CN109874780A - 渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法 - Google Patents
渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109874780A CN109874780A CN201910175354.2A CN201910175354A CN109874780A CN 109874780 A CN109874780 A CN 109874780A CN 201910175354 A CN201910175354 A CN 201910175354A CN 109874780 A CN109874780 A CN 109874780A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- serum
- stock solution
- frozen stock
- cell
- free
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 230000035699 permeability Effects 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003223 protective agent Substances 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 8
- PUKLDDOGISCFCP-JSQCKWNTSA-N 21-Deoxycortisone Chemical group C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@@](C(=O)C)(O)[C@@]1(C)CC2=O PUKLDDOGISCFCP-JSQCKWNTSA-N 0.000 claims abstract description 11
- FCYKAQOGGFGCMD-UHFFFAOYSA-N Fulvic acid Natural products O1C2=CC(O)=C(O)C(C(O)=O)=C2C(=O)C2=C1CC(C)(O)OC2 FCYKAQOGGFGCMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 229940095100 fulvic acid Drugs 0.000 claims abstract description 11
- 239000002509 fulvic acid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 33
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 23
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 16
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 12
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 12
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 claims description 4
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 7
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 45
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 Acyl serine Chemical compound 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002070 Transferrins Human genes 0.000 description 1
- 108010015865 Transferrins Proteins 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000254 damaging effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- GPOMTENHXXIXEG-UHFFFAOYSA-N ethyl(2-hydroxyethyl)azanium;chloride Chemical compound Cl.CCNCCO GPOMTENHXXIXEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 description 1
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 description 1
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Abstract
本发明涉及一种渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法，所述渗透性保护剂为富里酸。本发明技术方案，具有成本低廉、低毒性、细胞复苏后成活率高的技术效果。
Description
技术领域
本发明涉及细胞培养领域，具体涉及一种用于人血液由来淋巴细胞、粒细胞及脐带血由来的多功能干细胞冻存的渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法。
背景技术
细胞冻存及复苏是细胞培养技术中的重要技术,细胞冻存是细胞长期保存的重要手段。细胞冻存液,作为细胞冻存时必须使用的一种溶液,其作用是将需要冻存的细胞悬浮于冻存液,供给细胞生命代谢所必须的营养物质,同时可以防止或减少冷冻冰晶对细胞的损伤作用。
在现有技术中,细胞冻存经常采用渗透性保护剂,例如甘油和二甲基亚砜(DMSO)两种,而甘油作为冷冻保护剂冻存的免疫细胞存活率较低,但DMSO却可以迅速透入细胞,提高细胞膜对水的通透性,使水分在细胞冻结前透出细胞外形成冰晶,成为免疫细胞冻存最理想的冷冻保护剂，目前被广泛使用。
一般使用培养基、血清和二甲亚砜(DMSO)按照一定比例混合的方法来冻存细胞,DMSO用量为10％,但高浓度的DMSO有较大毒性,会对细胞体及人体造成伤害；且传统冻存液配方中所使用的血清成本高,增加动物病原污染的可能性。此外,有研究表明长期与胎牛血清接触的细胞会对溶液介质中的胎牛血清发生内吞,内吞胎牛血清后的间充质干细胞有可能发生某些蛋白表达的变化,应用于人体后可发生异种动物蛋白引起的免疫反应,不能直接用于临床输注。因此,利用含有血清的冻存液冻存的细胞会给临床使用带来一定的风险。
发明内容
基于上述问题，本发明提供一种成本低廉、低毒性、细胞复苏后成活率高的渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：一种渗透性保护剂，所述渗透性保护剂为富里酸。
一种无血清冻存液，按体积百分比包括：88％-94％的无血清培养基，6％-12％的渗透性保护剂，所述渗透性保护剂为富里酸。
本发明进一步设置：所述无血清培养基包括3-10g/L人血白蛋白、30-100mg/L谷胱酰肽以及基础培养基，所述基础培养基为RPMI1640、DMEM、F12、DMEM/F12或IMDM中的一种或几种，所述无血清培养基pH为6.8-7.4。
本发明进一步设置：按体积百分比包括：92％的无血清培养基，8％的渗透性保护剂。
本发明可进一步优选的采用发明人在公开号为CN108707579A的发明专利申请中的方案，如无血清培养基中还含有胰岛素、转铁蛋白、丙酮酸钠、亚硒酸钠、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、亚油酸、油酸、2-氨基乙醇盐酸盐、HEPES和碳酸氢钠等。
一种无血清冻存液的制备方法，将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光。
一种无血清冻存液的使用方法，包括：
细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；
冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。
本发明具有以下效果：1.富里酸有效地代替二甲基亚砜，在细胞冻存领域为首创；2.提供了一种制备方法简单、成本低廉、低毒性、细胞复苏后成活率高；3.该冻存液需现配现用,细胞复苏后无需倒掉冻存液后再培养,可直接将其加入到培养液中,至长满后传代或使用,方便快捷；4.该细胞冻存液不会引入外源蛋白,降低了动物病原污染的可能性,采用该冻存液经冻存复苏后的细胞,存活率达81-92％、贴壁生长好、纯度高、分化能力强,可用于继续培养或临床细胞直接回输,安全有效,在临床上具有良好的应用前景。
附图说明
图1为本发明实施例3无血清冻存液在液氮冻存6个月，显微镜下细胞复苏后24小时的生长情况。
具体实施方式
本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
实施例1
1)无血清冻存液按体积比配比：88％的无血清培养基(无血清培养基采用开号为CN108707579A的发明专利申请中的方案)，12％的富里酸；
2)将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光；
3)细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；
冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。
实施例2
1)无血清冻存液按体积比配比：92％的无血清培养基(无血清培养基采用开号为CN108707579A的发明专利申请中的方案)，8％的富里酸；
2)将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光；
3)细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；
冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。
实施例3
1)无血清冻存液按体积比配比：94％的无血清培养基(无血清培养基采用开号为CN108707579A的发明专利申请中的方案)，6％的富里酸(Fulvic Acid)，CAS登录号479-66-3；
2)将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光；
3)细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；
冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。
对比例
1)无血清冻存液按体积比配比：90％的无血清培养基(无血清培养基采用开号为CN108707579A的发明专利申请中的方案)，10％的二甲亚砜；
2)将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光；
3)细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；
冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。
性能测验
将对比例以及实施例1、2、3用10倍培养液从新重悬细胞，用10ul0.4％台盼蓝和10ul重悬细胞混匀，计数。活细胞率可达85.4％－92.3％。实验结果显示无血清富里酸冻存液与传统二甲基亚砜冻存液在冷冻细胞效果上没有区别。
无血清冻存液在液氮冻存6个月，显微镜下细胞复苏后24小时的生长情况(参见附图1)。暗色为死细胞，透亮为活细胞。经过计数，细胞生存率为92％。(10x10倍率)
Claims (6)
1.一种渗透性保护剂，其特征在于：所述渗透性保护剂为富里酸。
2.一种无血清冻存液，其特征在于：按体积百分比包括：88％-94％的无血清培养基，6％-12％的渗透性保护剂，所述渗透性保护剂为富里酸。
3.根据权利要求2所述的无血清冻存液，其特征在于：所述无血清培养基包括3-10g/L人血白蛋白、30-100mg/L谷胱酰肽以及基础培养基，所述基础培养基为RPMI1640、DMEM、F12、DMEM/F12或IMDM中的一种或几种，所述无血清培养基pH为6.8-7.4。
4.根据权利要求2所述的无血清冻存液，其特征在于：按体积百分比包括：92％的无血清培养基，8％的渗透性保护剂。
5.一种根据权利要求1-3任意一项所述的无血清冻存液的制备方法，其特征在于：将装有所述无血清冻存液的灭菌过滤器安装在超净工作台或安全柜中，用压力泵将混匀液体泵出，分装到无菌容器中；将分装好的容器密封并将其储存在4至10℃冷藏柜，且需避光。
6.一种根据权利要求5制备的无血清冻存液的使用方法，其特征在于：
包括：
细胞冻存：将细胞加入所述无血清冻存液重悬,将细胞悬液加入到冻存管中,冻存管置于已处于常温状态的程序降温盒中,再将程序降温盒放置于-80℃超低温冰箱过夜,第二天转移至液氮罐冻存架中保进一步地；
冻存细胞复：从液氮容器中取出冻存管直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化；从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀；在1000rpm情况下离心5min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910175354.2A CN109874780A (zh) | 2019-03-08 | 2019-03-08 | 渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910175354.2A CN109874780A (zh) | 2019-03-08 | 2019-03-08 | 渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109874780A true CN109874780A (zh) | 2019-06-14 |
Family
ID=66931421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910175354.2A Pending CN109874780A (zh) | 2019-03-08 | 2019-03-08 | 渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109874780A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110583622A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-20 | 依科赛生物科技（太仓）有限公司 | 一种t细胞无血清冻存液及其使用方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11292701A (ja) * | 1998-04-03 | 1999-10-26 | Shimizu Pharmaceutical Co Ltd | 細胞保護液 |
| CN101310009A (zh) * | 2005-11-17 | 2008-11-19 | 日本全药工业株式会社 | 细胞保存用水溶液 |
| CN108707579A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-26 | 北京美迪阿姆科技发展有限公司 | 一种人t淋巴细胞培养用的无血清培养基及制备方法和培养方法 |
| CN108782544A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-11-13 | 吉林省拓华生物科技有限公司 | 一种大量冻存间充质干细胞的冻存液及方法 |
| CN109221082A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-18 | 上海慧存医疗科技有限公司 | 细胞冻存液、冻存复苏方法及其应用 |
-
2019
- 2019-03-08 CN CN201910175354.2A patent/CN109874780A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH11292701A (ja) * | 1998-04-03 | 1999-10-26 | Shimizu Pharmaceutical Co Ltd | 細胞保護液 |
| CN101310009A (zh) * | 2005-11-17 | 2008-11-19 | 日本全药工业株式会社 | 细胞保存用水溶液 |
| CN108707579A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-10-26 | 北京美迪阿姆科技发展有限公司 | 一种人t淋巴细胞培养用的无血清培养基及制备方法和培养方法 |
| CN108782544A (zh) * | 2018-06-28 | 2018-11-13 | 吉林省拓华生物科技有限公司 | 一种大量冻存间充质干细胞的冻存液及方法 |
| CN109221082A (zh) * | 2018-09-14 | 2019-01-18 | 上海慧存医疗科技有限公司 | 细胞冻存液、冻存复苏方法及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| YU XIAO 等: ""Effects of fulvic acids on goat sperm"", 《ZYGOTE》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110583622A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-12-20 | 依科赛生物科技（太仓）有限公司 | 一种t细胞无血清冻存液及其使用方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105685016B (zh) | 细胞冻存保护组合物、该组合物的用途以及细胞冻存的方法 | |
| CN107027743B (zh) | 细胞冻存液及细胞冻存方法 | |
| CN104663649B (zh) | 人类卵母细胞冷冻保护剂 | |
| CN109090100A (zh) | 一种间充质干细胞冻存液及其制备方法与使用方法 | |
| WO2005052138A1 (en) | Cryopreservation of pluripotent stem cells | |
| CN107094753A (zh) | 一种造血干细胞冻存液及造血干细胞冻存方法 | |
| CN112889813B (zh) | 一种细胞存活率高的人脐带间充质干细胞的冻存方法 | |
| CN111183972A (zh) | 一种组合物及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法 | |
| CN108235981A (zh) | 一种可临床使用的细胞冻存液 | |
| CN111149795A (zh) | 一种冷冻保护剂及其应用和一种精子冷冻液及其制备方法 | |
| CN108450458A (zh) | 一种无血清细胞冻存液 | |
| WO2000019817A1 (en) | Cell preconditioning and cryopreservation medium | |
| CN105211052B (zh) | 一种培养后的nkt细胞的冻存液及其制备方法 | |
| CN109619088A (zh) | 一种脂肪间充质干细胞的保存液 | |
| CN110024775A (zh) | 临床细胞制剂用保存液的配方和用途 | |
| JP6073794B2 (ja) | 培養膵島 | |
| CN109874780A (zh) | 渗透性保护剂、无血清冻存液以及该无血清冻存液的制备与使用方法 | |
| Quan et al. | Oocyte cryopreservation based in sheep: The current status and future perspective | |
| CN108902129A (zh) | 细胞冻存组合物及其应用 | |
| CN109329272A (zh) | 一种精子冻存液及其制备方法和应用 | |
| CN103719071B (zh) | 一种大口黑鲈精子超低温冷冻保存及复苏方法 | |
| WO2008127959A1 (en) | Ergothioneine and/or its derivatives as a cell preservative | |
| WO2015026307A1 (en) | Boron added cell cryopreservation medium | |
| BR112013001191B1 (pt) | Método ex vivo para isolamento de ilhotas de pâncreas de tecido pancreático | |
| CN106993605A (zh) | 一种绒山羊冷冻精液稀释液配方 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240220 Address after: Room 305, Building 3, No. 88 Kechuang 6th Street, Beijing Economic and Technological Development Zone, Tongzhou District, Beijing, 100176 Applicant after: Beijing Kangda Xingjian Technology Development Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 100000 b217, floor 2, building B, No. 18, West Ring South Road, Beijing Economic and Technological Development Zone, Beijing Applicant before: BEIJING MEIDI AMU TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co.,Ltd. Country or region before: China |