CN109731000A - 2`-岩藻糖基乳糖的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了2'‑岩藻糖基乳糖的应用，属于生物医药技术领域。该新应用为2'‑岩藻糖基乳糖在制备缓解或辅助治疗由β‑乳球蛋白诱导的过敏反应的药物中的应用，2'‑岩藻糖基乳糖在制备缓解或辅助治疗由β‑乳球蛋白诱导的过敏反应的保健食品中的应用，2'‑岩藻糖基乳糖在制备具有缓解由β‑乳球蛋白诱导的过敏反应的食品中的应用。本发明首次发现了2'‑岩藻糖基乳糖具有缓解由β‑乳球蛋白诱导的过敏反应的作用，可以用于缓解由β‑乳球蛋白诱导的过敏反应。
Description
技术领域
本发明涉及2’-岩藻糖基乳糖的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
食物过敏是影响人类健康的一个主要疾病，研究发现全球有5％的成年人和8％的儿童患有食物过敏。牛乳因其营养丰富，成为婴幼儿重要的食物蛋白来源，但同时牛乳也易引发婴幼儿食物过敏。β-乳球蛋白(β-lactoglobulin，BLG)是牛乳中主要的过敏原蛋白之一。牛乳过敏严重危害儿童健康，已引起了全球的广泛关注。目前对食物过敏的治疗策略仍以排除致敏食物为主，但该方法效果欠佳，会在很大程度上限制婴儿或儿童的营养摄入。
根据世界卫生组织婴幼儿喂养全球策略，目前推荐的婴儿喂养标准是婴儿出生后的前6个月纯母乳喂养，并继续母乳喂养1～2年。母乳是婴儿最佳的天然食品，可提供婴儿正常生长发育所需的全部营养成分和大量生物活性物质。母乳中人乳低聚糖(human milkoligosaccharides，HMO)的含量可达到12～23g/L，作为仅次于乳糖和脂类的第三大固体组分，受到了越来越多的重视。
母乳喂养的婴儿不容易发生泌尿道感染，这是因为大部分的寡糖不能被消化吸收，它们被排泄到尿液后，能够阻止致使泌尿道感染的大肠杆菌对膀胱上皮细胞的粘附，进而阻止泌尿道感染这种疾病的发生。母乳喂养甚至能使糖尿病、心血管疾病、过敏和肥胖的发生率降低。母乳低聚糖是婴幼儿的益生元，是婴幼儿最天然最直接的营养来源，并且具有抗感染、增加免疫力、促进大脑发育、提高认知力等功能。
目前已鉴定出150多种HMOS，主要包括岩藻糖基化、唾液酸化和中性三种类型。在岩藻糖基化HMO中，主要包括2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose，2’-FL)和3-岩藻糖基乳糖(3’-fucosyllactose，3’-FL)，2’-FL含量通常是最丰富的，其含量其含量2–3g/L，最高可达到8g/L。尽管富含母乳中富含母乳低聚糖，但并未普遍应用与食品组成部分，主要是因为它们的功能不明确，很难获得，而且工业化生产成本较高。然而，随着科学研究的进步，其潜在作用已经开始被阐明。同时，还开发了大规模、合理成本合成HMO的生产方式。2016年，欧盟已经批准2’-FL作为新食品成分使用，在美国首次推出含2’-FL的配方奶粉，在欧洲首次推出含2’-FL和乳糖基-N-新四糖(LNnT)的配方奶粉。
发明内容
本发明提供了一种2’-岩藻糖基乳糖的新应用，采用的技术方案如下：
本发明的目的在于提供一种2’-岩藻糖基乳糖在制备缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种2’-岩藻糖基乳糖在制备辅助治疗由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的药物中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种2’-岩藻糖基乳糖在制备缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的保健食品中的应用。
本发明的另一目的在于提供一种2’-岩藻糖基乳糖在制备辅助治疗由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的保健食品中的应用。
优选地，2’-岩藻糖基乳糖以唯一有效成分作为缓解或辅助治疗由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的药物或保健食品。
本发明的另一目的在于提供一种2’-岩藻糖基乳糖在制备具有缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的食品中的应用。
优选地，所述食品为乳饮料或含乳果冻。即：将2’-FL添加到饮料中制备一种具有缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的乳饮料。将2’-FL添加到果冻中制备一种具有缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的含乳果冻。
本发明有益效果：
本发明对2’-岩藻糖基乳糖进行了研究，通过动物实验，对β-乳球蛋白致敏小鼠，定期灌胃二岩藻糖基乳糖(2’-FL)来缓解过敏症状，实验周期为1个月，对小鼠相关指标IgE、结肠组织切片、细胞因子等检测后发现：小鼠血清总IgE,2’-FL治疗组显著低于过敏组，接近正常组，且小鼠结肠组织切片，2’-FL治疗组肠粘膜结构完整，无明显的炎性细胞浸润，隐窝结构比较完整，由此可知：2’-FL治疗组对小鼠具有调节机体的免疫应答，维持机体的免疫平衡，提高肠道屏障功能，改善过敏的表观症状，有效缓解β-乳球蛋白诱导的过敏。因此，本发明首次发现了2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)对β-乳球蛋白诱导的过敏症状具有缓解作用。
附图说明
图1为不同组小鼠血清中的总IgE含量；图中*表示治疗组与致敏组之间存在显著差异，*P<0.001。
图2为小鼠结肠组织HE染色结果。
图3为不同组小鼠血清细胞因子的分泌水平；图中A为IL-10，B为TGF-β；*2’-FL组分别与致敏组之间存在显著性差异，*P<0.05。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。
实施例1
一、动物模型的建立
BALB/c小鼠买进后养一周适应环境，每组10只，共分成5个实验组，即对照组(contral)、过敏组(Allergy)，2’-FL干预组(2’-FL(H):600mg/kg、2’-FL(M):400mg/kg、2’-FL(L):200mg/kg)。2’-FL干预组一周三次灌胃，对照组(contral)，过敏组(Allergy)灌胃等量生理盐水。除对照组以外。每组分别在第7d、14d、21d腹腔注射0.2mL/只的过敏原(1mL弗氏佐剂+1mL 1mg/mLβ-Lg)，正常组小鼠腹腔注射等量生理盐水。于第28d用5mgβ-Lg末次激发，1h后处死收集血清和结肠等组织。
二、ELISA法测定小鼠血清中总IgE含量
小鼠摘除眼球取血，新鲜血液在室温静置30min，3 000r离心15min，取上清，严格按照总IgE试剂盒说明书检测血清中总IgE含量。结果见表1和图1。
①实验前30min从4℃冰箱中取出试剂盒，从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压实自封条，密封口袋，放回4℃。
②空白孔加标本或标准品稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100μL/孔)，用封板胶纸封住反应孔，于37℃孵箱孵育30min。
③洗板5次。
④每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育30min。
⑤洗板5次。
⑥每孔先加入显色剂A 50μL，再加入显色剂B 50μL，轻轻震荡均匀，37℃避光显色15min。
⑦打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。
⑧每孔加终止液50μL，终止反应。
⑨加入终止液100μL/孔，混匀后，即刻测量OD450值，并保存读数结果。
表1不同组小鼠血清中的总IgE含量
表中：*表示干预组与过敏组之间存在显著差异，*P<0.001。
由实验结果可以看出，β-乳球蛋白过敏组(Allergy)的总IgE最高。经过2’-FL治疗后，2’-FL干预组小鼠较过敏组(Allergy)小鼠血清IgE的含量明显的降低，治疗结束后，2’-FL低剂量组(2’-FL(L))小鼠血清IgE的含量虽然没有降低至正常组的水平，但相较于过敏组(Allergy)有显著的降低。说明本设计可有效缓解因过敏引起的IgE含量升高的问题。并且其中2’-FL高剂量组(2’-FL(H))治疗效果最好。说明2’-FL可以有助于缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应。
三、组织切片分析
颈椎脱臼处死小鼠后，置于75％酒精中浸泡5min，剖腹取出结肠和肺，于10％的福尔马林中固定1星期后用石蜡包埋。将组织切片5-7um厚，用hematoxylin and eosin(H/E)染色，Olympus BX-51普通光学显微镜观察小鼠结肠的病理形态，通过自动成像系统采集图像并拍照。结果见图2。
本实验中将不同组小鼠结肠组织制成病理学切片，致敏组小鼠结肠组织与空白对照组进行对比，致敏组肠粘膜上层有部分损伤、部分杯状细胞的结构严重破坏。本实验中2’-FL干预组，肠粘膜结构完整，无明显的炎性细胞浸润，隐窝结构比较完整。说明了本实验2’-FL可有效缓解β-乳球蛋白致敏小鼠的结肠组织炎症情况，具有提高肠道屏障的功效。
四、ELISA法检测血清中Treg相关细胞因子的含量
小鼠摘除眼球取血，新鲜血液在室温静置30min，3 000r离心15min，取上清，严格按照ELISA试剂盒说明书检测IL-10、TGF-β浓度。方法同2。结果见表2和图3。
表2不同组小鼠血清细胞因子的分泌水平
表中：治疗组与致敏组之间存在显著差异，*P<0.05。
本实验中，2’-FL干预组(2’-FL(H)、2’-FL(M)、2’-FL(L))与过敏组(Allergy)相比，IL-10和TGF-β的分泌水平显著增加(P＜0.05)，说明2’-FL可以通过诱导Treg细胞的分化，增强机体的免疫耐受，调节T细胞平衡进而维持免疫平衡。2’-FL高中低三个剂量组(2’-FL(H)、2’-FL(M)、2’-FL(L))对IL-10的作用没有剂量依赖性，而对TGF-β的作用具有剂量依赖性，其中2’-FL高剂量(2’-FL(H))最的效果最好。综上所述，2’-FL的低中高三种剂量组对机体都有不同程度的免疫调节作用，主要通过诱导Treg分化，调节免疫平衡，进而达到缓解机体过敏的目的。
综上可知：小鼠血清总IgE,2’-FL干预组(2’-FL(H)、2’-FL(M)、2’-FL(L))显著低于过敏组(Allergy)，接近正常组，且小鼠结肠组织切片，2’-FL干预组(2’-FL(H)、2’-FL(M)、2’-FL(L))肠粘膜结构完整，无明显的炎性细胞浸润，隐窝结构比较完整，由此可知：2’-FL治疗组对小鼠具有调节机体的免疫应答，维持机体的免疫平衡，提高肠道屏障功能，改善过敏的表观症状，有效缓解β-乳球蛋白诱导的过敏。因此，本实验得知2’-岩藻糖基乳糖(2’-FL)对β-乳球蛋白诱导的过敏症状具有缓解作用。
虽然本发明已以较佳的实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可以做各种改动和修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (6)
1.2'-岩藻糖基乳糖在制备缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的药物中的应用。
2.2'-岩藻糖基乳糖在制备辅助治疗由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的药物中的应用。
3.2'-岩藻糖基乳糖在制备缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的保健食品中的应用。
4.2'-岩藻糖基乳糖在制备辅助治疗由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的保健食品中的应用。
5.2'-岩藻糖基乳糖在制备具有缓解由β-乳球蛋白诱导的过敏反应的食品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述食品为乳饮料或含乳果冻。
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