CN109730937B

CN109730937B - 一种免洗巨藻双层卸妆液及其制备方法

Info

Publication number: CN109730937B
Application number: CN201910019647.1A
Authority: CN
Inventors: 钱进; 李传茂; 向琼彪; 刘德海; 黄建珍; 吕平平; 邓慧; 刘翠翠; 张伟杰; 张楚标
Original assignee: GUANGZHOU BAIYUN LIANJIA FINE CHEMICAL PLANT; Guangdong Danz Group Co Ltd; Guangzhou Keneng Cosmetic Research Co Ltd
Current assignee: Guangdong Danz Group Co Ltd; Guangzhou Keneng Cosmetic Research Co Ltd
Priority date: 2019-01-09
Filing date: 2019-01-09
Publication date: 2022-01-18
Anticipated expiration: 2039-01-09
Also published as: CN109730937A

Abstract

本发明涉及化妆品领域，尤其涉及一种免洗巨藻双层卸妆液及其制备方法。所述卸妆液含有的组合物成分包括：海藻油、酵素、聚甘油乳化剂、角鲨烷；所述酵素和海藻油为巨藻提取物。本发明的卸妆液乳化速度快，摇晃时瞬间乳化，放置后很快分层；质地温和，无需水洗，擦拭即可，卸妆效果好且具有明显的保湿润肤功效。

Description

一种免洗巨藻双层卸妆液及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品组合物技术领域，尤其涉及一种免洗巨藻双层卸妆液及其制备方法。

背景技术

海藻内含有多糖、矿物质、不饱和脂肪酸等活性成分。这些活性成分具有美白、保湿、降脂、抗衰老、抗炎症等功效。此外，海洋中海藻资源丰富，藻类生长繁殖速度极快。因此，藻类中活性物质的开发与研究逐渐引起了人们的重视。对于海藻内活性物质的应用有很多，如专利CN100998550A公开了一种由螺旋藻、海带、芦荟、仙人掌提炼出的精华素为主要原料的原生态皮肤面膜。专利200610122394.3提供了DHA微胶囊食品添加剂、DHA软胶囊保健品及其应用。专利200980149978.1提供了与一种或多种其它可食用成分组合的藻类生物质、藻油、包含微藻生物质的食品组合物。专利200710035799.8提供了一种含Ω-3 多不饱和脂肪酸的营养均衡调和油及其生产方法。专利201510865623.X公开了一种苹果味浒苔洗手液，包括海藻油8-15份。

酵素是生物体中的一种催化剂，是维持机体正常生命活动的必需物质。皮肤内含有多种酵素，它们能促进细胞的新陈代谢、清除分解衰老细胞，促进其正常脱落过程。将酵素用于化妆品中，可以起到美化皮肤的功效。将酵素用于化妆品的研究也有很多，像专利CN201810808838提供了一种海藻酵素温润洁面膏，包括保湿剂5-20％、清洁剂35-55％、香精0.05-0.12％、皮肤调理剂0.5-5％、增稠剂2.5-10％、乙二醇二硬脂酸酯0.5-3％、防腐剂0.24-0.36％、pH调节剂0.4-0.6％、提取物酵素0.1-10％，余量为水。专利 CN108685775A提供了一种植物酵素面膜及其制备方法和应用，其成分包括果蔬酵素粉12- 18份、二氢杨梅素7-11份、千金藤碱6-12份、金丝桃素10-20份、水解蛋黄粉5-17份、岩藻多糖2-7份。专利CN201710829049提供了一种海藻酵素面膜，其成分包括海藻提取液、乳化剂、保湿剂、滋补剂、增稠剂、珠光剂、成膜物质、香精和水。

卸妆油清洁力度强，但卸妆后的油脂难以清除干净，容易阻塞毛孔。因此如今的卸妆油中会添加大量的非离子型表面活性剂，以期达到水洗即可清除干净的目的。然而这些表面活性剂的刺激性较强，容易损伤皮肤。与卸妆油相比，卸妆水性质温和，肤感清爽，但使用温和的卸妆水，较难清除彩妆，使用卸妆力强的卸妆水又会对眼部造成刺激。双层卸妆液包含了水相和油相，综合了卸妆水和卸妆油的优点，其卸妆效果比卸妆水好，且卸妆后清爽不油腻。

现有的卸妆液配方中多采用矿油或合成油脂作为油相，并添加微量的植物提取物，以期达到润肤的效果。如专利CN201810040844提供了一种油水双层卸妆液的制备方法，包括保湿剂3-18％、pH调节剂、植物提取精华0-0.05％、润肤油脂30-50％、舒缓抗敏剂0.01- 1.0％、防腐剂0.1-0.5％、乳化剂0.1-5％、金属离子螯合剂0-0.2％、盐0.5-5％、去离子水补足至100％。专利CN201711454006，提供了一种双层卸妆液，包括油脂30-50wt％；醇类保湿剂1-10wt％；非离子型表面活性剂0.01-2wt％；天然保湿因子0.5-3wt％；有抑菌作用的非防腐剂0.1-0.4wt％；pH调节剂0.001-0.1wt％；螯合剂0.001-1wt％；水补充至100wt％。这些卸妆液性质温和，刺激性低，可用于眼唇部卸妆，但并不具备明显的润肤保湿效果。

针对这一问题，专利CN201810340861提供了一种高保湿性的卸妆液，包括丁二醇5-25 份；双丙甘醇2-8份；双甘油1-15份；PEG-7甘油椰油酸酯3-20份；甘油聚醚-26为1-8份；PEG-8甘油异硬脂酸酯1-18份；辛酸/癸酸甘油三酯2-25份；润肤剂2-38份。该专利采用了矿油和合成油脂卸妆，且添加了大量的表面活性剂，虽具有良好的卸妆效果和保湿效果，但其刺激性强不适用于眼唇部的卸妆。

发明内容

本发明目的之一在于提供一种含有巨藻油和巨藻酵素的组合物。

本发明进一步的目的在于提供一种用于卸妆的组合物。

本发明还有一个目的在于提供一种组合物在化妆品中的应用。

本发明进一步的目的在于提供一种温和的免洗巨藻卸妆液。

为解决以上技术问题，本发明提供了一种具有保湿修护效果的卸妆液。选用资源丰富的海藻巨藻，采用液态发酵技术制备巨藻酵素，使用超声破壁技术制备巨藻油提取液，同时选用了低刺激性的聚甘油乳化剂，并将它们与去离子水进行复配，制成低刺激性且具有保湿修护效果的巨藻双层卸妆液。采用的具体方案如下：

一方面，本发明提供了一种组合物，包含以下组分：海藻油、酵素、聚甘油乳化剂、角鲨烷；所述酵素和海藻油为巨藻提取物。

其中所述的酵素的制备方法包括以下步骤：

(1)将巨藻晒干后打碎成粉，加入蒸馏水混匀，在冰浴中进行超声处理，过滤除去脂肪得巨藻溶液；

(2)持续搅拌步骤(1)所得的巨藻溶液，并向其中加入NaOH溶液调节其pH；

(3)搅拌均匀后进行高压灭菌，再冷却，得到巨藻混合液；

(4)将枯草芽胞杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉混合，接种于培养液中；

(5)将步骤(4)所述的培养液加入到步骤(3)中的巨藻混合液中，发酵培养，制得发酵液；

(6)将步骤(5)的发酵液高温灭菌，离心，取上清液过滤，滤液浓缩，冷冻干燥，得酵素。

作为一种优选的实施方式，步骤(1)中，超声功率为250-400W，超声频率为20 kHz，超声时间为10-40min。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(1)中，超声功率为330W，超声频率为20 kHz，超声时间为35min。

作为一种优选的实施方式，步骤(1)中，采用0.22μm规格的滤膜过滤。

作为一种优选的实施方式，步骤(2)中，所述的pH为6-7.5。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(2)中，所述的PH为6.8。

作为一种优选的实施方式，步骤(2)中，所述的NaOH溶液的浓度为质量百分比1-5％。

作为一种优选的实施方式，步骤(3)中，用高压灭菌锅进行灭菌，温度为121℃，时间为10-20min。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(3)中，所述高压灭菌时间为15min。

作为一种优选的实施方式，步骤(3)中，冷却至25℃。

作为一种优选的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的总接种量为5×10²-8×10⁷CFU/mL。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的总接种量为5×10⁴-8×10⁶CFU/mL。

作为一种更进一步优选的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的总接种量为5×10⁵-8×10⁵CFU/mL。

作为一种可以选择的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的菌龄分别为20-36h、24-40h和3-6d。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的菌龄分别为29h、36h和5d。

作为一种优选的实施方式，步骤(5)中，将所述巨藻混合液置于摇床上进行发酵培养，摇床转速为100-150r/min，发酵温度为26-36℃。

作为一种优选的实施方式，步骤(5)中，将所述巨藻混合液置于摇床上进行发酵培养，摇床转速为100-150r/min，温度为30-35℃。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(5)中，所述的摇床转速为120r/min，温度为32℃。

作为一种优选的实施方式，步骤(5)中，所述的发酵培养时间为36-60h。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(5)中，所述的发酵培养时间为48h。

作为一种优选的实施方式，步骤(6)中，高温灭菌的温度为100℃，时间为15min。

作为一种优选的实施方式，步骤(6)中，离心转速为6000r/min，时间为20min。

作为一种优选的实施方式，步骤(6)中，上清液用双层滤纸过滤后，再用0.22μm的滤膜过滤。

作为一种优选的实施方式，步骤(1)中，蒸馏水与巨藻粉的质量比为(20-30):1。

作为一种优选的实施方式，步骤(1)中，蒸馏水与巨藻粉的质量比为26:1。

作为一种优选的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的质量比为(1-2)：(1-2)：(1-2)。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的质量比为2:1:1。

作为一种优选的实施方式，步骤(4)中，所述的培养液包括以下重量百分比的成分：牛肉膏0.2％-0.5％，蛋白胨0.5％-1％，氯化钠0.3％-6％，葡萄糖0.5％-1％，琼脂1.2％-2％。

作为一种优选的实施方式，步骤(4)中，所述培养液的PH为6.5-7.5。

作为一种可以选择的实施方式，所述海藻油的制备方法包括以下步骤：

(1)将巨藻晒干后打成巨藻粉，加入蒸馏水混匀，在冰浴下进行超声处理；

(2)将步骤(1)中所得的巨藻溶液与角鲨烷混合，在一定温度下震荡萃取；

(3)萃取结束后，在所得的巨藻混合液中加入β-环糊精，在一定温度下震荡进行精炼；

(4)待震荡结束后静置，进行离心处理，得上层油相；

(5)对步骤(4)中的上层油相进行2次过滤，得到巨藻油提取液。

作为一种优选的实施方式，步骤(1)中，巨藻粉与蒸馏水的质量比为1：(20-30)。

作为一种优选的实施方式，步骤(1)中，超声功率为250-400W，超声时间为20-45min。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(1)中，超声功率为250-400W，超声时间为20-40min。

作为一种更进一步优选的实施方式，步骤(1)中，巨藻超声功率为350W，超声时间为35min。

作为一种优选的实施方式，步骤(2)中，角鲨烷与巨藻粉的质量比为(20-30):1。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(2)中，角鲨烷与巨藻粉的质量比为28:1。

作为一种优选的实施方式，步骤(2)中，萃取温度为25-50℃，萃取时间为1-2h。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(2)中，萃取温度为30-50℃，萃取时间为1-2h。

作为一种更进一步优选的实施方式，步骤(2)中，萃取温度为40℃，萃取时间为2h。

作为一种优选的实施方式，步骤(3)中，β-环糊精的加入量为质量百分比0.1％-0.2％。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(3)中，β-环糊精的加入量为质量百分比0.15％- 0.2％。

作为一种优选的实施方式，步骤(3)中，精炼温度为30-55℃，精炼时间为1-5h。

作为一种更为优选的实施方式，步骤(3)中，精炼温度为30-50℃，精炼时间为1-4h。

作为一种更进一步优选的实施方式，步骤(3)中，精炼温度为50℃，精炼时间为1.5h。

作为一种可以选择的实施方式，所述的海藻油、酵素、聚甘油乳化剂、角鲨烷的重量份数分别为0.2-0.5份、0.1-1份、0.1-1份、30-50份。

作为一种优选的实施方式，所述的海藻油、酵素、聚甘油乳化剂、角鲨烷的重量份数分别为0.3-0.4份、0.5-0.8份、0.3-0.6份、39-45份。

作为一种优选的实施方式，所述聚甘油乳化剂选自聚甘油-6肉豆蔻酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-5硬脂酸酯、聚甘油-10五油酸酯中一种或多种。

作为一种更为优选的实施方式，所述聚甘油乳化剂为聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10 五油酸酯的组合。

作为一种更进一步优选的实施方式，所述聚甘油-10肉豆蔻酸酯，聚甘油-10五油酸酯的含量以重量百分比计分别为0.3％-0.5％、0.05％-0.2％。

作为一种可以选择的实施方式，所述的组合物还包括以下重量份数的组分：抗氧化剂 0.05-1份、EDTA-2钠0-0.2份、PCA椰油酰精氨酸乙酯盐0.01-0.1份、去离子水40-60份。

作为一种优选的实施方式，所述抗氧化剂为BHT、BHA、维生素E中的一种或几种。

另一当面，本发明还提供了上述组合物在化妆品中的应用。

作为一种可以选择的实施方式，所述的化妆品包括卸妆产品。

作为一种优选的实施方式，所述的化妆品为油水分层的卸妆液。

还有一方面，本发明提供了一种免洗的巨藻双层卸妆液，含有上述组合物。

与现有技术相比，本发明取得的有益效果：

(1)本发明的卸妆液乳化速度快，摇晃时瞬间乳化，放置后很快分层；

(2)本发明所述的卸妆液质地温和，无需水洗，擦拭即可；

(3)本发明所述卸妆液，卸妆效果好且具有明显的保湿润肤功效。

附图说明

图1卸妆前后效果对比：A为卸妆前的效果；B为卸妆后的效果；其中1为使用贝德玛卸妆水，2为使用实施例6中的卸妆液1。

具体实施方式

以下通过具体的实施例进一步说明本发明的技术方案，具体实施例不代表对本发明保护范围的限制。其他人根据本发明理念所做出的一些非本质的修改和调整仍属于本发明的保护范围。

实施例1巨藻酵素的制备方法

(1)将巨藻晒干后打成巨藻粉，加入蒸馏水混匀，然后超声波分散溶解。使用0.22μm 规格的滤膜过滤除去脂肪；

(2)持续搅拌所得的巨藻溶液，并向其中加入质量百分比1-5％的NaOH溶液调节其pH 值；

(3)搅拌均匀后用高压灭菌锅121℃灭菌15min，再冷却至25℃，得到巨藻混合液；

(4)培养液由以下重量百分比的成分组成：牛肉膏0.2％，蛋白胨0.8％，氯化钠0.5％，琼脂2％，葡萄糖0.8％。用质量百分比2％的NaOH溶液调节其pH值为6.5-7.5，然后将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉以一定比例混合，组成混合菌，接种于培养液中；

(5)将步骤(4)中的接种了混合菌的培养液加入到步骤(3)所得的巨藻混合液中，置于摇床上进行发酵培养，制得发酵液；

(6)将步骤(5)发酵液100℃高温灭菌15min，再进行离心分离，离心转速为6000 r/min，时间为20min，取上层清液用双层滤纸过滤，再用0.22μm规格的滤膜过滤，滤液浓缩，冷冻干燥，制得巨藻酵素。

备注：本发明中所使用的枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的菌龄分别为29h、36 h和5d。

表1巨藻酵素各个制备方法中的参数

其中，接种量(单位：CFU/mL)是指菌落在培养基中的浓度。

实施例2清除自由基能力评估(体外DPPH法)

准确称取DPPH试剂3.5mg，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，取2mL至100mL容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol/L DPPH溶液，置于冰箱中冷藏备用。

准确称取方法1-11制备的干燥的巨藻酵素各2mg，用无水乙醇溶解，并定量转入50mL容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10mL至100mL容量瓶中，摇匀得浓度为4mg /L巨藻酵素试液。

在10mL比色管中依次加入4.0mLDPPH溶液和4.0mL巨藻酵素试液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm比色皿在517nm波长处测吸光值(A)，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。按下式计算自由基清除率(K)：K(％)＝[1-(Ai-Aj)/Ac]*100％。结果如下：

表2清除自由基能力评估

结果表明，方法9制得的巨藻酵素对DPPH自由基清除效果最好。

实施例3巨藻油提取液的制备

(3)萃取结束后，在所得的巨藻混合液中按比例加入β-环糊精，在一定温度下震荡进行精炼；

(4)待震荡结束后静置2h，进行离心处理，离心速度为8000r/min，离心时间10min。

(5)再使用规格为0.22μm的过滤膜对上层油相进行2次过滤，得到巨藻油提取液。

表3巨藻油提取液各个制备方法的参数

实施例4巨藻油提取效果评价

分别测量方法12-21中巨藻油的提取量，其结果如表4所示。

巨藻油提取量的计算公式如式(1)所示：m_a＝m₁-m₀(1)；其中m_a为巨藻油提取量，m₁为提取巨藻油后的角鲨烷与巨藻油混合油的质量，m₀为提取前角鲨烷的质量。

表4巨藻油提取效果评价

方法	12	13	14	15	16	17	18	19	20	21
											m<sub>a</sub>(g)	0.11	0.15	0.18	0.20	0.19	0.18	0.21	0.19	0.14	0.10
m<sub>1</sub>(g)	20.11	23.15	25.18	28.20	30.19	30.18	28.21	25.19	23.14	20.10
											m<sub>0</sub>(g)	20	23	25	28	30	30	28	25	23	20

根据结果可以看出，方法18制备的巨藻油的含量最高。

实施例5卸妆液分层实验

根据前期的实验，选用实施例3方法18所制备的巨藻油提取液，并将各组分按表5所示的比例混合，置于PET瓶中。将成品摇匀后静置，观察体系状态，结果如表6所示。

表5卸妆液分层实验

表6实验现象

方法	现象
		方法A	摇匀后出现乳白色，静置5分钟后出现分层
方法B	摇匀后出现乳白色，静置4分钟后出现分层
		方法C	摇匀后出现乳白色，静置1分钟后出现分层

根据表6可以看出，方法A-C所配置的卸妆液乳化速度快，其中方法C配置的卸妆液，分层速度最快，为最适宜的配比。

实施例6卸妆液应用实施例及对比例

选用实施例3方法18制备的巨藻油提取液。从实施例4可知，巨藻油提取液中巨藻油的含量为(质量百分比％)：(28.21-28)/28.21＝0.74％。因此，卸妆油1-3、对比例3中，巨藻油提取液的质量百分比为45％、40％、40％、20％时，提取液中巨藻油的含量(质量百分比)分别为0.33％、0.30％、0.30％、0.15％；相应地，提取液中角鲨烷的含量(质量百分比)分别为44.67％、39.7％、39.7％、19.85％。

按照表7所示的配比将A相和B相在常温下溶解后混合，搅拌均匀后灌装，即可得到双层卸妆液(油水分层的卸妆液)。

其中，聚甘油乳化剂具体为聚甘油-10肉豆蔻酸酯和聚甘油-10五油酸酯的组合，两种成分在卸妆液体系中的含量以重量百分比计分别为0.4％、0.1％。

其中卸妆液3与实施例5方法C中的组分和含量相同。

表7卸妆液应用实施例及对比例

实施例7卸妆效果评价

选取实施例6中的卸妆液1-3、对比例1-3及市售的贝德玛卸妆水作为测试样品。挑选 10位身体健康的测试者，选用等量的口红与睫毛膏在手背上画线，待干了以后使用等体积的待测样品在画线部位均匀涂开，再使用纸巾擦拭。分别评估各个待测样品对睫毛膏和口红的清洁能力。采用10分制，10分为卸妆效果好，9分次之，1分最差。

其结果如表8与图1所示。

表8卸妆效果评价

注：表8的第一列的1-10指的是测试者编号。表格其他的数字为效果测试分值。

根据表8所示结果可以看出，实施例6中的卸妆液1-3卸妆效果较好，对比例2-3的卸妆液卸妆效果最弱。

与市面上所售的贝德玛卸妆水相比，本发明制备的卸妆液1-3较贝德玛卸妆水的卸妆力强。

实施例8皮肤刺激性测试

人体斑贴试验，试验方法依据《化妆品安全技术规范》(2015年版)。

将实施例6制备的卸妆液1-3，市面上的一款卸妆油和另一款卸妆水作为测试样品。选取 40名志愿者，取受试物0.02mL-0.025mL涂于斑试器内，用专用胶带贴敷于受试者的前臂内侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h，于去除受试物斑贴试验胶带后30min 观察皮肤反应，并记录观察结果。

表9皮肤刺激性实验

根据表9可以看出，使用本发明实施例6制备的卸妆液1-3，受试者均未出现不良反应。然而，使用某市售卸妆水和某市售卸妆油的受试者出现了不同程度的不良反应。其中，使用某市售卸妆水的受试者有1名出现了1级反应，使用某市售卸妆油的受试者有两名出现1级反应，1名出现了2级反应。说明本发明的卸妆液较为温和、安全。

实施例9卸妆液保湿效果评价

挑选40位女性测试者，选取实施例6中的卸妆液1及对比例1-3所制的卸妆油为测试样品，对测试者进行保湿效果评估。具体实验设计如下：

每个样品选取40名有效的受试者参加测试，在同一个测试条件下进行测试，温度20- 22℃、湿度40-60％。试验前，受试者由工作人员统一清洁双手前臂内侧；在受试者前臂内侧组号测量区域标记，试验区域面积为3cm×3cm；进行皮肤角质层水分的初始值(0h)测试；在受试者前臂内侧涂抹产品，产品用量为(0.0171～0.0189)g，样品区及空白对照区(不涂抹样品)按测试区域随机分布表分布于志愿者左或右前臂内侧区域；使用皮肤水分含量测试探头对使用前、使用后第2h、使用后第6h、使用后第8h进行皮肤角质层水分含量测试，结果如表10所示。

表10卸妆液保湿效果评价

从表10中的实验结果证明，本发明的卸妆液与对比例1-2的卸妆油比较，在使用8小时之后，仍然具有较好的含水量，即其保湿效果好，能够更长久高效。

Claims

1.一种免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含以下组分：海藻油、酵素、聚甘油乳化剂和角鲨烷；所述酵素和海藻油为巨藻提取物；

所述的海藻油、酵素、聚甘油乳化剂、角鲨烷的重量份数分别为0.2-0.5份、0.1-1份、0.1-1份、30-50份；

所述酵素的制备方法包括以下步骤：

(3)搅拌均匀后进行高压灭菌，再冷却，得到巨藻混合液；

(4)将枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉接种于培养液中；

(6)将步骤(5)的发酵液高温灭菌，离心，取上清液过滤，滤液浓缩，冷冻干燥，得酵素；

包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法包括以下步骤：

(2)将步骤(1)中所得的巨藻溶液与所述角鲨烷混合，在一定温度下震荡萃取；

(4)待震荡结束后静置，进行离心处理，得上层油相；

(5)对步骤(4)中的上层油相进行2次过滤，得到巨藻油提取液；

所述聚甘油乳化剂选自聚甘油-6肉豆蔻酸酯、聚甘油-10肉豆蔻酸酯、聚甘油-10五硬脂酸酯、聚甘油-10五油酸酯中一种或多种。

2.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(1)中，超声功率为250-400W，超声频率为20kHz，超声时间为10-45min。

3.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(1)中，超声功率为330W，超声频率为20kHz，超声时间为35min。

4.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(1)中，采用0.22μm规格的滤膜过滤。

5.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(2)中，所述的pH为6-7.5。

6.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(2)中，所述的pH为6.8。

7.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(2)中，所述的NaOH溶液的浓度为质量百分比1-5％。

8.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(3)中，用高压灭菌锅进行灭菌，温度为121℃，时间为10-20min。

9.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(3)中，所述高压灭菌时间为15min。

10.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(3)中，冷却至25℃。

11.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的总接种量为5×10²-8×10⁷CFU/mL。

12.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的总接种量为5×10⁴-8×10⁶CFU/mL。

13.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的总接种量为5×10⁵-8×10⁵CFU/mL。

14.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的菌龄分别为20-36h、24-40h和3-6d。

15.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的菌龄分别为29h、36h、5d。

16.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(5)中，将所述巨藻混合液置于摇床上进行发酵培养，摇床转速为100-150r/min，发酵温度为26-36℃。

17.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(5)中，将所述巨藻混合液置于摇床上进行发酵培养，摇床转速为100-150r/min，发酵温度为30-35℃。

18.如权利要求17所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(5)中，所述的摇床转速为120r/min，发酵温度为32℃。

19.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(5)中，所述的发酵培养时间为36-60h。

20.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(5)中，所述的发酵培养时间为48h。

21.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(6)中，高温灭菌的温度为100℃，时间为15min。

22.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(6)中，离心转速为6000r/min，时间为20min。

23.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(6)中，上清液用双层滤纸过滤后，再用0.22μm的滤膜过滤。

24.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(1)中，蒸馏水与巨藻粉的质量比为(20-30):1。

25.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(1)中，蒸馏水与巨藻粉的质量比为26:1。

26.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的质量比为(1-2)：(1-2)：(1-2)。

27.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和黑曲霉的质量比为2:1:1。

28.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述的培养液包括以下重量百分比的成分：牛肉膏0.2％-0.5％，蛋白胨0.5％-1.0％，氯化钠0.3％-0.6％，葡萄糖0.5％-1％，琼脂1.2％-2％。

29.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述酵素的制备方法步骤(4)中，所述培养液的pH为6.5-7.5。

30.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(1)中，巨藻粉与蒸馏水的质量比为1：(20-30)。

31.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(1)中，超声功率为250-400W，超声时间为20-45min。

32.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(1)中，超声功率为250-400W，超声时间为20-40min。

33.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(1)中，超声功率为350W，超声时间为35min。

34.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(2)中，角鲨烷与巨藻粉的质量比为(20-30):1。

35.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(2)中，角鲨烷与巨藻粉的质量比为28:1。

36.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(2)中，萃取温度为25-50℃，萃取时间为1-2h。

37.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(2)中，萃取温度为30-50℃，萃取时间为1-2h。

38.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(2)中，萃取温度为40℃，萃取时间为2h。

39.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(3)中，精炼温度为30-55℃，精炼时间为1-5h。

40.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(3)中，精炼温度为30-50℃，精炼时间为1-4h。

41.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，包含所述海藻油的巨藻油提取液的制备方法步骤(3)中，精炼温度为50℃，精炼时间为1.5h。

42.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述的海藻油、酵素、聚甘油乳化剂、角鲨烷的重量份数分别为0.3-0.4份、0.5-0.8份、0.3-0.6份、39-45份。

43.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述聚甘油乳化剂为聚甘油-10肉豆蔻酸酯和聚甘油-10五油酸酯的组合。

44.如权利要求1所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述的卸妆液还包括以下重量份数的组分：抗氧化剂0.05-1份、EDTA-2钠0-0.2份、PCA椰油酰精氨酸乙酯盐0.01-0.1份、去离子水40-60份。

45.如权利要求44所述的免洗的巨藻双层卸妆液，其特征在于，所述抗氧化剂为BHT、BHA、维生素E中的一种或几种。