CN109824664A - 一组抗肿瘤吲哚类生物碱化合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种抗癌化合物，其为吲哚类生物碱系列化合物，其通式为(I)。吲哚类生物碱对多种实体肿瘤，如人乳腺癌细胞有非常好的抑制作用，进而对肿瘤生长产生了抑制作用。本发明的化合物对癌细胞的生长有抑制作用，但是对正常细胞的生长却没有抑制作用。本发明的化合物除了可单独使用外，还可与其它药物联合用药。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一组抗肿瘤吲哚类生物碱化合物及其制备方法和应用。
背景技术
随着对癌症的不断深入地探索与研究，DNA和组蛋白修饰异常所导致的肿瘤抑制基因和/或原癌基因突变被证实是肿瘤发生的主要原因；而组蛋白甲基转移酶(HMTs)，特别是G9a(常染色质组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶，EHMT2)参与了异染色质的形成、DNA甲基化、转录沉默过程，与肿瘤细胞增殖、凋亡、分化及运动能力有着密不可分的联系。研究表明，G9a与免疫细胞的分化、病理性心脏肥大、阿尔茨海默病，人类免疫缺陷病毒-1潜伏期的维持等过程或疾病相关；此外，G9a高表达于许多肿瘤组织中，如结肠癌、肝癌、恶性和转移性卵巢癌、膀胱癌、骨髓癌、前列腺癌组织中；进一步的研究发现，G9a的表达异常增高与肿瘤预后不良有密切相关性；小鼠模型中，敲除G9a后，急性粒细胞性白血病发展放缓；由此可见，G9a介导的组蛋白甲基化与肿瘤的发生发展及其在生物学过程中扮演着重要角色，因此，可将G9a作为抗肿瘤药物研究的新靶标，从而对肿瘤形成中所涉及的组蛋白修饰的研究，探索通过对G9a酶的表达调控来逆转表观遗传修饰，为癌症的预防和治疗提供新思路、新方向。
近十年来，G9a抑制剂已逐渐成为一个研究的热点。然而，G9a抑制剂的结构类型的化合物较少，体内活性数据缺乏，并且还处于基础研究阶段，尚未有G9a抑制剂进入临床研究的报道。目前，G9a的抑制剂按作用可分为底物竞争性抑制剂和SAM竞争性抑制剂两类；按化学结构可分为喹唑啉类抑制剂、苯并咪唑类抑制剂、螺环-吲哚类抑制剂、喹啉类抑制剂、蒽环并异噁唑类抑制剂等。其中研究的最广泛的是喹唑啉类抑制剂及其衍生物，而其它两种抑制剂的报道较少。
喹唑啉类化合物BIX01294被广泛用于作为G9a抑制剂的阳性药来研究，有较好的酶活性水平活性(IC50＝1.9μmol/L)，但细胞活性较差，仅在4.1μmol/L时能降低H3k9me2水平。对BIX01294的进行结构优化，得到的一个在细胞活性水平较高G9a抑制剂UNC0642，在低浓度下即可降低人成骨肉瘤u2os细胞、人胰腺癌胞PANC-1、前列腺癌细胞系PC3中的H3K9me2水平。
本发明的吲哚类生物碱化合物是一种全新结构的G9a抑制剂，与阳性药BIX01294和UNC0642相比，对人乳腺癌细胞MDA-MB 231具有更高的抑制活性，具有很好开发前景。因此，本发明提供了一类具有结构新颖、活性高、毒性小，具有抗肿瘤应用潜力的吲哚类生物碱化合物。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一组具有抑制组蛋白甲基化转移酶G9a活性的吲哚生物碱化合物，在细胞水平有很好的抑制G9a活性，明显优于阳性对照物BIX01294和UNC0642，具有较好的抗肿瘤应用前景。
本发明采用以下技术方案实现本发明的目的，一组吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐，具有通式为(I)的化学结构：
其中：
R1，R2，R3分别选自H、Cl、F、Br、-CH3、-OH、-SH、-OCH3、-NH2、-CH2CH3、-NHCH3、-OCH2CH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2；n＝1-5。
优选地，所述通式(I)为
其中：
R1＝H，则R2＝Cl、F、-OCH3；R2＝H，则R1＝Cl、F、-OCH3。
优选地，所述通式(I)的吲哚类生物碱系列化合物选自：
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-甲氧基-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
及其药学上可接受的盐。
本发明还提供一种如上所述的吲哚类生物碱化合物或其可药用盐的制备方法，包括以下步骤：
(1)氮气保护，冰浴至0℃条件下，在容器中缓慢滴加三氯氧磷，缓慢恢复至室温，缓慢滴加相对应吲哚衍生物和N，N-二甲基甲酰胺的混合液，常温反应3h，反应结束后，将反应体液倒入水中，饱和碳酸钠调节pH＝8左右，乙酸乙酯萃取，柱层析，得中间体1；
(2)以硝基甲烷作为溶剂，使对应中间体1和乙酸铵溶于硝基甲烷，加热回流4h，反应结束后，加水，乙酸乙酯萃取，柱层析得中间体2；
(3)冰浴条件下，在容器中加入氢化铝锂，缓慢滴加四氢呋喃，制成氢化铝锂混悬液，缓慢加入中间体2和四氢呋喃溶液，加热回流3h反应结束后冰水淬灭，乙酸乙酯稀释后加入硅藻土强烈搅拌，抽滤，柱层析得中间体3；
(4)将3-(氯甲基)对茴香醛溶于适量的乙腈，然后缓慢滴加环己亚胺乙腈溶液，常温反应4h，得中间体4；
(5)在容器中，依次加入中间体3、中间体4，再加冰乙酸后，加热回流4h，将反应体液倒入水中，用饱和碳酸钠调节pH＝8，乙酸乙酯萃取，柱层析，获得最终产物吲哚类生物碱5。
本发明的另一目的在于提供了上述化合物在对抑制组蛋白甲基化转移酶G9a活性的应用。
本发明还提供了上述化合物在制备治疗癌症的药物中的应用。
优选地，所述药物还包含医学上可用辅料。
优选地，所述癌症为结肠癌、肝癌、恶性和转移性卵巢癌、膀胱癌、骨髓癌或前列腺癌。
与现有技术相比，本发明的有益效果：本发明的化合物具有新作用靶点，基本无毒副作用等特点，是一类新的抗肿瘤药物。动物实验数据表明，吲哚类生物碱对多种实体肿瘤，如人乳腺癌细胞有非常好的抑制作用，进而对肿瘤生长产生了抑制作用。本发明的化合物对癌细胞的生长有抑制作用，但是对正常细胞的生长却没有抑制作用。本发明的化合物除了可单独使用外，还可与其它药物联合用药。
附图说明
图1为本发明吲哚类生物碱系列化合物对癌细胞活力抑制率的影响示意图。
图2为本发明吲哚类生物碱系列化合物与G9a的结合效率示意图。
图3为本发明吲哚类生物碱系列化合物与G9a的亲和力效果示意图。
具体实施方式
为了更加简洁明了的展示本发明的技术方案、目的和优点，下面结合具体实施例及附图对本发明做进一步的详细描述。本发明中的所有化合物的结构经1H、13C NMR和MS所确定。
实施例1：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物1)的制备
步骤1：5-氯吲哚-3-甲醛的中间体制备
在圆底烧瓶中加入(5.0ml，33.00mmol)无水的N，N-二甲基甲酰胺，在氮气保护下，降温至0℃，缓慢滴加三氯氧磷(6.0ml，33.00mmol)，恢复至室温后，缓慢滴加(1.00g，6.6mmol)5-氯吲哚的N，N-二甲基甲酰胺混合液，常温反应3h，直至原料完全消失，将反应液倒入水中，用饱和碳酸钠溶液调节酸碱度(pH＝8)，然后用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，除去有机相，得粗品，经柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝2:1)分离提纯，得黄色固体5-氯吲哚-3-甲醛(0.95g，80.2％)。MS(ESI):180.0205[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.30(s，1H)，9.93(s，1H)，8.36(s，1H)，8.06(s，1H)，7.54(d，J＝8.6Hz，1H)，7.28(d，J＝8.6Hz，1H)。
步骤2：5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的中间体制备
在圆底烧瓶中，依次加入(0.75g，4.20mmol)5-氯吲哚-3-甲醛、(1.29g，16.80mmol)乙酸铵和(10.0ml，0.19mol)硝基甲烷，加热回流，直至原料完全消失，再加入20.0ml水，用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，除去有机相，得粗品，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)分离提纯，得黄色固体5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚(0.59g，63.7％)。MS(ESI):223.0265[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.35(s，1H)，8.39(d，J＝13.5Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.10(t，J＝6.7Hz，2H)，7.53(d，J＝8.6Hz，1H)，7.27(d，J＝8.6Hz，1H)。
步骤3：5-氯-1H-吲哚-3-乙胺的中间体制备
在冰浴条件下，将氢化铝锂(0.51g，13.40mmol)加入到圆底烧瓶中，缓慢滴加10.0mL四氢呋喃，制成氢化铝锂混悬液后，再滴加(0.50g，2.3mmol)5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的四氢呋喃溶液，加热回流，直至原料完全消失后，冰水淬灭，用乙酸乙酯稀释，再加入硅藻土强烈搅拌后，抽滤，收集滤液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，除去有机相，得粗品，柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝3:1)分离提纯，得无色油状物5-氯-1H-吲哚-3-乙胺(0.20g，46.8％)。MS(ESI):195.0681[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.04(s，1H)，7.56(s，1H)，7.35(d，J＝8.6Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.05(d，J＝8.6Hz，1H)，2.78(d，J＝6.2Hz，2H)，2.74(d，J＝6.2Hz，2H)。
步骤4：3-((氮杂蒽基)甲基)-4-甲氧基苯甲醛的中间体制备
将(2.00g，10.90mmol)3-(氯甲基)对茴香醛溶于10ml乙腈中，缓慢滴加环己亚胺(2.20g，21.80mmol)的乙腈溶液，常温反应，直至原料完全消失后，减压蒸馏，得粗品，柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝3:1)分离提纯，得黄色油状物3-((氮杂蒽基)甲基)-4-甲氧基苯甲醛(2.20g，82.7％)。MS(ESI):248.1641[M+H]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.94–9.85(m，1H)，8.00(s，1H)，7.77(d，J＝8.4Hz，1H)，6.95(d，J＝8.5Hz，1H)，3.90(s，3H)，3.68(s，2H)，2.74–2.63(m，4H)，1.71–1.58(m，8H)。
步骤5：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物1)的制备
依次将(0.23g，0.96mmol)3-((氮杂蒽基)甲基)-4-甲氧基苯甲醛、(0.15g，0.80mmol)5-氯-1H-吲哚-3-乙胺和5.0ml冰乙酸加入到圆底烧瓶中，加热回流，直至原料完全消失后，将反应液倒入水中，用饱和碳酸钠调节酸碱度(PH＝8)，然后用乙酸乙酯萃取，收集有机相，用无水硫酸钠干燥，减压蒸馏，除去有机相，得粗品，柱层析(二氯甲烷：甲醇＝15:1)分离提纯，得黄色固体1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(0.17g，52.3％)化合物1。MS(ESI):446.1963[M+Na]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.83(s，1H)，7.46(dd，J＝19.9，6.0Hz，2H)，7.31–7.14(m，2H)，7.03(d，J＝6.4Hz，1H)，6.80(t，J＝7.4Hz，1H)，5.05(d，J＝6.3Hz，1H)，3.90–3.62(m，5H)，3.32(s，1H)，3.09(d，J＝7.1Hz，1H)，2.79(s，6H)，1.62(d，J＝37.6Hz，8H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ157.35，136.44，134.44，133.82，131.37，128.45，128.34，124.55，121.36，117.44，112.10，110.69，108.98，57.01，55.53，55.10，54.84，42.70，27.13，25.92，22.36。
实施例2：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物2)的制备
步骤1：6-氯吲哚-3-甲醛的中间体制备
以制备5-氯吲哚-3-甲醛类似方法合成，得黄色固体(0.99g，83.2％)。MS(ESI):180.0208[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.22(s，1H)，9.93(s，1H)，8.34(s，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，1H)。
步骤2：6-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的中间体制备
以制备5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的方法合成，得黄色固体(0.61g，65.8％)。MS(ESI):223.0263[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.28(s，1H)，8.38(d，J＝13.5Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.11–7.90(m，2H)，7.57(s，1H)，7.21(d，J＝8.5Hz，1H)。
步骤3：6-氯-1H-吲哚-3-乙胺的中间体制备
以制备5-氯-1H-吲哚-3-乙胺方法合成，得无色油状物(0.25g，56.2％)。MS(ESI):195.0679[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.97(s，1H)，7.52(d，J＝8.4Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.18(s，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，1H)，2.83–2.77(m，2H)，2.76–2.70(m，2H)。
步骤4：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物2)的制备
以实施例1化合物1类似方法，得黄色固体，化合物2(0.16g，48.6％)。MS(ESI):446.1966[M+Na]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.76(s，1H)，7.43(d，J＝8.2Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.11(s，1H)，7.09–7.02(m，2H)，6.77(d，J＝8.3Hz，1H)，4.91(s，1H)，3.78(s，3H)，3.62(dd，J＝36.6，14.2Hz，2H)，3.34–3.27(m，1H)，3.12–3.04(m，1H)，2.89–2.75(m，2H)，2.64(s，4H)，1.55(s，8H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ157.49，136.37，135.67，133.40，130.48，128.22，127.49，127.00，126.02，119.61，118.84，110.83，110.40，109.83，57.08，55.77，55.51，55.35，42.18，27.45，27.11，22.40。
实施例3：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物3)的制备
步骤1：5-氟吲哚-3-甲醛的中间体制备
以制备5-氯吲哚-3-甲醛类似方法合成，得白色固体(0.86g，70.8％)。MS(ESI):164.0502[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.24(s，1H)，9.94(s，1H)，8.34(s，1H)，7.80(d，J＝9.5Hz，1H)，7.53(dd，J＝8.6，4.4Hz，1H)，7.11(t，J＝9.1Hz，1H)。
步骤2：5-氟-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的中间体制备
以制备5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚步骤6类似方法合成，得黄色固体(0.49g，54.8％)。MS(ESI):217.0561[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.29(s，1H)，8.38(d，J＝13.4Hz，1H)，8.27(s，1H)，8.03(d，J＝13.4Hz，1H)，7.81(d，J＝9.8Hz，1H)，7.52(dd，J＝8.4，4.4Hz，1H)，7.10(t，J＝9.0Hz，1H)。
步骤3：5-氟-1H-吲哚-3-乙胺的中间体制备
以制备5-氯-1H-吲哚-3-乙胺类似方法合成，得无色油状物(0.23g，42.3％)。MS(ESI):179.0975[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.93(s，1H)，7.44–6.97(m，3H)，6.89(t，J＝7.5Hz，1H)，2.76(dd，J＝24.0，5.2Hz，7H)。
步骤4：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物3)的制备
以制备实施例1化合物1类似方法，获得黄色固体，化合物3(0.08g，39.5％)。MS(ESI):408.2440[M+H]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.22(s，1H)，7.26(s，1H)，7.11–6.89(m，4H)，6.75(dt，J＝20.9，17.8Hz，3H)，4.91(s，1H)，3.69(s，3H)，3.53(q，J＝14.5Hz，2H)，3.24(d，J＝11.9Hz，1H)，3.00(s，1H)，2.77(d，J＝15.7Hz，1H)，2.65(d，J＝13.8Hz，1H)，2.55(s，4H)，1.46(s，9H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ158.89，157.47，156.56，137.03，133.42，132.44，130.39，128.14，127.84，127.74，127.51，111.33，111.23，110.68，110.47，109.97，109.93，109.51，109.26，103.26，103.03，57.40，55.79，55.52，55.38，42.60，27.53，27.42，27.08，22.48。
实施例4：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物4)的制备
步骤1：6-氟吲哚-3-甲醛的中间体制备
以制备5-氯吲哚-3-甲醛类似方法合成，得白色固体(0.91g，75.4％)。MS(ESI):164.0505[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.19(s，1H)，9.93(s，1H)，8.30(s，1H)，8.05(dd，J＝33.7，26.8Hz，1H)，7.33(d，J＝9.6Hz，1H)，7.09(t，J＝9.1Hz，1H)。
步骤2：6-氟-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的中间体制备
以制备5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚类似方法合成，得黄色固体(0.45g，58.6％)。MS(ESI):217.0559[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.25(s，1H)，8.39(d，J＝13.5Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.02(dd，J＝16.0，9.3Hz，2H)，7.33(d，J＝9.5Hz，1H)，7.10(dd，J＝20.1，11.2Hz，1H)。
步骤3：6-氟-1H-吲哚-3-乙胺的中间体制备
以制备5-氯-1H-吲哚-3-乙胺类似方法合成，得无色油状物(0.25g，45.8％)。MS(ESI):179.0973[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.97(s，1H)，7.81–7.36(m，1H)，7.20(dd，J＝52.8，7.3Hz，2H)，6.83(t，J＝9.2Hz，1H)，2.79(dt，J＝29.8，6.9Hz，4H)，2.08(d，J＝67.3Hz，2H)。
步骤4：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物4)的制备
以制备实施例1化合物1类似方法，得黄色固体，化合物4(0.08g，40.8％)。MS(ESI):408.2441[M+H]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.47(s，1H)，7.41(dd，J＝19.8，13.3Hz，2H)，7.11(d，J＝8.1Hz，1H)，6.86(td，J＝28.1，9.6Hz，3H)，4.98(s，1H)，3.79(s，3H)，3.64(dd，J＝31.3，14.3Hz，2H)，3.39–3.27(m，1H)，3.17–3.05(m，1H)，2.96–2.74(m，2H)，2.66(s，4H)，1.56(s，8H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ160.81，158.46，157.47，135.97，135.85，135.22，135.18，133.51，130.55，127.91，127.57，124.02，118.59，118.48，110.45，109.70，107.59，107.35，97.47，97.22，57.17，55.74，55.51，55.34，42.43，27.36，27.10，22.47。
实施例5：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物5)的制备
以制备实施例1化合物1类似方法，得黄色固体，化合物5(0.13g，58.4％)。MS(ESI):420.2640[M+H]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.19(s，1H)，7.40(s，1H)，7.11(dd，J＝18.2，8.4Hz，2H)，6.97(s，1H)，6.76(t，J＝7.1Hz，2H)，5.02(s，1H)，3.85(s，3H)，3.77(s，3H)，3.66(dd，J＝26.9，14.0Hz，2H)，3.32(d，J＝12.3Hz，1H)，3.09(s，1H)，2.84(dd，J＝25.6，18.9Hz，3H)，2.71(d，J＝15.9Hz，4H)，1.58(d，J＝20.2Hz，8H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ157.44，153.87，135.90，133.82，131.14，130.82，127.89，127.75，111.61，111.21，110.54，109.53，100.39，57.41，56.01，55.59，55.26，42.79，27.14，27.09，22.64。
实施例6：1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-甲氧基-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚(化合物6)的制备
步骤1：6-甲氧基吲哚-3-甲醛的制备
以制备5-氯吲哚-3-甲醛类似方法合成，得黄色固体(1.02g，85.6％)。MS(ESI):176.0703[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ11.94(s，1H)，9.87(s，1H)，8.15(s，1H)，7.95(d，J＝8.6Hz，1H)，7.00(s，1H)，6.86(d，J＝8.6Hz，1H)，3.79(s，3H)。
步骤2：6-甲氧基-3-(2-硝基乙烯基)吲哚的中间体制备
以制备5-氯-3-(2-硝基乙烯基)吲哚似方法合成，得黄色固体(0.58g，71.4％)。MS(ESI):219.0760[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ12.06(s，1H)，8.33(s，1H)，8.12(s，1H)，7.95(d，J＝13.4Hz，1H)，7.83(d，J＝8.7Hz，1H)，7.01(s，1H)，6.86(d，J＝8.7Hz，1H)，3.80(s，3H)。
步骤3：6-甲氧基-1H-吲哚-3-乙胺的中间体制备
以制备5-氯-1H-吲哚-3-乙胺类似方法合成，得无色油状物(0.25g，52.7％)。MS(ESI):179.0975[M+H]。1H NMR(400MHz，DMSO)δ10.61(s，1H)，7.37(d，J＝8.6Hz，1H)，6.97(s，1H)，6.84(s，1H)，6.63(d，J＝8.6Hz，1H)，3.75(s，3H)，2.80(t，J＝6.9Hz，2H)，2.71(t，J＝6.8Hz，2H)。
以制备实施例1化合物1类似方法，得黄色固体，化合物6(0.16g，56.7％)。MS(ESI):420.2642[M+H]。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(s，1H)，7.49–7.35(m，2H)，7.11(d，J＝8.2Hz，1H)，6.78(d，J＝8.4Hz，2H)，6.69(s，1H)，5.00(s，1H)，3.79(d，J＝6.6Hz，6H)，3.64(dd，J＝31.1，14.1Hz，2H)，3.37–3.26(m，1H)，3.09(d，J＝5.2Hz，1H)，2.91–2.75(m，2H)，2.67(s，4H)，1.58(s，8H)。13C NMR(101MHz，CDCl3)δ157.41，156.05，136.72，133.85，133.70，130.58，127.89，127.60，121.92，118.57，110.43，109.59，108.57，95.00，57.31，55.73，55.71，55.54，55.37，42.57，27.48，27.12，22.57。
实施例7：本发明吲哚类生物碱系列化合物的抗癌活性实验效果
细胞模型：人乳腺癌细胞MDA-MB 231
测定方法：采用溶剂DMSO作为对照组；BIX01294、UNC0642作为阳性对照组；采用MTS的方法检测化合物对乳腺癌细胞活力的影响，具体步骤为取对数生长期细胞，消化，计数，将细胞配置成2×104cell/mL密度的细胞悬液，接种到96孔板中，每孔约4000个细胞，培养过夜。轻轻吸去旧的培养基，加入含有10μM待检测药物的含药培养基，每孔200μL。于2d的同一时段更换无血清培养基(100μl)，加入MTS混合液20μL。将96孔板放入培养箱孵育1-4h后，立即用490nm波长读取吸光度。药物抑制细胞活力％＝(对照组吸光度-药物组吸光度)/对照组吸光度×100％。
从图1可知，在化合物给药浓度都为10μM/L，实施例4的化合物抑制细胞活力与阳性药UNC0642相当；实施例1和实施例2的化合物抑制细胞活力显著优于阳性药BIX01294、UNC0642，具有很好抗肿瘤研发潜力。
实施例8：本发明吲哚类生物碱系列化合物与G9a相互作用的实验效果
1、利用CETSA的方法检测本发明吲哚类生物碱系列化合物与G9a的结合效率
测定方法：
收集H1299细胞用PBS清洗一次；加入450μL含1％PMSF的RIPA，采用液氮反复冻融10次；在20000g，4℃条件下，离心20min，取上清，即得总蛋白；将上清平均分为2份，分别标记为control组、drug组；drug组加入相应量的化合物，化合物终浓度为100μM，control组给相同体积的溶剂，混合均匀，室温孵育30min；将control组和drug组的细胞裂解液分装6管(0.2ml EP)，每管25μL，采用梯度PCR仪设置6个温度梯度：37、40、43、46、49、52℃，将control、drug组各1管细胞裂解液在相应温度加热5min，25℃，3min，4℃保存；2000g，4℃离心20min，取16μL的上清，加入4μL的5×loading buffer制备蛋白样品；100℃煮5min，得到蛋白样品。再通过Western Blot方法检测细胞G9a蛋白的含量。
结果如图2所示，其中实例5的化合物能够显著的和G9a蛋白结合，而实例6的化合物显示与G9a蛋白有一定的结合能力。
2、利用SPR方法评价本发明吲哚类生物碱系列化合物与G9a的相互作用
测定方法：
在25℃下平衡的Proteon xpr36生物传感器(Bio-Rad Laboratories，Inc.，Hercules，CA)测量本发明的系列化合物和G9A之间的相互作用。将G9A从基于Tris的存储缓冲液中透析到25mM Hepes ph 8.0、2mM DTT和25mM NaCl中。GLM传感器芯片首先通过在芯片表面流动100mm的磺基NHS和100mm的EDC激活。然后将G9A在50mM NaOAC中稀释至50μg/ml，ph＝4.5并固定在表面上。然后通过流动的乙醇胺使表面失去活性。所有上述试剂均以30μl/min的流速飞行5分钟。然后用1×分析缓冲液(20mM Tris-HCl ph 8.0，25mM NaCl，0.025％吐温20，2mM DTT和1％DMSO)清洗传感器芯片表面。使用50mM NaOH(流速为100μl/min)的18s短脉冲稳定基线。将总共12000个G9A共振单元(Ru)固定在表面上，并至少稳定6h。在1×分析缓冲液(20mM Tris-HCl ph 8.0，25mM NaCl，0.025％吐温20，2mM DTT和1％DMSO)中连续稀释3倍，并以100μl/min的速率注射60或120秒。在数据分析中，使用载体的参考通道(1％DMSO)和无蛋白参考通道对基线进行归一化，并对数据进行Langmuir拟合。
从图3可知，在10μM/L浓度下条件下，实施例1和实例2的化合物与G9a有较强的亲和力，具有很好研发G9a抑制剂的潜力。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
1.一组吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐，其特征在于，具有通式为(I)的化学结构：
其中：
R1，R2，R3分别选自H、Cl、F、Br、-CH3、-OH、-SH、-OCH3、-NH2、-CH2CH3、-NHCH3、-OCH2CH3、-NHCH2CH3、-N(CH3)2；n＝1-5。
2.如权利要求1所述的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐，其特征在于，所述通式(I)为：
其中：
R1＝H，则R2＝Cl、F、-OCH3；R2＝H，则R1＝Cl、F、-OCH3。
3.如权利要求1所述的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐，其特征在于，所述吲哚类生物碱系列化合物选自：
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氯-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-氟-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-5-甲氧基-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
1-(3-((4-甲氧基-1-甲基)-4-甲氧基苯基)-6-甲氧基-2，3，4-，9-四氢-1H-吡啶并[3，4-B]吲哚；
及其药学上可接受的盐。
4.一种权要求1-3任一项所述的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)氮气保护，冰浴至0℃条件下，在容器中缓慢滴加三氯氧磷，缓慢恢复至室温，缓慢滴加相对应吲哚衍生物和N，N-二甲基甲酰胺的混合液，常温反应3h，反应结束后，将反应体液倒入水中，饱和碳酸钠调节pH＝8左右，乙酸乙酯萃取，柱层析，得中间体1；
(2)以硝基甲烷作为溶剂，使对应中间体1和乙酸铵溶于硝基甲烷，加热回流4h，反应结束后，加水，乙酸乙酯萃取，柱层析得中间体2；
(3)冰浴条件下，在容器中加入氢化铝锂，缓慢滴加四氢呋喃，制成氢化铝锂混悬液，缓慢加入中间体2和四氢呋喃溶液，加热回流3h反应结束后冰水淬灭，乙酸乙酯稀释后加入硅藻土强烈搅拌，抽滤，柱层析得中间体3；
(4)将3-(氯甲基)对茴香醛溶于适量的乙腈，然后缓慢滴加环己亚胺乙腈溶液，常温反应4h，得中间体4；
(5)在容器中，依次加入中间体3、中间体4，再加冰乙酸后，加热回流4h，将反应体液倒入水中，用饱和碳酸钠调节pH＝8，乙酸乙酯萃取，柱层析，获得最终产物吲哚类生物碱5。
5.通式为(I)的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐在对抑制组蛋白甲基化转移酶G9a活性的应用。
6.通式为(I)的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐在制备治疗癌症的药物中的应用。
7.如权利要求6所述的通式为(I)的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐，其特征在于，所述药物还包含医学上可用辅料。
8.如权利要求6所述的通式为(I)的吲哚类生物碱系列化合物或其可药用盐，其特征在于，所述癌症为乳腺癌。
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