CN109811016A - 一种发酵型乙酸乙酯的生产方法 - Google Patents

一种发酵型乙酸乙酯的生产方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109811016A
CN109811016A CN201910168206.8A CN201910168206A CN109811016A CN 109811016 A CN109811016 A CN 109811016A CN 201910168206 A CN201910168206 A CN 201910168206A CN 109811016 A CN109811016 A CN 109811016A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ester
fermentation
liquid
ethyl acetate
yeast
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201910168206.8A
Other languages
English (en)
Inventor
曹荣冰
何松贵
刘幼强
郭梅君
吴雪梅
马淑祯
余剑霞
卫云路
郭锦宁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Rice Wine Research Institute Co Ltd
GUANGDONG JIUJIANG DISTILLERY CO Ltd
Original Assignee
China Rice Wine Research Institute Co Ltd
GUANGDONG JIUJIANG DISTILLERY CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Rice Wine Research Institute Co Ltd, GUANGDONG JIUJIANG DISTILLERY CO Ltd filed Critical China Rice Wine Research Institute Co Ltd
Priority to CN201910168206.8A priority Critical patent/CN109811016A/zh
Publication of CN109811016A publication Critical patent/CN109811016A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Abstract

本发明公开了一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：将产酯酵母JJJC‑2活化后制得产酯酵母种子，然后进行发酵培养，发酵培养基的配方是：初始糖度5.0～20°Bx，氮源含量2～15g/L，乙醇浓度1～8％vol，乙酸浓度0.05～1.00％，乳酸浓度0.05％～1.00％；最后提取发酵醪液中的乙酸乙酯。本专利对培养配方增加氮源和微量营养物质，产酯酵母的活力和产酯能力大幅提升；扩大了碳源的来源；对发酵配方的反应前体进行了优化，并增加乳酸，优化最适pH值，发酵过程优化最适温度。以含氧量作为关键因素，而非搅拌速度。生产的乙酸乙酯，浓度更高，杂质成分更少，香气更干净。

Description

一种发酵型乙酸乙酯的生产方法
技术领域
本发明属于发酵产天然产物领域，具体涉及一种发酵型乙酸乙酯的生产方法。
背景技术
香精香料常用于食品、化妆品、医药、洗涤剂等工业。香料可分为天然香料、天然等同香料和人造香料3种。目前，在所生产的香味化合物中，只有很少量的是从天然动植物中提取，而大约84％的产品是通过化学合成法生产。也就是说，目前这些标着食品级的产品中的香精香料大多数都是通过传统生产方式在无机催化剂存在下化学合成的，其使用效果和安全性已经不能满足食品香精香料行业的发展需求。因此，急切需要寻找一种生产天然安全的香精香料的方法。
香精香料在食品生产中起着重要的作用，近年来人们由于健康观念的增强更倾向于使用天然产品，对天然香料的需求也大大增加了。由于合成香料与天然香料的价格相差较大，这使得寻找其他生产天然香味物质的方法成为必须。
在生物技术不断发展的今天，研究者将目光集中到如何将生物技术运用于制备天然香精香料。与化学法相比，生物法制备的香精香料香味自然、持久、协调性好，不像化学法合成的香精香料，产生的是浮香，且香味单一；化学合成法生产的香精香料多数为消旋体的混合物，易造成香味的改变，而生物催化法具有专一的立体选择性，能在温和的条件下制备对映体纯的香精香料，香味纯正；生物法中不采用各种无机催化剂和有机溶剂，避免了金属离子和有机溶剂的对食品和环境的污染。
乙酸乙酯有着广泛的用途，作为提取剂，用于医药、有机酸等产品的生产。作为香料原料，用于菠萝、香蕉、草莓等水果香精和威士忌、奶油等香料的主要原料。作为天然香料的萃取剂，也是制药工业和有机合成的重要原料。GB2760-2014规定为允许使用的食用香料，主要用于着香、柿子脱涩、制作香辛料的颗粒或片剂、酿醋配料，广泛用于配制樱桃、桃、杏等水果型香精及白兰地等酒用香精。
目前乙酸乙酯的生产主要以酯化合成法、乙烯加成法、乙醇脱氢法、乙醛缩合法4种工艺路线，这几种工艺路线均应用各种无机催化剂和有机溶剂等，生产出来的乙酸乙酯，使用效果和安全性已经不能满足食品香精香料行业的发展需求，且香味单一、不自然，持久及协调性差。
在白酒生产中，乙酸乙酯是白酒中重要的香味物质，其适宜的含量是奠定白酒产品质量的基础。在实际酿酒发酵中，基酒中乙酸乙酯的含量容易受到酒曲、原料、季节及发酵过程控制等因素的影响而造成含量不足，影响基酒质量稳定性。因此，开发富含乙酸乙酯的特殊调味酒应用于基酒的组合勾调，是确保产品质量的重要技术手段之一。
中国专利CN 102559519 B公开了一株产酯酵母及其生产乙酸乙酯和酒精的方法，该专利的发酵培养基配方较为简单，不利于提升酵母的质量及产酯能力；此外，该专利发酵过程中以搅拌培养的时间作为控制参数，而该参数实非关键因素，因此其发酵培养方法比较粗放，不利于提升产酯量。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，为天然乙酸乙酯的生产提供新方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、制备产酯酵母种子
(1)酵母平板活化
制备固体培养基平板(包括灭菌)，接种产酯酵母JJJC-2(Saccharomycescerevisiae)，26-32℃培养2-6d；
活化的酵母菌落健壮，具有产酯酵母典型特征(白色，圆形，边缘为锯齿状白圈)，无霉菌、细菌及其他酵母生长。
所述固体培养基的配方是：酵母膏9-15g，蛋白胨18-22g，葡萄糖18-25g，琼脂粉2％，水1L；
所述的产酯酵母JJJC-2已在中国专利CN 102559519 B中公开，并在指定机构做了保藏；
(2)一级液体种子培养(三角瓶培养)
制备一级液体种子培养基，灭菌后冷却至室温，接种经过酵母平板活化的产酯酵母，26-32℃摇床培养1～3d；
所述一级液体种子培养基的配方是：酵母膏9-15g，蛋白胨18-22g，葡萄糖18-25g，水1L；
(3)二级液体种子培养(种子罐培养)
制备二级液体种子培养基，灭菌后冷却至室温，调节初始pH值3.5～6.0，接种经过一级液体种子培养的发酵液，发酵过程控制温度20～35℃，含氧量2～15％(含氧量能有效促进酵母增殖)，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子；
所述二级液体种子培养基的配方是：碳源的初始糖度5.0～20°Bx，氮源含量2～15g/L，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L，盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O 4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L；
所述的碳源为糖蜜和/或粮食糖化液；
所述的粮食包括大米、小米、玉米、高粱、青稞、小麦、大麦、燕麦、木薯等；
所述的氮源优选可发酵氮源；
所述的可发酵氮源为玉米浆粉、麸皮水解液、黄豆水解液、豆粕水解液、小麦蛋白水解液、酵母膏或牛肉膏中的一种以上；
氮源是构成细胞中所含蛋白质、核算和酶等成分，以及代谢产物中氮素来源的营养物质。本发明的二级液体种子培养基中将可发酵氮源与无机氮源进行合理搭配，既能满足产酯酵母繁殖和产酯需要，又不引入杂味。酵母的生长需要多种维生素，主要有生物素、泛酸、肌醇和硫胺素。
二、发酵产乙酸乙酯
发酵培养基的配方是：碳源的初始糖度5.0～20°Bx，氮源含量2～15g/L，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L，乙醇浓度1～8％vol，乙酸浓度0.05～1.00％，乳酸浓度0.05％～1.00％。该培养基中，氮源能有效增加产酯酵母的数量和活力；乳酸能促进产酯酵母的增殖，并对其他杂菌有一定的抑制作用；在pH值3.5～4.5酸性条件下，对产酯酵母的繁殖和产酸是非常有利的，能抑制其他菌的生长繁殖。
所述的碳源为糖蜜和/或粮食糖化液；
所述的粮食包括大米、小米、玉米、高粱、青稞、小麦、大麦、燕麦、木薯等；
所述的氮源优选可发酵氮源；
所述的可发酵氮源为玉米浆粉、麸皮水解液、黄豆水解液、豆粕水解液、小麦蛋白水解液、酵母膏或牛肉膏中的一种以上；
将发酵罐洗净、灭菌后；装入发酵培养基，该过程注意调节糖度；将培养基灭菌后，冷却至室温，调节pH值至3.5～6.0；接种产酯酵母种子，20～35℃培养5～30天得到发酵醪液，发酵过程中溶氧量控制为4～20％(产酯酵母在该溶氧量范围内，能快速生长繁殖和产酯)，pH值控制3.5～4.5。
三、提取发酵醪液中的乙酸乙酯
可以采用现有技术的提取工艺，也可以采用以下方法中的一种：
(1)蒸馏
往发酵醪液中添加食用酒精，使醪液酒精度含量大于13％vol(该酒度能有效提升乙酸乙酯的提取率)，添加万分之三的大豆油作为消泡剂，用釜式蒸馏甑间接加热蒸馏(间接加热避免了水蒸气蒸馏带入水分和杂质，蒸馏出来的酒液香气浓郁，无异杂味)，蒸馏至53％vol，该酒液含有高浓度的乙酸乙酯，可达60g/L以上(该酒度能提取和溶解更多的乙酸乙酯，并且在储存过程中避免乙酸乙酯的水解)，馏出酒液无酒度即可停止蒸馏，酒尾回收至下一甑蒸馏用(该措施起到回收酒精和乙酸乙酯的作用)；
(2)精馏
发酵醪液经过精馏塔提取，即为高纯度发酵型乙酸乙酯。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
1、本专利对培养配方和生产工艺进行了革新，产量大幅度提升，发酵液中的乙酸乙酯浓度达到16g/L以上。本专利对培养配方增加氮源和微量营养物质，产酯酵母的活力和产酯能力大幅提升；扩大了碳源的来源；对发酵配方的反应前体进行了优化，并增加乳酸，优化最适pH值，发酵过程优化最适温度。以含氧量作为关键因素，而非搅拌速度。提纯应用精馏的方法，浓度更高，杂质成分更少，香气更干净，生产的乙酸乙酯，不限定于白酒行业，可广泛应用于食品、化妆品、医药等行业。
2、本发明利用驯化的纯种产酯酵母进行发酵，不仅产物中乙酸乙酯浓度高，而且含有少量的其他酯类，如乳酸乙酯、丁酸乙酯等，提高了香气的复合度。
3、本发明发酵法生产的乙酸乙酯，香气自然、持久、协调性好，符合人们对健康天然产品的需求。
4、本发明方法利用深层微氧发酵，能进行高密度的培养和发酵，乙酸乙酯产量高，能用现代发酵设备进行大规模生产，生产效率高，生产成本低。
5、本发明的发酵过程是在常温常压下进行的生物化学反应，反应安全，要求条件也比较简单。发酵过程不采用各种无机催化剂和有机溶剂，避免了金属离子和有机溶剂的对食品和环境的污染。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、产酯酵母种子制备：
(1)酵母平板活化
培养基配方：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂粉2％，水1L。
培养工艺：固体培养基及平皿经过121℃湿热灭菌15min。无菌室操作台(无菌条件下)倒平板，制得酵母固态平板，要求空白平板无菌落生长。平板无菌条件下接种一环斜面产酯酵母，30℃培养2d。
(2)一级液体种子培养(三角瓶培养)
培养基配方：酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，水1L。
培养工艺：培养基经过121℃湿热灭菌15min，冷却到30℃，无菌室操作台(无菌条件下)接种，接种量5％，于30℃条件下摇床转速100r/min培养2d。
(3)二级液体种子培养(种子罐培养)
培养基配方：碳源为糖蜜，初始糖度10°Bx，添加0.2％玉米浆粉，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O 4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L。
培养工艺：初始pH值4.5～5.0，接种量5％，发酵温度26～30℃，含氧量6％～10％，培养时间14～18h，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子。
二、发酵产乙酸乙酯
(1)培养基配方：碳源为糖蜜，发酵初始糖度8°Bx，添加0.2％玉米浆粉，MgSO4·H2O6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。乙醇浓度1％～8％vol，乙酸浓度0.05％～1％，乳酸浓度0.05％～1％。
(2)空罐灭菌工艺
投料前，用清水将发酵罐清洗干净(罐内无粘附物、无异味即可)，通入蒸汽使罐体温度达到121℃，维持15min。
取样口、排料口、无菌空气系统都要通入30min蒸汽进行灭菌。
(3)投料工艺
按发酵配方往搅拌器加入水、糖蜜(或粮食糖化液)、玉米浆粉、硫酸镁，搅拌均匀后泵入发酵罐中(一边搅拌一边投料)，注意糖度的调节，糖度的检测仪器为糖度折光仪或糖度计。发酵罐装料系数为0.8，装料系数通过发酵罐的液位计控制。
(4)物料灭菌要求
夹套通入蒸汽间接加热，将糖溶液升温到约100℃，保持60min。取样口、排料口、无菌空气系统都要通入蒸汽进行60min的灭菌。
开启冷却水冷却至30℃。其中发酵培养基按配方要求加入酒精、乙酸及乳酸，用NaOH颗粒(或用浓度200g/L的NaOH溶液)调整pH值至4.0～5.0。
(5)发酵工艺及检测
①发酵工艺：接种量5％(严格的无菌接种)，26～30℃培养5天，溶氧量控制为4％～10％，pH控制4.0～5.5。
控制手段：溶氧量DO——无菌空气流量+搅拌速度；发酵温度——热水保温，或冷水降温；pH值——添加NaOH或乙酸。
②发酵过程监测(频次：1次/天)
A.发酵醪液糖度：用旋光糖度计直接测量。
B.发酵醪液酒度：取220mL发酵液，添加80mL去离子水，于1L三角瓶中蒸馏，馏取100mL酒液，测量其酒度，除以2.2即为酯化醪液的酒度。
C.发酵醪液乙酸乙酯含量：取400mL酯化液于1L三角瓶，添加50mL 95％乙醇，混合后蒸馏，得到100mL酒液，用气相色谱测定乙酸乙酯含量，得到的数值除以4，即为乙酸乙酯含量。
D.发酵醪液酵母数量：血球计数法。
E.发酵醪液染菌情况：革兰氏染色法涂片镜检，如发现有红色阴性菌、长杆菌、球菌、芽孢菌或菌体碎片等，说明污染了细菌。
三、提取工艺
发酵醪液经过精馏塔提取，即为高纯度发酵型乙酸乙酯。
四、过程产品控制标准
(1)酵母活化的指标要求
活化的酵母菌落健壮，具有产酯酵母典型特征，(白色，圆形，边缘为锯齿状白圈)，无霉菌、细菌及其他酵母生长。
(2)种子液的指标要求
A.产酯酵母数量≥1.0×108个/ml；检测方法，血球计数法。
B.霉菌、细菌及其他酵母数为0，检测方法为，接种时，随机抽取两瓶，吸取0.1ml已接种的培养基，涂布于麦汁培养基于35℃培养1～2d。评价标准，平板上长有单一典型的产酯酵母菌落(白色，圆形，边缘为锯齿状白圈)，无霉菌、细菌及其他酵母生长。
C.培养1天期细菌检测：革兰氏染色法涂片镜检，如发现有红色阴性菌、长杆菌、球菌、芽孢菌或菌体碎片等，说明污染了细菌。
(3)合格发酵醪液的指标要求：发酵液乙酸乙酯含量大于16g/L。
实施例2
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、产酯酵母种子制备：
步骤(1)和(2)与实施例1相同。
(3)二级液体种子培养(种子罐培养)
培养基配方：碳源为大米糖化液，初始糖度10°Bx，添加0.5％麸皮水解液，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O 4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L。
培养工艺：初始pH值4.5～5.0，接种量5％，发酵温度26～30℃，含氧量6％～10％，培养时间14～18h，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子。
二、发酵产乙酸乙酯
(1)培养基配方：碳源为大米糖化液，发酵初始糖度8°Bx，添加0.5％麸皮水解液，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。乙醇浓度1％～8％vol，乙酸浓度0.05％～1％，乳酸浓度0.05％～1％。
余下步骤与实施例1相同。
实施例3
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、产酯酵母种子制备：
步骤(1)和(2)与实施例1相同。
(3)二级液体种子培养(种子罐培养)
A.培养基配方：碳源为大米糖化液，初始糖度10°Bx，添加0.5％黄豆水解液，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。维生素，包括盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O 4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L。
B.培养工艺：初始pH 4.5～5.0，接种量5％，发酵温度26～30℃，含氧量6％～10％，培养时间14～18h，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子。
二、发酵产乙酸乙酯
(1)培养基配方：碳源为大米糖化液，发酵初始糖度8°Bx，添加0.5％黄豆水解液，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。乙醇浓度1％～8％vol，乙酸浓度0.05％～1％，乳酸浓度0.05％～1％。
余下步骤与实施例1相同。
实施例4
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、产酯酵母种子制备：
步骤(1)和(2)与实施例1相同。
(3)二级液体种子培养(种子罐培养)
A.培养基配方：碳源为玉米糖化液，初始糖度10°Bx，添加0.1％玉米浆粉，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O 4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L。
B.培养工艺：初始pH值4.5～5.0，接种量5％，发酵温度26～30℃，含氧量6％～10％，培养时间14～18h，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子。
二、发酵产乙酸乙酯
(1)培养基配方：碳源为玉米糖化液，发酵初始糖度8°Bx，添加0.1％玉米浆粉，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。乙醇浓度1％～8％vol，乙酸浓度0.05％～1％，乳酸浓度0.05％～1％。
余下步骤与实施例1相同。
实施例5
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、产酯酵母种子制备：
步骤(1)和(2)与实施例1相同。
(3)二级液体种子培养(种子罐培养)
A.培养基配方：碳源为高粱糖化液，初始糖度10°Bx，添加0.4％麸皮水解液，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L。
B.培养工艺：初始pH 4.5～5.0，接种量5％，发酵温度26～30℃，含氧量6％～10％，培养时间14～18h，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子。
二、发酵产乙酸乙酯
(1)培养基配方：碳源为高粱糖化液，发酵初始糖度8°Bx，添加0.4％麸皮水解液，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L。乙醇浓度1％～8％vol，乙酸浓度0.05％～1％，乳酸浓度0.05％～1％。
余下步骤与实施例1相同。
实施例6
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
一、产酯酵母种子制备：与实施例3相同。
二、发酵产乙酸乙酯
步骤(1)和(2)与实施例3相同。
(3)投料与灭菌
按发酵配方往搅拌器加入水、粮食糖化液、黄豆水解液、营养盐及维生素等，搅拌均匀后，通过高温瞬时灭菌冷却后，泵入发酵罐中，控制料液入罐温度为30℃，发酵罐装料系数为0.8，装料系数通过发酵罐的液位计控制。按配方要求加入酒精、乙酸及乳酸，用NaOH颗粒(或用浓度200g/L的NaOH溶液)调整pH值至4.0～5.0。
余下步骤与实施例3相同。
实施例7
一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，包括以下步骤：
步骤1和2与实施例3相同。
三、提取工艺：
往发酵醪液中添加酒精，使醪液酒精度含量为13％vol，添加万分之三的大豆油作为消泡剂，用釜式蒸馏甑间接蒸馏，蒸馏至53％vol，馏出酒液无酒度即可停止蒸馏，酒尾回收至下一甑蒸馏用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种发酵型乙酸乙酯的生产方法，其特征在于包括以下步骤：
一、制备产酯酵母种子；
将产酯酵母JJJC-2经过酵母平板活化，再经过一级液体种子培养、二级液体种子培养，制得产酯酵母种子；
二、发酵产乙酸乙酯；
发酵培养基的配方是：碳源的初始糖度5.0～20°Bx，氮源含量2～15g/L，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L，乙醇浓度1～8％vol，乙酸浓度0.05～1.00％，乳酸浓度0.05％～1.00％；
所述的氮源为可发酵氮源；
将发酵罐洗净、灭菌后；装入发酵培养基，该过程注意调节糖度；将培养基灭菌后，冷却至室温，调节pH值至3.5～6.0；接种产酯酵母种子，20～35℃培养5～30天得到发酵醪液，发酵过程中溶氧量控制为4～20％，pH值控制3.5～4.5；
三、提取发酵醪液中的乙酸乙酯。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(二)所述的可发酵氮源为玉米浆粉、麸皮水解液、黄豆水解液、豆粕水解液、小麦蛋白水解液、酵母膏或牛肉膏中的一种以上。
3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(二)所述的碳源为糖蜜和/或粮食糖化液。
4.根据权利要求3所述的生产方法，其特征在于：所述的粮食包括大米、小米、玉米、高粱、青稞、小麦、大麦、燕麦和木薯。
5.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(一)所述的酵母平板活化包括以下步骤：
制备固体培养基平板，接种产酯酵母JJJC-2，26-32℃培养2-6d；
所述固体培养基的配方是：酵母膏9-15g，蛋白胨18-22g，葡萄糖18-25g，琼脂粉2％，水1L。
6.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(一)所述的一级液体种子培养包括以下步骤：
制备一级液体种子培养基，灭菌后冷却至室温，接种经过酵母平板活化的产酯酵母，26-32℃摇床培养1～3d；
所述一级液体种子培养基的配方是：酵母膏9-15g，蛋白胨18-22g，葡萄糖18-25g，水1L。
7.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(一)所述的二级液体种子培养包括以下步骤：
制备二级液体种子培养基，灭菌后冷却至室温，调节初始pH值3.5～6.0，接种经过一级液体种子培养的发酵液，发酵过程控制温度20～35℃，含氧量2～15％，培养至产酯酵母数量≥1.0×108个/ml，制得产酯酵母种子；
所述二级液体种子培养基的配方是：碳源的初始糖度5.0～20°Bx，氮源含量2～15g/L，MgSO4·H2O 6～10g/L，(NH)2PO4 8～12g/L，KH2PO4 4～6g/L，盐酸硫胺4mg/L，生物素0.1mg/L，泛酸钙4mg/L，肌醇100mg/L，CaCl2·2H2O 18mg/L，FeSO4·7H2O 12mg/L，MnCl2·2H2O4mg/L，CuSO4·5H2O 1.2mg/L，ZnSO4·7H2O 16mg/L，KI 0.4mg/L；
所述的氮源为可发酵氮源。
8.根据权利要求7所述的生产方法，其特征在于：所述的可发酵氮源为玉米浆粉、麸皮水解液、黄豆水解液、豆粕水解液、小麦蛋白水解液、酵母膏或牛肉膏中的一种以上。
9.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(三)所述提取发酵醪液中的乙酸乙酯采用的是蒸馏工艺，包括以下步骤：
往发酵醪液中添加食用酒精，使醪液酒精度含量大于13％vol，添加万分之三的大豆油作为消泡剂，用釜式蒸馏甑间接加热蒸馏，蒸馏至53％vol，馏出酒液无酒度即可停止蒸馏，酒尾回收至下一甑蒸馏用。
10.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：步骤(三)所述提取发酵醪液中的乙酸乙酯采用的是精馏工艺，发酵醪液经过精馏塔提取，即为高纯度发酵型乙酸乙酯。
CN201910168206.8A 2019-03-06 2019-03-06 一种发酵型乙酸乙酯的生产方法 Pending CN109811016A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910168206.8A CN109811016A (zh) 2019-03-06 2019-03-06 一种发酵型乙酸乙酯的生产方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910168206.8A CN109811016A (zh) 2019-03-06 2019-03-06 一种发酵型乙酸乙酯的生产方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109811016A true CN109811016A (zh) 2019-05-28

Family

ID=66608237

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910168206.8A Pending CN109811016A (zh) 2019-03-06 2019-03-06 一种发酵型乙酸乙酯的生产方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109811016A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559519A (zh) * 2011-09-20 2012-07-11 广东省九江酒厂有限公司 一株产酯酵母及其生产乙酸乙酯和酒精的方法
CN107254415A (zh) * 2017-08-08 2017-10-17 中国农业大学 一株产乙酸乙酯的异常毕赤酵母及其应用
CN108018218A (zh) * 2016-11-02 2018-05-11 北京工商大学 一株高产乙酸乙酯酵母菌株及其培养方法与应用
CN108330075A (zh) * 2018-05-11 2018-07-27 劲牌有限公司 高产乙酸乙酯酵母及其在机械化清香型小曲白酒中的应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102559519A (zh) * 2011-09-20 2012-07-11 广东省九江酒厂有限公司 一株产酯酵母及其生产乙酸乙酯和酒精的方法
CN108018218A (zh) * 2016-11-02 2018-05-11 北京工商大学 一株高产乙酸乙酯酵母菌株及其培养方法与应用
CN107254415A (zh) * 2017-08-08 2017-10-17 中国农业大学 一株产乙酸乙酯的异常毕赤酵母及其应用
CN108330075A (zh) * 2018-05-11 2018-07-27 劲牌有限公司 高产乙酸乙酯酵母及其在机械化清香型小曲白酒中的应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
刘源才等: "高产乙酸乙酯酵母的产酯条件研究", 《食品与发酵科技》 *
李志辉等: "一株产乙酸乙酯酵母C42的分离与鉴定", 《食品工业科技》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104450399B (zh) 一种液态发酵生产米香型白酒的方法
CN101457190B (zh) 以香为主的白酒调味酒或白酒调味液的制备方法
CN101270329B (zh) 液态深层发酵生产高浓度果醋制备方法
CN104962430B (zh) 一种高产乙酸乙酯的混粮川法小曲白酒生产工艺
CN101575617B (zh) 一种富铬酵母培养物及其发酵工艺
CN110305754A (zh) 一种多维纯种发酵的黄酒及其制备方法
CN104877886B (zh) 一种食醋液态发酵营养盐配方及食醋液态半连续发酵方法
CN103436403A (zh) 一种青稞咂酒及其制作方法
CN100562580C (zh) 一株枯草芽孢杆菌在制备3-羟基丁酮中的应用
CN116083193A (zh) 一种利用黄水发酵液酯化制备调味酒的方法及产品和应用
CN1099945A (zh) 用玉米酒精糟液生产酱油，酱油渣生产多酶蛋白饲料的方法
CN115704001A (zh) 己酸菌菌粉、其制造方法及应用
CN109517745B (zh) 一种酿酒用微生物复合菌及用其酿造的藜麦酒
CN104212851A (zh) 一种多级连续发酵生产l-苯丙氨酸的方法
CN103305369A (zh) 酱香生物培养液及其制作方法和使用方法
CN109811016A (zh) 一种发酵型乙酸乙酯的生产方法
CN102559519B (zh) 一株产酯酵母及其生产乙酸乙酯和酒精的方法
CN102533508B (zh) 生产浓香型白酒的方法
CN104651157B (zh) 一种牦牛乳清低醇饮料的生产方法
CN103805520A (zh) 一株高酸性蛋白酶华根霉及培养方法和应用
Shaikh et al. Organic Acid and Solvent Production from Microbial Fermentation
CN110452822A (zh) 一种利用酒糟发酵酿酒的复合酿酒曲及其酿酒方法
CN105524896A (zh) 粘质沙雷氏菌脂肪酶发酵产酶及其提高酶活的方法
Humphrey et al. Industrial fermentation: principles, processes, and products
CN212560278U (zh) 一种酯香酵母发酵罐

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190528

RJ01 Rejection of invention patent application after publication