CN109750099A

CN109750099A - 一种用于检测心源性猝死的致病/易感基因的探针组

Info

Publication number: CN109750099A
Application number: CN201910088709.4A
Authority: CN
Inventors: 何昆仑; 伍建; 石金龙; 贾倩; 贾志龙; 赵晓静; 许振国; 姜辉源; 马俊峰; 张润敏
Original assignee: Beijing; Chinese PLA General Hospital
Current assignee: Beijing; Chinese PLA General Hospital
Priority date: 2019-01-30
Filing date: 2019-01-30
Publication date: 2019-05-14

Abstract

本发明提供了一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断心源性猝死的产品中的应用，所述的试剂可以捕获与心源性猝死的致病和/或易感的多种基因，可最多检测116个相关基因。本发明所述的试剂、含有试剂的产品可以解释心源性猝死患者的病因，评估患有心源性猝死的风险、危险因素，为患病个体分子遗传学诊断，高发人群普查、筛查家属中的发病高危人群以及进行相应的遗传咨询及产前诊断干预提供参考，以期减少心源性猝死的发病率。同时，本发明所述的探针组、芯片及试剂盒具有高效、检测位点多、准确、操作简便、特异性好、灵敏度高、快速、实用性强且成本低廉的优势。

Description

一种用于检测心源性猝死的致病/易感基因的探针组

技术领域

本发明涉及基因工程及分子遗传学技术领域，具体涉及一种用于心源性猝死的致病和/或易感基因的个性化捕获、测序的探针组及试剂盒。

背景技术

心源性猝死是指急性症状发作后1小时内发生的以意识突然丧失为特征的由心脏原因引起的自然死亡，占猝死的大部分，死者生前可有也可无心血管疾病。心源性猝死具有起病急、进展快、病死率高等特点。全球每年有1700万人因心血管疾病而死亡，心源性猝死占了25％左右。女性的心源性猝死发生率为1.40/1000人/年，男性为6.68/1000人/年。约50％的心脏骤停发生在无已知的心脏病个体中，但大部分患者有未诊断的缺血性心脏病。据估计，我国每年心源性猝死的人超过50万，且愈趋年轻化。心源性猝死者绝大多数患有器质性心脏病，主要包括冠心病、肥厚型和扩张型心肌病、心脏瓣膜病、心肌炎、非粥样硬化性冠状动脉异常、浸润性病变、传导异常(QT间期延长综合征、心脏阻滞)和严重室性心律失常等。另外，洋地黄和奎尼丁等药物中毒亦可引起。大多数心脏性猝死则是室性快速心律失常所致。一些暂时的功能性因素，如心电不稳定、血小板聚集、冠状动脉痉挛、心肌缺血及缺血后再灌注等使原有稳定的心脏结构异常发生不稳定情况。某些因素如自主神经系统不稳定、电解质失调、过度劳累、情绪压抑及用致室性心律失常的药物等，都可触发心源性猝死。心源性猝死遇难者一级亲属的家庭筛查是一项非常重要的干预措施，它不仅可以识别有风险的家属，对可用的治疗作出建议，还可以充分预防猝死。在高达50％心律失常性猝死综合征遇难者的亲属中，可作出遗传性致心律失常性疾病的诊断。

例如：专利CN103757091B公开了一种心源性猝死快速基因检测试剂盒及检测方法，包括检测KCNE1、KCNH2、SCN5A、KCNJ11、NUP155、CACNA1C、CACNB2B基因所对应的7个SNP多态性检测。专利CN104561310A公开了心源性猝死突变基因检测试剂盒，包括8个主效基因的12个SNP位点的多态性检测，结合特异性等位基因PCR盒温度梯度降落PCR特点，对每个SNP位点分别采用上游和下游共三条特异性引物，通过温度梯度降落PCR程序扩增，经琼脂糖凝胶电泳分析可同时测定12个位点的突变情况。专利CN107858423A公开了用于诊断/预测心源性猝死的试剂盒，包括检测COL1A2、MIR155HG、CTH、DSG2基因插入/缺失多态性位点的特异性引物对。专利CN108517357A公开了一种检测心源性猝死相关SCN5A基因上心源性猝死相关SNP的试剂盒及其检测方法。

下面简述几种可引发心源性猝死的疾病。

致心律失常性右室心肌病，又称致心律失常性右室发育不良，是一种遗传性心肌病，其特征为右心室心肌被进行性纤维脂肪组织所替代，临床常表现为右心室扩大、心律失常和猝死。较为常见的是家族性发病，通常是常染色体出现显性遗传，且在青年男性群体中较为多发。致心律失常性右室心肌病病因目前尚未明确，在临床中，致心律失常性右室心肌病早期的临床特点不明确，通常以右室来源的室性心律失常为最主要的特征，在发作的过程中通常会伴随严重的血流动力学障碍。致心律失常性右室心肌病呈家族聚集性，基因研究显示，其病因为控制心肌的细胞连接蛋白基因发生突变。一半以上的患者可监测出桥粒蛋白基因异常。由于致心律失常性右室心肌病临床表现多样，特别是早期诊断困难，误诊率较高。因此，通过筛查该病的致病基因对本病进行预防、诊断和治疗，降低粹死率有着重要的意义。目前发现与致心律失常性右室心肌病有关的基因有DSP、RYR2、PKP2、DSG2、PLN等。另有专利CN1261592C、CN105267986A、CN102965428A、CN106868175A、CN107287317A、CN107058538A及CN107937511A公开了与心律失常或心肌病相关的基因及检测的试剂盒。基因检测是致心律失常性右室心肌病相关诊断治疗指南建议中的重要部分。

长QT综合征，表现为QT间期延长和T波异常，易产生恶性心律失常，导致反复发作性晕厥、心脏骤停甚至猝死等心脏不良事件。长QT综合征患病率约为1/2500，临床表现多样性，患者可以终身无症状，也可能在婴儿期发生猝死。LQTS可分为遗传性与获得性两种，遗传性长QT综合征可呈常染色体显性遗传，如Romano-Ward综合征，或常染色体隐性遗传，如Jerwell-Lange-Nielsen综合征，多见于青年。按病因可分为遗传性长QT综合征和获得性长QT综合征。遗传性长QT综合征是患者自出生起先天携带某种基因变异，导致心脏细胞有一些细微异常，在机体遇到紧张或激动刺激时发生晕厥。获得性长QT综合征的致病因素则是一些外界因素，常见于电解质紊乱(低钾血症、低镁血症等)、高胆固醇血症、动脉粥样硬化、心肌缺血、药物作用(如麻醉剂、抗生素、抗心律失常药物、抗组胺药物)等，常引发ATP敏感钾离子通道、Kir3.1钾离子通道(是G蛋白门控通道，GIRK通道1)、钙离子通道、瞬时外向钾离子通道等功能改变。长QT综合征的临床分型主要根据基因型进行，最常见的是LQT1、LQT2和LQT3，3种类型在临床中所占的比例超过了长QT综合征的90％。亚型不同恶性室性心律失常诱因不同，心电图表现、危险分层、预后和临床治疗策略不同。基因诊断是LQTS诊断的金标准，另外还可根据临床症状、心电图QTC和T波变化进行评分，临床诊断标准虽与基因诊断结果非常相似，但仍不能达到基因诊断的准确率。目前发现与长QT综合征相关的基因有KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2等。

家族性房颤，与非家族性房颤同属于房颤(心房颤动)。心房颤时心房激动的频率达300～600次/分，心跳频率往往快而且不规则，有时候可达100～160次/分，不仅比正常人心跳快得多，而且绝对不整齐，心房失去有效的收缩功能。房颤常见的病因包括高血压病、冠心病、心脏外科手术、瓣膜病、心力衰竭、心肌病、先天性心脏病、肺动脉栓塞、甲状腺功能亢进症等，与饮酒、精神紧张、水电解质紊乱、严重感染等有关。此外还可以合并有其他类型心律失常。大多数房颤继发于严重的器质性心脏病或存在明确的危险因素，但也有2％～16％的房颤患者，发病年龄相对较轻，无明确基础心脏疾病，称作特发性房颤或孤立性房颤，此类房颤与基因变异密切相关，其中有家族遗传史者称为家族性房颤。家族性房颤遵循孟德尔遗传定律，为单基因遗传，在同一个家系中有多个成员患病。家族性房颤有时可并发其他器质性心脏病，如肥厚型或扩张型心肌病，但相对很少见。单基因遗传性房颤的致病基因，可以通过连锁分析的方法予以确认。目前研究多认为离子通道基因多态性与房颤关系密切，除此之外，非离子通道基因的遗传变异也被认为参与了房颤的发生。目前认为与家族性房颤发生相关的基因有KCNQ1、KCNE2、KCNE1、KCNJ2、SCN5A、ABCC9、SCN1B、NUP155、SCN3B、SCN4B等。房颤相关诊断、治疗指南推荐对家族性房颤先证者的所有一级亲属行基因检测；建议对合并心脏离子通道和心肌病者可进行基因筛查。另外，对于年龄小于40岁、存在明显家族史、无明确基础疾病的房颤患者，可进行DNA检测分析。

随着基因测序技术的发展，基因组序列测定的费用越来越低，收集个体样本遗传信息的速度也越来越快。第二代高通量测序技术(next-generation sequencingtechnology)具有快速、准确、低成本的优点，可同时对多个基因的各种类型突变进行检测，已经被广泛应用于遗传缺陷的病因检测和分子遗传学诊断，然而到目前为止，一直尚未有专门针对心源性猝死的致病/易感基因检测的高通量探针、芯片或试剂盒，使得本病相关领域的进展严重滞后，发病率高居不下，遗传咨询和必要的产前干预措施无法施行，本应早发现、早明确病因、早干预治疗甚至部分可治愈的本病患者不能及早得到关注，不仅给患者和其家庭带来的巨大的痛苦和沉重的经济负担，也严重阻碍了我国整体人口素质的大幅度提高。目前商售人类全基因组外显子测序的价格在6千到8千人民币之间，而本发明的探针组的基因测序成本只有2千到3千人民币，可以大大降低患者的经济负担，是一种非常实用的心源性猝死的筛查工具。

综上所述，开发一种高效、准确、快速、低价的心源性猝死的致病/易感基因的试剂盒，用于心源性猝死的致病/易感基因的基因筛查和分子遗传学诊断，意义非常重大。

发明内容

本发明人通过创造性劳动筛选出约116种与心源性猝死的致病和/或易感相关的基因，根据这些基因的任意组合提供相应组合的探针组、芯片或试剂盒，可以判断是否患有心源性猝死、解释心源性猝死患者的病因、评估个体患心源性猝死的风险、用于孕前预警指示突变基因携带者的后代患有心源性猝死的风险或以上述变异位点作为靶点，为治疗心源性猝死提供一种全新的思路和手段。为个体提供分子学遗传诊断，对患病家属的家系筛查，以及对突变携带者的早期干预治疗具有重要的临床意义，也可对再次妊娠的风险进行精确评估。同时，本发明所述的探针组、芯片及试剂盒具有高效、检测位点多、准确、快速、实用性强且成本低的优势。

优选的，所述筛选的方法为结合大量数据库检索和/或对患者基因测序结果进行筛选。进一步优选的，所述的数据库为OMIM数据库，通过查询OMIM数据库及权威文献，确定以心源性猝死为临床表型的疾病的致病基因。

本发明的第一方面，提供了作为心源性猝死诊断的生物标志物，所述的生物标志物选自基因KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的一种或两种以上的组合以及各基因表达的蛋白或蛋白的组合。

优选的，所述的生物标志物选自基因KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的一种或两种以上的组合。

优选的，上述的各生物标志物的基因发生突变会使心源性猝死发生的风险剧增。

本发明所述的各生物标志物均可单独作为诊断或评估心源性猝死的依据。

优选的，心源性猝死诊断的依据为各基因或其组合的突变，或者，各基因或其组合基因的表达量的多少。

在本发明的一个具体实施方式中，所述的心源性猝死诊断的依据为各基因或其组合的突变。

优选的，通过基因测序的方法进行各基因或其基因组合的突变检测。

本发明的第二方面，提供了一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断和/或预防心源性猝死的产品中的应用，或者，在诊断心源性猝死患病与否、解释心源性猝死患者的病因、心源性猝死患病风险度评估、心源性猝死患者预后评估、孕前预警指示后代患病的风险度、筛选治疗或预防心源性猝死的药物及为临床治疗提供决策支持的产品中的应用。

优选的，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

进一步优选的，所述心源性猝死的致病和/或易感基因为DSP、RYR2、PKP2、DSG2、PLN、KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、ABCC9、SCN1B、NUP155、SCN3B或SCN4B中的两种或两种以上的组合。

在本发明的一个具体实施方式中，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为CACNA1C、CAV3、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、SCN2B、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B的组合。

优选的，所述的试剂选自探针组、引物组或基因芯片。所述的产品包括所述的试剂或所述的产品为试剂盒或药物。

本发明的第三方面，提供了一种筛选用于治疗或预防心源性猝死的药物的方法，包括如下步骤：

a)将能够表达突变型的上述基因或其组合的生物样品置于存在候选药物的条件下培养；

b)将能够表达突变型的上述基因或其组合的生物样品置于不存在候选药物的条件下培养；

c)确定生物样品在步骤a)和步骤b)两种情况下的是否患有导致心源性猝死的疾病以及动物死亡率变化，以此结果指示候选药物是否可以用于治疗或预防心源性猝死。

优选的，所述的生物样品为动物模型。进一步优选的，所述的动物模型选自大鼠、小鼠、兔或猴。

本发明的第四方面，提供了一种治疗或预防心源性猝死的药物，所述的药物以上述各标志物基因或基因的组合作为靶点。

本发明的第五方面，提供了一种探针组，所述探针组检测的各基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

在本发明的一个具体实施方式中，所述探针组检测的各基因为DSP、RYR2、PKP2、DSG2、PLN、KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、ABCC9、SCN1B、NUP155、SCN3B或SCN4B中的两种或两种以上的组合。

在本发明的另一个具体实施方式中，所述探针组检测的各基因为CACNA1C、CAV3、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、SCN2B、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

在本发明的另一个具体实施方式中，所述的探针组检测的各基因为CACNA1C、CAV3、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、SCN2B、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA及CACNA1B的组合。

在本发明的另一个具体实施方式中，所述的探针组检测的各基因为DSP、RYR2、PKP2、DSG2、PLN、KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、ABCC9、SCN1B、NUP155、SCN3B及SCN4B的组合。

在本发明的另一个具体实施方式中，所述的探针组包含能同时特异性捕获116个致病基因的探针，所述的探针组检测的各致病基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA及CACNA1B的组合。

优选的，所述的基因为心源性猝死致病和/或易感相关的基因。

优选的，根据上述各基因通过公知、通用的方法设计并合成探针序列，对目的片段进行特异性捕获、扩增、测序，以达到检测样本的目的。

本发明所述的基因或各基因的组合作为心源性猝死的生物标志物。

本发明所述的基因或各基因的组合可以用于治疗或预防心源性猝死的药物的筛选。

本发明所述的治疗或预防心源性猝死的药物以上述各标志物基因或基因的组合作为靶点。

本发明所述的心源性猝死的患者，生前患有心血管疾病或生前未患有心血管疾病。

优选的，引起心源性猝死的疾病包括但不限于冠心病、肥厚型心肌病、扩张型心肌病、心脏瓣膜病、心肌炎、非粥样硬化性冠状动脉异常、浸润性病变、家族性房颤、传导异常(QT间期延长综合征、心脏阻滞)和严重室性心律失常。进一步优选的，所述的家族性房颤的病因包括但不限于高血压病、冠心病、心脏外科手术、瓣膜病、心力衰竭、心肌病、先天性心脏病、肺动脉栓塞、甲状腺功能亢进症、心律失常。

优选的，引起心源性猝死的方式还包括药物中毒，所述的药物包括但不限于洋地黄或奎尼丁。

优选的，引起心源性猝死的患者功能性因素包括但不限于心电不稳定、血小板聚集、冠状动脉痉挛、心肌缺血及缺血后再灌注等使原有稳定的心脏结构异常、自主神经系统不稳定、电解质失调、过度劳累、情绪压抑及用致室性心律失常的药物。

本发明的第六方面，提供了一种应用本发明所述的探针组进行基因检测的方法，包括将待检DNA与所述的探针组混合。

优选的，所述的基因检测包括检测所述基因的有或无，或者，突变的有或无。进一步优选的，所述的突变选自剪切位点突变、无义突变或移码突变。

优选的，所述的基因检测包括检测所述基因的水平。

本发明所述的基因检测的方法可以为非诊断目的或诊断目的。

本发明所述的非诊断目的为应用所述的探针组检测上述基因组合中各基因的突变有或无以及检测上述基因组合中各基因的水平。

本发明所述的诊断目的为应用所述的探针组检测上述基因后诊断或预测疾病。

本发明的第七方面，提供了一种含有本发明所述的探针组的基因芯片。

优选的，所述的基因芯片还包括固相载体。进一步优选的，所述的固相载体选自硝酸纤维素膜、尼龙膜、聚苯乙烯、玻璃片、硅片或聚丙烯膜中的一种或两种以上的组合。

优选的，所述的基因芯片还包括相应的引物组。

优选的，所述探针固定在固相载体上的方法选自原位合成法、点样法或其他固定方法。

其中，将基因芯片中的探针固定在所述的固相载体上。优选的，将探针序列密集有序地排列固定在固相载体预先设置的区域内，形成微型检测器件。

本发明的第八方面，提供了一种含有本发明所述的探针组或本发明所述的基因芯片的试剂盒。

优选的，所述的试剂盒还包括杂交液和/或缓冲液和/或洗涤液。

进一步优选的，所述试剂盒还包括富集缓冲液、杂交缓冲液、结合缓冲液、漂洗液、NaOH溶液、Tris-HCl缓冲液、PCR反应液、TE缓冲液。

本发明的第九方面，提供了一种所述的含有探针组的试剂盒的制备方法，包括：

1)根据上述心源性猝死的各致病和/或易感基因制备相应的探针序列；

2)为步骤1)获得的探针序列加上生物素标记；

3)配制所需杂交液和/或缓冲液和/或洗涤液。

本发明的第十方面，提供了心源性猝死的致病和/或易感基因在制备诊断心源性猝死的产品中的应用，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

本发明的第十一方面，提供了一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合，其中，所述的试剂选自探针组、引物组或基因芯片。

本发明的第十二方面，提供了一种心源性猝死的致病和/或易感基因的检测方法，包括：

(1)提取待检测的DNA，制备全基因组文库；

(2)将步骤(1)获得的全基因组文库与检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂混合，进行PCR；

(3)纯化步骤(2)所述的PCR产物；

(4)对步骤(3)纯化后的PCR产物进行测序；

(5)对步骤(4)的测序结果进行分析；

其中，所述的试剂为探针组、引物组或基因芯片。

优选的，所述的分析包括SNP分析和/或InDel分析。

本发明的第十三方面，提供了一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂在制备产品中的应用，所述的产品为诊断心源性猝死患病与否、解释心源性猝死患者的病因、心源性猝死患病风险度评估、心源性猝死患者预后评估、孕前预警指示后代患病的风险度的产品。

优选的，所述的产品选自探针组、引物组、试剂盒、基因芯片或药物。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的部分实施例，而不是全部。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1本发明探针组的设计和制备一、致病和/或易感基因的筛选

本实施例中的致病和/或易感基因为：KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA及CACNA1B。

对100位心源性猝死患者(患者为医院临床确诊的心源性猝死疾病，各患者均签署知情及自愿协议，并经医院医学伦理委员会批准)进行全外显子组测序，覆盖、检测范围为人类基因组已知的全部3万余个基因的所有外显子，其中，心源性猝死患者的突变基因高度集中，基因组的其余基因(占绝大多数)虽然也有累及，但突变频率非常低，很多甚至只在单一患者有发现，其与疾病的相关性难以确定。因此在设计本发明探针组时，纳入在本病患者发生突变概率最高的上述116个基因，其突变累及频率均大于5，这样能够在最大限度地增加检出致病和/或易感基因的同时合理控制检测成本。

二、探针的制备

根据上述致病和/或易感基因的基因组序列，本领域技术人员可以通过公知、通用的方法设计并合成探针序列(例如专利WO2013/003585)，本实施例中对合成的探针序列进行生物素标记，具体操作为：采用本领域公知方法合成探针序列，均匀混合在总体积1.2mL的dH₂O中，取其中15μL利用通用的PCR引物(5’端序列为GACTACATGGGACAT(SEQ ID NO：1)、3’端的序列为GGAACCTACGACGTA(SEQ ID NO：2))，分三管进行PCR扩增，其中引物GACTACATGGGACAT(SEQ ID NO：1)为带有生物素标记的引物。

PCR扩增体系：上述探针溶液，5μL；正向引物(25μM)，2μL；反向引物(25μM)，2μL；MgCl₂(50mM)，4μL；10x Platinum Taq聚合酶缓冲液(购自Life Technologies)，5μL；dNTPs(每种10mM)，4μL；Platinum Taq聚合酶(5U/μL，购自Life Technologies)，1μL；H₂O，27μL；总体积50μL。

扩增条件：98℃，30s；(98℃，30s，60℃，25s，72℃，45s)35个循环；72℃，5min。

将PCR产物用MinElute PCR纯化试剂盒(购自Life Technologies)纯化后，取500ng，用MyOne链酶亲和素磁珠(购自Invitrogen)将PCR产物结合下来。然后加入碱性NaOH将没有生物素的互补链变性、洗脱下来；然后将整个磁珠用100℃的甲酰胺液体洗涤，使探针从磁珠上分离下来。用乙醇沉淀后即得到生物素标记的本实施例的探针组。

实施例2：本发明试剂盒组成、制备及使用。

本实施例所述的用于检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂盒，是通过检测上述116个致病和/或易感基因的突变来进行受检个体的分子遗传学诊断或发病风险预测的试剂盒。

一、试剂盒的组成

所述试剂盒包含的成分为：实施例1所获得的探针组(160μL，150ng/μL)、富集缓冲液(208μL)、杂交缓冲液(800μL)、结合缓冲液(3.2mL)、漂洗液1(9mL)、漂洗液2(45mL)、NaOH溶液(0.1M，1mL)、Tris-HCl缓冲液(1M，pH 7.5，1.2mL)、PCR反应液(580μL)、TE缓冲液(800μL，10mM Tris-HCl，1mM EDTA，调pH至8.0，水定容至500mL)。其中各缓冲液组成如下：

(1)富集缓冲液(每20μL)：

人cot-1DNA(购自Invitrogen)，7μL；鲑鱼精DNA(购自Invitrogen)，3μL；

特异性封闭引物，共10μL，每种引物浓度为1nmol/μL：

引物1：

AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCT(SEQ ID NO：3)；

引物2：

CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGGTCTCGGCATTCCTGCTGAACCGC(SEQ ID NO：4)；

(2)杂交缓冲液：5倍浓度的SSPE(购自AMRESCO公司)，5倍浓度的Denhardt溶液(购自USB公司)，5mM EDTA(0.5M，pH8.0，购自Mediatech公司)，0.1％SDS；

(3)结合缓冲液：1M NaCl，10mM Tris-HCl(pH 7.5)，1mM EDTA；

(4)漂洗液1：1倍浓度的SSC溶液(NaCl 175g，柠檬酸三钠88g，调pH至7.4，dH₂O定容至1升)，0.1％SDS；

(5)漂洗液2：0.1倍浓度的SSC溶液(NaCl 175g，柠檬酸三钠88g，调pH至7.4，dH₂O定容至1升)，0.1％SDS；

(6)PCR反应液：2μL dNTPs(每种10mM)，

0.5μL引物1(AATGATACGGCGACCACCGA*G，50pmol)，

0.5μL引物2(CAAGCAGAAGACGGCATACG*A，50pmol)，20μL 5倍浓度的Phusion缓冲液(购自New England Biolab公司)，1μL Hotstart Phusion酶(购自New England Biolabs)，5μL DMSO，51μL dH₂O；*表示中间有硫代修饰；

二、试剂盒的应用

1、DNA提取及全基因组文库制备

使用Qiagen DNA mini kit(250)(购自Qiagen)试剂盒提取外周血中的DNA。用分光光度计定量，琼脂糖凝胶电泳检测样本质量，完整的基因组DNA电泳条带通常应不小于20kb。质检合格的DNA将浓度调整到75ng/μL，总量3-5μg DNA随机打断、扩增，从而建立全基因组文库。

2、目标致病和/或易感基因片段的特异性捕获及测序

1)制备以下混合体系：取1μg步骤1的构建好的全基因组文库，13μL富集缓冲液，5μL实施例1的本发明探针组；置于PCR仪上：95℃，7min，之后65℃，2min；

2)取65℃预热的杂交缓冲液23μL加入到上述步骤1)得到的混合液中，然后于PCR仪上65℃杂交22小时，得到富集体系混合物。

3)将MyOne C1链霉亲和素磁珠(购自Invitrogen)漩涡震荡使磁珠充分悬浮，短暂离心，使磁珠离心至管底部，取50μL MyOne C1链霉亲和素磁珠到新的1.5mL的离心管。

4)将装有50μL MyOne C1链霉亲和素磁珠的1.5mL离心管漩涡震荡至少5s，使磁珠充分悬浮，短暂离心后放入磁力架上保持静止一分钟(不要旋转离心管)，小心吸弃上清。

5)取下离心管，加入50μL的1倍浓度的结合缓冲液，旋窝震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟，小心吸弃上清，重复三次。

6)取下离心管，加入100μL的2倍浓度的结合缓冲液，旋窝震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟。

7)将步骤2)得到的富集体系混合物加入到骤6)的离心管中，旋窝震荡至少5s(不用离心)，置于旋转仪上室温旋转1小时(60转/分钟)。

8)然后，利用漂洗液1室温清洗步骤7)的磁珠一次，15分钟，然后再用漂洗液2清洗3次，65℃，每次15分钟。

9)将步骤8)的磁珠用0.1M NaOH室温下洗脱10分钟，然后将洗脱液漩涡震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟，然后将上清液转移到含有70μL Tris-HCl缓冲液(1M，pH 7.5)的干净离心管中。

10)采用Qiagen MinElute Column(购自Qiagen)对步骤9)得到的DNA溶液进行纯化，其纯化步骤参照Qiagen MinElute Kit的实验操作手册。

11)纯化的DNA通过PCR最终扩增15个循环：

PCR反应液：2μL dNTPs(每种10mM)，

0.5μL引物1(AATGATACGGCGACCACCGA*G(SEQ ID NO：5)，50pmol)，

0.5μL引物2(CAAGCAGAAGACGGCATACG*A(SEQ ID NO：6)，50pmol)，20μL 5倍浓度的Phusion缓冲液(购自New England Biolabs)，1μL Hotstart Phusion酶(购自New EnglandBiolabs)，5μL DMSO，51μL dH₂O；*表示中间有硫代修饰。PCR程序：98℃，30s(1cycle)；98℃，25s；65℃，30s；72℃，30s(15cycles)；72℃，5min(1cycle)。

12)利用Agencourt AMPure XP核酸纯化试剂盒(购自Beckman Coulter)，根据使用手册纯化步骤11)的PCR产物。

13)将步骤12)得到的DNA产物在Illumina Nexseq 500测序仪上进行测序。

3、生物信息学分析流程及结果输出：

(1)SNP分析流程

①获取原始短序列；

②去除测序数据中的接头和低质量数据等；

③把短序列用SOAPaligner软件定位到人MHC3.6M基因组数据相应的位置上，所用到参数：soap2.20-a-b-t-v 3-l 42-s 63-m100-x 400，其中序列错配数为3，具体参数含义参考：http://soap.genomics.org.cn/soapaligner.html；

④统计测序结果信息，短序列数量、目标区域覆盖大小、平均测序深度等；

⑤SOAPsnp用于在目标区域找出位点的基因型，所用到参数：soapsnp-i-d-o-r0.00005-e0.0001-M-t-u-L-s-2–T，具体参数含义参考：http://soap.genomics.org.cn/soapsnp.html；

⑥过滤低质量值(质量值>＝20)和低覆盖度(深度>＝10)的SNP；

⑦利用CCDS、人基因组数据库(NCBI 37.2)、dbSNP(v138)信息对SNP进行注释，确定突变位点发生的基因、坐标、mRNA位点、氨基酸改变、SNP功能(错义突变/无义突变/可变剪切位点)、SIFT预测SNP影响蛋白功能预测等；

⑧根据疾病样品和正常样品信息，选出疾病样品所共有的而在正常组中不存在的SNP作为候选的SNPs，在候选的SNPs中去除掉在dbSNP、HAPMAP、1000人MHC3.6M基因组、其他外显子测序项目中出现的SNP。同时，过滤掉SIFT预测对蛋白功能无影响的SNPs作为最后疾病相关的候选SNPs；

(2)InDel分析流程

①把去除接头序列和低质量的测序数据用Burrows-Wheeler Aligner(BWA)比对到人MHC3.6M基因组上，所用到参数：bwa aln-L-l 31-i 10-k2-t 7-e 40，具体参数含义参考：http://bio-bwa.sourceforge.net/bwa.shtml；

②用GATK软件找出序列中所含有的插入/缺失(InDel)的信息；

③利用CCDS、人基因组数据库(NCBI 37.2)、dbSNP(v138)信息对InDel进行注释，确定突变位点发生的基因、坐标、mRNA位点、编码区域序列的改变、对氨基酸的影响、InDel功能(氨基酸插入/氨基酸缺失/移码突变)。

实施例3：本发明试剂盒的使用效果验证

利用本发明所述试剂盒(实施例2制备获得)检测72例样本，结果证实目的致病和/或易感基因的捕获率满意，目标区域的平均有效测序数据量达到243.87Mb，目标区域的平均测序深度为483.45X(见表1)，远远高于一般的遗传疾病诊断要求(一般为20X)。

表1目的致病和/或易感基因测序数据质量

综上所述，本发明提供的用于检测心源性猝死的致病/易感基因的探针组及试剂盒具有操作简便、成本低廉、特异性好、灵敏度高等特点，可以同时最多检测、明确116个致病/易感基因的各种类型突变，因此本发明的探针组和试剂盒可应用于患病个体的分子遗传学诊断，同时还可用筛查心源性猝死患者家属中的发病高危人群，以及进行相应的遗传咨询或产前干预提供参考。由于心源性猝死具有临床异质性强、急性发作致死率高等特点，早发现、早诊断、早干预、早治疗是降低患者死亡率、提高患者生存质量的重要策略。本发明的使用可以为尽早确立诊断和对患者采取正确、合理的干预、治疗措施提供依据，符合精准医疗的发展趋势。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

序列表

<110> 中国人民解放军总医院

北京迈基诺基因科技股份有限公司

<120> 一种用于检测心源性猝死的致病/易感基因的探针组

<130> 1

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 15

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

gactacatgg gacat 15

<210> 2

<211> 15

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ggaacctacg acgta 15

<210> 3

<211> 50

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct 50

<210> 4

<211> 50

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

caagcagaag acggcatacg agatcggtct cggcattcct gctgaaccgc 50

<210> 5

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

aatgatacgg cgaccaccga g 21

<210> 6

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

caagcagaag acggcatacg a 21

Claims

1.一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂在制备诊断和/或预防心源性猝死的产品中的应用，其特征在于，所述心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述心源性猝死的致病和/或易感基因为DSP、RYR2、PKP2、DSG2、PLN、KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、ABCC9、SCN1B、NUP155、SCN3B或SCN4B中的两种或两种以上的组合。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述心源性猝死的致病和/或易感基因为CACNA1C、CAV3、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、SCN2B、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B的组合。

4.根据权利要求1-3任一所述的应用，其特征在于，所述的检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂选自探针组、引物组或基因芯片；所述的产品包括所述的试剂，或所述的产品为试剂盒。

5.一种心源性猝死的诊断标志物，其特征在于，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

6.心源性猝死的致病和/或易感基因在制备诊断心源性猝死的产品中的应用，其特征在于，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合。

7.一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂，其特征在于，所述的心源性猝死的致病和/或易感基因为KCNQ1、KCNH2、SCN5A、ANK2、KCNE1、KCNE2、KCNJ2、CACNA1C、CAV3、SCN4B、AKAP9、SNTA1、KCNJ5、CALM1、CALM2、KCNE3、RYR2、CASQ2、TRDN、LMNA、CACNA2D1、CACNB2、GPD1L、SCN1B、SCN3B、HCN4、KCND3、SCN10A、KCNJ8、ABCC9、SCN2B、PKP2、TRPM4、RANGRF、NKX2-5、PRKAG2、DES、EMD、NUP155、JPH2、DPP6、MYH6、TNNT2、TTN、PLN、MYH7、RBM20、BAG3、MYBPC3、SGCD、VCL、CSRP3、ACTN2、LDB3、TPM1、DMD、ACTC1、TNNI3、TAZ、TCAP、TMPO、PSEN1、FKTN、TNNC1、DSG2、NEXN、CRYAB、LAMA4、RAF1、SDHA、GATAD1、EYA4、PSEN2、ANKRD1、CTF1、DSC2、DSP、DTNA、TGFB3、TMEM43、JUP、NOS1AP、MYL3、MYL2、MYOZ2、CALR3、MYLK2、MAP2K1、GLA、BRAF、SLC25A4、SOS1、FHL2、LAMP2、PTPN11、KRAS、NRAS、SHOC2、TTR、HRAS、HADHA、CBS、FBN1、TGFBR1、TGFBR2、FBN2、COL3A1、COL5A1、COL5A2、MYH11、ACTA2、SMAD3、SLC2A10、ELN、RPSA或CACNA1B中的两种或两种以上的组合，其中，所述的试剂选自探针组、引物组或基因芯片。

8.一种心源性猝死的致病和/或易感基因的检测方法，其特征在于，包括：

(1)提取待检测的DNA，制备全基因组文库；

(3)纯化步骤(2)所述的PCR产物；

(4)对步骤(3)纯化后的PCR产物进行测序；

(5)对步骤(4)的测序结果进行分析；

其中，所述的试剂为探针组、引物组或基因芯片。

9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述的分析包括SNP分析和/或InDel分析。

10.一种检测心源性猝死的致病和/或易感基因的试剂在制备产品中的应用，其特征在于，所述的产品为诊断心源性猝死患病与否、解释心源性猝死患者的病因、心源性猝死患病风险度评估、心源性猝死患者预后评估、孕前预警指示后代患病的风险度的产品。