CN109771407B

CN109771407B - 迷迭香酸在制备抑制水痘-带状疱疹病毒的药物中的用途

Info

Publication number: CN109771407B
Application number: CN201910251925.6A
Authority: CN
Inventors: 陈恬; 李祖锐; 任科; 曹康; 张倩; 孙宇豪
Original assignee: Chengdu Medical College
Current assignee: Chengdu Medical College
Priority date: 2019-03-29
Filing date: 2019-03-29
Publication date: 2021-11-26
Anticipated expiration: 2039-03-29
Also published as: CN109771407A

Abstract

本发明提供了迷迭香酸在制备抑制水痘‑带状疱疹病毒的药物中的用途。本发明迷迭香酸对VZV有显著的抑制作用，可用于制备抑制水痘‑带状疱疹病毒(VZV)的药物，也可以用于制备治疗水痘‑带状疱疹病毒所致感染性疾病的药物，所述疾病包括水痘和带状疱疹、疱疹后神经痛、水痘肺炎，以及由水痘‑带状疱疹病毒引起的急性小脑共济失调和脑炎等。

Description

迷迭香酸在制备抑制水痘-带状疱疹病毒的药物中的用途

技术领域

本发明涉及迷迭香酸在制备抑制水痘-带状疱疹病毒的药物中的用途。

背景技术

水痘-带状疱疹病毒(varicella-zoster virus，VZV)是一类双链DNA病毒，属α疱疹病毒亚科，能引发水痘和带状疱疹两种疾病。VZV具有很强的嗜神经性，可长期潜伏在三叉神经和背根神经节内，并且人是其唯一的宿主。在机体抵抗力下降或一些诱发因素的作用下，潜伏的VZV可被激活，沿感觉神经轴索到达该神经支配的皮肤内增殖，引起带状疱疹。VZV感染在学生和儿童中是一种自限性的疾病；然而，在孕妇人群中，VZV感染可导致胎儿先天性畸形或死亡；在新生儿中，VZV感染可导致急性小脑共济失调和脑炎等；在免疫功能低下的老年人中，VZV感染可导致疱疹后神经痛、水痘肺炎等。

目前临床上用于治疗VZV感染的抗病毒药物大多数是依赖病毒胸苷激酶磷酸化的核苷类似物，阿昔洛韦是其中用于治疗VZV感染的首选抗病毒药物。此外，还有一些非核苷类抗病毒药物，如膦甲酸钠、CP-4661等。在被VZV感染的细胞中，病毒编码胸腺嘧啶核苷激酶(TK)，可将核苷类似物磷酸化，进一步被宿主细胞内的激酶磷酸化成二磷酸及三磷酸活性分子，三磷酸化的核苷类似物是病毒DNA合成的竞争性抑制剂，最终抑制病毒DNA的合成。阿昔洛韦、膦甲酸钠等抗病毒药物的广泛应用解决了病人的痛苦，但伴随着VZV耐药株的出现，对阿昔洛韦等抗病毒药物的应用产生局限性。早在1991年Collins等报道了两例耐阿昔洛韦的VZV毒株，同年有关膦甲酸钠的VZV耐药株也已经有报道。耐药病毒株的出现迫切的要求我们研制新的抗病毒药物以解决这一问题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了迷迭香酸在制备抑制水痘-带状疱疹病毒的药物中的用途。

进一步地，所述药物是治疗水痘-带状疱疹病毒所致感染性疾病的药物。

进一步地，所述药物是治疗水痘和带状疱疹的药物。

进一步地，所述药物是治疗水痘肺炎的药物。

进一步地，所述药物是治疗疱疹后神经痛的药物。

进一步地，所述药物是治疗水痘-带状疱疹病毒导致的急性小脑共济失调和/或脑炎的药物。

进一步地，所述药物中迷迭香酸的浓度为100～400μmol/L。

进一步地，所述药物中迷迭香酸的浓度为400μmol/L。

本发明还提供了一种抑制水痘-带状疱疹病毒的药物，它是由前述的迷迭香酸为活性物质，加上药学上可接受的辅助成分制备而成的制剂；其中，所述药物中迷迭香酸的浓度为100～400μmol/L。

进一步地，所述药物中迷迭香酸的浓度为400μmol/L。

综上，本发明迷迭香酸对VZV有显著的抑制作用，可用于制备抑制水痘-带状疱疹病毒(VZV)的药物，也可以用于制备治疗水痘-带状疱疹病毒所致感染性疾病的药物，所述疾病包括水痘和带状疱疹、疱疹后神经痛、水痘肺炎，以及由水痘-带状疱疹病毒引起的急性小脑共济失调和脑炎等。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为不同浓度迷迭香酸对Vero细胞的毒性(x 100)。

图2为不同浓度迷迭香酸抑制VZV对Vero细胞所致的细胞病变作用(CPE)(x 100)。

具体实施方式

本发明使用的迷迭香酸购买于成都曼斯特生物科技有限公司。本发明具体实施方式中使用的其他原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

实施例1、本发明迷迭香酸对水痘-带状疱疹病毒(VZV)抑制作用的研究

一、实验方法

本实施例中维持液是由3％小牛血清、1％双抗和95％DMEM高糖培养基组成，现配现用，维持细胞生存不生长。

1、VZV滴度的测定

将生长状态良好的Vero细胞接种于96孔细胞培养板中，置于37℃，5％CO₂培养箱中培养。细胞贴壁后，将VZV原液用维持液稀释为10^-1、10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7、10^-8、10^-9共9个稀释度，细胞培养板弃去培养液后每孔分别加入上述浓度的病毒稀释液50uL，每个稀释浓度设有6个复孔，并设立细胞对照组(不加VZV稀释液，而是加入等量的维持液)。将细胞培养板置于37℃，5％CO₂培养箱中继续培养，每日在倒置显微镜下观察并记录各组Vero细胞病变情况，Vero细胞圆缩、聚集、呈串珠样即为病变。观察3天，记录结果，将细胞病变达50％及以上的孔记为细胞病变孔。用细胞病变法算出不同病毒浓度的细胞病变率，并用Reed-Muench法计算半数细胞感染量(TCID₅₀)。

TCID₅₀＝C×C_m ^d；

C：病变大于50％时的滴度；

C_m：病毒稀释倍数；

d：比距＝(病变大于50％的百分比-0.5)/(病变大于50％的百分比-病变小于50％的百分比)。

2、迷迭香酸对细胞的毒性作用

迷迭香酸用维持液稀释成3200μmol/L、1600μmol/L、800μmol/L、400μmol/L、200μmol/L、100μmol/L和50μmol/L共7个浓度的溶液。将生长状态良好的Vero细胞接种于96孔细胞培养板，并将上述浓度的迷迭香酸溶液分别加入细胞培养板中，每个迷迭香酸浓度设有5个复孔，作为实验组，并设立细胞对照组(不加迷迭香酸溶液，而是加等体积的维持液)。将实验组和对照组均置于37℃，5％CO₂培养箱中继续培养72h，然后观察迷迭香酸对Vero细胞的药物毒性作用。用细胞病变法和MTT法综合评价不同药物浓度的细胞病变情况，并用Reed-Muench法计算药物的半数中毒浓度(TC₅₀)。

TC₅₀＝C×C_m ^d；

C:病变小于50％时的滴度；

C_m:药物稀释倍数；

d:比距＝(0.5-病变小于50％的百分比)/(病变大于50％的百分比-病变小于50％的百分比)。

3、迷迭香酸对VZV的抑制作用

将生长状态良好的Vero细胞接种于96孔细胞培养板，用100倍TCID₅₀的VZV感染细胞1h后弃去上清液；迷迭香酸用维持液稀释成浓度为400μmol/L、200μmol/L、100μmol/L和50μmol/L的迷迭香酸溶液，将上述浓度的迷迭香酸溶液分别加入细胞培养板中，每个迷迭香酸浓度设有5个复孔，并设立细胞对照组(不用VZV感染，也不加迷迭香酸溶液)、病毒对照组(仅用VZV感染，不加迷迭香酸溶液)和阿昔洛韦对照组(用VZV感染后，加50μmol/L阿昔洛韦)。用细胞病变法测出不同浓度的迷迭香酸对VZV的抑制率，并用Reed-Muench法计算药物的半数抑制浓度(IC₅₀)。

计算中草药提取物的治疗指数TI＝TC₅₀/IC₅₀。

二、实验结果

1、VZV的滴度

在不同VZV稀释度下，细胞病变情况不同，结果见表1。通过Reed-Muench法计算得出VZV滴度TCID₅₀为10^-5.533。

表1 VZV病毒的滴度

2、迷迭香酸对细胞的毒性作用

迷迭香酸对细胞的毒性作用如图1所示。由图1可知：培养72h后，高浓度迷迭香酸对Vero细胞有明显的药物毒性作用，在显微镜下细胞形态改变、数量减少，且随着迷迭香酸的浓度逐渐增高部分细胞脱落死亡。而显微镜下见迷迭香酸浓度在≤400μmol/L时细胞形态正常，无脱落，因此在此浓度下进行后续实验。通过Reed-Muench法计算得出迷迭香酸TC₅₀为2362.10μmol/L。

3、迷迭香酸对VZV的抑制作用

迷迭香酸对VZV的抑制作用如图2所示。由图2和计算可知，VZV感染Vero细胞后，病毒对照组细胞脱落、圆缩，CPE达“++++”；用25μmol/L和50μmol/L迷迭香酸作用于VZV感染的细胞，可见病变细胞呈串珠样病变；100μmol/L和200μmol/L迷迭香酸对VZV的抑制效果有明显提高；400μmol/L迷迭香酸和阳性对照阿昔洛韦对VZV均有明显的抑制作用，其中，阿昔洛韦组CPE为“++”，400μmol/L迷迭香酸组CPE为“-”(没有病变)或“+”，400μmol/L迷迭香酸对VZV的抑制效果较阿昔洛韦组效果更好。

通过Reed-Muench法计算得出迷迭香酸IC₅₀为69.53μmol/L，根据TI＝TC₅₀/IC₅₀，治疗指数是35.51。

治疗指数为半数中毒浓度(TC₅₀)与半数抑制浓度(IC₅₀)的比值，是药物安全性的指标，该数值越大，表明有效剂量与中毒剂量间距愈大，愈安全。

Claims

1.迷迭香酸在制备抑制水痘-带状疱疹病毒的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗水痘-带状疱疹病毒所致感染性疾病的药物。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗水痘和带状疱疹的药物。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗水痘肺炎的药物。

5.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗疱疹后神经痛的药物。

6.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述药物是治疗水痘-带状疱疹病毒导致的急性小脑共济失调和/或脑炎的药物。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物中迷迭香酸的浓度为100～400μmol/L。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述药物中迷迭香酸的浓度为400μmol/L。