CN109721539A - 吡唑酰胺类衍生物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种通式Ⅰ所示吡唑类衍生物或其立体异构体、互变异构体,其制备方法以及预防和/或治疗血栓栓塞性疾病的药物的用途。

Description

吡唑酰胺类衍生物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种通式Ⅰ所示吡唑类衍生物或其立体异构体、互变异构体，其制备方法以及含有它们的药物组合物以及其用于制备预防和/或治疗血栓栓塞性疾病的药物的用途。

背景技术

血栓栓塞性疾病不仅发病率高，而且致死率和致残率也很高，如由血栓栓塞引起的心肌梗死、脑梗死、肺梗死居各种死亡原因之首。对血栓性疾病的防治药物主要包括抗凝血、抗血小板和溶栓药物。出血是目前临床抗栓药物防治最主要、最常见的并发症。传统的抗凝药物，如华法林、肝素、低分子量肝素(LMWH)，以及近年上市的新药，如FXa抑制剂(利伐沙班、阿哌沙班等)和凝血酶抑制剂(达比加群酯、水蛭素等)，对减少血栓形成均具有较好效果，但都还面临着共同的不足——可能引起出血并发症。因此，研发具有出血副作用小的抗栓新药具有重要价值。

凝血因子Ⅺ(FⅪ)作为凝血接触激活途径的一员首先被大家认识，其在体内活化形成凝血因子Ⅺa。然而随着研究的深入，人们对传统的瀑布凝血理论进行了修正，修正的理论认为：FⅪ可被凝血酶激活形成FⅪa，并且在持续不断的凝血酶的生成和纤维蛋白溶解的抑制中发挥作用。近年来，有关人类FⅪ缺陷或FⅪ水平升高的临床资料，以及动物FⅪ缺陷或被抑制的抗栓实验研究表明，FⅪ及FⅪa是出血风险小的抗栓防治新靶点，针对FⅪ及FⅪa靶点的抗栓药物出血副作用小。因此，开发凝血因子Ⅺa抑制剂类药物有望克服传统抗凝药物的共同缺点：出血并发症，具有重要的临床需求和广阔的市场前景。

本发明的一个目的是提供具有抗凝作用的新的物质。

特别是这些物质可以预防和/或治疗血栓栓塞性疾病，同时可以在一定程度上避免现有技术的不足，提供了具有通式Ⅰ结构的化合物或其立体异构体、互变异构体。

本发明另一个目的是提供具有通式Ⅰ结构的化合物或其立体异构体、互变异构体的制备方法。

本发明的再一个目的是提供含有通式Ⅰ结构的化合物或其立体异构体、互变异构体用于制备预防和/或治疗血栓栓塞性疾病的药物的用途。

发明内容

本发明涉及一种通式Ⅰ所示的化合物或其立体异构体、互变异构体，具有下列结构:

其中：

A选自

R^a1、R^a2或R^a3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I；

B选自如下结构之一：

R^b1各自独立的选自H、C_1-6烷基；

R^b2或R^b3各自独立的选自H或烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基的取代基所取代；

m选自1、2或3；

n选自1或2；

R₁选自H或C_1-4烷基；

R₂选自-(CO)R^c、5～6元碳环或5～6元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至5个选自H、F、Cl、Br、羟基、氨基、C_1-6烷基酰胺基、取代或未取代的3～7元环烷基酰胺基、-NH(CO)R^d、羧基、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基的取代基所取代；

R^c选自

R^d选自

本发明优选方案，一种通式Ⅰ所示的化合物或其立体异构体、互变异构体，其中：

A选自

R^a1、R^a2或R^a3各自独立的选自H、F、Cl；

B选自如下结构之一：

R^b1各自独立的选自H、Me或Et；

R^b2或R^b3各自独立的选自C_1-2烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基的取代基所取代；

m选自1、2或3；

n选自1或2；

R₁选自H或C_1-2烷基；

R₂选自-(CO)R^c、5～6元碳环或5～6元杂环，进一步优选苯、吡啶、吗啉酮或-(CO)R^c，所述苯基任选进一步被0至5个选自H、F、Cl、羟基、氨基、C_1-6烷基酰胺基、取代或未取代的3～7元环烷基酰胺基、-NH(CO)R^d的取代基所取代；

R^c选自

R^d选自

本发明更优选方案，一种通式Ⅰ所示的化合物或其立体异构体、互变异构体，优选：

本发明涉及本发明通式Ⅰ所述的任意化合物或其立体异构体、互变异构体、在制备预防/治疗血栓栓塞性疾病和/或血栓栓塞并发症的药物中的用途。

在本发明范围内，“血栓栓塞性疾病”尤其包括疾病例如具有ST段抬高(STEMI)和不带有ST段抬高(无STEMI)的心肌梗塞，稳定/不稳定心绞痛，冠状动脉介入治疗例如血管成形术或主动脉冠状动脉旁路手术后的再阻塞和再狭窄，外周血管闭塞性疾病、肺栓塞、深度静脉血栓形成和肾静脉血栓形成，暂时性缺血发作以及血栓形成型和血栓栓塞型脑卒中。

所述的血栓栓塞性疾病还包括心脏性血栓栓塞，例如中风、脑缺血、全身血栓栓塞和缺血，还例如急性、间歇性或持续性心脏心律不齐、心脏复律、心脏瓣膜疾病或人造心脏瓣膜。

所述的血栓栓塞性疾病还包括动脉粥样硬化血管疾病和炎症性疾病(如运动系统风湿性疾病)，以及由其他疾病(如糖尿病、肿瘤疾病，特别是进行了大外科介入或放/化疗的患者)引起的血栓栓塞。

所述的血栓栓塞性疾病还包括弥散型内渗凝血(DIC)。

所述的血栓栓塞并发症包括微血管溶血性贫血，诸如血液透析和心脏瓣膜修复术的体外血液循环情况下发生的并发症。

本发明涉及一种治疗与凝血因子Ⅺa有关的疾病的方法，所述方法包括给药本发明所述的化合物或其立体异构体来制备的药物。

除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。

本发明涉及到被多个取代基取代时，各取代基可以相同或不相同。

本发明涉及到含有多个杂原子时，各杂原子可以相同或不相同。

本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括¹²C、¹³C、¹⁴C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括¹⁶O、¹⁷O和¹⁸O，硫的同位素包括³²S、³³S、³⁴S和³⁶S，氮的同位素包括¹⁴N和¹⁵N，氟的同位素¹⁹F，氯的同位素包括³⁵Cl和³⁷Cl，溴的同位素包括⁷⁹Br和⁸¹Br。

术语“烷基”是指饱和的脂肪族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的烷基，非限制性实施例包括，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正壬基，及其各种支链异构体等；更优选的是含有1至4个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧基、羧酸酯基、杂环烷巯基。

“烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基如本文上面所定义。烷氧基可以是取代的或未取代的，其非限制性实施例包括，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基或己氧基，优选具有1至12元烷氧基。当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧基、羧酸酯基或杂环烷基巯基。

“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香可以是3至8元的单环，4至12元双环或者10至15元三环系统，碳环可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环戊烯、环己二烯、环庚三烯、苯基、萘基、苯并环戊基、二环[3.2.1]辛烷基、二环[5.2.0]壬烷基、三环[5.3.1.1]十二烷基、金刚烷基或螺[3.3]庚烷基等。碳环可以被取代，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷巯基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧基、羧酸酯基或杂环烷基巯基。

“杂环”是指取代的或未取代的饱和或者不饱和的芳香环或非芳香环，芳香环和非芳香环可以是3至8元的单环，4至12元双环或者10至15元三环系统，且由至少一个选自N、O或S的杂原子组成，优选3至10元杂环，杂环的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环可以连接在杂原子或者碳原子上。杂环可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括，环氧乙烷基、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环基、1,4-二氧戊环基、1,3-二氧六环基、氮杂环庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷基、二氢呋喃基、二氢吡喃基、二噻戊环基、四氢呋喃、四氢吡咯基、四氢咪唑、四氢噻唑、四氢吡喃、苯并咪唑、苯并吡啶、吡咯并吡啶、苯并二氢呋喃、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基、氧杂螺[3.3]庚烷基等；当被取代时，取代基优选为1至5个，取代基独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、杂环烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧基、羧酸酯或杂环烷基巯基。

“氨基”是指-NH₂，可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为1至3个，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、羟基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、杂环烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、羟基烷基、羧基或羧酸酯。

“芳基”是指取代的或未取代的6至14元全碳单环或稠和多环基团，具有共轭的π电子体系的多环基团，优选6至10元芳香环，其非限定性实施例包括苯基或萘基；所述芳基可以稠和与杂芳基、杂环基或环烷基，且与母体结构连接的部分为芳基，其非限定性实施例包括苯并呋喃基、苯并环戊烷基或苯并噻唑基等。当被取代时，取代基优选为1至5个，取代基独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧基、羧酸酯基或杂环烷基巯基。

本发明的“＝O”为本领域通常习惯用法，是指以双键相连的氧原子，譬如羰基中与碳原子相连的双键氧原子。

“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。

“任选”、“任选的”或“任选地”意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“芳基任选被烷基取代”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代的情形。

“取代或未取代的”是指基团可以被取代或不被取代的情形，若在本发明中没有指出基团可以被取代，则表示该基团为未取代的情形。

“取代”是指基团中一个或多个氢原子被其它基团取代的情形，如果所述的基团被氢原子取代，形成的基团与被氢原子取代的基团相同。基团被取代的情形，例如氨基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_3-6碳环、3至6元杂环任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氰基、氨基、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基的取代基所取代，形成的基团包括但不限于甲基、氯甲基、三氯甲基、羟基甲基、-CH₂OCH₃、-CH₂SH、-CH₂CH₂CN、-CH₂NH₂、-NHOH、-NHCH₃、-OCH₂Cl、-OCH₂OCH₂CH₃、-OCH₂CH₂NH₂、-OCH₂CH₂SH、-OCH₂CH₂OH、1-羟基环丙基、2-羟基环丙基、2-氨基环丙基、4-甲基呋喃基、2-羟基苯基、4-氨基苯基、苯基。

本发明化合物的合成方法:

其中：A、R₁、R₂、B的定义与通式Ⅰ一致。

化合物Ⅰa，胺化合物可以通过常规合成方法制备或购买获得。

化合物Ⅰa在酸性或碱性条件下与胺化合物反应可得到通式Ⅰ化合物。

具体实施方式

下面结合实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但不限于此。

化合物的结构上通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10^-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker AV400型核磁共振波谱仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl₃),氘代甲醇(CD₃OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。

MS的测定时用Thermo scientific(finnigan lcq ad)(ESI)。

薄层层析硅胶板使用烟台黄海GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm,薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。

柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。

本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于百灵威科技，阿拉丁科技等公司。

氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。

氢气氛是指反应瓶连接一个约1L溶剂的氢气气球。

实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。

实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。

实施例中无特殊说明，反应温度是室温。

室温为最适宜的反应温度，为20～30℃。

中间体1：

(S)-4-(2-氨基-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸甲酯(中间体1)

(S)-methyl4-(2-amino-3-phenylpropanamido)benzoate

第一步：(S)-4-[2-(叔丁氧羰基)氨基-3-苯基丙酰胺基]苯甲酸甲酯(1b)

(S)-methyl-4-(2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-phenylpropanamido)benzoate(1b)

将Boc-Phe(1a)(10.0g，37.7mmol)溶于100mLCH₂Cl₂中，加入10mL吡啶和4-氨基苯甲酸甲酯(5.7g,37.7mmol)，-10℃滴加三氯氧磷(5.8g，37.7mmol)，加毕，继续搅拌2h；向反应液中加入20mL水，分出有机相，1M盐酸洗涤一次，干燥，旋干后得到标题化合物(S)-4-[2-(叔丁氧羰基)氨基-3-苯基丙酰胺基]苯甲酸甲酯(1b)，(11.6g,收率77.3％)。

第二步：(S)-4-(2-氨基-3-苯基丙酰胺基)苯甲酸甲酯(中间体1)

(S)-methyl 4-(2-amino-3-phenylpropanamido)benzoate

(S)-4-[2-(叔丁氧羰基)氨基-3-苯基丙酰胺基]苯甲酸甲酯(1b)(11.5g,28.9mmol)溶于50mLEtOAc中，搅拌下滴加50mL饱和的HCl/EtOAc溶液，加毕，室温搅拌8h，抽滤得到中间体1的盐酸盐，暗白色固体(8.2g，收率84.3％)(不需要处理，直接进行下一步反应)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.27(1H,s),8.45(3H,s),7.93-7.91(2H,d,J＝8.4),7.73-7.71(2H,d,J＝8.8),7.32-7.23(5H,s),4.34(1H,s),3.81(3H,s),3.24-3.12(2H,m).

MS m/z＝299.09[M+1]

中间体2：

(S)-5-(2-氨基-3苯基丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体2)

(S)-ethyl5-(2-amino-3-phenylpropanamido)-1H-indole-2-carboxylate

第一步：(S)-5-[2-(叔丁氧羰基)氨基-3-苯基丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2b)

将Boc-Phe(1a),(5g,18.9mmol)溶于50mL CH₂Cl₂中，加入5mL吡啶和5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(3.9g,18.9mmol)，-10℃滴加三氯氧磷(2.9g，18.9mmol)，加毕，继续搅拌2h；向反应液中加入10mL水，分出有机相，1M盐酸洗涤一次，干燥，旋干后得到标题化合物(S)-5-{2-(叔丁氧羰基)氨基-3-苯基丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2b)，(6.6g,收率77.6％)。

第二步：(S)-5-(2-氨基-3苯基丙酰胺基)-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体2)

(S)-ethyl 5-(2-amino-3-phenylpropanamido)-1H-indole-2-carboxylate

(S)-5-[2-(叔丁氧羰基)氨基-3-苯基丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2b)(6.5g,14.4mmol)溶于15mL EtOAc中，搅拌下滴加30mL饱和的HCl/EtOAc溶液，加毕，室温搅拌8h，抽滤后得到中间体2的盐酸盐，浅黄色固体(4.9g，收率87.7％)，(不需要处理，直接进行下一步反应)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.86(1H,s),10.46(1H,s),8.36(2H,s),7.91(1H,s),7.33-7.12(8H,m),4.35-4.29(2H,m),4.19(1H,m),3.13-3.08(2H,m),1.34-1.31(3H,t,J＝7.2and 6.8).

MS m/z＝352.10[M+1]

中间体3：

(S)-5-[2-氨基-3-(4-氟苯基)丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体3)

(S)-ethyl 5-(2-amino-3-(4-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

第一步：(S)-5-[2-(叔丁氧羰基)-氨基-3(4-氟苯基)丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(3b)

将BOC-L-4-氟苯丙氨酸(3a),(5.4g，18.9mmol)溶于50mL二氯甲烷中，加入5mL吡啶和5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(3.9g,18.9mmol)，-10℃滴加三氯氧磷(2.9g，18.9mmol)，加毕，继续搅拌2h；向反应液中加入10mL水，分出有机相，1M盐酸洗涤一次，干燥，旋干后得到标题化合物(S)-5-[2-(叔丁氧羰基)-氨基-3(4-氟苯基)丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(3b)，(6.3g,收率71.1％)。

第二步：(S)-5-[2-氨基-3(4-氟苯基)丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体3)

(S)-ethyl 5-(2-amino-3-(4-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

(S)-5-[2-(叔丁氧羰基)-氨基-3(4-氟苯基)丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(3b)(6.2g,13.2mmol)溶于15mLEtOAc中，搅拌下滴加30mL饱和的HCl/EtOAc溶液，加毕，室温搅拌8h，抽滤，得到中间体3的盐酸盐，棕色固体(4.6g，收率85.7％)(不需要处理，直接进行下一步反应)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ11.85(1H,s),10.84(1H,s),8.45(2H,s),7.96(1H,s),7.41-7.36(4H,m),7.15-7.11(3H,m),4.36-4.29(3H,m),3.15-3.09(2H,m),1.34-1.30(3H,m).

MS m/z＝370.06[M+1]

以与中间体3的类似的制备方式，以Boc-L-3-氟苯丙氨酸、Boc-3-(4-吡啶基)-L-丙氨酸、Boc-3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸、Boc-3-(2-吡啶基)-L-丙氨酸、Boc-L-4-硝基苯丙氨酸为起始原料与5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯反应，制备中间体4、中间体5、中间体6、中间体7和中间体8。

中间体9：

(S)-2-氨基-3-(3-氟苯基)-N-{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}丙酰胺(中间体9)

(S)-2-amino-3-(3-fluorophenyl)-N-(1'-oxo-1'H-spiro[cyclobutane-1,3'-oxazolo[3,4-a]indol]-7'-yl)propanamide

第一步：

{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-氨基}甲酸叔丁酯(9b)

tert-butyl(1'-oxo-1'H-spiro[cyclobutane-1,3'-oxazolo[3,4-a]indol]-7'-yl)carbamate

将5-[(叔丁氧羰基)氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(9a)(5.5g，20mmol，采用公知的方法“Journal of American Chemical Society,2007，129(17)，5384-5390”制备而得)溶解于150mL THF中，冰浴下加入N,N'-羰基二咪唑(6.3g,40mmol)，反应液升至室温，搅拌2小时，加入环丁酮(3.5g,50mmol)，1,8-二氮杂二环十一碳-7-烯(7.9g,52mmol)，搅拌4小时。反应液中加入250mL水，用EtOAc萃取(200mL×3)，合并有机相，用100mL饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩，柱层析(n-hexane：EtOAc＝10:1～1:1)得到标题产物{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-氨基}甲酸叔丁酯9b(3.5g，收率53.2％)。

第二步：

7'-氨基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-1'-酮(9c)

7'-amino-1'H-spiro[cyclobutane-1,3'-oxazolo[3,4-a]indol]-1'-one

将{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-氨基}甲酸叔丁酯49b(3.5g，10.7mmol)溶解于20mLEtOAc中，加入50mL饱和HCl的EtOAc溶液，室温搅拌8小时。反应减压浓缩，得到标题产物7'-氨基-1'-H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-1'酮盐酸盐(2.8g,淡黄色固体)，产品直接进行下一步反应。

第三步：

(S)-(3-(3-氟苯基)-1-氧-1-{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}丙基-2-基)氨基甲酸叔丁酯(9d)

(S)-tert-butyl(3-(3-fluorophenyl)-1-oxo-1-((1'-oxo-1'H-spiro[cyclobutane-1,3'-oxazolo[3,4-a]indol]-7'-yl)amino)propan-2-yl)carbamate

将BOC-L-3-氟苯丙氨酸(2.7g，9.5mmol)溶于20mL吡啶中，加入7'-氨基-1'-H-螺[环丁基-1-3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-1'酮盐酸盐(2.5g,9.5mmol)，冰浴，滴加三氯氧磷(1.5g，9.5mmol)，加毕，室温搅拌1h；向反应液中加入50mL水，抽滤，滤饼用水洗涤(20mL×2)，用EtOAc溶解，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚：EtOAc＝20：1～1：2)得到标题化合物(S)-(3-(3-氟苯基)-1-氧-1-{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}丙基-2-基)氨基甲酸叔丁酯(9d)，(3.3g,收率73.2％)。

第四步：(S)-2-氨基-3-(3-氟苯基)-N-{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}丙酰胺(中间体9)

(S)-2-amino-3-(3-fluorophenyl)-N-(1'-oxo-1'H-spiro[cyclobutane-1,3'-oxazolo[3,4-a]indol]-7'-yl)propanamide

(S)-{{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}-3-苯丙酰基-2-基}-氨基甲酸叔丁酯(9d)(3.2g,6.7mmol)溶于10mLEtOAc中，搅拌下滴加30mL饱和HCl/EtOAc溶液，加毕，室温搅拌8h，旋蒸除溶剂得到标题化合物(S)-2-氨基-N-{1'-羰基-1'H-螺[环丁基-1,3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}-3-苯丙酰胺中间体9的盐酸盐，暗白色固体(2.5g，收率90.2％)，(不需要处理，直接进行下一步反应)。

MS m/z＝394.15[M+1]

以与中间体9的类似的制备方式，以丙酮、3-氧杂环丁酮、环戊酮、二氢-3(2H)-呋喃酮、环己酮、四氢吡喃酮起始原料与5-[(叔丁氧羰基)氨基]-1H-吲哚-2-羧酸(3a)反应，制备中间体10、中间体11、中间体12、中间体13、中间体14和中间体15。

中间体16：5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸

5-phenyl-1H-pyrazole-3-carboxylic acid

第一步：2,4-二氧代-4-苯基丁酸乙酯(16b)

ethyl 2,4-dioxo-4-phenylbutanoate

将苯乙酮(16a)(2.0g，16.5mmol)溶于10mL叔丁基甲醚中，加入1.3M双(三甲硅基)氨基锂的THF溶液(12.7mL，16.5mmol)；搅拌下，滴加乙二酸二乙酯(3.0g，20.8mmol)，加毕，室温反应过夜。减压浓缩，加入20mL水和20mLEtOAc，萃取。保留水层，加入20MlEtOAc，用1N稀盐酸调pH＝6.分层，有机层经减压浓缩，得油状物(3.4g，收率92.7％).

第二步：3-苯基-1H-吡唑-5-甲酸乙酯(16c)

ethyl 3-phenyl-1H-pyrazole-5-carboxylate

向2,4-二氧代-4-苯基丁酸乙酯(16b)(3.4g，15.4mmol)中，加入15mL无水乙醇和水合肼(1.2g，24.0mmol)，加热至50℃反应。反应完毕，加入30mL水，降至室温，析出固体。抽滤，干燥，得标题化合物2,4-二氧代-4-苯基丁酸乙酯(16b)(2.6g，收率77.9％)。

第三步：5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸(中间体16)

5-phenyl-1H-pyrazole-3-carboxylic acid

将2,4-二氧代-4-苯基丁酸乙酯(16b)(2.6g，9.1mmol)溶于30mL甲醇中，加入15mL一水合氢氧化锂(0.5g，20.0mmol)水溶液。加热至70℃反应至水解完全。减压浓缩，得固体悬浊液。加入15mL水，用1N稀盐酸调pH＝3。抽滤，得标题化合物5-苯基-1H-吡唑-3-甲酸(中间体16)，暗白色固体(2.1g，收率89.5％)。

MS m/z＝189.06[M+1]

以与中间体16的类似的制备方式，以3-氯苯乙酮、3-氯-2-氟苯乙酮、3-氯苯丙酮和3-氯-2,6-二氟苯乙酮为起始原料，制备中间体17、中间体18、中间体19和中间体20。

实施例1

(S)-4-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺}苯甲酸(化合物1)

(S)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-phenylpropanamido)benzoic acid

第一步：

(S)-4-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺}苯甲酸甲酯(中间体1Z)

(S)-methyl4-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-phenylpropanamido)benzoate

将中间体1的盐酸盐(200.0mg，0.60mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体18(144.4mg,0.60mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)162.2mg,1.20mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(230.4mg,1.20mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(232.2mg,1.80mmol)，室温反应8小时，加入20mL水，抽滤，滤饼加水洗涤(5mL×2)，抽干，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-4-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺}苯甲酸甲酯(中间体1Z)(205.4mg,收率65.7％)，直接用于下一步反应。

第二步：(S)-4-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺}苯甲酸(化合物1)

(S)-4-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-phenylpropanamido)benzoic acid

将中间体1Z(205.4mg，0.39mmol)溶于4mL甲醇中，搅拌下，加入2mL水和一水合氢氧化锂(32.8mg，0.78mmol)，室温搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用2M的盐酸酸化至pH＝1，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-4-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺}苯甲酸(化合物1)，(164.2mg,收率85.2％)。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.86(1H,s),12.69(1H,s),10.54(1H,s),8.99(1H,s),8.31-8.29(1H,d,J＝8.0),7.91-7.86(2H,m),7.73-7.37(2H,m),7.57(1H,s),7.35-7.19(5H,m),7.17-7.15(1H,m),4.91-4.89(1H,m),3.16-2.99(1H,m),2.86-2.81(1H,m).

MS m/z＝506.93[M+1]

实施例2-4

以与化合物1类似的制备方式，以中间体17、中间体19和中间体20为起始原料，制备化合物2、化合物3和化合物4。

实施例5

(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(化合物5)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-phenylpropanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

第一步：(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体5Z)

(S)-ethyl

5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-phenylpropanamido)-1H-indole-2-carboxylate

将中间体2的盐酸盐(232.5mg，0.60mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体18(144.4mg,0.60mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)(243.2mg,1.80mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(345.1mg,1.80mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(388.2mg,3.00mmol)，室温反应8小时，加入20mL水，抽滤，滤饼加水洗涤(5mL×2)，抽干，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体5Z)(214.6mg,收率62.3％)，直接用于下一步反应。

第二步：(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(化合物5)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-phenylpropanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体5Z(211.0mg，0.37mmol)溶于3mL甲醇中，搅拌下，加入1.5mL水和一水合氢氧化锂(31.1mg，0.74mmol)，室温搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用2M的盐酸酸化至pH＝1，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-苯丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(化合物5),(85.2mg,收率42.1％)

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.84(1H,s),12.81(1H,s),11.67(1H,s),10.11(1H,s),7.98(1H,s),7.88(1H,s),7.58(1H,s),7.52-7.11(11H,m),7.04(1H,s),4.93-4.87(1H,m),3.20-3.10(2H,m).

MS m/z＝546.13[M+1]

实施例6-8

以与化合物5类似的制备方式，以中间体17、中间体90和中间体20为起始原料，制备化合物6、化合物7和化合物8

实施例9

(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-氟苯基)丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(化合物9)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(4-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

第一步：(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-氟苯基)丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体9Z)

(S)-ethyl

5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(4-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

将中间体3的盐酸盐(241.7mg，0.60mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体18(144.4mg,0.60mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)(243.2mg,1.80mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(345.1mg,1.80mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(388.2mg,3.00mmol))，室温反应8小时，加入20mL水，抽滤，滤饼加水洗涤(5mL×2)，抽干，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-氟苯基)丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体9Z)(239.0mg,收率67.3％)，直接用于下一步反应。

第二步：(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-氟苯基)丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(化合物9)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(4-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体9Z(231.0mg，0.39mmol)溶于3mL甲醇中，搅拌下，加入1.5mL水和氢氧化钠(31.2mg，0.78mmol)，室温搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用2M的盐酸酸化至pH＝1，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-{2-[3-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-氟苯基)丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(化合物9)，(83.5mg,收率38.0％)

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.87(1H,s),12.99-12.88(1H,m),11.64(1H,s),10.15(1H,s),8.99-8.91(1H,m),7.97(1H,s),7.94(1H,s),7.58(1H,s),7.39-7.29(5H,m),7.15-7.02(2H,m),4.90-4.85(1H,m),3.30-3.09(2H,m).

MS m/z＝563.82[M+1]

实施例10-12

以与化合物9类似的制备方式，以中间体17、中间体19和中间体20为起始原料，与中间体3反应制备化合物10、化合物11和化合物12。

实施例13

(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(3-氟苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物13)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(3-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

第一步：(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(3-氟苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体33Z)

(S)-ethyl

5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(3-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体4的盐酸盐(200.0mg，0.49mmol)溶于4mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体18(119.0mg,0.49mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)(133.2mg,0.99mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(189.1mg,0.99mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(188.0mg,1.50mmol)，室温反应8小时，加入20mL水，抽滤，滤饼加水洗涤(5mL×2)，抽干，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(3-氟苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体13Z),(249.8mg,收率85.6％)，直接用于下一步反应。

第二步：(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(3-氟苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物13)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(3-fluorophenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体13Z(250.0mg，0.42mmol)溶于3mL甲醇中，搅拌下，加入1.5mL水和氢氧化锂(106mg，2.52mmol)，室温搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用2M的盐酸酸化至pH＝1，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(3-氟苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物13)，(78.3mg,收率32.4％)

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):13.92-13.75(1H,m),13.03-12.81(1H,m),11.66(1H,s),7.97(1H,s),7.87(1H,s),7.59-7.56(1H,m),7.54-7.27(5H,m),7.21-6.93(4H,m),4.94-4.88(1H,m),3.29-3.13(2H,m).

MS m/z＝563.84[M+1]

实施例14-16

以与化合物13类似的制备方式，以中间体17、中间体19和中间体20为起始原料，与中间体4反应制备化合物14、化合物15和化合物16。

实施例17

(S)-3-(2-氟-3-氯苯基)-N-{{1'-羰基-1'-H-螺[环丁基-1-3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}-3-(3-氟苯基)-丙酰胺基-2-基}-1H-吡唑-5-甲酸胺(化合物17)

(S)-3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-N-(3-(3-fluorophenyl)-1-oxo-1-((1'-oxo-1'H-spiro[cyclobutane-1,3'-oxazolo[3,4-a]indol]-7'-yl)amino)propan-2-yl)-1H-pyrazole-5-carboxamide

第一步：

将中间体4的盐酸盐(244.8mg，0.60mmol)溶于2mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体16(144.4mg,0.60mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)(243.2mg,1.80mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(345.1mg,1.80mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(388.2mg,3.00mmol))，室温反应8小时，加入20mL水，EtOAc萃取3次(5mL×3)，合并有机相，干燥，旋干，得到标题化合物(S)-3-(2-氟-3-氯苯基)-N-{{3-(3-氟苯基)-1'-羰基-1'-H-螺[环丁基-1-3’-噁唑并(3,4-a)吲哚]-7'-基}-3-丙酰胺基-2-基}-1H-吡唑-5-甲酸胺(化合物17)，(250.5mg,收率69.8％)。

MS m/z＝616.15[M+1]

实施例18-23

以与化合物17类似的制备方式，以中间体10～15为起始原料，与中间体4反应制备化合物18～23。

实施例24

(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-吡啶基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物24)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(pyridin-4-yl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

第一步：(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-吡啶基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体24Z)

(S)-ethyl

5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(pyridin-4-yl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体5的盐酸盐(190.6mg，0.49mmol)溶于4mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体18(119.0mg,0.49mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)(133.2mg,0.99mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(189.1mg,0.99mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(188.0mg,1.50mmol)，室温反应8小时，加入20mL水，抽滤，滤饼加水洗涤(5mL×2)，抽干，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-吡啶基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体24Z)，(89.3mg,收率31.7％)，直接用于下一步反应。

第二步：(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-吡啶基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物24)

(S)-5-(2-(3-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-5-carboxamido)-3-(pyridin-4-yl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体24Z(85.0mg，0.15mmol)溶于3mL甲醇中，搅拌下，加入1.5mL水和一水合氢氧化锂(26mg，0.60mmol)，室温搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用2M的盐酸酸化至pH＝1，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-5-甲酰胺基]-3-(4-吡啶基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物24)，(72.0mg,收率87.8％)

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.87(1H,s),12.83(1H,s),11.69(1H,s),8.96(1H,s),8.50(1H,s),7.98(1H,s),7.93(1H,s),7.69-7.39(6H,m),7.05(1H,s),5.00-4.95(1H,m),3.27-3.17(2H,m)

MS m/z＝547.01[M+1]

实施例25-26

以与化合物24的类似的制备方式，以中间体6、7为起始原料与中间体18反应，制备化合物25和26。

实施例27

(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-氨基苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物27)

(S)-5-(3-(4-aminophenyl)-2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

第一步：(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-氨基苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体27a)

(S)-ethyl

5-(3-(4-aminophenyl)-2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

将中间体8的盐酸盐(2.1g，4.9mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，搅拌下，加入中间体18(1.2g,4.9mmol)，1-羟基苯并三唑(HOBT)(1.3mg,9.9mmol)，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)(1.9mg,9.9mmol)和二异丙基乙胺(DIEA)(1.9g,15mmol)，室温反应6小时，加入200mL水，抽滤，滤饼加水洗涤(20mL×2)，抽干。固体转移至烧瓶中，加入200mL甲醇、100mL EtOAc和300mg Pd/C(10％),氢气氛围下搅拌过夜，抽滤，滤液旋干得到标题化合物27a(1.48g,收率51.2％)。

第二步：(化合物27)

将中间体27a(140mg，0.24mmol)溶于3mL甲醇中，搅拌下，加入1.5mL一水合氢氧化锂(52mg，1.20mmol)，40℃搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用2M的盐酸酸化至pH＝5，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥3小时，得到标题化合物27(98.0mg,收率72.8％)。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.88-13.86(1H,m),11.64(1H,s),10.10-10.04(1H,m),8.82(1H,s),7.96(1H,s),7.89(1H,s),7.58(1H,s),7.57-7.29(6H,m),7.22-6.98(3H,m),6.45-6.43(2H,d,J＝8.0),4.80-4.74(1H,m),3.02-2.92(2H,m).

MS m/z＝560.92[M+1]

实施例28

(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(3-氧代吗啉)苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物28)

(S)-5-(2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(3-oxomorpholino)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

第一步：(S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(3-氧代吗啉)苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(中间体28z)

(S)-ethyl

5-(2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(3-oxomorpholino)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

将中间体27a的(200mg，0.34mmol)加入到4mL THF中，搅拌下，加入2-(2-氯-乙氧基)乙酸(48mg,0.34mmol)和EEDQ(100mg，0.41mmol),60℃反应4小时，旋干后加入5mL THF，搅拌下分批加入NaH(40mg,1mmol),室温反应5小时，加入0.2mL氯化铵溶液，旋干，粗品在正己烷和EtOAc中重结晶得到中间体28z(174mg,收率76.0％)。

第二步：S)-5-[2-[3-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(3-氧代吗啉)苯基)-丙酰胺基]-1H-吲哚-2-甲酸(化合物28)

(S)-5-(2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(3-oxomorpholino)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体28z(160mg，0.24mmol)溶于4mL甲醇中，搅拌下，加入2mL一水合氢氧化锂(52mg，1.20mmol)，40℃搅拌4小时。旋蒸除甲醇，残留溶液用1M的盐酸酸化至pH＝5，抽滤，滤饼加5mL水洗涤，50℃鼓风干燥1小时，得到标题化合物28(78.0mg,收率50.4％)。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.89(1H,s),11.18(1H,s),10.14(1H,s),7.88-7.92(2H,m),7.56-7.41(2H,m),7.39-7.25(6H,m),4.91(1H,m),4.15(2H,s),3.93-3.90(t,2H,J＝4.4Hz and 5.6Hz),3.68-3.66(t,2H,J＝5.2Hz and 4.8Hz),3.57-3.55(m,2H)

MS m/z＝644.90[M+1]

实施例29

第一步：(S)-5-{2-[5-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲酰胺基)苯基)-丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(29z)

(S)-ethyl

5-(2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(4-methylpiperazine-1-carboxamido)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

反应瓶中加入中间体27a的盐酸盐(300mg，0.51mmol)和5mL DMF中，搅拌下，加入吡啶(403mg,5.1mmol)、DMAP(13mg,0.10mmol)和4-甲基哌嗪-1-甲酰氯盐酸盐(166mg,1.02mmol)室温搅拌过夜；加入40mL水，EtOAc萃取3次(15mL)，合并有机相，干燥，旋干得到化合物29z(223mg,收率60.8％)。

第二步：(S)-5-{2-[5-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(4-甲基哌嗪-1-甲酰胺基)苯基)-丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(29)

(S)-5-(2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(4-methylpiperazine-1-carboxamido)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将中间体29z(218mg,0.30mmol)和4mL甲醇加至反应瓶中，搅拌下，加入2mL水和一水合氢氧化锂(50mg,1.20mol)，40℃搅拌3小时；旋除有机溶剂，剩余物加入4mL水，1M的盐酸酸化至pH＝5，抽滤，滤饼用2mL水洗，50℃干燥4小时得到化合物29(153mg,73.4％收率)。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.88(1H,s),11.66(1H,s),10.10(1H,s),8.44(1H,s),7.97(1H,s),7.88(1H,s),7.58(1H,s),7.38-7.20(9H,m),7.03(1H,s),4.86-4.85(1H,m),3.48-3.44(6H,m),3.13-3.02(4H,m),2.30(3H,s).

MS m/z＝687.11[M+1]

实施例30

第一步：(S)-5-{2-[5-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(2-甲基环丙基甲酰胺基)苯基)-丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(化合物30)

ethyl

5-((2S)-2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(2-methylcyclopropanecarboxamido)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylate

将中间体27a(200mg，0.34mmol)加到5mL CH₂Cl₂中，搅拌下加入2-甲基环丙基甲酸(34mg,0.34mmol)、吡啶(54mg,0.68mmol)，-10℃滴加POCl₃(78mg,0.51mmol)，加完继续搅拌1小时，加0.5mL水淬灭，旋干，硅胶板分离得到标题化合物30(76mg,收率33.3％)。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.85(1H,s),11.80(1H,s),10.10(1H,s),9.99(1H,s),7.98(1H,s),7.91(1H,s),7.57(1H,s),7.48-7.10(9H,m),7.05(1H,s),4.86-4.85(1H,m),4.35-4.29(2H,dd,J＝6.8),3.12-3.02(2H,m),1.46-1.45(1H,m),1.34-1.31(3H,t,J＝6.8,7.2),1.22-1.16(1H,m),1.08-1.05(3H,m),0.96-0.94(1H,m),0.58(1H,s)

MS m/z＝670.92[M+1]

实施例31

第一步：(S)-5-{2-[5-(3-氯-2-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺基]-3-(4-(2-甲基环丙基甲酰胺基)苯基)-丙酰胺基}-1H-吲哚-2-甲酸(31)

5-((2S)-2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-3-(4-(2-methylcyclopropanecarboxamido)phenyl)propanamido)-1H-indole-2-carboxylic acid

将化合物30(70mg,0.11mmol)和2mL甲醇加至反应瓶中，搅拌下加入1mL水和一水合氢氧化锂(19mg,0.44mmol)，40℃搅拌3小时；旋除有机溶剂，剩余物加入2mL水，1M的盐酸酸化至pH＝4～5，抽滤，滤饼用2mL水洗，50℃干燥4小时得到化合物31(45mg,收率63.7％)。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.86(1H,s),12.84(1H,s),11.67(1H,s),10.02(1H,s),8.12(1H,s),7.98(1H,s),7.60-7.57(1H,t,J＝7.2Hz and 6.8Hz),7.52-7.04(6H,m),7.03(1H,s),4.88-4.70(1H,m),3.14-3.01(1H,m),1.48-1.44(1H,m),1.21-1.17(1H,m),1.16-1.08(3H,m),1.06-1.04(1H,m),0.56-0.59(1H,m).

MS m/z＝642.92[M+1]

实施例32

第一步：(S)-5-(4-(叔丁氧基)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2甲酸乙酯(32b)

(S)-ethyl

5-(4-(tert-butoxy)-2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-4-oxobutanamido)-1H-indole-2-carboxylate

将中间体32a(2.83g,9.8mmol)、5-氨基-1H-吲哚-2-甲酸乙酯(2.00g,9.8mmol)和吡啶(3.00g,19.6mmol)溶于30mLCH₂Cl₂中，搅拌下，-10℃滴加POCl₃(1.16g,14.7mmol)，保持该温度反应1小时，1M盐酸洗涤，干燥后旋干，柱层析(正己烷：EtOAc＝50:1～2:1)得到中间体32b(1.77g,收率36.7％).

第二步：(S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-4-((2(乙氧羰基)-1H-吲哚-5-基)氨基)-4-氧代丁酸(32c)

(S)-3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-4-((2-(ethoxycarbonyl)-1H-indol-5-yl)amino)-4-oxobutanoic acid

将中间体32b(1.7g,3.6mmol)溶于5mLTHF中，0℃搅拌并加入5mL TFA，加完后室温搅拌6小时；旋除溶剂，剩余物中加入20mLTHF、10mLH₂O、Et₃N(3.6g,36mmol)和(Boc)₂O(772mg,3.6mmol)，反应液室温搅拌过夜；旋除有机溶剂，剩余物加入10mLH₂O，用MTBE(3mL)萃取一次，分出的水相用1M HCl酸化至pH＝5，EtOAc萃取3次(10mLx 3)，合并有机相，无水硫酸钠干燥后，旋干得到标题化合物32c.(543mg,收率35.8％)

第三步：(S)-5-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-氨基-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2甲酸乙酯盐酸盐(32d)

(S)-ethyl

5-(4-(4-acetylpiperazin-1-yl)-2-amino-4-oxobutanamido)-1H-indole-2-carboxylatehydrochloride

反应瓶中加入DMF(4mL)、中间体32c(200mg,0.48mmol)、N-乙酰基哌嗪(61mg,0.48mmol)、HOBT(129mg,0.96mmol)、EDCI(183mg,0.96mmol)和DIEA(185mg,1.43mmol)，室温搅拌6小时；向反应液中加入40mL水，用EtOAc萃取3次，合并有机相，干燥，旋干，剩余物溶于2mLEtOAc中，搅拌下加入10mLHCl/EtOAc溶剂，室温搅拌过夜；抽滤后得到标题化合物32d(155mg,收率69.8％)。

第四步：(S)-5-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(5-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-3-甲酸氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2甲酸乙酯(32e)

(S)-ethyl

5-(2-amino-4-morpholino-4-oxobutanamido)-1H-indole-2-carboxylatehydrochloride

反应瓶中加入DMF(3mL)、中间体32d(150mg,0.32mmol)、中间体18(78mg,0.32mmol)、HOBT(87mg,0.64mmol)、EDCI(124mg,0.64mmol)和DIEA(124mg,0.96mmol)，室温搅拌6小时；反应体系中加入30mL水，搅拌，抽滤，滤饼烘干得到标题化合物32e.(91mg,收率43.3％)

第五步：(S)-5-(4-(4-乙酰基哌嗪-1-基)-2-(5-(2-氟-3-氯苯基)-1H-吡唑-3-甲酸氨基)-4-氧代丁酰胺基)-1H-吲哚-2甲酸(32)

5-(4-(4-acetylpiperazin-1-yl)-2-(5-(3-chloro-2-fluorophenyl)-1H-pyrazole-3-carboxamido)-4-oxobutanamido)-1H-indole-2-carboxylate

中间体32e溶于4mL EtOH中，搅拌下加入H₂O(2mL)和LiOH.H₂O(40mg,0.95mmol)，室温反应5小时，旋除溶剂，剩余物中加入水，1M的盐酸调至pH＝3～4，抽滤，滤饼干燥得到化合物32(62mg,收率76.4％)。

1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.94(1H,s),11.63(1H,s),10.00(1H,s),7.98(1H,s),7.89(1H,s),7.58(1H,s),7.43-7.32(4H,m),7.01(1H,s),5.01-5.00(1H,m),3.57-3.47(6H,m),2.95-2.85(4H,m),2.00(3H,s).

MS m/z＝623.94[M+1]

实施例33

以与化合物32的类似的制备方式，以中间体32a为起始原料制备化合物33。

实施例34

测试例：

测试例1、本发明化合物对凝血因子Ⅺa体外酶活性抑制作用

以下方法可用来测定本发明化合物体外对人源凝血因子Ⅺa活性的抑制作用，用IC₅₀表示；

溶液配制：反应缓冲液：0.05M Tris,0.3M NaCl,pH＝7.4,Tris 606mg,NaCl1.753g,加ddH₂O 80mL,用HCl调pH＝7.4，定容至100mL；

CS-21(66)底物储备液(10mM):一支底物(25mg)溶于5mL无菌去离子水，分装4℃保存，避光；

CS-21(66)底物工作液：临用前用反应缓冲液稀释4倍使用；

FⅪa工作液：储备液浓度为50μg/ml，分装-20℃冻存，临用前稀释10倍；

方法：在384孔板中加入15μL受试样品工作液(对照组加入15μLDMSO)、15μL FXIa工作液和100μl缓冲液，室温孵育5分钟,加入CS-11(65)底物工作液30μL,启动反应，测定405nm处吸光值，每5分钟测定一次，作△A-时间曲线，计算斜率为反应速度。按以下公式计算，用spass16.0计算底物浓度为2.5μM时各受试样品的IC₅₀值。

IC₅₀＝Ki(1+[S]/Km)

式中：Km＝0.4mM；[S]＝0.44mM

结果如表1所示

表1：体外凝血因子Ⅺa酶活性测定实验结果

Claims (4)

1.一种式Ⅰ结构的化合物或其立体异构体、互变异构体：

其中：

A选自

R^a1、R^a2或R^a3各自独立的选自H、F、Cl、Br、I；

B选自如下结构：

R^b1各自独立的选自H、C_1-6烷基；

R^b2或R^b3各自独立的选自H或烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基的取代基所取代；

m选自1、2或3；

n选自1或2；

R₁选自H或C_1-4烷基；

R₂选自-(CO)R^c、5～6元碳环或5～6元杂环，所述碳环或杂环任选进一步被0至5个选自H、F、Cl、Br、羟基、氨基、C_1-6烷基酰胺基、取代或未取代的3～7元环烷基酰胺基、-NH(CO)R^d、羧基、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基的取代基所取代；

R^c选自

R^d选自

2.根据权利要求1所述的式Ⅰ结构的化合物或其立体异构体、互变异构体：

其中：

A选自

R^a1、R^a2或R^a3各自独立的选自H、F、Cl；

B选自如下结构：

R^b1各自独立的选自H、Me或Et；

R^b2或R^b3各自独立的选自C_1-2烷基，其中所述的烷基任选进一步被一个或多个选自烷基、卤素、羟基、烷氧基、环烷基的取代基所取代；

m选自1、2或3；

n选自1或2；

R₁选自H或C_1-2烷基；

R₂选自-(CO)R^c、5～6元碳环或5～6元杂环，进一步优选苯、吡啶、吗啉酮或-(CO)R^c，所述苯基任选进一步被0至5个选自H、F、Cl、羟基、氨基、C_1-6烷基酰胺基、取代或未取代的3～7元环烷基酰胺基、-NH(CO)R^d的取代基所取代；

R^c选自

R^d选自

3.根据权利要求1～2中任一项所述的式Ⅰ结构的化合物或其立体异构体、互变异构体，优选：

4.权利要求1～3任一项所示的式Ⅰ结构的化合物用于制备预防和/或治疗血栓栓塞性疾病的药物的用途。