CN109770133A - 野生蔓越莓保健饮品的制备方法 - Google Patents

Abstract

野生蔓越莓保健饮品的制备方法，它涉及一种保健饮品的制备方法，属于保健食品技术领域。本发明的是为了解决现有蔓越莓饮品中虽然引入了卡琪花蒂玛，但是含醇饮料不适合驾驶员饮用的技术问题。野生蔓越莓保健饮品的制备方法如下：一、制备红花提取物；二、制备枸杞提取物；三、制备卡琪花蒂玛提取物；四、野生蔓越莓冻果前处理；五、备野生蔓越莓保健饮原汁；六、调配；七、灭菌。本发明不添加任何防腐剂，不含酒精，具有浓郁的蔓越莓果香和酸甜清凉的草本口味，色泽红润明亮，质量稳定，口感爽滑细腻，营养价值高，增强女性免疫能力，改善内分泌紊乱，提高女性性功能，提神醒脑，预防妇科炎症，细肤美颜的作用。

Description

野生蔓越莓保健饮品的制备方法

技术领域

本发明涉及一种保健饮品的制备方法，属于保健食品技术领域。

背景技术

蔓越莓又称蔓越橘、红豆、鹤莓，是指杜鹃花越橘属红莓苔子亚属。富含花青素、多酚类、黄酮类化合物，其不但可以预防妇科疾病，还可以美容养颜维持肌肤健康。尤其是野生的蔓越莓，其原花青素、维生素C、白藜芦醇等营养物质比栽培品种高很多。

卡琪花蒂玛(Kacip Fatimah)，也可译作卡琪法蒂玛，植物学名为LabisiaPumila，是一种生长在东南亚热带雨林中常见的草药。卡琪花蒂玛的价值与东革阿里并驾齐驱，被誉为“女性圣品”，是马来妇女用于丰胸、美颜，提高机体活力、保持青春、延长寿命的药物。

现有的蔓越莓饮品，如专利号为201710342152.3《一种具有抗氧化和改善皮肤状态的饮料》中由于主要保健功效为抗氧化和改善皮肤状态因此采用了西红花、枸杞及复合果汁作为原料，并未采用野生蔓越莓作为主要饮料来源，因此在提高女性健康和生理机能方面还有欠缺。

而专利号为201711039454.X《一种能够激活女性机能的野生蔓越莓保健酒及其制备方法》虽然原料丰富了卡琪花蒂玛，具有激活女性机能的功效，但由于是含醇饮料，因此不适宜于日益增多的女性驾驶员。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有蔓越莓饮品中虽然引入了卡琪花蒂玛，但是含醇饮料不适合驾驶员饮用的技术问题，提供了一种野生蔓越莓保健饮品的制备方法。

野生蔓越莓保健饮品的制备方法如下：

一、红花提取物的制备：

按照红花(拉丁学名:Carthamus tinctorius L.)与矿泉水的体积比为1:1-1.5的比例，将20-30g红花浸泡于矿泉水中0.5-1.5小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，过滤，收集滤液后，将红花残渣与矿泉水按照1:1-1.5的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，反复将红花残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

二、枸杞提取物的制备：

按照枸杞与矿泉水的体积比为1:1.5-2.5的比例，将30-40g枸杞浸泡于矿泉水中0.5-1.5小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，过滤，将枸杞残渣与矿泉水按照1:2-2.5的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，反复将枸杞残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

三、卡琪花蒂玛提取物的制备：

将30-40g卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后按照卡琪花蒂玛叶与酒精体积比为1:1.5-2.5的比例，将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中0.5-1.5h，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.5-1h，过滤，将残渣与酒精按照1:1.5-2.5的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.5-1h，反复将残渣超声、过滤五次，并收集合并滤液；

将滤液在温度为50℃、转速为40-60r/min的条件下浓缩至体积为80-120mL，于40-50℃的条件下风干，磨碎，得到卡琪花蒂玛提取物固形物粉末；

四、野生蔓越莓冻果前处理：

称取野生蔓越莓冻果1.3-1.5g，解冻捏碎，加入果胶酶，果胶酶加入量为混合物总质量的0.3-0.5％，过夜，在50℃矿泉水浴的条件下处理0.5-1h，得果碎混合物；

五、野生蔓越莓保健饮原汁的制备：

将步骤四得到的果碎混合物与步骤一的产物和步骤二的产物混合，加入新鲜洗净的薄荷叶8-15片，榨汁，过滤，收集汁液，向滤渣中加入0.6-1L矿泉水再次榨汁，收集合并汁液并加入6-8g卡琪花蒂玛提取物固形物粉末，采用200目滤布过滤，得到野生蔓越莓保健饮原汁；

六、调配：

1)无糖型：

即野生蔓越莓保健饮原汁直接使用；

2)蔗糖型：

按照加入蔗糖后，蔗糖质量分数为10-12％的比例，加入蔗糖混匀；

3)木糖醇型：

按照加入木糖醇后，木糖醇质量分数为12-14％的比例，加入木糖醇混匀；

七、灭菌：

采用0.2um的膜过滤方式进行灭菌，即得野生蔓越莓保健饮品。

因野生蔓越莓具有的天然防腐功能，本发明野生蔓越莓保健饮品无需添加任何防腐剂，口感独特，保质期长。

通过对野生蔓越莓提取物的液质色谱检测结果分析野生蔓越莓的主要功能物质为花色苷类物质。通过对野生蔓越莓中的挥发性成分进行GC-MS分析，共鉴定出了23种主要成分，主要含有烷烃、醇、醛、酮类，胺、有机酸、糖、酯类物质，其中多种挥发性成分均具有抗癌抗氧化的作用。野生蔓越莓中特有的A型原花青素含量测定结果为原花青素A1含量为0.27mg/g、原花青素A2含量为0.07mg/g。野生蔓越莓中原花青素主要为A1型的原花青素。采用野生蔓越莓冻果制备饮品不但可以利用野生蔓越莓对女性生殖系统保健的功效，还可以利用野生蔓越莓强力的抗菌功能代替防腐剂为食品带来的危害，还解决了野生蔓越莓附加值低。

本发明提供一种以野生蔓越莓冻果榨汁为基础饮料，将蔓越莓与马来西亚国宝——“卡琪花蒂玛”、红花、枸杞、薄荷提取物进行君臣配伍，配以蔗糖或木糖醇或三氯蔗糖制备而成的保健型无醇果汁饮品，不添加任何防腐剂，不含酒精，具有浓郁的蔓越莓果香和酸甜清凉的草本口味，色泽红润明亮，质量稳定，口感爽滑细腻，营养价值高，增强女性免疫能力，改善内分泌紊乱，提高女性性功能，提神醒脑，预防妇科炎症，细肤美颜的作用。

卡琪花蒂玛叶中的黄酮含量为49.16mg/g，而根部的黄酮含量仅为29.21mg/g，黄酮是重要的植物源雌激素，是卡琪花蒂玛保健功效的核心物质，故本发明采用卡琪花蒂玛叶片进行有效物质的提取。同时本发明采用食用乙醇提取卡琪花蒂玛叶，一方面使用食用乙醇具有一定的安全性，另一方面获得的卡琪花蒂玛提取物已经将食用乙醇全部挥发掉，不会给保健饮料带来任何酒精来源。在将卡琪花蒂玛提取物调配入饮品中进行微膜灭菌时没有发现大量滤渣，说明醇提的卡琪花蒂玛提取物与红花、枸杞提取物在野生蔓越莓果汁中可能发生了螯合作用，使原本醇溶的有效物质在饮品中也几乎全部溶解。

枸杞子中含有大量的蛋白质、氨基酸、维生素和铁、锌、磷、钙等人体必需的营养成分。红花含有红花甙，红花黄色素，另含脂肪油，棕榈酸，硬脂酸花生酸，亚油酸，亚麻酸，油酸等等油脂类。卡琪花蒂玛中微量元素钙含量比较多，植物雌激素多达13种，富含多酚。卡琪花蒂玛中的主要有效物质黄酮的吸收首先需要在肠道内被酶或肠道菌群分解成苷元，而枸杞子和红花中富含的营养物质都是利于肠道菌群的生长的。红花成本低廉，且不容易使人上火。

本发明采用超声波萃取利用超声波温度为65℃(温度过高可能会导致黄酮类物质和乙醇的挥发，过低可能导致提取率不高)压强产生的强烈空化应效应、机械振动、扰动效应、高的加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标成分进入溶剂，促进提取的进行。适合各种天然植物(苷类、黄酮类、帖类、多糖、生物碱)等成分的提取。本专利所涉及的红花、枸杞及卡琪花蒂玛的功效成分主要为黄酮类多酚和生物碱类物质。

因此将超声波萃取技术应用于本专利的提取工艺中是具有可适性和先进性的，具有创新性。而且具有萃取工艺简洁、快速、高效、易操作、成本低的优点，产品价格合理、易被消费者接受，解决了以往技术存在的缺点。

野生蔓越莓果含有大量的果胶，不利于果汁的澄清，并会带来果汁的损失。本发明采用果胶酶提前处理野生蔓越莓果碎，不但有利于野生蔓越莓果汁的澄清，也减少了野生蔓越莓果碎与红花、枸杞、薄荷同时榨汁时的损失，具有实用性。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。

具体实施方式一：本实施方式野生蔓越莓保健饮品的制备方法如下：

一、红花提取物的制备：

将红花浸泡于矿泉水中，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，过滤，收集滤液后，将红花残渣与矿泉水混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，反复将红花残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

二、枸杞提取物的制备：

将枸杞浸泡于矿泉水中，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，过滤，将枸杞残渣与矿泉水混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，反复将枸杞残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

三、卡琪花蒂玛提取物的制备：

将卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.5-1h，过滤，将残渣与酒精混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.5-1h，反复将残渣超声、过滤五次，并收集合并滤液；

将滤液浓缩，风干，磨碎，得到卡琪花蒂玛提取物固形物粉末；

四、野生蔓越莓冻果前处理：

称取野生蔓越莓冻果，解冻捏碎，加入果胶酶，过夜，在50℃矿泉水浴的条件下处理0.5-1h，得果碎混合物；

五、野生蔓越莓保健饮原汁的制备：

将步骤四得到的果碎混合物与步骤一的产物和步骤二的产物混合，加入新鲜洗净的薄荷叶8-15片，榨汁，过滤，收集汁液，向滤渣中加入0.6-1L矿泉水再次榨汁，收集合并汁液并加入6-8g卡琪花蒂玛提取物固形物粉末，采用200目滤布过滤，得到野生蔓越莓保健饮原汁；

六、调配；

七、灭菌；即得野生蔓越莓保健饮品。具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是所述步骤一中按照红花与矿泉水的体积比为1:1-1.5的比例，将20-30g红花浸泡于矿泉水中0.5-1.5小时。其他与具体实施方式一相同。

具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二不同的是所述步骤一中将红花残渣与矿泉水按照1:1-1.5的体积比混合。其他与具体实施方式一或二相同。

具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是所述步骤二中所述的酒精为体积浓度为75％的食用酒精。其他与具体实施方式一至三之一相同。

具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是所述步骤二中按照枸杞与矿泉水的体积比为1:1.5-2.5的比例，将30-40g枸杞浸泡于矿泉水中0.5-1.5小时。其他与具体实施方式一至四之一相同。

具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是所述步骤二中按照枸杞与矿泉水的体积比为1:2的比例，将35g枸杞浸泡于矿泉水中1小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.3h其他与具体实施方式一至五之一相同。

具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是所述步骤二中将枸杞残渣与矿泉水按照1:2-2.5的体积比混合。其他与具体实施方式一至六之一相同。

具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是所述步骤二中将枸杞残渣与矿泉水按照1:2.3的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.4h。其他与具体实施方式一至七之一相同。

具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是所述步骤三中将30-40g卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后按照卡琪花蒂玛叶与酒精体积比为1:1.5-2.5的比例，将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中0.5-1.5h。其他与具体实施方式一至八之一相同。

具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是所述步骤三中按照卡琪花蒂玛叶与酒精体积比为1:1.8的比例，将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中1.2h，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.8h。其他与具体实施方式一至九之一相同。

具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式一至十之一不同的是所述步骤三中将残渣与酒精按照1:1.5-2.5的体积比混合。其他与具体实施方式一至十之一相同。

具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式一至十一之一不同的是所述步骤三中将残渣与酒精按照1:1.7的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.6h。其他与具体实施方式一至十一之一相同。

具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式一至十二之一不同的是所述步骤三中将滤液在温度为50℃、转速为40-60r/min的条件下浓缩至体积为80-120mL，于40-50℃的条件下风干。其他与具体实施方式一至十二之一相同。

具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式一至十三之一不同的是所述步骤三中滤液在温度为50℃、转速为50r/min的条件下浓缩至体积为100mL，于45℃的条件下风干。其他与具体实施方式一至十三之一相同。

具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式一至十四之一不同的是所述步骤四中称取野生蔓越莓冻果1.3-1.5kg，解冻捏碎，加入果胶酶，果胶酶加入量为混合物总质量的0.3-0.5％。其他与具体实施方式一至十四之一相同。

具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式一至十五之一不同的是所述步骤四中称取野生蔓越莓冻果1.4kg，解冻捏碎，加入果胶酶，果胶酶加入量为混合物总质量的0.4％，过夜，在50℃矿泉水浴的条件下处理0.8h。其他与具体实施方式一至十五之一相同。

采用下述实验验证本发明效果：

实验一：

野生蔓越莓保健饮品的制备方法如下：

一、红花提取物的制备：

按照红花与矿泉水的体积比为1:1的比例，将23.16g红花浸泡于矿泉水中1小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，过滤，收集滤液后，将红花残渣与矿泉水按照1:1的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，反复将红花残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

二、枸杞提取物的制备：

按照枸杞与矿泉水的体积比为1:2的比例，将38.60g枸杞浸泡于矿泉水中2小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，过滤，将枸杞残渣与矿泉水按照1:2的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，反复将枸杞残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

三、卡琪花蒂玛提取物的制备：

将39.70g卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后按照卡琪花蒂玛叶与酒精体积比为1:2的比例，将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中1h，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声1h，过滤，将残渣与酒精按照1:2的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声1h，反复将残渣超声、过滤五次，并收集合并滤液1.5L；

将滤液在温度为50℃、转速为45r/min的条件下浓缩至体积为100mL，于50℃的条件下风干，磨碎，得到卡琪花蒂玛提取物固形物粉末；

四、野生蔓越莓冻果前处理：

称取野生蔓越莓冻果1403g，解冻捏碎，加入果胶酶，果胶酶加入量为混合物总质量的0.3％，过夜，在50℃矿泉水浴的条件下处理0.5h，得果碎混合物；

五、野生蔓越莓保健饮原汁的制备：

将步骤四得到的果碎混合物与步骤一的产物和步骤二的产物混合，加入新鲜洗净的薄荷叶10片，榨汁，过滤，收集汁液，向滤渣中加入0.8L矿泉水再次榨汁，收集合并汁液并加入7g卡琪花蒂玛提取物固形物粉末，采用200目滤布过滤，得到野生蔓越莓保健饮原汁；

六、调配：

按照加入蔗糖后，蔗糖质量分数为11％的比例，加入蔗糖混匀；

七、灭菌：

采用0.2um的膜过滤方式进行灭菌，即得野生蔓越莓保健饮品。

每日推荐使用量：

根据原花青素、红花、枸杞、卡琪花蒂玛的推荐使用量计算野生蔓越莓保健饮品的日饮用量为38mL。

将野生蔓越莓保健饮品进行如下试验：

1)饮品的抗氧化性试验：

材料与试剂：实验动物：SPF级ICR小鼠60只，购自辽宁长生生物技术有限公司，实验动物许可证号：SCXK(辽)2015-0001。

实验条件：黑龙江中医药大学实验动物中心(屏障环境)，许可证号：SYXK(黑)2016-004，温度为21℃～25℃，湿度为40％～70％。SPF级实验动物饲料购自北京科澳协力饲料有限公司，许可证号：SCXK(京)2014-0010。

仪器与设备：连续光谱酶标仪、可见光分光光度计、微量加样器、恒温水浴锅、离心机、组织匀浆器、丙二醛(MDA)测定试剂盒、还原型谷胱甘肽(GSH)测定试剂盒、蛋白质羰基测定试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒、蛋白定量测试盒(以上均由南京建成生物技术有限公司生产)。

研究方法：

D－半乳糖氧化损伤模型建立：

选25-30g健康成年小鼠，除空白对照组外，其余动物用D-半乳糖1.0g/kg·bw腹腔注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组，随机分为1个模型对照组和3个受试样品剂量组。

剂量设计分组及受试样品给予时间：

试验设高、中、低三个剂量组，分别为人体推荐量的5倍、10倍和30倍，即11.023g/kg·bw、22.046g/kg·bw和66.138g/kg·bw。准确称取野生蔓越莓保健饮品混匀定容至20ml，分别作为高、中、低三个剂量经口给予受试小鼠。另设空白对照组和模型对照组，共5组，每组12只。空白对照组和模型对照组均给予等容积蒸馏水，试验小鼠按体重的2％灌胃容积进行灌胃，在给受试样品的同时，模型对照组和各剂量组继续给予相同剂量D-半乳糖腹腔注射，每日一次，连续灌胃30天后处死动物测血清及肝组织中脂质氧化产物丙二醛(MDA)含量、抗氧化物质还原型谷胱甘肽(GSH)含量、蛋白质氧化产物蛋白质羰基含量及抗氧化酶指标中超氧化物歧化酶(SOD)活力。

脂质氧化产物：丙二醛(MDA)含量测定：

按试剂盒的要求测血清及10％肝均浆中MDA含量。

1)

注：样本测试前稀释倍数＝上清液制备时稀释倍数(5倍)

2)

*nmol/mgprot为纳摩尔/毫克蛋白。

抗氧化物质：还原型谷胱甘肽(GSH)含量测定：

按试剂盒的要求测血清及10％肝均浆中GSH含量。

I)

注：标准品浓度为20μmol/L＝20×10^-6mol/L；样本测试前稀释倍数＝上清液制备时稀释倍数(5倍)2)

注：样本测试前稀释倍数＝上清液制备时稀释倍数(5倍)

蛋白质氧化产物：蛋白质羰基含量测定：

按试剂盒的要求测血清及10％肝均浆中蛋白质羰基含量。

1)

2)

抗氧化酶：超氧化物歧化酶(SOD)活力测定：

按试剂盒的要求测血清及10％肝均浆中SOD活力。

1)

2)

mgprot*为毫克蛋白数。

蛋白质定量测试(考马斯亮蓝法)：

按试剂盒的要求测血清及10％肝均浆中蛋白含量。

试验数据处理：

用Excel软件建立数据库，用SPSS软件进行方差分析，需按方差分析的程序先进行方差齐性检验。如方差齐，计算F值。F值<F_0.05，结论为各组均数间差异无显著性；F值≥F_0.05,P≤0.05，再用多个试验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计。对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐性要求后，用转换后的数据进行统计。

研究结果：

a：过氧化损伤模型的建立，D-半乳糖造模后小鼠血清中MDA含量的影响。

D-半乳糖造模后小鼠血清中MDA含量的影响

注：与空白对照组比较差异有显著性^**P＜0.01。

由表可见，以D-半乳糖1.0g/kg·bw每日腹腔注射造模6周后，模型组小鼠血清中MDA含量明显增加，与空白对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)，说明过氧化损伤模型成立。

b.野生蔓越莓保健饮品对过氧化损伤模型小鼠MDA的影响。

由表可见，与模型对照组比较，中、高剂量组小鼠血清和肝组织中MDA的含量差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

野生蔓越莓保健饮品对小鼠血清及肝组织中MDA含量的影响

注：与模型对照组比较差异有显著性^*P＜0.05；^**P＜0.01。

c.野生蔓越莓保健饮品对GSH的影响。

野生蔓越莓保健饮品对小鼠血清及肝组织中GSH含量的影响

注：与模型对照组比较差异有显著性^*P＜0.05；^**P＜0.01。

由表可见，与模型对照组比较，高剂量组血清和中、高剂量组肝组织中还原型谷胱甘肽差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

d.野生蔓越莓保健饮品对蛋白质羰基的影响。

野生蔓越莓保健饮品对小鼠血清及肝组织中蛋白质羰基含量的影响

注：与模型对照组比较差异无显著性P＞0.05

由表可见，与模型对照组比较，各剂量组小鼠血清及肝组织蛋白质羰基含量差异均无显著性(P>0.05)。

e.野生蔓越莓保健饮品对SOD活力的影响。

野生蔓越莓保健饮品对小鼠血清及肝组织中SOD活力的影响

注：与模型对照组比较差异有显著性^*P＜0.05；^**P＜0.01。

由表可见，与模型对照组比较，中、高剂量组血清和肝组织中SOD活力差异均有显著性(P＜0.05或P＜0.01)。

f.野生蔓越莓保健饮品对过氧化损伤模型小鼠体重的影响。

野生蔓越莓保健饮品对小鼠体重(g)的影响

注：与模型对照组比较差异无显著性P＞0.05

由表可见，给予受试物30天，各剂量组小鼠的体重与模型对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。

研究结论：经口给予过氧化损伤模型小鼠66.138g/kg·bw、22.046g/kg·bw、11.023g/kg·bw(相当于人推荐剂量的30倍、10倍、5倍)野生蔓越莓保健饮品30天，可明显降低血清及肝组织的脂质氧化产物丙二醛(MDA)含量，升高血清、肝组织抗氧化产物还原型谷胱甘肽(GSH)含量及血清、肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)活力，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05)。根据“关于印发抗氧化功能评价方法等9个保健功能评价方法的通知”中的判定标准，认为野生蔓越莓保健饮品具有抗氧化功能。

2)饮品的急性毒性试验：

材料与试剂：

受试物：本发明饮品(原花青素含量为4.62966mg/mL)。溶于水，稳定。供试品采用蒸馏水配制，配制频率为试验当天配制一次，配制提供样品的三倍浓缩液。

实验动物：Wistar大鼠，SPF级，雌雄各半，共20只，初始体重范围为90～100g，使用时体重范围：118.5-129.0g，来源于辽宁长生生物技术股份有限公司(动物合格证号：SCXK-(辽)2015-0001)。动物购入后，首先进行预分笼，给一个临时预分号并测定购入日体重。从购入日算作第1天，检疫与驯化期共为7天。期间对于外观、一般状态出现异常，可能对试验有影响的动物在试验时剔除。分组方法：雌、雄动物禁食16小时后分别按体重分组。识别方法：检疫驯化期采用尾部标记动物编号，正式试验采用皮毛标记编号，并在笼具上标明试验研究号、组别、性别及笼号。

仪器与设备：

实验动物饲养管理的环境条件：饲养室：屏障系统；温度设定：21～25℃；湿度设定：40％～70％；换气次数：10-20次/小时；昼夜明暗交替时间：12/12(6:00～18:00采用动物照明控制系统)。

饲养条件：笼具种类：PC聚碳酸酯鼠盒(长×宽×高＝40×25.5×20cm3)；饲养密度：5只/盒；笼具交换：2次/周；粪便处理方法：更换鼠盒及垫料(周一、周四)；清扫及处理方法：每天全部试验结束后，由动物室人员进行常规消毒。

饲料及饮用水：全价颗粒饲料(北京科澳协力饲料有限公司)，钴60辐照灭菌，自由摄取。饮用水采用经高压灭菌自来水，由动物饮水瓶自由摄取，经检测符合城市饮用水标准。

研究方法：

灌胃途径及方法：禁食16h后灌胃给予。

灌胃剂量：设一个剂量组，具体见下表：

剂量设计理由：根据预试验结果(按设计剂量未测得LD50)，以允许的最大浓度(10倍原液浓缩)及动物最大灌胃容积1次，7天内无一死亡，未见毒性反应，乃进行最大给量测定。

灌胃频率：分组当天给1次

观察内容：观察动物体重、精神状态、毛色、呼吸、自主活动、饮食、二便、口鼻分泌物，以及死亡和恢复的时间等。

观察例数：灌胃后全部试验动物

观察次数：灌胃后4小时内连续观察，然后每天上下午各观察一次，连续观察14天。

体重测定方法：采用“BMS420.3电子天平(上海卓精)”测定

体重测定例数：灌胃前全部购入动物，灌胃后全部试验动物

体重测定次数：购入日、动物分组(灌胃第1天)时、灌胃后每2天各测定一次。

解剖方法：动物脱臼处死后，进行解剖。剖检时对动物外表、全身各脏器进行肉眼观察。若发现异常则作组织病理学检查。

解剖时间：动物死亡后即刻及整个试验观察结束

解剖例数：灌胃后全部试验动物

研究结果：

a.急性毒性研究中体重变化：

在该试验中，试验前和试验结束时各受试动物体重均呈一定程度的增长，说明该供试品灌胃灌胃后未影响受试动物生长。

对大鼠体重的影响

b.急性毒性研究中毒性反应：

在灌胃后直至试验结束，大鼠一般状态良好，毛顺光亮，活动和饮食正常，粪便成形。无一动物死亡。

c.急性毒性研究中解剖所见：

试验结束次日，所有动物均进行了大体解剖观察，肉眼未发现器官出现体积、颜色、质地等改变，特别观察了心、肝、脾、肺、肾、脑、胃肠等重要脏器。检查结果：未见出血、充血、渗出、溃疡、穿孔、炎症，胸腔、腹腔及心包腔均无积液。

d.急性毒性研究中大鼠最大灌胃量：

测定结果：

大鼠最大灌胃量测定结果

研究结论：因受浓度及灌胃容积的限制，无法测得大鼠的LD50；大鼠灌胃最大灌胃量为936mg/kg；相当于人用剂量2.06mg/kg的450倍。根据以上几点，可以认为野生蔓越莓保健饮品毒性较小，很安全。

实验二：

野生蔓越莓保健饮品的制备方法如下：

一、红花提取物的制备：

按照西红花与矿泉水的体积比为1:1的比例，将23.16g红花浸泡于矿泉水中1小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，过滤，收集滤液后，将西红花残渣与矿泉水按照1:1的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，反复将红花残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

二、枸杞提取物的制备：

按照枸杞与矿泉水的体积比为1:2的比例，将38.60g枸杞浸泡于矿泉水中2小时，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，过滤，将枸杞残渣与矿泉水按照1:2的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.25h，反复将枸杞残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

三、卡琪花蒂玛提取物的制备：

将39.70g卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后按照卡琪花蒂玛叶与酒精体积比为1:2的比例，将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中1h，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声1h，过滤，将残渣与酒精按照1:2的体积比混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声1h，反复将残渣超声、过滤五次，并收集合并滤液1.5L；

将滤液在温度为50℃、转速为45r/min的条件下浓缩至体积为100mL，于50℃的条件下风干，磨碎，得到卡琪花蒂玛提取物固形物粉末；

四、野生蔓越莓冻果前处理：

称取野生蔓越莓冻果1403g，解冻捏碎，加入果胶酶，果胶酶加入量为混合物总质量的0.3％，过夜，在50℃矿泉水浴的条件下处理0.5h，得果碎混合物；

五、野生蔓越莓保健饮原汁的制备：

将步骤四得到的果碎混合物与步骤一的产物和步骤二的产物混合，加入新鲜洗净的薄荷叶10片，榨汁，过滤，收集汁液，向滤渣中加入0.8L矿泉水再次榨汁，收集合并汁液并加入7g卡琪花蒂玛提取物固形物粉末，采用200目滤布过滤，得到野生蔓越莓保健饮原汁；

六、调配：

按照加入蔗糖后，蔗糖质量分数为11％的比例，加入蔗糖混匀；

七、灭菌：

采用0.2um的膜过滤方式进行灭菌，即得野生蔓越莓保健饮品。

将实验一制备的野生蔓越莓保健饮品和本实验制备的野生蔓越莓保健饮品分别给30人饮用，其中饮用实验一制备的野生蔓越莓保健饮品的30人，无一人出现上火症状，饮用本实验制备的野生蔓越莓保健饮品的30人，有15人出现上火症状，可见采用红花成本低廉，且不容易使人上火。

Claims (10)

1.野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于野生蔓越莓保健饮品的制备方法如下：

一、红花提取物的制备：

将红花浸泡于矿泉水中，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，过滤，收集滤液后，将红花残渣与矿泉水混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，反复将红花残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

二、枸杞提取物的制备：

将枸杞浸泡于矿泉水中，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，过滤，将枸杞残渣与矿泉水混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.2-0.5h，反复将枸杞残渣超声、过滤三次，并收集合并滤液；

三、卡琪花蒂玛提取物的制备：

将卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中，在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.5-1h，过滤，将残渣与酒精混合，继续在65℃、超声频率为40KHz的条件下超声0.5-1h，反复将残渣超声、过滤五次，并收集合并滤液；

将滤液浓缩，风干，磨碎，得到卡琪花蒂玛提取物固形物粉末；

四、野生蔓越莓冻果前处理：

称取野生蔓越莓冻果，解冻捏碎，加入果胶酶，过夜，在50℃矿泉水浴的条件下处理0.5-1h，得果碎混合物；

五、野生蔓越莓保健饮原汁的制备：

将步骤四得到的果碎混合物与步骤一的产物和步骤二的产物混合，加入新鲜洗净的薄荷叶8-15片，榨汁，过滤，收集汁液，向滤渣中加入0.6-1L矿泉水再次榨汁，收集合并汁液并加入6-8g卡琪花蒂玛提取物固形物粉末，采用200目滤布过滤，得到野生蔓越莓保健饮原汁；

六、调配；

七、灭菌；即得野生蔓越莓保健饮品。

2.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤一中按照红花与矿泉水的体积比为1:1-1.5的比例，将20-30g红花浸泡于矿泉水中0.5-1.5小时。

3.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤一中将红花残渣与矿泉水按照1:1-1.5的体积比混合。

4.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤二中所述的酒精为体积浓度为75％的食用酒精。

5.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤二中按照枸杞与矿泉水的体积比为1:1.5-2.5的比例，将30-40g枸杞浸泡于矿泉水中0.5-1.5小时。

6.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤二中将枸杞残渣与矿泉水按照1:2-2.5的体积比混合。

7.采用权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤三中将30-40g卡琪花蒂玛叶进行粉碎，然后按照卡琪花蒂玛叶与酒精体积比为1:1.5-2.5的比例，将卡琪花蒂玛粉末浸泡于酒精中0.5-1.5h。

8.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤三中将残渣与酒精按照1:1.5-2.5的体积比混合。

9.根据权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤三中将滤液在温度为50℃、转速为40-60r/min的条件下浓缩至体积为80-120mL，于40-50℃的条件下风干。

10.采用权利要求1所述野生蔓越莓保健饮品的制备方法，其特征在于所述步骤四中称取野生蔓越莓冻果1.3-1.5kg，解冻捏碎，加入果胶酶，果胶酶加入量为混合物总质量的0.3-0.5％。