CN109718280B - 一种治疗妇女更年期综合征的中药组合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中医药领域,涉及一种治疗妇女更年期综合征的中药组合物、其制备方法及其在治疗更年期综合征中的应用。该组合物的原料药组成为升麻:葛根:赤芍:炙甘草为1:1~1.5:1:1。该组合物的提取物的制备方法为常规水煎煮醇沉工艺,或者为乙醇浸渍、回流、过滤去渣、滤液静置、再过滤去渣、回收乙醇、烘干、粉碎,即得。本组合物提取物中含有升麻苷、异阿魏酸、葛根素、芍药苷、甘草酸、甘草次酸、甘草苷等有效活性成分。由本发明的中药组合物所得的提取物对去势雌性大鼠造成的更年期综合征模型有显著的治疗作用,可以显著增加模型大鼠的子宫湿重和子宫系数,抑制模型大鼠体温的异常升高,并对E2、FSH、LH等雌激素水平有明显的恢复和调节作用。
Description
技术领域
本发明涉及中医药领域,具体涉及一种治疗妇女更年期综合征的中药组合物、其制备方法及其在治疗更年期综合征中的应用。
背景技术
更年期综合征也称围绝经期综合征,是指妇女在绝经前后的一段时间内,由于雌激素水平急剧下降,导致下丘脑-垂体-性腺轴平衡失调,出现的以植物神经功能失调或紊乱为主的症状,约25%更年期妇女的症状较重,因为自身的雌激素水平突然下降,引起了阴道和/或子宫萎缩及干涩,骨质疏松、头晕、头痛、烘热发汗等一系列病症。此病属于中医“绝经前后诸症”,“脏燥”、“郁证”等病的范畴,具体表现为阳气郁遏、元气下陷、阴阳失衡等。妇女在绝经前后通常出现月经紊乱,烘热汗出,失眠,眩晕耳鸣,烦躁易怒,周身酸痛不适,腰腿酸软等多达100多种的症状,且这些症状常反复出现,持续时间不定,严重影响生活质量,危害妇女身心健康。
现代医学研究表明,妇女子宫和卵巢的周期性活动受下丘脑、垂体和雌性激素水平的调控,卵巢分泌的激素使子宫内膜发生周期性变化,同时对下丘脑、垂体进行反馈调节。女性进入更年期后,由于卵巢功能逐渐衰退和消失,体内雌激素水平下降,雌激素对下丘脑-体系统的负反馈抑制作用减弱,从而诱导下丘脑弓状核和室旁核不断地分泌促性腺激素释放激素(GnRH)进入门脉循环系统,进而刺激和增加垂体释放FSH和LH,使血液中的FSH及LH水平均明显升高,下丘脑-垂体-性腺轴平衡失调,出现神经、内分泌失调的症状,被认为是导致更年期综合征的主要原因。
目前,针对更年期综合征的治疗主要包括雌激素替代疗法和非激素疗法。雌激素替代(或补充)疗法虽然可以明显地缓解症状,疗效也比较明确,且简便易行,但部分患者对激素的使用有禁忌(如患生殖系统肿瘤、乳腺增生或癌变等患者),且因各人的体质和对药物的吸收、代谢等方面的差异,易造成体内激素水平的异常或紊乱,并有报导可能会导致患者迸发心脑血管风险、生殖系统肿瘤、乳腺癌等恶性病变风险增加等副作用,临床使用受到限制。非激素疗法主要有非激素药物疗法(如5-羟色胺再摄取抑制剂氟西汀、帕罗西等)、植物提取药物的治疗、中医药等传统医药的治疗等。目前,因多数的非激素治疗化学药物都有一定的副作用,除症状较重且不宜用替代疗法者外,已经较少应用。国内外多用从植物中提取药物的治疗或缓解相应的症状,代表性的药物有德国夏菩天然药物制药公司生产的莉芙敏片、国内山东绿叶制药有限公司生产的希明婷片等,它们一般用于缓解、改善烘热发汗、烦躁易怒、失眠、肋痛、头晕耳鸣、腰膝酸软、忧郁寡欢等症状,但起效较慢,一般连续服用4周才产生作用,疗程达12周以上,且对雌激素水平失调、阴道和子宫的萎缩、干涩等症状作用不明显。中医药的治疗虽多有报导,也有坤宝丸等市售成药,但多数疗效未得到公认,且服用量大,疗程长,不方便服用,患者依从性也差。本发明的中药组合物虽系古代中医药的经典名方,但从未见报导或记载于用妇女更年期综合征的治疗,初步的实验研究结果表明,本发明中药组合物的提取物在治疗大鼠更年期综合征模型时对烘热的治疗与莉芙敏相当,而在对子宫萎缩的抑制和激素水平的调节等方面略优于莉芙敏片。且进口的莉芙敏片价格昂贵,30片/盒的售价近400元人民币。本发明如能推广应用于临床,其多组份、多靶点的作用优势既能为患者解除痛苦,带来福音,又能减少费用和负担,为临床医生提供新的、更加科学、可靠、实用的治疗方案。
发明内容
本发明旨在提供一种治疗妇女更年期综合征的中药组合物、其制备方法及其在治疗更年期综合征中的应用。通过对此中药组合物不同提取物的研究、比较和分析、测定,确定其主要有效活性部位和活性成分,依此优选和优化提取和制备工艺,最大限度地保留有效活性组份,并最终研制成疗效确切、质量稳定可控、服用安全且方便的中成药新制剂,适用于临床应用,为众多的更年期综合征患者解除痛楚,提供安全、有效的健康服务。
本发明是通过如下的技术方案实现的:
本发明的中药原料药的组成为:
升麻2~10重量份、葛根2~15重量份、赤芍2~10重量份、炙甘草2~10重量份。
中医方解:方中升麻升举阳气、清热解毒、辛凉透肌为君药;葛根解肌退热、升津止渴、通经活络为臣药,其合君药升麻辛能达表,为清热凉血之要药;赤芍和营清热凉血、散瘀止痛为佐药;炙甘草益气复脉、缓急止痛、调和诸药为使药,合赤芍可以滋阴、柔肝、和中,对经脉失养等引起的拘急疼痛效果尤佳。以上诸药合用,共奏“升举阳气、辛凉透肌、解热镇痛”等功效,用于治疗妇女更年期综合征所致的阳气郁遏、元气下陷、阴阳不调等证候,证见烘热汗出、头痛、失眠,眩晕耳鸣,烦躁易怒,五心烦热,腰腿酸软、肢体烦痛等。
本发明中的中药原料药均收录于2015版的《中华人民共和国药典》一部,依药典记载和相关文献报道,其提取物中含有升麻苷、异阿魏酸、阿魏酸、葛根素、芍药苷、甘草酸、甘草次酸、甘草苷等有效活性成分或组分。以这些活性成分作为工艺优化和质量控制(包括定性鉴别、含量测定、稳定性试验)的靶标成分。
本发明按2015版《中国药典》标准确定合格药材,通过进一步的研究、比较和分析,结合药效学试验,优选和优化以下的技术方案和制备工艺:
工艺1原料药材清洗干净后,以8~10倍水浸泡4~8小时,后加热煎煮1.5~2小时,过滤,滤渣加水浸渍后再煎煮1.5~2小时,过滤,合并滤液,离心,浓缩至相对密度1.15~1.20(80℃)的清膏,放冷至室温,加乙醇使含醇量达80%,搅匀,静置,过滤,滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.15~1.20(80℃)的清膏,干燥,制粒,即得提取物;
工艺2原料药材清洗干净后,以8~10倍的乙醇(浓度30%~70%)浸渍,加热回流提取2次,每次1.5~2小时,过滤,合并滤液,回收乙醇至相对密度1.10~1.15(80℃)的清膏,干燥,制粒,即得提取物;
将上述所得的提取物按药剂学的常规方法制成常用的剂型,如颗粒剂、片剂、胶囊、丸剂(含滴丸、浓缩丸、水丸、蜜丸等)、膏剂、酒剂、口服液等。
运用去势雌性大鼠的更年期综合征模型证明了本发明之中药组合物的提取物对更年期综合征模型大鼠的治疗作用。
具体实施例
实施例1准确称取升麻1000g、葛根1500g、赤芍1000g、炙甘草1000g,洗净后加4.5L的70%乙醇浸渍4小时,回流提取2小时,过滤;滤渣复用4.5L的70%乙醇回流提取2小时,过滤,合并2次的滤液,静置,过滤,滤液回收乙醇至相对密度1.10(80℃)的清膏,减压真空干燥,粉碎,即得提取物A(干粉),真空密闭保存。经HPLC法(双波长、梯度洗脱)测定:每克提取物(干粉)中含有异阿魏酸3.05mg(RSD 1.9%)、葛根素109.37mg(RSD 2.8%)、芍药苷38.61mg(RSD2.6%)。
实施例2准确称取升麻500g、葛根750g、赤芍500g、炙甘草500g,洗净后加2.5L水浸泡4小时,沸煮提取2小时,过滤;滤渣复用2.5L的水沸煮提取2小时,过滤,合并2次的滤液,离心,浓缩至相对密度1.16(80℃)的清膏,放冷至室温,加乙醇使含醇量达80%,搅匀,静置,过滤,滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.16(80℃)的清膏,干燥,制粒,即得提取物B(干粉),真空密闭保存。经HPLC法(双波长、梯度洗脱)测定:每克提取物(干粉)中含有异阿魏酸2.09mg(RSD 1.8%)、葛根素89.91mg(RSD 2.9%)、芍药苷29.43mg(RSD 2.7%)。
实施例3准确称取升麻2g、葛根2g、赤芍2g、炙甘草2g,洗净后加100mL的70%乙醇浸渍4小时,回流提取2小时,过滤;滤渣复用4.5L的70%乙醇回流提取2小时,过滤,合并2次的滤液,回收乙醇至相对密度1.12(80℃)的清膏,放置冷却至室温,密封,-20℃冷藏,得到提取物C。
实施例4准确称取升麻6g、葛根6g、赤芍6g、炙甘草6g,洗净后加300mL水浸泡4小时,沸煮提取2小时,过滤;滤渣复用300m L的水沸煮提取2小时,过滤,合并2次的滤液,离心,浓缩至相对密度1.16(80℃)的清膏,放冷至室温,加乙醇使含醇量达80%,搅匀,静置,过滤,滤液回收乙醇并浓缩至相对密度1.16(80℃)的清膏,放置冷却至室温,密封,-20℃冷藏,得到提取物D。
实施例5准确称取升麻10g、葛根15g、赤芍10g、炙甘草10g,洗净后加500mL的50%乙醇浸泡4小时,加热回流提取2小时,过滤;滤渣复用500m L的50%乙醇回流提取2小时,过滤,合并2次的滤液,静置,离心,取上清液回收乙醇至相对密度1.11(80℃)的清膏,放置冷却至室温,密封,-20℃冷藏,得到提取物E。
实施例6准确称取升麻10g、葛根15g、赤芍10g、炙甘草10g,洗净后加500mL的30%乙醇浸泡4小时,加热回流提取2小时,过滤;滤渣复用500m L的30%乙醇回流提取2小时,过滤,合并2次的滤液,静置,离心,取上清液回收乙醇至相对密度1.11(80℃)的清膏,放置冷却至室温,密封,-20℃冷藏,得到提取物F。
实施例7准确称取由实施例1制备的提取物A干粉1g,加5mL甲醇超声溶解,于4℃低温下12000r/min离心10min,取上清液定溶于10mL容量瓶中,作为供试品。另外精密称取异阿魏酸、葛根素、芍药苷的标准品,用甲醇配制成每mL含异阿魏酸0.04mg、芍药苷0.5mg、葛根素0.6mg的溶液,作为对照品,用Agilent 1260型高效液相色谱仪(配备G1310A型HPLC四元泵、G1314BVWD检测器备、Agilent ChemStation工作站)同时检测供试品中所含有的异阿魏酸、葛根素、芍药苷3种活性成分的量。色谱条件为:Waters Shield RP18色谱柱(250mmx4.6mm,5μm),流动相为甲醇(A)-0.05mol/L磷酸二氢钾(B),按设定的固定配比进行梯度洗脱,体积流量为0.8mL/min,柱温30℃,进样量5μl,于230nm和317nm波长处双波长检测,在此色谱条件下,理论塔板数以葛根素峰计不低于5 000。重复进样3次,测得的结果为:每克提取物(干粉)中含有异阿魏酸3.05mg(RSD 1.9%)、葛根素109.37mg(RSD 2.8%)、芍药苷38.61mg(RSD 2.6%)。本实验运用同一色谱条件的HPLC双波长检测法,以梯度洗脱的方式同时检测本组合物的提取物中异阿魏酸、葛根素、芍药苷3种有效成分的含量,方法简便易行,准确度高,稳定性和重现性好,为本组合物的提取物及后续产品的质量评价提供了先进、稳定、可行的研究方法。
实施例8采用去势雌性大鼠更年期综合征模型证明了本中药组合物的有效性。
1.中药组合物提取物的制备:按照实施例1进行制备,得提取物A用作供试品。
2.实验动物造模:选取健康成年SD雌性未孕大鼠60只,体重200~240g,购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司,生产许可证号:SCXK(沪)2018-0006。实验前大鼠置于本院实验动物中心内SPF级饲养室内适应环境一周,使用许可证号:SYXK(苏)2016-0018,室温18~22℃,湿度55~70%。取成年SD雌性大鼠50只,10%的水合氯醛(3.5ml/kg)腹腔注射麻醉,背位固定,下腹部正中线1/3处打开腹腔,分离组织,摘除双侧的卵巢。术后缝合腹腔内肌层和皮肤,青霉素20万U/只皮下注射抗感染,连续3天。另取10只大鼠麻醉手术后仅分离双侧卵巢,并去除卵巢旁少许脂肪组织,不摘除卵巢,作为假手术对照组。
3.分组与给药:去势后大鼠随机分为模型对照组、美雌醇对照组、莉芙敏对照组,和中药组合物提取物高、低剂量组,每组10只。去势2周后按组灌胃给药,美雌醇对照组的剂量为0.5mg/kg·d-1,莉芙敏对照组的剂量为28mg/kg·d-1,中药组合物提取物高、低剂量组的剂量分别2.8、1.4g生药/kg·d-1,各组药物均配制成相应浓度后按5mL/kg·d-1给药,假手术组及模型对照组均灌服等量的蒸馏水,连续给药4周。
4.大鼠体重称量造模前及造模后每周称量大鼠体重,比较各组大鼠体重的差异。
5.大鼠体温的测定去势后次日起用多功能红外电子体温计监测各大鼠的体温,以后每隔一周测量一次,均于上午8:30~10点测量鼠尾的体温。
6.大鼠血浆雌激素水平的测定末次给药1小时后,各组大鼠用10%的水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射麻醉,腹主动脉取血4ml,加中止剂抗凝后3000r/min离心15分钟,取上清液-20℃冰柜贮存,按放免试剂盒说明书的方法测定血浆样本中E2、LH和FSH的水平。
7.大鼠子宫重量和系数的测定取血后处死大鼠,解剖摘取大鼠完整子宫称重,计算子宫系数。
子宫系数=[子宫湿重(g)/大鼠体重(g)]×100%。
9.主要实验结果
9.1各组大鼠体温的比较(见表1)
注:与模型组比较,*:P<0.05,**:P<0.01;
与假手术组比较,△:P<0.05,△△:P<0.01,下同。
由表1可见,术后次日因为是手术后的感染期,各组大鼠的体温均有明显的升高。术后一周及给药前,假手术组大鼠的体温趋于正常水平,但造模后各组大鼠的体温均有明显的小幅升高,与假手术组比较P<0.01,表明雌性大鼠去势造模后有潮热现象,与临床上更年期综合征的情况相似。给药2周后各给药组的体温均比模型组有明显的下降(P<0.05~0.01),至第3周时本中药组合物高剂量组和莉芙敏组的体温已经恢复接近假手术组的正常水平,至第4周时本中药组合物低剂量组的体温也恢复正常水平。美雌醇组大鼠的体温给药2周后虽有明显的下降,与假手术组比较P<0.05,但仍明显高于假手术组的正常水平(P<0.01)。
9.2各组大鼠子宫指数的比较(见表2)。
表2可见,与模型组比较,美雌醇组的大鼠子宫湿重和指数均明显升高(P<0.01),并恢复正常水平,与假手术组比较无明显差异(P>0.05)。本中药组合物高剂量组的大鼠子宫湿重和指数与模型组比较也有明显的上升(P<0.05),但仍明显低于假手术组(P<0.01),本中药组合物低剂量组的作用与莉芙敏组相近,子宫湿重和指数虽略高于模型组,但无统计学差异(P>0.05),且均明显低于假手术的正常水平(P<0.01),但本中药组合物低剂量组有升高的作用趋势。
9.3各组大鼠血浆E2、LH和FSH水平的比较(见表3)
表3可见,与模型组比较,美雌醇组的大鼠的血浆E2明显升高(P<0.01),且明显高于假手术组的正常水平(P<0.01),超出了正常值水平;LH和FSH水平明显降低(P<0.01),并恢复了正常值水平。莉芙敏组的E2水平与模型组比较无明显的统计学差异(P>0.05),LH和FSH水平则有明显的下降(P<0.01),但均明显高于假手术组的正常水平(P<0.01)。本中药组合物的高、低剂量组大鼠的E2水平明显高于模型组(P<0.05~0.01),其中高剂量组接近假手术组的正常水平,低剂量组仍明显低于正常水平(P<0.05);而LH和FSH水平均明显低于模型组(P<0.01),但均高于假手术组的正常水平(P<0.05~0.01),与莉芙敏的作用相当。
10实验小结
10.1本中药组合物的处方出自于宋代的《太平惠氏和剂局方》中的“升麻葛根汤”,其功效是“辛凉疏表,解肌透疹”,古籍文献记载主要用于治疗感受时气温疫,头痛发热,肢体烦痛,以及麻疹初起,发而不透的早期治疗,但极少有临床上实际应用的案例和报导。古代文献如《医方考》(卷6)对此古方的注解为“升麻、葛根辛轻者也,故用方达表而去实。寒邪之伤人也,气血为之壅滞,佐以芍药,用和血也;佐以甘草,用调气也”,提示本方可以用于治疗中医的“郁证”。但自有史记录以来未见有用此方治疗“绝经前后诸症”的实际应用报道。处于五十岁左右更年期的妇女,主要是呈阳气郁遏、元气下陷的证候,兼有烘热汗出、头痛发热、肢体烦痛等症状,本方的“升举阳气、辛凉透肌、解热镇痛”等功效,恰好对应了这些症状。方中升麻升举阳气、清热解毒、辛凉透肌为君药;葛根解肌退热、升津止渴、通经活络为臣药,其合君药升麻辛能达表,为清热凉血之要药;赤芍和营清热凉血、散瘀止痛为佐药;炙甘草益气复脉、缓急止痛、调和诸药为使药,合赤芍可以滋阴、柔肝、和中,对经脉失养等引起的拘急疼痛效果尤佳。本试验结果提示,本方确有缓解去势更年期综合征模型大鼠的烘热、内分泌失调等症状,调节E2、FSH和LH等紊乱,其综合作用有待进一步的研究、挖掘,并有待临床实际应用的证实。
10.2实验中所用的对照药莉芙敏片(remifemin tablets)是德国夏菩天然药物制药公司生产销售的治疗妇女更年期综合征的专科用药,它是从北美的天然植物黑升麻是提取的纯天然药物,已经被美国的草药典收载,并于2016年7月获准在我国销售。黑升麻(black cohoch)亦称总状升麻,学名Cimicifuga racemosa(L.)Nutt.,是一种生长在北美东部的毛莨科毛莨属植物,曾被美洲的印地安土族用作传统的治疗妇科疾病的药物,在德国和欧洲,该草药根的提取物及制剂用于治疗妇女更年期综合征已经有近60年的历史,主要用于改善烘热汗出、心慌、头晕等症状。比较巧合的是我国的中草药升麻也常被称作黑升麻,虽然不是同一种的植物,但在外观色泽、性状等方面相仿,其及所含有的活性化学成分如三萜苷、27-脱氢升麻烃、升麻苷、异阿魏酸、咖啡酸、水杨酸、糖、鞣酸及长链脂肪酸等成分也大多的相同或相近,且都不含芒柄花黄素、山萘酚和木黄酮等,因此它们不是植物雌激素。目前认为它的主要活性成分为萜烯糖苷,可产生类雌激素样效果,调节内分泌平衡,从而有助于缓解更年期失眠、潮热、背部疼痛及情绪失控等不适症状痛及情绪失控等不适症状。本研究的初步试验研究表明,“升麻葛根汤”的提取物具有与莉芙敏相近的功效,且对去势大鼠子宫萎缩和雌激素水平的恢复等方面略有优势,且没有激素替代疗法药物美雌醇的雌激素水平超过正常生理水平而导致肿瘤等恶性病变风险增加等副作用,值得进一步地研究、开发,以期为临床治疗更年期综合征提供更佳的治疗方案,以解除或缓解患者的痛苦。
Claims (4)
1.一种中药组合物在制备治疗妇女更年期综合征药物中的用途,其特征为由以下重量份的成分制成:升麻 2~10、葛根 2~15、赤芍 2~10、炙甘草 2~10。
2.如权利要求 1 所述的中药组合物的用途,其特征在于其制备方法为中药制剂学上常用的水洗、水浸渍、水煎煮、过滤去渣、浓缩、加乙醇沉淀、再过滤去渣、回收乙醇、烘干、粉碎,即得。
3.如权利要求 1所述的中药组合物的用途,其特征在于其制备方法为30%~80%乙醇浸渍、回流、过滤去渣、滤液静置、再过滤去渣、回收乙醇、烘干、粉碎,即得。
4.如权利要求2或3 所述的中药组合物的用途,其特征在于剂型为片剂、颗粒剂、胶囊、滴丸、浓缩丸、蜜丸、膏剂、酒剂、口服液。
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《中医散文欣赏》赤芍与白芍,一对姐妹花;无;《http://www.huashandao.com/h-nd-1627.html》;20180908;第5页最后1段 * |
甘草可有效缓解女性更年期症状;39健康网社区;《http://cm.39.net/a/2010910/1477833.html》;20100910;标题 * |
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