中的应用。

10.根据权利要求9所述的表皮细胞生长因子模拟肽在制备与EGFR相关的药物、化妆品或检测产品中的应用，其特征在于：

所述的EGFR相关药物或检测产品包括靶向制剂。