CN109789224A - 靶向il-6和cd126的dna单克隆抗体 - Google Patents

Abstract

本文公开了包含编码抗IL‑6和/或抗CD126合成抗体的重组核酸序列的组合物。本公开还提供了使用所述组合物和产生方法来预防和/或治疗受试者的疾病的方法。

Description

靶向IL-6和CD126的DNA单克隆抗体

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年5月5日提交的美国临时申请号62/332,377的优先权和权益，所述美国临时申请的内容整体并入本文。

技术领域

本发明涉及一种组合物，其包含用于在体内产生一种或多种合成抗体，包括抗IL-6和抗CD126抗体及其功能片段的重组核酸序列，并且涉及一种通过施用所述组合物预防和/或治疗受试者疾病的方法。

背景技术

促炎细胞因子IL-6在先天性炎症和败血症中起重要作用。由于许多研究证明了IL-6信号传导与肿瘤发展之间的关联，因此临床上将IL-6水平升高与癌症预后不良联系起来。目前，靶向IL-6及其受体CD126的治疗性抗体被批准用于治疗多中心卡斯特莱曼病(multicentric Castleman disease)和类风湿性关节炎。不幸的是，纯化的抗IL-6和抗CD126抗体的制造和递送成本高昂。此外，这些抗体疗法必须每周至每月重新施用—这是治疗慢性疾病诸如癌症和自身免疫性疾病的一个具有挑战性的考虑因素。

因此，本领域需要改进的靶向IL-6和CD126的组合物和方法，用于治疗癌症和自身免疫性疾病。

发明内容

本发明涉及一种组合物，其包含编码一种或多种合成抗体的一种或多种核酸分子，其中所述一种或多种核酸分子包含选自以下的至少一种：a)编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列；b)编码抗IL-6合成抗体的片段的核苷酸序列；c)编码抗CD126抗体的核苷酸序列；和d)编码抗CD126抗体的片段的核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码抗IL-6合成抗体的第一核苷酸序列；和编码抗CD126抗体的第二核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码裂解结构域的核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码抗IL-6的可变重链区和可变轻链区的核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码抗CD126的可变重链区和可变轻链区的核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码人IgG1κ的恒定重链区和恒定轻链区的核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码下述多肽的核苷酸序列，所述多肽包含：抗IL-6的可变重链区；人IgG1κ的恒定重链区；裂解结构域；抗IL-6的可变轻链区；和IgG1κ的恒定轻链区。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码下述多肽的核苷酸序列，所述多肽包含：抗CD126的可变重链区；人IgG1κ的恒定重链区；裂解结构域；抗CD126的可变轻链区；和IgG1κ的恒定轻链区。

在一个实施方案中，所述组合物包含编码前导序列的核苷酸序列。

在一个实施方案中，所述组合物包含表达载体。

在各个实施方案中，本发明提供了包含核酸分子的组合物。在一个实施方案中，所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。

在一个实施方案中，本发明提供了一种预防或治疗受试者的疾病的方法，其包括向受试者施用本文所述的组合物。在一个实施方案中，所述疾病为癌症。在一个实施方案中，所述疾病为自身免疫性疾病。在一个实施方案中，所述疾病为败血症。在一个实施方案中，所述疾病为病毒感染。在一个实施方案中，所述疾病为多中心卡斯特莱曼病。在一个实施方案中，所述疾病与高烧相关。在一个实施方案中，所述疾病为移植物抗宿主(GVH)疾病。在一个实施方案中，所述疾病为细胞溶解综合征。

附图说明

图1是编码抗IL-6和抗CD126的DNA构建体的示意图。

图2，包括图2A至图2C，描绘了证明DMAb构建体在293T细胞中表达的实验结果。用携带抗IL-6(IL-6 1至4)或抗CD126(CD126 1至2)构建体的质粒DNA转染HEK 293T细胞。空质粒用作阴性对照。(图2A和图2B)通过定量ELISA测定人IgG1κ表达(N＝3次转染重复，±SEM)。(图2C)代表性Western印迹，显示上清液重链和轻链肽裂解和表达。

图3，包括图3A和图3B，描绘了证实DMAb在肌内电穿孔后在体内小鼠血清中表达的实验结果。BALB/c小鼠肌肉注射100μg质粒DNA，然后进行电穿孔。七天后，通过ELISA测定血清人IgG1κ抗体水平。(图3A)抗IL-6DMAb表达，从1.5μg/mL至7.0μg/mL(平均值)，高于第0天放血前的基线水平。(图3B)抗CD126DMAb表达，从1.6μg/mL至4.1μg/mL(平均值)，高于第0天放血前的基线水平。(N＝5，平均值±SEM。)

图4描绘了证明来自肌肉电穿孔小鼠的血清中的DMAb在体外结合其靶抗原的实验结果。BALB/c小鼠注射100μg质粒DNA，然后进行肌肉内电穿孔。一周后，通过ELISA测定与重组人IL-6(左)和人CD126(右)结合的血清人IgG抗体。(N＝5，平均值±SEM。)

图5描绘了证明血清DMAb在体外阻断IL-6介导的细胞信号传导的实验结果。获得用人CD126和STAT3诱导的分泌型碱性磷酸酶(SEAP)稳定转染的HEK-293细胞。来自未处理小鼠的稀释(1:40)血清诱导基线水平的小鼠-IL-6驱动的SEAP表达，将其标准化为细胞上清液中的100％SEAP活性(灰色条)。稀释第-7天来自DMAb-电穿孔小鼠的血清(1:40)，并测定细胞上清液的SEAP活性，表示为未处理对照(黑色条)的百分比。非特异性细胞因子TNFα充当特异性细胞因子活化的对照(白色条)。(N＝4，平均值±SEM。)

图6描绘了证明血清DMAb在体外阻断IL-6介导的细胞信号传导的实验结果。获得用人CD126和STAT3诱导的分泌型碱性磷酸酶(SEAP)稳定转染的HEK-293细胞。来自未处理小鼠的稀释(1:40-1:40960)血清诱导基线水平的小鼠-IL-6驱动的SEAP表达，将其标准化为细胞上清液中的100％SEAP活性(黑色线条)。稀释第-7天来自DMAb-电穿孔小鼠的血清(1:40-1:40960)，并测定细胞上清液的SEAP活性，如图所示(蓝色线条)。非特异性细胞因子TNFα充当特异性细胞因子活化的对照(灰色线条)。(N＝4，平均值±SEM。)

具体实施方式

本发明涉及包含编码抗体、其片段、其变体或它们的组合的重组核酸序列的组合物。所述组合物可以施用于有需要的受试者，以促进合成抗体的体内表达和形成。

具体来说，由重组核酸序列表达的重链多肽和轻链多肽可以组装成合成抗体。重链多肽和轻链多肽可彼此相互作用以使得组装产生合成抗体，所述合成抗体能够结合预期靶标(例如，IL-6和CD126)，与并非如本文所述组装的抗体相比具有更高的免疫原性，并且能够引发或诱导针对预期靶标的免疫应答。

此外，与响应于抗原诱导的免疫应答而产生的抗体相比，这些合成抗体在受试者中更快速地产生。合成抗体能够有效地结合并中和一系列靶标。所述合成抗体还能够有效地防止疾病和/或促进疾病存活率。因此，对于呈合成DNA质粒形式的工程改造的单克隆抗体(MAb)，本发明涉及包含编码抗体、其片段、其变体或其组合的重组核酸序列的组合物。所述组合物可以施用于有需要的受试者，以促进合成抗体的体内表达和形成。在一个实施方案中，本文描述了所述核苷酸序列。例如，在一个实施方案中，所述核苷酸序列包括SEQ IDNO:1、3、5、7、9、11的核苷酸序列，或其变体或其片段。在另一个实施方案中，所述核苷酸序列包括编码SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12的多肽序列的核苷酸序列，或其变体或其片段。在一个实施方案中，所述核苷酸序列包括由本文所述的DNA序列转录的RNA序列。例如，在一个实施方案中，所述核苷酸序列包括由SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11的DNA序列，或其变体或其片段转录的RNA序列。在另一个实施方案中，所述核苷酸序列包括由编码SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12的多肽序列的DNA序列，或其变体或其片段转录的RNA序列。

在一个实施方案中，所述核苷酸序列编码在氨基酸序列的整个长度上与选自SEQID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％同一性的氨基酸序列。在一个实施方案中，所述核苷酸序列编码在氨基酸序列的整个长度上与选自SEQ ID NO:2、SEQID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:12的氨基酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％同一性的氨基酸序列的片段。

在一个实施方案中，所述核苷酸序列在核苷酸序列的整个长度上与选自SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:11的核苷酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％的同一性。在一个实施方案中，所述核苷酸序列是在核苷酸序列的整个长度上与选自SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:5、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:11的核苷酸序列具有至少约80％、至少约85％、至少约90％或至少约95％同一性的核苷酸序列片段。

1.定义

除非另外定义，否则本文所用的所有技术术语和科学术语所具有的含义与本领域的普通技术人员通常所了解的含义相同。在矛盾的情况下，将以包括定义在内的本文件为准。虽然可以在实施或测试本发明时使用与本文所述的方法和材料相似或等同的方法和材料，但是下文描述了优选的方法和材料。本文提到的所有出版物、专利申请、专利以及其他参考文献以引用的方式整体并入。本文公开的材料、方法、以及实例仅是说明性的并且不意图具有限制性。

如本文所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“可”、“含有”以及其变形意图是开放式过渡短语、术语、或词语，它们不排除另外的行为或结构的可能性。除非上下文另外明确规定，否则单数形式“一个/一种”和“该/所述”包括复数指代对象。本公开还考虑了“包含本文提供的实施方案或要素”、“由本文提供的实施方案或要素组成”以及“基本上由本文提供的实施方案或要素组成”的其他实施方案，无论是否明确阐述。

“抗体”可以意指类别IgG、IgM、IgA、IgD或IgE的抗体、或其片段、片段或衍生物，包括Fab、F(ab')2、Fd、和单链抗体及其衍生物。抗体可以是从哺乳动物的血清样品中分离的抗体、多克隆抗体、亲和力纯化抗体或它们的混合物，它对所期望的表位或由其衍生的序列表现出足够的结合特异性。

如本文可互换使用的“抗体片段”或“抗体的片段”指的是完整抗体的包含抗原结合位点或可变区的部分。所述部分不包括完整抗体的Fc区的恒定重链结构域(即CH2、CH3或CH4，这取决于抗体同种型)。抗体片段的实例包括但不限于Fab片段、Fab’片段、Fab’-SH片段、F(ab’)2片段、Fd片段、Fv片段、双体抗体、单链Fv(scFv)分子、仅含一个轻链可变结构域的单链多肽、含有轻链可变结构域的三个CDR的单链多肽、仅含一个重链可变区的单链多肽、以及含有重链可变区的三个CDR的单链多肽。

“抗原”是指具有在宿主中产生免疫应答的能力的蛋白质。抗原可以由抗体识别和结合。抗原可以源自于体内或外部环境。

如本文所用，“编码序列”或“编码核酸”意指包含编码本文所述抗体的核苷酸序列的核酸(RNA或DNA分子)。编码序列还可包括编码RNA序列的DNA序列。编码序列还可以包括与调控元件可操作地连接的起始信号和终止信号，所述调控元件包括能够指导在接受核酸施用的个体或哺乳动物的细胞中表达的启动子和多聚腺苷酸化信号。编码序列还可以包括编码信号肽的序列。

如本文所用，“互补序列”或“互补”可以意指核酸，可以意指核酸分子的核苷酸或核苷酸类似物之间的沃森-克里克(Watson-Crick)(例如，A-T/U和C-G)或Hoogsteen碱基配对。

如本文所用，“恒定电流”定义了在向组织递送电脉冲的持续时间内同一组织或限定所述组织的细胞接受或经历的电流。电脉冲是从本文所述的电穿孔装置递送的。因为本文提供的电穿孔装置具有反馈元件，优选地具有瞬时反馈，所以该电流在所述组织中在电脉冲的寿命内保持在恒定的安培数。反馈元件可以在整个脉冲的持续时间内测量组织(或细胞)的电阻，并且使电穿孔装置改变它的电能输出(例如，增加电压)，以使同一组织中的电流在整个电脉冲期间(约几微秒)和脉冲间保持恒定。在一些实施方案中，反馈元件包括控制器。

如本文所用，“电流反馈”或“反馈”可以互换使用并且可以意指所提供的电穿孔装置的主动响应，所述主动响应包括测量电极之间组织中的电流以及相应地改变由EP装置递送的能量输出，以将电流维持在恒定水平。在开始脉冲序列或电处理之前，由使用者预设该恒定水平。反馈可以通过电穿孔装置的电穿孔部件，例如控制器完成，这是因为其中的电路能够连续地监测电极之间组织中的电流，并且将该所监测的电流(或组织内的电流)与预设电流相比较，并且连续地进行能量输出调整以将所监测的电流维持在预设水平。反馈回路可以是瞬时的，因为它是模拟闭环反馈。

如本文所用，“分散电流”可以意指从本文所述的电穿孔装置的各种针电极阵列递送的电流模式，其中所述模式使正被电穿孔的组织的任何区域上电穿孔相关热应激的发生减到最低限度或优选地消除所述电穿孔相关热应激的发生。

如本文可互换使用，“电穿孔”、“电透化”或“电动增强”(“EP”)可以指使用跨膜电场脉冲在生物膜中诱导微观路径(孔)；它们的存在允许生物分子，诸如质粒、寡核苷酸、siRNA、药物、离子以及水从细胞膜的一侧传递到另一侧。

如本文所用，“内源性抗体”可以指在接受有效剂量的抗原的施用以诱导体液免疫应答的受试者体内产生的抗体。

如本文所用，“反馈机制”可以指由软件或硬件(或固件)执行的过程，所述过程接收所期望的组织的阻抗并且将其与预设值，优选地电流相比较(在递送能量脉冲之前、期间和/或之后)，并且调整所递送的能量脉冲以达到所述预设值。反馈机制可以由模拟闭环电路执行。

“片段”可以意指可以发挥功能，即可以结合所期望的靶标并且具有与全长抗体相同的预期作用的抗体的多肽片段。抗体的片段可以与全长具有100％同一性，除了缺少来自N末端和/或C末端的至少一个氨基酸之外，在每种情况下在位置1处具有或不具有信号肽和/或甲硫氨酸。片段可以包含特定全长抗体的长度的20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、99％或更多百分比，不包括所添加的任何异源信号肽在内。片段可以包括与抗体具有95％或更大、96％或更大、97％或更大、98％或更大或99％或更大的同一性的多肽片段，并且另外包含在计算同一性百分比时不包括在内的N末端甲硫氨酸或异源信号肽。片段还可以包含N末端甲硫氨酸和/或信号肽，诸如免疫球蛋白信号肽，例如IgE信号肽或IgG信号肽。N末端甲硫氨酸和/或信号肽可以与抗体的片段连接。

编码抗体的核酸序列的片段可以与全长具有100％同一性，除了缺少来自5'末端和/或3'末端的至少一个核苷酸之外，在每种情况下在位置1处具有或不具有编码信号肽和/或甲硫氨酸的序列。片段可以包含特定全长编码序列的长度的20％或更多、25％或更多、30％或更多、35％或更多、40％或更多、45％或更多、50％或更多、55％或更多、60％或更多、65％或更多、70％或更多、75％或更多、80％或更多、85％或更多、90％或更多、91％或更多、92％或更多、93％或更多、94％或更多、95％或更多、96％或更多、97％或更多、98％或更多、99％或更多百分比，不包括所添加的任何异源信号肽在内。片段可以包括编码与抗体具有95％或更大、96％或更大、97％或更大、98％或更大或99％或更大的同一性的多肽的片段，并且另外任选地包含编码在计算同一性百分比时不包括在内的N末端甲硫氨酸或异源信号肽的序列。片段还可以包含N末端甲硫氨酸和/或信号肽，诸如免疫球蛋白信号肽，例如IgE信号肽或IgG信号肽的编码序列。编码N末端甲硫氨酸和/或信号肽的编码序列可以与编码序列的片段连接。

如本文所用，“遗传构建体”是指包含编码蛋白质，诸如抗体的核苷酸序列的DNA分子或RNA分子。遗传构建体还可以指转录RNA的DNA分子。编码序列包括与调控元件可操作地连接的起始信号和终止信号，所述调控元件包括能够指导在接受核酸分子施用的个体的细胞中的表达的启动子和多聚腺苷酸化信号。如本文所用的术语“可表达形式”指的是含有必要调控元件的基因构建体，所述调控元件与编码蛋白质的编码序列可操作地连接以使得当存在于个体的细胞中时，所述编码序列将被表达。

如本文所用，“同一”或“同一性”在两个或更多个核酸或多肽序列的背景下可以意指所述序列在指定区域中具有指定百分比的相同残基。所述百分比可以通过最佳地比对这两个序列，在指定区域中比较这两个序列，确定这两个序列中存在相同残基的位置数量以产生匹配位置数，将匹配位置数除以指定区域中位置的总数，并且将结果乘以100以得到序列同一性百分比来计算。在这两个序列具有不同的长度或比对产生一个或多个交错末端并且指定的比较区域仅包括单个序列的情况下，单个序列的残基被包括在计算的分母中，但是不包括在分子中。当比较DNA和RNA时，胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)可以被认为是等同的。同一性可以手动或通过使用计算机序列算法，诸如BLAST或BLAST 2.0来进行。

如本文所用，“阻抗”可以在论述反馈机制时使用并且可以根据欧姆定律(Ohm'slaw)转换成电流值，从而使得能够与预设电流相比较。

如本文所用，“免疫应答”可以意指响应于一种或多种核酸和/或肽的引入，宿主的免疫系统，例如哺乳动物的免疫系统的活化。所述免疫应答可以呈细胞应答或体液应答或这两者的形式。

如本文所用，“核酸”或“寡核苷酸”或“多核苷酸”可以意指共价连接在一起的至少两个核苷酸。单链的描绘还限定了互补链的序列。因此，核酸还涵盖所描绘的单链的互补链。核酸的许多变体可以用于与给定核酸相同的目的。因此，核酸还涵盖基本上相同的核酸和其互补序列。单链提供了可以在严格杂交条件下与靶序列杂交的探针。因此，核酸还涵盖了在严格杂交条件下杂交的探针。

核酸可以是单链的或双链的，或可以含有双链序列和单链序列二者的部分。核酸可以是DNA(基因组和cDNA)、RNA、或杂合体，其中核酸可以含有脱氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的组合、以及包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、肌苷、黄嘌呤次黄嘌呤、异胞嘧啶以及异鸟嘌呤的碱基的组合。核酸可以通过化学合成方法或通过重组方法获得。

如本文所用，“可操作地连接”可以意指基因的表达处在与它在空间上连接的启动子的控制之下。启动子可以位于处在它的控制之下的基因的5'(上游)或3'(下游)。启动子和基因之间的距离可以与作为该启动子来源的基因中该启动子与它控制的基因之间的距离大致相同。如本领域已知的那样，可以调节该距离的变化而不会丧失启动子功能。

如本文所用，“肽”、“蛋白质”或“多肽”可以意指氨基酸的连接序列并且可以是天然的、合成的、或天然和合成的修饰或组合。

如本文所用，“启动子”可以意指能够赋予、激活或增强核酸在细胞中的表达的合成或天然来源的分子。启动子可以包含一个或多个特定的转录调控序列，以进一步增强其表达和/或改变其空间表达和/或时间表达。启动子还可以包含远端增强子或阻遏子元件，它们可以位于与转录起始位点相距多达数千个碱基对的位置处。启动子可以来源于包括病毒、细菌、真菌、植物、昆虫和动物的来源。对于其中发生表达的细胞、组织或器官，或对于发生表达的发育阶段，或响应于外部刺激，诸如生理应激、病原体、金属离子或诱导剂，启动子可以组成型地或差异性地调控基因组分的表达。启动子的代表性实例包括噬菌体T7启动子、噬菌体T3启动子、SP6启动子、lac操纵子-启动子、tac启动子、SV40晚期启动子、SV40早期启动子、RSV-LTR启动子、CMV IE启动子、SV40早期启动子或SV 40晚期启动子以及CMV IE启动子。

“信号肽”和“前导序列”在本文中可互换使用，是指可以在本文所述的蛋白质的氨基末端处连接的氨基酸序列。信号肽/前导序列通常引导蛋白质的定位。本文所用的信号肽/前导序列优选地促进蛋白质从其产生的细胞中的分泌。在从细胞中分泌时，信号肽/前导序列常常从蛋白质的其余部分(常常被称为成熟蛋白)切割。信号肽/前导序列在蛋白质的N末端处连接。

如本文所用，“严格杂交条件”可以意指第一核酸序列(例如，探针)将与第二核酸序列(例如，靶标)，诸如核酸的复杂混合物中的第二核酸序列杂交的条件。严格条件具有序列依赖性并且在不同的情况下将是不同的。严格条件可选择为在限定离子强度pH下比特定序列的热解链温度(T_m)低约5-10℃。T_m可以是(在限定的离子强度、pH和核酸浓度下)平衡时50％与靶标互补的探针与靶序列杂交时的温度(因为靶序列过量存在，在T_m下，在平衡时50％的探针被占据)。严格条件可以是如下的那些条件，其中在pH 7.0至8.3下，盐浓度低于约1.0M钠离子，诸如约0.01M-1.0M钠离子浓度(或其他盐)，并且对于短探针(例如约10个-50个核苷酸)，温度为至少约30℃，对于长探针(例如大于约50个核苷酸)，为至少约60℃。严格条件还可以通过添加去稳定剂，诸如甲酰胺来实现。对于选择性或特异性杂交，阳性信号可以是背景杂交的至少2倍至10倍。示例性严格杂交条件包括以下：50％的甲酰胺、5×SSC和1％的SDS，在42℃孵育；或5×SSC、1％的SDS，在65℃孵育，以及在65℃下在0.2×SSC和0.1％SDS中洗涤。

如本文可互换使用，“受试者”和“患者”是指任何脊椎动物，包括但不限于哺乳动物(例如牛、猪、骆驼、美洲驼、马、山羊、兔、绵羊、仓鼠、豚鼠、猫、狗、大鼠和小鼠、非人灵长类动物(例如猴，诸如食蟹猴或恒河猴、黑猩猩等)以及人)。在一些实施方案中，受试者可以是人或非人。受试者或患者可以正接受其他形式的治疗。

如本文所用，“基本上互补”可以意指第一序列在8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个或更多个核苷酸或氨基酸的区域内与第二序列的互补序列具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性，或这两个序列在严格杂交条件下杂交。

如本文所用，“基本上同一的”可以意指第一序列和第二序列在1个、2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、30个、35个、40个、45个、50个、55个、60个、65个、70个、75个、80个、85个、90个、95个、100个、200个、300个、400个、500个、600个、700个、800个、900个、1000个、1100个或更多个核苷酸或氨基酸的区域内具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％，或对于核酸，如果第一序列与第二序列的互补序列基本上互补。

如本文所用，“合成抗体”是指由本文所述的重组核酸序列编码并且在受试者中产生的抗体。

如本文所用，“治疗”可以意指经由预防、抑制、阻遏、或完全消除疾病的手段来保护受试者免受疾病的影响。预防疾病涉及在疾病发作之前向受试者施用本发明的疫苗。抑制疾病涉及在诱发疾病之后，但是在它出现临床表现之前，向受试者施用本发明的疫苗。阻遏疾病涉及在疾病的临床表现之后向受试者施用本发明的疫苗。

本文关于核酸使用的“变体”可以指(i)参考核苷酸序列的一部分或片段；(ii)参考核苷酸序列或其部分的互补序列；(iii)与参考核酸或其互补序列基本相同的核酸；或(iv)在严格条件下与参考核酸、其互补序列或与其基本相同的序列杂交的核酸。

关于肽或多肽的“变体”在氨基酸序列上由于氨基酸的插入、缺失、或保守取代而不同，但是保留至少一种生物学活性。变体还可以意指具有这样的氨基酸序列的蛋白质：其与具有保留至少一种生物学活性的氨基酸序列的参考蛋白质基本上相同。氨基酸的保守取代，即将氨基酸用具有相似特性(例如带电荷的区域的亲水性、程度以及分布)的不同氨基酸置换，在本领域中通常被认为涉及微小变化。如本领域所理解的，通过考虑氨基酸的亲水指数可以部分地鉴定这些微小变化。Kyte等人，J.Mol.Biol.157:105-132(1982)。氨基酸的亲水指数是基于它的疏水性和电荷的考虑。在本领域中已知的是，具有相似亲水指数的氨基酸可以被取代并且仍保留蛋白质功能。在一个方面，具有相差±2的亲水指数的氨基酸被取代。氨基酸的亲水性还可以用于揭示将产生保留生物学功能的蛋白质的取代。在肽的背景下氨基酸的亲水性的考虑容许计算该肽的最大局部平均亲水性，这是已经被报道与抗原性和免疫原性良好相关的有用的量度。美国专利号4,554,101以引用的方式整体并入本文。如本领域所理解的，取代具有相似亲水性值的氨基酸可产生保留生物活性，例如免疫原性的肽。可以用亲水性值在彼此±2以内的氨基酸进行取代。氨基酸的疏水指数和亲水值这两者都受该氨基酸的特定侧链的影响。与该观测结果相一致，与生物学功能相容的氨基酸取代被理解为取决于氨基酸的相对相似性，并且特别是那些氨基酸的侧链，如疏水性、亲水性、电荷、大小和其他特性所揭示。

变体可以是在完整基因序列或其片段的全长上基本上相同的核酸序列。所述核酸序列在基因序列或其片段的全长上可以是80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的。变体可以是在氨基酸序列或其片段的全长上基本上相同的氨基酸序列。所述氨基酸序列在氨基酸序列或其片段的全长上可以是80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一的。

如本文所用，“载体”可以意指含有复制起点的核酸序列。载体可以是质粒、噬菌体、细菌人工染色体或酵母人工染色体。载体可以是DNA载体或RNA载体。载体可以是自我复制的染色体外载体或整合到宿主基因组中的载体。

对于本文中数值范围的叙述，其间具有相同精确度的每一个中间数被明确考虑。举例来说，对于6-9的范围，除了6和9之外，还考虑了数字7和8，并且对于范围6.0-7.0，数字6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、以及7.0被明确考虑。

2.组合物

本发明涉及一种组合物，所述组合物包含编码抗体、其片段、其变体或它们的组合的重组核酸序列。本发明还包括用于在哺乳动物细胞中产生抗体或用于在DNA或RNA载体(包括细菌、酵母以及病毒载体)中递送的新型序列。核酸序列可以是DNA序列、RNA序列或其组合和/或衍生物。当向有需要的受试者施用时，组合物可以引起合成抗体在受试者中的产生。合成抗体可以结合受试者体内存在的靶分子(即IL-6和CD126)。此类结合可以中和靶标，阻断另一分子(例如蛋白质或核酸)对靶标的识别，并引发或诱导对靶标的免疫应答。

在一个实施方案中，组合物包含编码合成抗体的核苷酸序列。在一个实施方案中，组合物包含含有编码第一合成抗体的第一核苷酸序列和编码第二合成抗体的第二核苷酸序列的核酸分子。在一个实施方案中，核酸分子包含编码裂解结构域的核苷酸序列。

在一个实施方案中，编码第一合成抗体的第一核苷酸序列包含编码第一合成抗体的重链区的第一结构域和编码第一合成抗体的轻链区的第二结构域。在一个实施方案中，编码第二合成抗体的第二核苷酸序列包含编码第二合成抗体的重链区的第一结构域和编码第二合成抗体的轻链区的第二结构域。

在一个实施方案中，核酸分子包含编码抗IL-6抗体的核苷酸序列。在一个实施方案中，编码抗IL-6抗体的核苷酸序列包含编码抗IL-6的可变VH区和VL区的密码子优化的核酸序列。在一个实施方案中，编码抗IL-6抗体的核苷酸序列包含编码人IgG1κ的CH区和CL区的密码子优化的核酸序列。

在一个实施方案中，核酸分子包含编码抗CD126抗体的核苷酸序列。在一个实施方案中，编码抗CD126抗体的核苷酸序列包含编码抗CD126的可变VH区和VL区的密码子优化的核酸序列。在一个实施方案中，编码抗CD126抗体的核苷酸序列包含编码人IgG1κ的CH区和CL区的密码子优化的核酸序列。

在一个实施方案中，核酸分子包含编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列，所述抗体包含选自SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8的氨基酸序列，其片段或其同源序列。

在一个实施方案中，抗IL-6合成抗体包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列，其由SEQ IDNO:1的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗IL-6合成抗体可包含在SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的整个长度上具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以提供SEQ ID NO:2的片段。片段可包含SEQ ID NO:2的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，片段包括前导序列，诸如免疫球蛋白前导序列，诸如IgE前导序列。在一些实施方案中，片段不含前导序列。

在一个实施方案中，抗IL-6合成抗体包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列，其由SEQ IDNO:3的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗IL-6合成抗体可包含在SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的整个长度上具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以提供SEQ ID NO:4的片段。片段可包含SEQ ID NO:4的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，片段包括前导序列，诸如免疫球蛋白前导序列，诸如IgE前导序列。在一些实施方案中，片段不含前导序列。

在一个实施方案中，抗IL-6合成抗体包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列，其由SEQ IDNO:5的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗IL-6合成抗体可包含在SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的整个长度上具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以提供SEQ ID NO:6的片段。片段可包含SEQ ID NO:6的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，片段包括前导序列，诸如免疫球蛋白前导序列，诸如IgE前导序列。在一些实施方案中，片段不含前导序列。

在一个实施方案中，抗IL-6合成抗体包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列，其由SEQ IDNO:7的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗IL-6合成抗体可包含在SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的整个长度上具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以提供SEQ ID NO:8的片段。片段可包含SEQ ID NO:8的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，片段包括前导序列，诸如免疫球蛋白前导序列，诸如IgE前导序列。在一些实施方案中，片段不含前导序列。

在某些实施方案中，核酸分子包含编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6的核苷酸序列，其片段或其同源序列。

在一个实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列包括SEQ ID NO:1的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列在SEQ ID NO:1中所示的核酸序列的整个长度上包含至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。

一些实施方案涉及SEQ ID NO:1的片段。片段可为SEQ ID NO:1的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。

在一个实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列包含SEQ ID NO:3的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列在SEQ ID NO:3中所示的核酸序列的整个长度上包含至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。

一些实施方案涉及SEQ ID NO:3的片段。片段可为SEQ ID NO:3的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。

在一个实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列包括SEQ ID NO:5的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列在SEQ ID NO:5中所示的核酸序列的整个长度上包含至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。

一些实施方案涉及SEQ ID NO:5的片段。片段可为SEQ ID NO:5的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。

在一个实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列包含SEQ ID NO:7的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列在SEQ ID NO:1中所示的核酸序列的整个长度上包含至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。

一些实施方案涉及SEQ ID NO:7的片段。片段可为SEQ ID NO:7的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。

在一个实施方案中，核酸分子包含编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列，所述抗体包含选自SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:12、其片段或其同源序列的氨基酸序列。

在一个实施方案中，抗CD126合成抗体包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列，其由SEQID NO:9的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗CD126合成抗体可包含在SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的整个长度上具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以提供SEQ ID NO:10的片段。片段可包含SEQ ID NO:10的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，片段包括前导序列，诸如免疫球蛋白前导序列，诸如IgE前导序列。在一些实施方案中，片段不含前导序列。

在一个实施方案中，抗CD126合成抗体包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列，其由SEQID NO:11的核苷酸序列编码。在一些实施方案中，抗CD126合成抗体可包含在SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的整个长度上具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。

可以提供SEQ ID NO:12的片段。片段可包含SEQ ID NO:12的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些实施方案中，片段包括前导序列，诸如免疫球蛋白前导序列，诸如IgE前导序列。在一些实施方案中，片段不含前导序列。

在某些实施方案中，核酸分子包含编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列，其中所述核苷酸序列包括SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:11的核苷酸序列，其片段或其同源序列。

在一个实施方案中，编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列包括SEQ ID NO:9的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列在SEQ ID NO:9中所示的核酸序列的整个长度上包含至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。

一些实施方案涉及SEQ ID NO:9的片段。片段可为SEQ ID NO:9的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。

在一个实施方案中，编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列包括SEQ ID NO:11的核苷酸序列。在某些实施方案中，编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列在SEQ ID NO:11中所示的核酸序列的整个长度上包含至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。

一些实施方案涉及SEQ ID NO:11的片段。片段可为SEQ ID NO:11的至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。

本发明的组合物可以治疗、预防和/或防止与IL-6和/或CD126活性相关的任何疾病、病症或病状。在某些实施方案中，所述组合物可以治疗、预防和/或防止炎症。在某些实施方案中，所述组合物可以治疗、预防和/或防止自身免疫性疾病或病症。在某些实施方案中，所述组合物可以治疗、预防和/或防止癌症。

所述合成抗体可以在接受所述组合物的施用的受试者中治疗、预防、和/或防止疾病。合成抗体通过结合靶标可以在接受所述组合物的施用的受试者中治疗、预防和/或防止疾病。所述合成抗体可以在接受所述组合物的施用的受试者中促进疾病存活率。合成抗体可以在接受所述组合物的施用的受试者中提供至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的疾病存活率。在其他实施方案中，合成抗体可以在接受所述组合物的施用的受试者中提供至少约65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％或80％的疾病存活率。

组合物可以在向所述受试者施用组合物的至少约1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、11小时、12小时、13小时、14小时、15小时、20小时、25小时、30小时、35小时、40小时、45小时、50小时、或60小时内引起合成抗体在受试者中产生。组合物可以在向受试者施用组合物的至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、或10天内引起合成抗体在受试者中产生。组合物可以在向受试者施用组合物的约1小时至约6天、约1小时至约5天、约1小时至约4天、约1小时至约3天、约1小时至约2天、约1小时至约1天、约1小时至约72小时、约1小时至约60小时、约1小时至约48小时、约1小时至约36小时、约1小时至约24小时、约1小时至约12小时、或约1小时至约6小时内引起合成抗体在受试者中产生。

当向有需要的受试者施用时，与在接受抗原施用以诱导体液免疫应答的受试者中内源性抗体的产生相比，组合物可以更快地引起合成抗体在受试者中产生。组合物可以在接受抗原施用以诱导体液免疫应答的受试者中产生内源性抗体之前至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天引起合成抗体的产生。

本发明的组合物可具有有效组合物所需的特征，例如是安全的以使得组合物不会引起疾病或死亡；防止病患；以及提供易施用性、很少的副作用、生物稳定性以及低的每剂成本。

3.重组核酸序列

如上文所述，组合物可以包含重组核酸序列。重组核酸序列可以编码抗体、其片段、其变体或它们的组合。抗体在下文中更详细地描述。

重组核酸序列可以是异源核酸序列。重组核酸序列可以包括至少一种异源核酸序列或一种或多种异源核酸序列。

重组核酸序列可以是优化的核酸序列。这种优化可以增加或改变抗体的免疫原性。优化还可以改善转录和/或翻译。优化可以包括以下一种或多种：低GC含量的前导序列用于增加转录；mRNA稳定性和密码子优化；添加kozak序列(例如，GCC ACC)以增加翻译；添加编码信号肽的免疫球蛋白(Ig)前导序列；并尽可能消除顺式作用序列基序(即内部TATA盒)。

a.重组核酸序列构建体

重组核酸序列可以包括一种或多种重组核酸序列构建体。重组核酸序列构建体可以包括一种或多种组分，它们更详细地描述于下文中。

重组核酸序列构建体可以包括编码重链多肽、其片段、其变体或它们的组合的异源核酸序列。重组核酸序列构建体可以包括编码轻链多肽、其片段、其变体或它们的组合的异源核酸序列。重组核酸序列构建体还可以包括编码蛋白酶或肽酶切割位点的异源核酸序列。重组核酸序列构建体可以包括一个或多个前导序列，其中每个前导序列编码信号肽。重组核酸序列构建体可以包括一个或多个启动子、一个或多个内含子、一个或多个转录终止区、一个或多个起始密码子、一个或多个终止密码或终止密码子和/或一个或多个多聚腺苷酸化信号。重组核酸序列构建体还可以包括一个或多个接头或标签序列。标签序列可以编码血凝素(HA)标签。

(1)重链多肽

重组核酸序列构建体可以包括编码重链多肽、其片段、其变体或它们的组合的异源核酸。重链多肽可以包括可变重链(VH)区和/或至少一个恒定重链(CH)区。至少一个恒定重链区可以包括恒定重链区1(CH1)、恒定重链区2(CH2)以及恒定重链区3(CH3)和/或铰链区。

在一些实施方案中，重链多肽可以包括VH区和CH1区。在其他实施方案中，重链多肽可以包括VH区、CH1区、铰链区、CH2区和CH3区。

重链多肽可以包括互补决定区(“CDR”)组。CDR组可以含有VH区的三个高变区。从重链多肽的N末端开始，这些CDR分别被表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。重链多肽的CDR1、CDR2和CDR3可以有助于抗原结合或识别。

(2)轻链多肽

重组核酸序列构建体可以包括编码轻链多肽、其片段、其变体或它们的组合的异源核酸序列。轻链多肽可以包括可变轻链(VL)区和/或恒定轻链(CL)区。

轻链多肽可以包括互补决定区(“CDR”)组。CDR组可以含有VL区的三个高变区。从轻链多肽的N末端开始，这些CDR分别被表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。轻链多肽的CDR1、CDR2和CDR3可以有助于结合或识别抗原。

(3)蛋白酶切割位点

重组核酸序列构建体可以包括编码蛋白酶切割位点的异源核酸序列。蛋白酶切割位点可以由蛋白酶或肽酶识别。蛋白酶可以是内肽酶或内切蛋白酶，例如但不限于弗林蛋白酶、弹性蛋白酶、HtrA、钙蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶。蛋白酶可以是弗林蛋白酶。在其他实施方案中，蛋白酶可以是丝氨酸蛋白酶、苏氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶、谷氨酸蛋白酶、或切割内部肽键(即，不切割N末端肽键或C末端肽键)的任何蛋白酶。

蛋白酶切割位点可以包括促进或增加切割效率的一个或多个氨基酸序列。一个或多个氨基酸序列可以提高或增加形成或产生离散多肽的效率。一个或多个氨基酸序列可以包括2A肽序列。

(4)接头序列

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个接头序列。接头序列可以在空间上分隔或连接本文所述的一种或多种组分。在其他实施方案中，接头序列可以编码在空间上分隔或连接两个或更多个多肽的氨基酸序列。

(5)启动子

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个启动子。一个或多个启动子可以是能够驱动基因表达和调控基因表达的任何启动子。这种启动子是经由DNA依赖性RNA聚合酶进行转录所需的顺式作用序列元件。用于引导基因表达的启动子的选择取决于具体的应用。启动子可以位于与重组核酸序列构建体中的转录起始点相距与它在它的天然环境中与转录起始位点相距的距离大致相同的距离处。然而，可以容许该距离的变化而不会丧失启动子功能。

启动子可以与编码重链多肽和/或轻链多肽的异源核酸序列可操作地连接。启动子可以是被证实对于在真核细胞中表达来说有效的启动子。与编码序列可操作地连接的启动子可以是CMV启动子；来自猿猴病毒40(SV40)的启动子，诸如SV40早期启动子和SV40晚期启动子；小鼠乳腺瘤病毒(MMTV)启动子；人免疫缺陷病毒(HIV)启动子，诸如牛免疫缺陷病毒(BIV)长末端重复序列(LTR)启动子；莫洛尼病毒启动子；禽白血病病毒(ALV)启动子；巨细胞病毒(CMV)启动子，诸如CMV立即早期启动子；爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)启动子或劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子。启动子也可以是来自人基因的启动子，诸如人肌动蛋白、人肌球蛋白、人血红蛋白、人肌肉肌酸、人多角体蛋白或人金属硫蛋白。

启动子可以是组成型启动子或诱导型启动子，所述诱导型启动子只有当宿主细胞暴露于一些特定的外部刺激时才会引发转录。在多细胞生物体的情况下，启动子也可以对特定组织或器官或发育阶段具有特异性。启动子也可以是天然或合成的组织特异性启动子，诸如肌肉或皮肤特异性启动子。这些启动子的实例描述于美国专利申请公开号US20040175727中，该美国专利申请公开的内容整体并入本文。

启动子可以与增强子结合。增强子可以位于编码序列的上游。增强子可以是人肌动蛋白、人肌球蛋白、人血红蛋白、人肌肉肌酸或病毒增强子，诸如来自CMV、FMDV、RSV或EBV的增强子。多核苷酸功能增强描述于美国专利号5,593,972、5,962,428和W094/016737中，这些美国专利中的每一件的的内容通过引用全部并入。

(6)内含子

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个内含子。每个内含子可以包括功能性剪接供体和受体位点。内含子可以包括剪接的增强子。内含子可以包括有效剪接所需的一个或多个信号。

(7)转录终止区

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个转录终止区。转录终止区可以在编码序列的下游以提供有效的终止。转录终止区可以从与上述启动子相同的基因中获得或可以从一个或多个不同的基因中获得。

(8)起始密码子

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个起始密码子。起始密码子可以位于编码序列的上游。起始密码子可以与编码序列同框。起始密码子可以与有效翻译起始所需的一个或多个信号结合，例如但不限于核糖体结合位点。

(9)终止密码子

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个终止子或终止密码子。终止密码子可以在编码序列的下游。终止密码子可以与编码序列同框。终止密码子可以与有效翻译终止所需的一个或多个信号结合。

(10)多聚腺苷酸化信号

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个多聚腺苷酸化信号。多聚腺苷酸化信号可以包括转录物的有效多聚腺苷酸化所需的一个或多个信号。多聚腺苷酸化信号可以位于编码序列的下游。多聚腺苷酸化信号可以是SV40多聚腺苷酸化信号、LTR多聚腺苷酸化信号、牛生长激素(bGH)多聚腺苷酸化信号、人生长激素(hGH)多聚腺苷酸化信号、或人β-球蛋白多聚腺苷酸化信号。SV40多聚腺苷酸化信号可以是来自pCEP4质粒(Invitrogen,SanDiego,CA)的多聚腺苷酸化信号。

(11)前导序列

重组核酸序列构建体可以包括一个或多个前导序列。前导序列可以编码信号肽。信号肽可以是免疫球蛋白(Ig)信号肽，例如但不限于IgG信号肽和IgE信号肽。

b.重组核酸序列构建体的排列

如上文所述，重组核酸序列可以包括一种或多种重组核酸序列构建体，其中每种重组核酸序列构建体可以包括一种或多种组分。一种或多种组分详细描述于上文中。当被包括在重组核酸序列构建体中时，一种或多种组分可以相对于彼此以任何顺序排列。在一些实施方案中，一种或多种组分可以如下文所述在重组核酸序列构建体中排列。

(1)排列1

在一种排列中，第一重组核酸序列构建体可以包括编码重链多肽的异源核酸序列，并且第二重组核酸序列构建体可以包括编码轻链多肽的异源核酸序列。

第一重组核酸序列构建体可以被放置在载体中。第二重组核酸序列构建体可以被放置在第二或单独的载体中。将重组核酸序列构建体放置到载体中更详细地描述于下文中。

第一重组核酸序列构建体还可以包括启动子、内含子、转录终止区、起始密码子、终止密码子和/或多聚腺苷酸化信号。第一重组核酸序列构建体还可以包括前导序列，其中前导序列位于编码重链多肽的异源核酸序列的上游(或5')。因此，由前导序列编码的信号肽可以通过肽键与重链多肽连接。

第二重组核酸序列构建体还可以包括启动子、起始密码子、终止密码子和多聚腺苷酸化信号。第二重组核酸序列构建体还可以包括前导序列，其中前导序列位于编码轻链多肽的异源核酸序列的上游(或5')。因此，由前导序列编码的信号肽可以通过肽键与轻链多肽连接。

因此，排列1的一个实例可以包括编码包括VH和CH1的重链多肽的第一载体(并且因此包括第一重组核酸序列构建体)，以及编码包括VL和CL的轻链多肽的第二载体(并且因此包括第二重组核酸序列构建体)。排列1的第二实例可以包括编码包括VH、CH1、铰链区、CH2和CH3的重链多肽的第一载体(并且因此包括第一重组核酸序列构建体)，以及编码包括VL和CL的轻链多肽的第二载体(并且因此包括第二重组核酸序列构建体)。

(2)排列2

在第二排列中，重组核酸序列构建体可以包括编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列。编码重链多肽的异源核酸序列可以位于编码轻链多肽的异源核酸序列的上游(或5')。或者，编码轻链多肽的异源核酸序列可以位于编码重链多肽的异源核酸序列的上游(或5')。

重组核酸序列构建体可以被放置在载体中，如下文更详细描述的那样。

重组核酸序列构建体可以包括编码蛋白酶切割位点的异源核酸序列和/或接头序列。如果被包括在重组核酸序列构建体中，那么编码蛋白酶切割位点的异源核酸序列可以位于编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列之间。因此，蛋白酶切割位点允许在表达时将重链多肽和轻链多肽分离成不同的多肽。在其他实施方案中，如果接头序列被包括在重组核酸序列构建体中，则接头序列可以位于编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列之间。

重组核酸序列构建体还可以包括启动子、内含子、转录终止区、起始密码子、终止密码子和/或多聚腺苷酸化信号。重组核酸序列构建体可以包括一个或多个启动子。重组核酸序列构建体可以包括两个启动子以使得一个启动子可以与编码重链多肽的异源核酸序列关联，并且第二启动子可以与编码轻链多肽的异源核酸序列关联。在另外的其他实施方案中，重组核酸序列构建体可以包括一个启动子，该启动子与编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列关联。

重组核酸序列构建体还可以包括两个前导序列，其中第一前导序列位于编码重链多肽的异源核酸序列的上游(或5')，并且第二前导序列位于编码轻链多肽的异源核酸序列的上游(或5')。因此，由第一前导序列编码的第一信号肽可以通过肽键与重链多肽连接，并且由第二前导序列编码的第二信号肽可以通过肽键与轻链多肽连接。

因此，排列2的一个实例可以包括编码包括VH和CH1的重链多肽以及包括VL和CL的轻链多肽的载体(并且因此包括重组核酸序列构建体)，其中接头序列位于编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列之间。

排列2的第二实例可以包括编码包括VH和CH1的重链多肽以及包括VL和CL的轻链多肽的载体(并且因此包括重组核酸序列构建体)，其中编码蛋白酶切割位点的异源核酸序列位于编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列之间。

排列2的第三实例可以包括编码包括VH、CH1、铰链区、CH2和CH3的重链多肽以及包括VL和CL的轻链多肽的载体(并且因此包括重组核酸序列构建体)，其中接头序列位于编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列之间。

排列2的第四实例可以包括编码包括VH、CH1、铰链区、CH2和CH3的重链多肽以及包括VL和CL的轻链多肽的载体(并且因此包括重组核酸序列构建体)，其中编码蛋白酶切割位点的异源核酸序列位于编码重链多肽的异源核酸序列和编码轻链多肽的异源核酸序列之间。

c.从重组核酸序列构建体表达

如上文所述，在一种或多种组分中，重组核酸序列构建体可以包括编码重链多肽的异源核酸序列和/或编码轻链多肽的异源核酸序列。因此，重组核酸序列构建体可以促进重链多肽和/或轻链多肽的表达。

当利用如上文所述的排列1时，第一重组核酸序列构建体可以促进重链多肽的表达，并且第二重组核酸序列构建体可以促进轻链多肽的表达。当利用如上文所述的排列2时，重组核酸序列构建体可以促进重链多肽和轻链多肽的表达。

在表达时，例如但不限于在细胞、生物体或哺乳动物中，重链多肽和轻链多肽可以组装成合成抗体。具体来说，重链多肽和轻链多肽可以彼此相互作用以使得组装产生能够结合抗原的合成抗体。在其他实施方案中，重链多肽和轻链多肽可以彼此相互作用以使得组装产生与并非如本文所述组装的抗体相比具有更大的免疫原性的合成抗体。在另外的其他实施方案中，重链多肽和轻链多肽可以彼此相互作用以使得组装产生能够引发或诱导对抗原的免疫应答的合成抗体。

d.载体

载体包括但不限于质粒、表达载体、重组病毒、任何形式的重组“裸DNA”载体等等。“载体”包含可以感染、转染、瞬时或永久转导细胞的核酸。应认识到，载体可以是裸核酸，或与蛋白质或脂质复合的核酸。载体任选地包含病毒或细菌核酸和/或蛋白质和/或膜(例如，细胞膜、病毒脂质包膜等)。载体包括但不限于DNA片段可以附接和复制的复制子(例如，RNA复制子、噬菌体)。因此，载体包括但不限于RNA、自主自我复制的环状或线性DNA或RNA(例如，质粒、病毒等，参见，例如美国专利号5,217,879)，并且包括表达和非表达质粒。当重组微生物或细胞培养物被描述为具有“表达载体”时，这包括染色体外环状和线性DNA以及已整合进一条或多条宿主染色体的DNA二者。当载体由宿主细胞维持时，载体可以在有丝分裂期间作为自主结构由细胞稳定复制，或整合在宿主的基因组内。上述重组核酸序列构建体可以被放置在一种或多种载体中。一种或多种载体可以含有复制起点。一种或多种载体可以是质粒、噬菌体、细菌人工染色体或酵母人工染色体。一种或多种载体可以是自我复制染色体外载体或整合到宿主基因组中的载体。

一种或多种载体可以是异源表达构建体，其通常是用于将特定基因引入到靶细胞中的质粒。一旦表达载体处于细胞内，由重组核酸序列构建体编码的重链多肽和/或轻链多肽就由细胞转录和翻译机制核糖体复合物产生。所述一种或多种载体可以表达大量稳定的信使RNA，因此也可以表达蛋白质。

(1)表达载体

一种或多种载体可以是环状质粒或线性核酸。环状质粒和线性核酸能够引导特定核苷酸序列在适当的受试者细胞中表达。包含重组核酸序列构建体的一种或多种载体可以是嵌合的，这意味着其组分中的至少一种相对于其他组分中的至少一种是异源的。

(2)质粒

一种或多种载体可以是质粒。质粒可用于用重组核酸序列构建体转染细胞。质粒可用于将重组核酸序列构建体引入受试者中。质粒还可以包含调控序列，所述调控序列可以非常适合于其中施用质粒的细胞中的基因表达。

质粒还可以包含哺乳动物复制起点，以在染色体外维持质粒并且在细胞中产生质粒的多个拷贝。质粒可以是来自Invitrogen(San Diego,CA)的pVAX、pCEP4或pREP4，它们可以包含爱泼斯坦-巴尔病毒复制起点和核抗原EBNA-1编码区，这可以在没有整合的情况下产生高拷贝游离型复制。质粒的骨架可以是pAV0242。质粒可以是复制缺陷型5型腺病毒(Ad5)质粒。

质粒可以是pSE420(Invitrogen,San Diego,Calif.)，其可以用于在大肠杆菌(E.coli)中产生蛋白质。质粒也可以是p YES2(Invitrogen,San Diego,Calif.)，其可以用于在酵母的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)株中产生蛋白质。质粒也可以是MAXBAC^TM完整杆状病毒表达系统(Invitrogen,San Diego,Calif.)，其可以用于在昆虫细胞中产生蛋白质。质粒也可以是pcDNAI或pcDNA3(Invitrogen,San Diego,Calif.)，其可以用于在哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中产生蛋白质。

(3)RNA载体

在一个实施方案中，所述核酸为RNA分子。在一个实施方案中，所述RNA分子由本文所述的DNA序列转录而来。例如，在一些实施方案中，RNA分子由SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11之一或其变体或其片段编码。在另一个实施方案中，所述核苷酸序列包括由编码SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12的多肽序列的DNA序列，或其变体或其片段转录的RNA序列。因此，在一个实施方案中，本发明提供了编码本文公开的一种或多种抗体或其他分子的RNA分子。RNA可以是正链。因此，在一些实施方案中，RNA分子可以由细胞翻译，而不需要任何中间重复步骤，诸如逆转录。本发明所用的RNA分子可以具有5′帽(例如7-甲基鸟苷)。该帽可以增加RNA的体内翻译。本发明所用的RNA分子的5′核苷酸可以具有5′三磷酸基团。在加帽RNA中，这可以通过5′至5′桥连接至7-甲基鸟苷。RNA分子可以具有3′多聚腺苷酸尾。它还可包括其3′末端附近的多聚腺苷酸聚合酶识别序列(例如AAUAAA)。本发明使用的RNA分子可以是单链的。

(4)环状和线性载体

所述一种或多种载体可以是一种或多种环状质粒，其可以通过整合到细胞基因组中转化靶细胞或者存在于染色体外(例如，具有复制起点的自主复制质粒)。载体可以是pVAX、pcDNA3.0或provax，或能够表达由重组核酸序列构建体编码的重链多肽和/或轻链多肽的任何其他表达载体。

本文还提供了线性核酸或线性表达盒(“LEC”)，其能够经由电穿孔有效地向受试者递送并且表达由重组核酸序列构建体编码的重链多肽和/或轻链多肽。LEC可以是缺乏任何磷酸骨架的任何线性DNA。DNA可以编码一种或多种抗体。LEC可包含启动子、内含子、终止密码子、多聚腺苷酸化信号。LEC可以不含任何抗生素抗性基因和/或磷酸骨架。LEC可以不含与所需抗体表达无关的其他核酸序列。LEC能够通过电穿孔有效递送到受试者中并表达一种或多种所需抗体。

LEC可以来源于能够线性化的任何质粒。这些也可以在没有细菌生长的情况下合成制备，而不是由线性化序列制备。质粒可能能够表达由重组核酸序列构建体编码的重链多肽和/或轻链多肽。质粒可以是pNP(Puerto Rico/34)或pM2(New Caledonia/99)。质粒可以是WLV009、pVAX、pcDNA3.0或provax，或能够表达由重组核酸序列构建体编码的重链多肽和/或轻链多肽的任何其他表达载体。

LEC可以是pcrM2。LEC可以是pcrNP。pcrNP和pcrMR可以分别来源于pNP(PuertoRico/34)和pM2(New Caledonia/99)。

(5)病毒载体

在一个实施方案中，本文提供病毒载体，它们能够将本发明的核酸递送至细胞。表达载体可以以病毒载体的形式提供给细胞。病毒载体技术是本领域中公知的，并且例如在Sambrook等人(2001年)和在在Ausubel等人(1997)，以及其他病毒学和分子生物学手册中进行了描述。可用作载体的病毒包括但不限于逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒和慢病毒。通常，合适的载体包含在至少一种生物体中有功能的复制起点，启动子序列，方便的限制性核酸内切酶位点和一种或多种选择标志物。(参见，例如WO 01/96584；WO 01/29058；和美国专利第6,326,193号。病毒载体，特别是逆转录病毒载体，已成为最广泛使用的将基因插入哺乳动物(例如人)细胞的方法。其他病毒载体可以来源于慢病毒、痘病毒、单纯疱疹病毒I、腺病毒和腺相关病毒等等。参见例如，美国专利第5,350,674和5,585,362号。

(6)制备载体的方法

本文提供了一种用于制备一种或多种载体的方法，在一种或多种载体中已经放置了重组核酸序列构建体。在最终亚克隆步骤之后，可以使用本领域已知的方法，使用载体来接种大规模发酵罐中的细胞培养物。

在其他实施方案中，在最终亚克隆步骤之后，可以将载体与一种或多种电穿孔(EP)装置一起使用。EP装置更详细地描述于下文中。

一种或多种载体可以使用已知装置和技术组合配制或制造，但优选地，它们使用2007年5月23日提交的、许可的、共同未决的美国临时专利申请美国序列号60/939,792描述的质粒制造技术来制造。在一些实例中，本文所述的DNA质粒可以以大于或等于10mg/mL的浓度配制。除了美国序列号60/939792中所述的那些装置和方案之外，制造技术还包括或结合了本领域的普通技术人员通常已知的多种装置和方案，包括2007年7月3日公布的许可专利美国专利号7,238,522中所述的那些。上文引用的申请和专利美国序列号60/939,792和美国专利号7,238,522分别据此整体并入本文。

4.抗体

如上文所述，重组核酸序列可以编码抗体、其片段、其变体或它们的组合。抗体可以与抗原结合或反应，所述抗原更详细地描述于下文中。

抗体可以在接受本发明组合物的施用的受试者中治疗、预防和/或防止疾病。抗体通过结合抗原可以在接受所述组合物的施用的受试者中治疗、预防和/或防止疾病。抗体可以在接受所述组合物的施用的受试者中促进疾病存活率。在一个实施方案中，相比尚未施用抗体的患病受试者的预期存活率，抗体可以使受试者的疾病存活率提高。在各个实施方案中，相比在不存在组合物的情况下的预期存活率相比，抗体可以使已接受组合物施用的受试者的疾病存活率提高至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在一个实施方案中，相比尚未施用抗体的受试者的预期防护，抗体可以在受试者中提供增加的疾病防护。在各个实施方案中，相比在不存在组合物的情况下的预期防护相比，抗体可以防止接受组合物施用的受试者的疾病至少约1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。

抗体可以包含重链互补决定区(“CDR”)组和轻链互补决定区组，其分别插入于重链框架(“FR”)组和轻链框架组之间，这为CDR提供支撑并且限定CDR相对于彼此的空间关系。CDR组可以含有重链V区或轻链V区的三个高变区。从重链或轻链的N末端开始，这些区域分别表示为“CDR1”、“CDR2”和“CDR3”。抗原结合位点因此可以包括六个CDR，包括来自重链V区和轻链V区中的每一个的CDR组。

蛋白水解酶木瓜蛋白酶优先地切割IgG分子以产生几个片段，其中两个(F(ab)片段)各自包含包括完整抗原结合位点的共价异二聚体。胃蛋白酶能够切割IgG分子以提供几个片段，包括F(ab')₂片段，其包含两个抗原结合位点。因此，抗体可以是Fab或F(ab')₂。Fab可以包括重链多肽和轻链多肽。Fab的重链多肽可以包括VH区和CH1区。Fab的轻链可以包括VL区和CL区。

抗体可以是免疫球蛋白(Ig)。Ig可以是例如IgA、IgM、IgD、IgE和IgG。免疫球蛋白可以包括重链多肽和轻链多肽。免疫球蛋白的重链多肽可以包括VH区、CH1区、铰链区、CH2区和CH3区。免疫球蛋白的轻链多肽可以包括VL区和CL区。

抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。抗体可以是嵌合抗体、单链抗体、亲和力成熟抗体、人抗体、人源化抗体或完全人抗体。人源化抗体可以是来自非人物种的结合所期望的抗原的抗体，所述抗原具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区。

抗体可以是如下文更详细描述的双特异性抗体。抗体可以是也如下文更详细描述的双功能抗体。

如上文所述，在向受试者施用组合物后，在受试者体内可以产生抗体。抗体在受试者体内可能具有半衰期。在一些实施方案中，抗体可以被修饰以延长或缩短其在受试者体内的半衰期。这样的修饰更详细地描述于下文中。

抗体可以是脱岩藻糖基化的，如下文更详细描述的那样。

抗体可以被修饰以减少或防止抗原相关的疾病的抗体依赖性增强(ADE)，如下文更详细描述的那样。

a.双特异性抗体

重组核酸序列可以编码双特异性抗体、其片段、其变体或它们的组合。双特异性抗体可以与两种抗原结合或反应，例如下文更详细描述的抗原中的两种。双特异性抗体可以由本文所述的两种抗体的片段组成，从而允许双特异性抗体与两种预期靶分子结合或反应，所述靶分子可以包括抗原(其在下文中有更详细地描述)、配体(包括受体的配体)、受体(包括受体上的配体结合位点)、配体-受体复合物和标志物(包括癌症标志物)。

b.双功能抗体

重组核酸序列可以编码双功能抗体、其片段、其变体或它们的组合。双功能抗体可以与下文所述的抗原结合或反应。双功能抗体还可以被修饰以赋予抗体除识别和结合抗原之外的另外的功能。这样的修饰可以包括但不限于与因子H或其片段偶联。因子H是补体激活的可溶性调节因子并且因此可以经由补体介导的裂解(CML)来促进免疫应答。

c.延长抗体半衰期

如上文所述，抗体可以被修饰以延长或缩短抗体在受试者体内的半衰期。修饰可以延长或缩短抗体在受试者的血清中的半衰期。

修饰可以存在于抗体的恒定区中。修饰可以是抗体的恒定区中的一个或多个氨基酸取代，与不包含一个或多个氨基酸取代的抗体的半衰期相比，一个或多个氨基酸置换延长了抗体的半衰期。修饰可以是抗体的CH2域中的一个或多个氨基酸取代，与不包含一个或多个氨基酸取代的抗体的半衰期相比，一个或多个氨基酸取代延长了抗体的半衰期。

在一些实施方案中，恒定区中的一个或多个氨基酸取代可以包括用酪氨酸残基置换恒定区中的甲硫氨酸残基、用苏氨酸残基置换恒定区中的丝氨酸残基、用谷氨酸残基置换恒定区中的苏氨酸残基或它们的任何组合，从而延长抗体的半衰期。

在其他实施方案中，恒定区中的一个或多个氨基酸置换可以包括用酪氨酸残基置换CH2结构域中的甲硫氨酸残基、用苏氨酸残基置换CH2结构域中的丝氨酸残基、用谷氨酸残基置换CH2结构域中的苏氨酸残基或它们的任何组合，从而延长抗体的半衰期。

d.脱岩藻糖基化

重组核酸序列可以编码未经岩藻糖基化的抗体(即，脱岩藻糖基化抗体或非岩藻糖基化抗体)、其片段、其变体或它们的组合。岩藻糖基化包括将糖岩藻糖添加到分子中，例如，将岩藻糖与N-聚糖、O-聚糖以及糖脂连接。因此，在脱岩藻糖基化抗体中，岩藻糖不与恒定区的碳水化合物链连接。进而，与岩藻糖基化抗体相比，这种岩藻糖基化的缺乏可以提高抗体的FcγRIIIa结合和抗体指导的细胞毒性(ADCC)活性。因此，在一些实施方案中，与岩藻糖基化抗体相比，非岩藻糖基化抗体可以表现出增加的ADCC活性。

抗体可以被修饰以防止或抑制抗体的岩藻糖基化。在一些实施方案中，与未修饰的抗体相比，这样的修饰的抗体可以表现出增加的ADCC活性。修饰可以在重链、轻链或它们的组合中。修饰可以是重链中的一个或多个氨基酸取代、轻链中的一个或多个氨基酸取代或它们的组合。

e.减少的ADE反应

抗体可以被修饰以减少或防止抗原相关的疾病的抗体依赖性增强(ADE)，但是仍中和抗原。

在一些实施方案中，抗体可以被修饰以包括减少或防止抗体与FcyR1a结合的一个或多个氨基酸取代。一个或多个氨基酸取代可以在抗体的恒定区中。一个或多个氨基酸取代可以包括在抗体的恒定区中用丙氨酸残基置换亮氨酸残基，即在本文也被称为LA、LA突变或LA取代。一个或多个氨基酸取代可以包括在抗体的恒定区中分别用丙氨酸残基取代两个亮氨酸残基，并且在本文也被称为LALA、LALA突变或LALA取代。LALA取代的存在可以防止或阻断抗体与FcyR1a结合，因此修饰的抗体不会增强或引起抗原相关的疾病的ADE，但是仍中和抗原。

5.靶标

合成抗体针对靶标或其片段或变体。靶标可以是核酸序列、氨基酸序列或其组合。核酸序列可以是DNA、RNA、cDNA、其变体、其片段或它们的组合。氨基酸序列可以是蛋白质、肽、其变体、其片段或它们的组合。

在一个实施方案中，靶标为IL-6。在一个实施方案中，靶标为CD126。在许多疾病中IL-6及其受体CD126刺激炎症和自身免疫过程，所述疾病包括但不限于糖尿病、动脉粥样硬化、抑郁症、阿尔茨海默氏病(Alzheimer's Disease)、全身性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、癌症、白赛氏病(disease)和类风湿性关节炎。

6.组合物的赋形剂和其他组分

组合物还可以包含药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的赋形剂可以是功能性分子，诸如媒介物、载剂或稀释剂。药学上可接受的赋形剂可以是转染促进剂，其可以包括表面活性剂，诸如免疫刺激复合物(ISCOMS)；弗氏不完全佐剂(Freunds incompleteadjuvant)；LPS类似物，包括单磷酰脂质A；胞壁酰肽；醌类似物；囊泡，诸如鲨烯和角鲨烯；透明质酸；脂质；脂质体；钙离子；病毒蛋白；聚阴离子；聚阳离子或纳米颗粒或者其他已知的转染促进剂。

转染促进剂是聚阴离子；聚阳离子，包括聚L-谷氨酸(LGS)；或脂质。转染促进剂是聚L-谷氨酸，聚L-谷氨酸可以以小于6mg/ml的浓度存在于组合物中。转染促进剂还可以包括表面活性剂，诸如免疫刺激复合物(ISCOMS)；弗氏不完全佐剂；LPS类似物，包括单磷酰脂质A；胞壁酰肽；醌类似物以及囊泡，诸如鲨烯和角鲨烯，并且还可以使用与组合物结合施用的透明质酸。组合物还可以包括转染促进剂，诸如脂质；脂质体，包括卵磷脂脂质体或本领域已知的其他脂质体，作为DNA-脂质体混合物(参见例如W09324640)；钙离子、病毒蛋白、聚阴离子、聚阳离子或纳米颗粒或者其他已知的转染促进剂。转染促进剂是聚阴离子；聚阳离子，包括聚L-谷氨酸(LGS)；或脂质。疫苗中转染剂的浓度小于4mg/ml、小于2mg/ml、小于1mg/ml、小于0.750mg/ml、小于0.500mg/ml、小于0.250mg/ml、小于0.100mg/ml、小于0.050mg/ml或小于0.010mg/ml。

组合物还可以包含1994年4月1日提交的美国序列号021,579中所述的遗传促进剂，该专利以引用的方式整体并入。

该组合物可包含DNA，其量为约1纳克至100毫克；约1微克至约10毫克；或优选约0.1微克至约10毫克；或更优选约1毫克至约2毫克。在一些优选的实施方案中，根据本发明的组合物包含约5纳克至约1000微克的DNA。在一些优选的实施方案中，组合物可以含有约10纳克至约800微克的DNA。在一些优选的实施方案中，组合物可以含有约0.1微克至约500微克的DNA。在一些优选的实施方案中，组合物可以含有约1微克至约350微克的DNA。在一些优选的实施方案中，组合物可含有约25至约250微克，约100至约200微克，约1纳克至100毫克；约1微克到约10毫克；约0.1微克到约10毫克；约1毫克至约2毫克，约5纳克至约1000微克，约10纳克至约800微克，约0.1至约500微克，约1至约350微克，约25至约250微克，约100至约200微克的DNA。

组合物可以根据要使用的施用方式来配制。可注射的药物组合物可以是无菌的、无热原的和无颗粒的。可以使用等渗制剂或溶液。用于等渗性的添加剂可以包括氯化钠、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇和乳糖。组合物可以包含血管收缩剂。等渗溶液可以包括磷酸盐缓冲盐水。组合物还可以包含稳定剂，包括明胶和白蛋白。稳定剂可以允许制剂在室温或环境温度下在一段较长的时间内稳定，包括LGS或聚阳离子或聚阴离子。

7.产生合成抗体的方法

本发明还涉及一种产生合成抗体的方法。该方法可以包括通过使用下文更详细描述的递送方法向有需要的受试者施用组合物。因此，在向受试者施用组合物后，在受试者中或体内产生合成抗体。

该方法还可以包括将组合物引入一种或多种细胞中，并且因此，在一种或多种细胞中可以形成或产生合成抗体。该方法还可以包括将组合物引入一种或多种组织中，例如但不限于皮肤和肌肉，并且因此，在一种或多种组织中可以形成或产生合成抗体。

8.鉴定或筛选抗体的方法

本发明还涉及一种鉴定或筛选上述抗体的方法，所述抗体对上述抗原具有反应性或结合上述抗原。鉴定或筛选抗体的方法可以在本领域技术人员已知的方法中使用抗原来鉴定或筛选抗体。这些方法可以包括但不限于从文库(例如，噬菌体展示)中选择抗体以及对动物进行免疫接种，然后分离和/或纯化抗体。

9.组合物的递送方法

本发明还涉及一种向有需要的受试者递送组合物的方法。递送方法可以包括向受试者施用组合物。施用可包括但不限于在进行和不进行体内电穿孔的情况下进行核酸(即DNA和/或RNA，或其修饰形式)注射、脂质体介导的递送和纳米颗粒促进的递送。

接受组合物的递送的哺乳动物可以是人、灵长类动物、非人灵长类动物、奶牛、牛、绵羊、山羊、羚羊、野牛、水牛、野牛、牛科动物、鹿、刺猬、象、美洲驼、羊驼、小鼠、大鼠和鸡。

组合物可以通过不同的途径施用，包括口服、肠胃外、舌下、透皮、经直肠、经粘膜、局部、经由吸入、经由颊面施用、胸膜内、静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、肌内、鼻内、鞘内以及关节内或它们的组合。对于兽医用途，组合物可以根据正常的兽医实践作为可适当接受的制剂施用。兽医可以容易地确定最适合于具体动物的给药方案和施用途径。组合物可以通过传统注射器、无针注射装置、“微粒轰击基因枪”或其他物理方法，诸如电穿孔(“EP”)、“流体动力学方法”或超声来施用。

a.电穿孔

经由电穿孔施用组合物可以使用电穿孔装置来完成，所述电穿孔装置可以被配置成向哺乳动物的所期望的组织递送能够有效引起在细胞膜中形成可逆性孔隙能量脉冲，并且优选的是，能量脉冲是与使用者输入的预设电流相似的恒定电流。电穿孔装置可以包括电穿孔部件和电极组件或柄部组件。电穿孔部件可以包括和结合电穿孔装置的各种元件中的一种或多种，包括：控制器、电流波形发生器、阻抗测试器、波形记录器、输入元件、状态报告元件、通信端口、存储部件、电源和电源开关。电穿孔可以使用体内电穿孔装置完成，例如CELLECTRA EP系统(Inovio Pharmaceuticals,Plymouth Meeting,PA)或Elgen电穿孔仪(Inovio Pharmaceuticals,Plymouth Meeting,PA)，以促进质粒对细胞的转染。

电穿孔部件可以充当电穿孔装置的一个元件，并且其他元件是与电穿孔部件通信的单独元件(或部件)。电穿孔部件可以充当电穿孔装置的多于一个元件，其可以与和电穿孔部件分开的电穿孔装置的另外其他元件通信。作为一个机电装置或机械装置的零件存在的电穿孔装置的元件可以不受限制，因为元件可以充当一个装置或彼此通信的单独元件。电穿孔部件可能能够在所期望的组织中递送产生恒定电流的能量脉冲，并且包括反馈机制。电极组件可以包括具有空间排列的多个电极的电极阵列，其中电极组件从电穿孔部件接收能量脉冲并且将其经由电极递送至所期望的组织。多个电极中的至少一个在递送能量脉冲期间是中性的，并且测量所期望组织中的阻抗，并且将阻抗传送给电穿孔部件。反馈机制可以接收所测量的阻抗并且可以调整由电穿孔部件递送的能量脉冲以维持恒定电流。

多个电极可以以分散模式递送能量脉冲。多个电极可以经由按照编程序列控制电极以分散模式来递送能量脉冲，并且编程序列是由使用者输入到电穿孔部件。编程序列可以包括按顺序递送的多个脉冲，其中多个脉冲中的每一个脉冲是由至少两个有源电极递送的，其中一个中性电极测量阻抗，并且其中多个脉冲的后续脉冲由至少两个有源电极中不同的电极递送，其中一个中性电极测量阻抗。

反馈机制可以通过硬件或软件执行。反馈机制可以通过模拟闭环电路执行。反馈每50微秒、20微秒、10微秒或1微秒发生一次，但优选地是实时反馈或瞬时的(即基本上瞬时的，如通过用于确定响应时间的可用技术确定)。中性电极可以测量所期望的组织中的阻抗并且将阻抗传送给反馈机制，并且反馈机制对阻抗作出响应并且调整能量脉冲以将恒定电流维持在与预设电流相似的值。反馈机制可以在递送能量脉冲期间连续地并且瞬时地维持恒定电流。

可以促进本发明的组合物的递送的电穿孔装置和电穿孔方法的实例包括Draghia-Akli等人的美国专利号7,245,963、Smith等人递交的美国专利公开2005/0052630中所述的那些，这些文献的内容据此以引用的方式整体并入本文。可以用于促进组合物的递送的其他电穿孔装置和电穿孔方法包括2007年10月17日提交的共同未决的和共同拥有的美国专利申请序列号11/874072中提供的那些，该美国专利申请依照美国法典第35篇第119条(e)款要求保护2006年10月17日提交的美国临时申请序列号60/852,149和2007年10月10日提交的美国临时申请序列号60/978,982的权益，所有申请均据此整体并入。

Draghia-Akli等人的美国专利号7,245,963描述了模块化电极系统和它们用于促进将生物分子引入到身体或植物中所选择的组织的细胞中的用途。模块化电极系统可包括多个针电极；皮下注射针；电连接器，其提供从可编程恒流脉冲控制器到多个针电极的导电连接；和电源。操作人员可以抓住安装在支撑结构上的多个针电极并且将它们牢固地插入到身体或植物中所选择的组织中。然后经由皮下注射针将生物分子递送到所选择的组织中。启动可编程的恒定电流脉冲控制器并且将恒定电流电脉冲施加到多个针电极。所施加的恒定电流电脉冲促进将生物分子引入到多个电极之间的细胞中。美国专利号7,245,963的全部内容据此以引用的方式并入。

Smith等人递交的美国专利公开2005/0052630描述了一种电穿孔装置，其可以用于有效地促进生物分子引入到身体或植物中所选择的组织的细胞中。电穿孔装置包括电动装置(“EKD装置”)，其操作由软件或固件指定。EKD装置基于使用者对脉冲参数的控制和输入在阵列中的电极之间产生一系列可编程的恒定电流脉冲图形，并且允许存储和获取电流波形数据。电穿孔装置还包括可更换的电极盘，所述电极盘具有针电极的阵列、用于注射针的中心注射通道以及可移除的引导盘。美国专利公开2005/0052630的全部内容在此以引用的方式并入。

美国专利号7,245,963和美国专利公开2005/0052630中所述的电极阵列和方法可以适用于不仅深度穿透到诸如肌肉的组织中，而且还深度穿透到其他组织或器官中。由于电极阵列的配置，因此注射针(递送所选择的生物分子)也完全插入到靶器官中，并且在由电极预先界定的区域中垂直于靶组织施用注射。美国专利号7,245,963和美国专利公开2005/005263中所述的电极优选地为20mm长和21号。

此外，在包括电穿孔装置和其用途的一些实施方案中考虑，电穿孔装置是以下专利中所述的那些：1993年12月28日公布的美国专利5,273,525、2000年8月29日公布的美国专利6,110,161、2001年7月17日公布的美国专利6,261,281、和2005年10月25日公布的美国专利6,958,060、以及2005年9月6日公布的美国专利6,939,862。此外，本文考虑了涵盖2004年2月24日公布的美国专利6,697,669(涉及使用多种装置中的任一种递送DNA)和2008年2月5日公布的美国专利7,328,064(涉及注射DNA的方法)中提供的主题的专利。上述专利以引用的方式整体并入。

10.治疗方法

本文还提供了一种在有需要的受试者中通过在受试者中产生合成抗体来治疗、防止和/或预防疾病的方法。该方法可以包括向受试者施用组合物。向受试者施用组合物可以使用上述递送方法进行。

在某些实施方案中，本发明提供治疗、防止和/或预防与IL-6和/或CD126相关的疾病的方法。例如，在一个实施方案中，该方法治疗、防止和/或预防自身免疫性病症。在一个实施方案中，该方法治疗、防止和/或预防癌症。通过施用本发明组合物治疗或预防的示例性疾病或病症包括但不限于糖尿病、动脉粥样硬化、抑郁症、阿尔茨海默氏病、全身性红斑狼疮、多发性骨髓瘤、癌症、白赛氏病、类风湿性关节炎、败血症、细菌感染、病毒感染、真菌感染、多中心卡斯特莱曼病、与高烧相关的任何疾病、移植物抗宿主(GVH)疾病、细胞溶解综合征等。

在受试者中产生合成抗体后，合成抗体可以与抗原结合或反应。这种结合可以中和抗原，阻断另一种分子(例如蛋白质或核酸)对抗原的识别，并且引发或诱导对抗原的免疫应答，从而治疗、防止和/或预防受试者的抗原相关的疾病。

组合物剂量可以是1μg至100mg活性组分/kg体重/次，并且可以是20μg至100mg组分/kg体重/次。组合物可以每1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天或31天施用。用于有效治疗的组合物剂量数可以是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。

本发明具有通过以下非限制性实施例说明的多个方面。

11.实施例

在以下实施例中进一步说明本发明。应当了解的是，这些实施例虽然表明了本发明的优选的实施方案，但是仅通过说明方式给出。从上述论述和这些实施例，本领域技术人员可以确定本发明的基本特征，并且在不脱离其精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种变化和修改以使它适应各种用途和条件。因此，根据上述说明，除本文所示和所述的那些之外，本发明的多种修改对本领域技术人员来说将是显而易见的。这些修改也旨在落入所附权利要求书的范围内。

实施例1

本文提供的研究证明通过质粒DNA的肌内电穿孔产生功能性抗IL-6和抗CD126“DNA单克隆抗体”(DMAb)。

这些研究证明靶向IL-6和CD126的功能性DNA单克隆抗体(DMAb)在体内表达。构建了来自四种抗IL-6和两种抗CD126单克隆抗体的人IgG1恒定结构域上的密码子优化的可变区DNA序列。编码每种抗体的质粒DNA通过电穿孔经肌肉内递送至有免疫力的裸鼠。优化DMAb递送的多个方面-包括抗体序列、质粒重链和轻链排列以及配制-以增强体内表达。

抗IL-6和抗CD126DMAb在血清中表达，在BALB/c小鼠中的水平范围为1.5μg/mL至7.1μg/mL。同样，观察到在裸鼠中的长期DMAb表达。血清DMAb保持与纯化IL-6和CD126的功能性结合。血清DMAb还在体外阻断下游IL-6细胞信号传导。进行研究以调查抗IL-6和抗CD126DMAb在控制败血症，限制急性病毒感染期间的炎症和减缓肿瘤进展中的作用。这些研究不仅提供了一种新方法用于进一步明确体内IL-6信号传导在免疫病理学中的作用，而且还将DMAb确定为蛋白质抗体疗法的替代方案。

该研究支持DMAb作为现有生物疗法的替代方案，并提供了一种新方法用于进一步明确体内IL-6信号传导在免疫病理学中的作用。

现在描述方法和材料

抗体DNA序列和克隆：

抗IL6抗体(克莱赞珠单抗(Clazakizumab)[Alder Biopharmaceuticals]、奥鲁凯珠单抗(Olokizumab)[R-Pharm]、司妥昔单抗(Siltuximab)[JanssenBiotech]、西卢卡单抗(Sirukumab)[Centocor/GSK])和抗CD126抗体(沙鲁单抗(Sarilumab)[Regeneron Pharmacauticals]、托珠单抗(Tocilizumab)[Genentech])的可变VH和VL氨基酸序列经过密码子优化。用密码子优化的恒定人IgG1κ合成DNA序列，并克隆到经修饰的pVax-1(Invitrogen)哺乳动物表达质粒中。包括弗林蛋白酶(furin)/2A肽切割位点用于分离重链和轻链肽(图1)。

转染：

使用GeneJammer(Agilent Technologies)，用0.5μg质粒DNA转染1x10⁶个293T细胞。转染48小时后收集细胞上清液和全部裂解物。

DMAb电穿孔：

BALB/c小鼠接受100μg配制的质粒DNA肌肉内递送至股四头肌，然后如前所述用3P装置(Inovio Pharmaceuticals,Plymouth Meeting,PA)进行电穿孔(Flingai等人，2015,Sci Rep,5:12616；Muthumani等人，2013,Hum Vaccin Immunother,9(10):2253-63。

ELISA和Western印迹：

使用抗人Fc片段捕获人IgG1κ，并用二抗κ轻链HRP偶联抗体检测，并针对人IgG1κ对照(Bethyl)进行定量。用HRP偶联的抗人IgG二抗(Sigma)检测与重组人IL-6和CD126(Sino Biological)的结合。用偶联的抗人IgG 800nm抗体(Licor)显示出Western印迹。

STAT3信号传导测定：

从InVivoGen购买用人CD126和STAT3诱导的分泌型碱性磷酸酶稳定转染的HEK-BlueTM 293细胞。将小鼠血清在培养基中1:40稀释，并添加到用1ng/mL重组人IL-6处理的细胞中。24小时后通过量热QuantiBlueTM测定(InVivoGen)测定上清液SEAP。将吸光度值标准化为接受来自未处理(无DMAb)小鼠的血清的细胞中的SEAP表达。10μg/mL TNFα用作对照。

现在描述实验的结果

含有抗IL-6和抗CD126抗体序列的质粒DNA的肌肉内电穿孔使得从体内肌肉组织产生单克隆抗体

将来自抗IL-6和抗CD126单克隆抗体的密码子优化的可变区DNA序列合成到人IgG1恒定结构域上。将编码抗体的质粒DNA递送至BALB/c小鼠体内(图1)。单克隆抗体可变VH和VL氨基酸序列经DNA密码子优化。用人IgG1κ抗体恒定CH区和CL区DNA序列合成密码子优化的DNA。将工程改造的DNA序列克隆到经修饰的pVax-1表达载体中。肌肉内注射质粒构建体，然后用装置(Inovio Pharmaceuticals)进行电穿孔。测量体内产生的人IgG1κ的表达和功能。

DMAb构建体由转染的293T细胞表达和分泌

进行实验以评价由DMAb构建体编码的抗IL-6和抗CD126的表达和分泌。用携带抗IL-6或抗CD126构建体的质粒DNA转染HEK293T细胞。空质粒用作阴性对照。通过定量ELISA测定人IgG1κ表达，并进行Western印迹以检测上清液重链和轻链肽的裂解和表达(图2A-图2C)。如图2A和图2B所示，在HEK 293T上清液和HEK 293T裂解物中观察到抗IL-6和抗CD126，证明DMAb构建体能够诱导抗IL-6和抗CD126的表达和分泌。

在小鼠中进行DNA电穿孔后，抗IL-6和抗CD126DNA单克隆抗体的血清水平稳定

进行实验以评价DMAb是否在体内诱导抗IL-6和抗CD126表达。对BALB/c小鼠肌肉注射100μg质粒DNA，然后进行电穿孔。七天后，通过ELISA测定血清人IgG1κ抗体水平。如图3A和图3B所示，在肌肉DNA电穿孔后，在小鼠血清中产生高水平的抗IL-6和抗CD126抗体。

血清DNA单克隆抗体结合靶抗原IL-6和CD126

进行实验以研究表达的抗IL-6和抗CD126的功能。对BALB/c小鼠注射100μg质粒DNA，然后进行肌肉内电穿孔。一周后，通过ELISA测定与重组人IL-6和人CD126结合的血清人IgG抗体。如图4所示，表达的抗体与靶IL-6和CD126抗原结合。

血清DNA单克隆抗体在体外阻断IL-6介导的细胞信号传导

进行实验以研究表达的抗体是否可以抑制IL-6介导的信号传导。获得用人CD126和STAT3诱导的分泌型碱性磷酸酶(SEAP)稳定转染的HEK-293细胞。来自未处理小鼠的稀释(1:40)血清诱导基线水平的小鼠-IL-6驱动的SEAP表达，将其标准化为细胞上清液中的100％SEAP活性。稀释第-7天来自DMAb-电穿孔小鼠的血清(1:40)，并测定细胞上清液的SEAP活性，表示为未处理对照的百分比。HEK-293细胞响应于IL-6信号传导而分泌SEAP。如图5所示，来自用编码抗IL-6的DMAb构建体处理的小鼠的血清阻断SEAP活性，证明编码的抗体可以阻断IL-6介导的信号传导。

本文提供的实验证明，在表达密码子优化的抗体可变序列的质粒DNA构建体的肌肉内电穿孔后，抗IL-6和抗CD126DNA单克隆抗体(DMAb)在小鼠血清中以高水平体内表达。体内肌肉细胞产生的抗体在体外是功能性的、结合和信号传导的。DMAb为靶向IL-6和CD126的纯化蛋白单克隆抗体疗法提供安全、经济、实用的替代方案。实施IL-6在控制败血症，限制急性病毒感染期间的炎症和减缓肿瘤进展中的作用。

与纯化的蛋白质mAb和病毒载体相比，DMAb具有几个优点。相对于蛋白质mAb，DMAb的生产相对便宜；具热稳定性；易于分配；可修饰；并且诱导持久表达而不需要频繁的重新施用。相对于病毒载体，DMAb安全并且是非整合性的；非免疫原性；可以反复递送；没有预先存在的血清学特征；并且诱导急性表达以快速施用。DMAb的有效持久表达在治疗可能需要重新给药的慢性病状诸如癌症和自身免疫性疾病方面提供了实质性益处。廉价的DNA载体生产和分配提供了增强的负担能力，特别是在发展中国家和长期需要的地方。

应当了解的是，上述详细说明和所附实施例仅仅是说明性的而不应当被认为对本发明的范围构成限制，本发明的范围仅由所附权利要求和它们的等同方案限定。

对于本领域技术人员来说，对所公开的实施方案的各种改变和修改将是显而易见的。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行此类改变和修改，包括但不限于与本发明的化学结构、取代基、衍生物、中间体、合成、组合物、制剂或使用方法有关的那些改变和修改。

序列表

<110> 大卫·韦纳

萨拉·埃利奥特

<120> 靶向IL-6和CD126的DNA单克隆抗体

<130> 206108-0060-00-WO.605372

<150> US 62/332,377

<151> 2016-05-05

<160> 12

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 2184

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IL-6 1 DNA

<400> 1

atggactgga cttggaggat tctgtttctg gtcgccgccg ccactggaac tcacgccgag 60

gtgcagctgg tcgaatcagg aggaggactg gtgcagcctg gcggatctct gcggctgagt 120

tgcgccgctt caggcttcaa ctttaatgac tacttcatga actgggtcag gcaggctcca 180

ggaaaagggc tggagtgggt ggcacagatg agaaacaaga attaccagta tgggacttac 240

tatgccgagt cactggaagg caggttcacc atcagcaggg acgatagcaa aaactccctg 300

tacctgcaga tgaattctct gaagactgag gacaccgcag tgtactattg tgcccgagaa 360

tcatactatg ggttcaccag ctattggggc cagggaacac tggtcactgt gagctccgct 420

tctacaaagg gccctagcgt gttccccctg gcaccttgct ctcgcagtac ctcagagagc 480

acagcagccc tgggctgtct ggtgaaggat tacttccccg aacctgtcac cgtgtcttgg 540

aacagtggag ccctgacaag cggggtccac acttttccag ctgtgctgca gtctagtgga 600

ctgtactccc tgtcaagcgt ggtcacagtg ccatcctcta gtctggggac taaaacctat 660

acatgcaacg tggaccataa gcccagtaat accaaggtcg ataaaagggt ggagtccaag 720

tacggccctc cctgcccacc ctgtccagca ccagagttcc tgggcggccc aagcgtgttc 780

ctgtttcctc caaagcctaa agacacactg atgatcagca gaactcctga ggtcacctgc 840

gtggtcgtgg acgtgtccca ggaggacccc gaagtccagt tcaactggta cgtggatggc 900

gtcgaagtgc acaatgccaa gaccaaacca cgcgaggaac agtttaactc cacataccga 960

gtcgtgtctg tcctgactgt gctgcatcag gactggctga acggaaagga gtataagtgc 1020

aaagtgtcta acaaggggct gccctcaagc atcgagaaga caattagcaa ggcaaaaggc 1080

cagccaagag aaccccaggt gtacactctg cccccttctc aggaggaaat gactaaaaac 1140

caggtcagcc tgacctgtct ggtgaagggg ttctatccat ccgacattgc tgtggagtgg 1200

gaatctaatg gccagcccga gaacaattac aaaaccacac cacccgtgct ggactcagat 1260

ggcagcttct ttctgtatag cagactgacc gtggataagt cccggtggca ggagggaaac 1320

gtcttttcct gctctgtgat gcacgaagcc ctgcacaatc attacactca gaaaagtctg 1380

tcactgagcg gcaaacgggg acgcaagagg agatccgggt ctggcgccac caacttcagc 1440

ctgctgaagc aggctggcga cgtggaggaa aatcctggac caatggtcct gcagacacag 1500

gtgtttatca gtctgctgct gtggatttca ggggcctatg gcgatatcca gatgactcag 1560

tctccctcct ctctgagtgc ctcagtcggc gaccgggtga ctattacctg tcaggctagc 1620

caggatatcg gcattagcct gtcctggtac cagcagaagc ctggaaaagc tccaaagctg 1680

ctgatctata acgccaacaa tctggctgac ggagtgccta gccgcttctc tggaagtggg 1740

tcaggcactg actttacact gactattagt tcactgcagc ccgaggattt cgcaacctac 1800

tattgcctgc agcacaattc cgccccttac acctttggac aggggacaaa actggagatc 1860

aagcggaccg tcgctgcacc cagcgtgttc atctttcctc caagtgacga acagctgaag 1920

agcggaacag cctccgtggt gtgcctgctg aacaatttct accctcgcga ggcaaaagtc 1980

cagtggaagg tggataacgc cctgcagtcc gggaattctc aggagagtgt gaccgaacag 2040

gactcaaaag atagcacata ttccctgagc tccaccctga cactgtccaa ggctgattac 2100

gagaagcata aagtgtatgc atgcgaggtc actcaccagg ggctgtcaag tccagtcact 2160

aagtccttca atagagggga atgc 2184

<210> 2

<211> 728

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> IL-6 1蛋白

<400> 2

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe

35 40 45

Asn Asp Tyr Phe Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ala Gln Met Arg Asn Lys Asn Tyr Gln Tyr Gly Thr Tyr

65 70 75 80

Tyr Ala Glu Ser Leu Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser

85 90 95

Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr

100 105 110

Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Ser Tyr Tyr Gly Phe Thr Ser Tyr

115 120 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

130 135 140

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser

145 150 155 160

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

165 170 175

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

180 185 190

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

195 200 205

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val

210 215 220

Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys

225 230 235 240

Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly

245 250 255

Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile

260 265 270

Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu

275 280 285

Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg

305 310 315 320

Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys

325 330 335

Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu

340 345 350

Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr

355 360 365

Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu

370 375 380

Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp

385 390 395 400

Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val

405 410 415

Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp

420 425 430

Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His

435 440 445

Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Gly

450 455 460

Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser

465 470 475 480

Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val

485 490 495

Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala

500 505 510

Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser

515 520 525

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Gly

530 535 540

Ile Ser Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

545 550 555 560

Leu Ile Tyr Asn Ala Asn Asn Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe

565 570 575

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

580 585 590

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Ala

595 600 605

Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val

610 615 620

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

625 630 635 640

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

645 650 655

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

660 665 670

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

675 680 685

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

690 695 700

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

705 710 715 720

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

725

<210> 3

<211> 2190

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> IL-6 2 DNA

<400> 3

atggactgga cctggagaat cctgttcctg gtggcagcag caaccggaac acacgcagag 60

gtgcagctgg tggagagcgg cggcaagctg ctgaagccag gcggctccct gaagctgtct 120

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Gln Ser Ile Asn Asn Glu Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys

545 550 555 560

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val

565 570 575

Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

580 585 590

Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

595 600 605

Gly Tyr Ser Leu Arg Asn Ile Asp Asn Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys

610 615 620

Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro

625 630 635 640

Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu

645 650 655

Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp

660 665 670

Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp

675 680 685

Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys

690 695 700

Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln

705 710 715 720

Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

725 730 735

<210> 9

<211> 2184

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD126 1 DNA

<400> 9

atggactgga catggagaat cctgttcctg gtcgccgccg caaccgggac tcacgcagaa 60

gtgcagctgg tcgaaagtgg agggggcctg gtgcagcccg gccgaagtct gaggctgtca 120

tgcgccgcta gccgattcac ctttgacgat tacgctatgc actgggtgag gcaggcacct 180

ggaaaagggc tggagtgggt cagcggcatc tcctggaact ctggccggat tggatatgct 240

gacagcgtga agggaagatt cacaatctcc cgggataacg cagaaaattc tctgtttctg 300

cagatgaatg ggctgagagc agaggacact gccctgtact attgcgccaa gggccgggac 360

agcttcgata tttggggcca gggaaccatg gtcacagtga gctccgcaag caccaaaggc 420

ccctccgtgt ttcccctggc cccttctagt aagtccactt ctggcggaac cgcagccctg 480

ggatgtctgg tgaaggatta cttccctgag ccagtcacag tgagttggaa ctcaggcgcc 540

ctgaccagcg gagtgcatac atttcctgct gtcctgcagt caagcgggct gtacagcctg 600

tcctctgtgg tcaccgtgcc aagttcaagc ctgggcactc agacctatat ctgcaacgtg 660

aatcacaaac catccaatac aaaggtcgac aagaaagtgg aacccaaatc ttgtgataag 720

acacatactt gccctccctg tccagcacct gagctgctgg gcggcccaag cgtgttcctg 780

tttccaccca agcctaaaga caccctgatg attagccgca cacccgaagt gacttgcgtg 840

gtcgtggacg tgagccacga ggaccccgaa gtgaagttca actggtacgt ggatggcgtc 900

gaggtgcata atgctaagac aaaacccagg gaggaacagt acaactctac ctatagagtc 960

gtgagtgtcc tgacagtgct gcaccaggac tggctgaacg ggaaggagta taagtgcaaa 1020

gtgtccaaca aggccctgcc agctcccatc gagaagacaa tttctaaggc caaaggccag 1080

ccacgggaac cccaggtgta cactctgcct ccaagccgcg acgagctgac aaaaaaccag 1140

gtgagcctga cttgtctggt caagggattc tatccttctg atatcgctgt ggagtgggaa 1200

agtaatgggc agccagaaaa caattacaag accacacccc ctgtgctgga cagcgatggc 1260

agcttcttcc tgtatagtaa actgaccgtg gacaagtcaa ggtggcagca ggggaacgtg 1320

tttagttgct cagtcatgca tgaggccctg cacaatcatt acactcagaa aagcctgtcc 1380

ctgtctcctg ggaaacgggg ccgcaagagg agaagtgggt caggcgctac aaacttctcc 1440

ctgctgaagc aggcagggga tgtggaggaa aatcctggcc caatggtgct gcagacccag 1500

gtctttatct cactgctgct gtggattagc ggagcctatg gggacatcca gatgacacag 1560

tcccccagca gcgtgagcgc ctccgtgggc gatcgcgtca ccatcacatg tcgagcctct 1620

cagggaatta gttcatggct ggcttggtac cagcagaagc ctggcaaagc accaaagctg 1680

ctgatctatg gagccagctc cctggaatcc ggggtgccat ctagattctc tggaagtggg 1740

tcaggcaccg actttactct gaccatttct agtctgcagc cagaggattt cgcctcctac 1800

tattgccagc aggctaactc tttcccctac acttttggac aggggaccaa actggaaatc 1860

aagcgcactg tggctgcacc aagcgtcttc atttttccac cctccgacga gcagctgaag 1920

agtggaaccg cctcagtggt gtgcctgctg aacaacttct acccccgaga agcaaaagtg 1980

cagtggaagg tcgataacgc cctgcagtct ggcaatagtc aggagtcagt gactgaacag 2040

gacagcaaag attccaccta ttctctgtca agcacactga ctctgagcaa ggctgactac 2100

gagaagcaca aagtgtatgc atgcgaagtg acccaccagg ggctgagcag tccagtgacc 2160

aagtctttca atagaggaga atgc 2184

<210> 10

<211> 728

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD126 1蛋白

<400> 10

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Thr His Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln

20 25 30

Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Arg Phe Thr Phe

35 40 45

Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu

50 55 60

Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Arg Ile Gly Tyr Ala

65 70 75 80

Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn

85 90 95

Ser Leu Phe Leu Gln Met Asn Gly Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Lys Gly Arg Asp Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

115 120 125

Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe

130 135 140

Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu

145 150 155 160

Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp

165 170 175

Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu

180 185 190

Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser

195 200 205

Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro

210 215 220

Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys

225 230 235 240

Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro

245 250 255

Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

260 265 270

Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp

275 280 285

Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

290 295 300

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val

305 310 315 320

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

325 330 335

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys

340 345 350

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

355 360 365

Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

370 375 380

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

385 390 395 400

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

405 410 415

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys

420 425 430

Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

435 440 445

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

450 455 460

Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser

465 470 475 480

Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Met Val

485 490 495

Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala

500 505 510

Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser

515 520 525

Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser

530 535 540

Ser Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

545 550 555 560

Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe

565 570 575

Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu

580 585 590

Gln Pro Glu Asp Phe Ala Ser Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe

595 600 605

Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val

610 615 620

Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys

625 630 635 640

Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg

645 650 655

Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn

660 665 670

Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser

675 680 685

Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys

690 695 700

Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr

705 710 715 720

Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

725

<210> 11

<211> 2193

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> CD126 2 DNA

<400> 11

atggattgga cctggagaat cctgttcctg gtggcagcag caaccggaac acacgcacag 60

gtgcagctgc aggagtccgg accaggactg gtgcgcccaa gccagaccct gtccctgacc 120

tgcacagtga gcggctactc catcacatct gaccacgcct ggagctgggt gcggcagccc 180

cctggaaggg gactggagtg gatcggctac atctcttata gcggcatcac cacatataac 240

ccaagcctga agtccagggt gaccatgctg agagacacat ccaagaatca gttctctctg 300

aggctgagct ccgtgaccgc agcagataca gccgtgtact attgcgccag gtctctggcc 360

agaaccacag ccatggacta ctggggacag ggcagcctgg tgaccgtgtc tagcgccagc 420

acaaagggac catccgtgtt tccactggca ccctcctcta agtccacctc tggcggcaca 480

gccgccctgg gctgtctggt gaaggattat ttccccgagc ctgtgaccgt gtcttggaac 540

agcggcgccc tgacctccgg agtgcacaca tttccagccg tgctgcagag ctccggcctg 600

tacagcctgt ctagcgtggt gaccgtgccc tcctctagcc tgggcaccca gacatatatc 660

tgcaacgtga atcacaagcc ctctaataca aaggtggaca agaaggtgga gcctaagagc 720

tgtgataaga cccacacatg cccaccctgt ccagcaccag agctgctggg cggcccttcc 780

gtgttcctgt ttcctccaaa gccaaaggat accctgatga tctcccggac ccctgaggtg 840

acatgcgtgg tggtggacgt gtctcacgag gaccccgagg tgaagttcaa ctggtacgtg 900

gacggcgtgg aggtgcacaa tgccaagacc aagcctcggg aggagcagta caactctacc 960

tatcgcgtgg tgagcgtgct gacagtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtat 1020

aagtgcaagg tgagcaataa ggccctgcct gccccaatcg agaagaccat ctccaaggcc 1080

aagggccagc ctagggagcc acaggtgtac acactgcccc ctagcagaga ggagatgacc 1140

aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtg aagggcttct atccatccga tatcgccgtg 1200

gagtgggagt ctaatggcca gcccgagaac aattacaaga ccacaccacc cgtgctggac 1260

tccgatggct ctttctttct gtatagcaag ctgaccgtgg acaagtcccg ctggcagcag 1320

ggcaacgtgt ttagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaatcacta cacccagaag 1380

tctctgagcc tgtccccagg caagagggga aggaagagga gatctggcag cggcgccaca 1440

aacttcagcc tgctgaagca ggcaggcgat gtggaggaga atccaggacc tatggtgctg 1500

cagacccagg tgtttatctc cctgctgctg tggatctctg gcgcctacgg cgacatccag 1560

atgacacagt ccccctcctc tctgtccgcc tctgtgggcg acagggtgac catcacatgt 1620

cgcgccagcc aggatatcag ctcctacctg aactggtatc agcagaagcc cggcaaggcc 1680

cctaagctgc tgatctacta tacctctagg ctgcacagcg gcgtgccttc cagattcagc 1740

ggctccggct ctggcaccga cttcaccttt acaatctcta gcctgcagcc cgaggatatc 1800

gccacatact attgccagca gggcaatacc ctgccttaca catttggcca gggcaccaag 1860

gtggagatca agaggacagt ggccgcccct agcgtgttca tctttcctcc aagcgatgag 1920

cagctgaagt ctggcaccgc cagcgtggtg tgcctgctga acaatttcta cccaagagag 1980

gccaaggtgc agtggaaggt ggacaacgcc ctgcagagcg gcaattccca ggagtctgtg 2040

accgagcagg acagcaagga ttccacatat tctctgtcct ctaccctgac actgtccaag 2100

gccgactacg agaagcacaa ggtgtatgca tgcgaggtga cccaccaggg actgagctcc 2160

ccagtgacaa agagctttaa cagaggcgag tgt 2193

<210> 12

<211> 731

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD126 2蛋白

<400> 12

Met Asp Trp Thr Trp Arg Ile Leu Phe Leu Val Ala Ala Ala Thr Gly

1 5 10 15

Thr His Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg

20 25 30

Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile

35 40 45

Thr Ser Asp His Ala Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Arg Gly

50 55 60

Leu Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Ser Tyr Ser Gly Ile Thr Thr Tyr Asn

65 70 75 80

Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Leu Arg Asp Thr Ser Lys Asn

85 90 95

Gln Phe Ser Leu Arg Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val

100 105 110

Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Leu Ala Arg Thr Thr Ala Met Asp Tyr Trp

115 120 125

Gly Gln Gly Ser Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

130 135 140

Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

145 150 155 160

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr

165 170 175

Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro

180 185 190

Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr

195 200 205

Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn

210 215 220

His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser

225 230 235 240

Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu

245 250 255

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

260 265 270

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

275 280 285

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

290 295 300

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr

305 310 315 320

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

325 330 335

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro

340 345 350

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

355 360 365

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

370 375 380

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

385 390 395 400

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

405 410 415

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

420 425 430

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

435 440 445

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

450 455 460

Ser Pro Gly Lys Arg Gly Arg Lys Arg Arg Ser Gly Ser Gly Ala Thr

465 470 475 480

Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly

485 490 495

Pro Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile

500 505 510

Ser Gly Ala Tyr Gly Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu

515 520 525

Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln

530 535 540

Asp Ile Ser Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala

545 550 555 560

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro

565 570 575

Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile

580 585 590

Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly

595 600 605

Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

610 615 620

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

625 630 635 640

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

645 650 655

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

660 665 670

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

675 680 685

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

690 695 700

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

705 710 715 720

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

725 730

Claims (25)

1.一种组合物，其包含编码一种或多种合成抗体的一种或多种核酸分子，其中所述一种或多种核酸分子包含选自由以下组成的组的至少一种：

a)编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列；

b)编码抗IL-6合成抗体的片段的核苷酸序列；

c)编码抗CD126抗体的核苷酸序列；和

d)编码抗CD126抗体的片段的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列，所述抗IL-6合成抗体包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:2的片段、与SEQ ID NO:2具有大于90％序列同一性的氨基酸序列、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:4的片段、与SEQ ID NO:4具有大于90％序列同一性的氨基酸序列、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:6的片段、与SEQ ID NO:6具有大于90％序列同一性的氨基酸序列、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:8的片段或与SEQ ID NO:8具有大于90％序列同一性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中所述编码抗IL-6合成抗体的核苷酸序列包括选自由以下组成的组的核苷酸序列：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:1的片段、与SEQ ID NO:1具有大于90％序列同一性的核苷酸序列、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:3的片段、与SEQ ID NO:3具有大于90％序列同一性的核苷酸序列、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:5的片段、与SEQ ID NO:5具有大于90％序列同一性的核苷酸序列、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:7的片段或与SEQ IDNO:7具有大于90％序列同一性的核苷酸序列。

4.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列，所述抗CD126合成抗体包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:10的片段、与SEQ ID NO:10具有大于90％序列同一性的氨基酸序列、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:12的片段和与SEQ ID NO:12具有大于90％序列同一性的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述编码抗CD126合成抗体的核苷酸序列包括选自由以下组成的组的核苷酸序列：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:9的片段、与SEQ ID NO:9具有大于90％序列同一性的核苷酸序列、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:11的片段和与SEQ ID NO:11具有大于90％序列同一性的核苷酸序列。

6.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码抗IL-6合成抗体的第一核苷酸序列；和编码抗CD126抗体的第二核苷酸序列。

7.根据权利要求1所述的组合物，其还包含编码裂解结构域的核苷酸序列。

8.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码抗IL-6的可变重链区和可变轻链区的核苷酸序列。

9.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码抗CD126的可变重链区和可变轻链区的核苷酸序列。

10.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码人IgG1κ的恒定重链区和恒定轻链区的核苷酸序列。

11.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码下述多肽的核苷酸序列，所述多肽包含：抗IL-6的可变重链区；人IgG1κ的恒定重链区；裂解结构域；抗IL-6的可变轻链区；和IgG1κ的恒定轻链区。

12.根据权利要求1所述的组合物，其包含编码下述多肽的核苷酸序列，所述多肽包含：抗CD126的可变重链区；人IgG1κ的恒定重链区；裂解结构域；抗CD126的可变轻链区；和IgG1κ的恒定轻链区。

13.根据权利要求1所述的组合物，其中所述核苷酸序列编码前导序列。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的组合物，其中所述核酸分子包含表达载体。

15.一种组合物，其包含权利要求1-14中任一项所述的核酸分子。

16.根据权利要求15所述的组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂。

17.一种治疗受试者的疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1-14中任一项所述的组合物或如权利要求15-16中任一项所述的组合物。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为癌症。

19.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为自身免疫性疾病。

20.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为败血症。

21.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为病毒感染。

22.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为多中心卡斯特莱曼病。

23.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病与高烧相关。

24.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为移植物抗宿主(GVH)疾病。

25.根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病为细胞溶解综合征。