CN109701089A - 一种可降解组织再生屏障膜及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物材料领域,具体涉及一种可降解组织再生屏障膜及其制备方法。本发明一种可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:藻酸钙溶液35~55%、壳聚糖溶液30~40%和富血小板纤维蛋白溶液5~35%。本发明提供的可降解组织再生屏障膜不仅具有良好的机械性能,还能够有效消除炎症,此外,与采用单组份壳聚糖溶液相比,本发明提供的可降解组织再生屏障膜的降解时间大大缩短,满足了机械性能、杀菌消炎性能和降解性能于一身的需求。
Description
技术领域
本发明属于生物材料领域,具体涉及一种可降解组织再生屏障膜及其制备方法。
背景技术
牙周炎发生于牙周组织,其特征是造成结缔组织附着和牙槽骨支持组织不可逆转的丧失。近几十年,牙周病学家们对再生为牙周炎所破坏的组织产生了兴趣,通过用于屏障技术的移植材料作为支架的功能,阻止屏障的崩解来提供一个空间,使刚形成的血块稳定于患处,引导其为牙周组织再生创造了条件。
根据临床需要,一种有效的屏障膜应该具有适当的机械强度,以阻挡生长快速的修复组织(上皮和牙龈结缔组织)远离牙根表面,在根面维持一个受保护的空间。另外,屏障膜的可控制性、安全性、无毒无抗原活性以及在宿主组织周图很少甚至不引起炎症反应,能够稳定固着并能保持一段足够引导组织起效的时间都是影响其应用的重要因素,根据在体内是否容易降解,临床应用的引导组织再生膜膜材料可分为生物降解和不可降解两大类。
早期比较常用的引导牙周组织屏障膜材料主要是生物不可降解材料,如聚四氟乙烯材料,其具有良好的生物相容性和比较理想的机械强度,在临床应用取得了比较满意的效果,被用作其他引导组织再生膜材料对比的金标准。然而,一个显著的缺点是本身不被组织吸收且无法与周围组织结合,必须在植入后二次手术取出,增加了创伤的机会,再次手术可能对牙周组织造成损伤,且会对已形成新附着产生破坏作用,容易引起并发症。
生物可降解材料是目前应用比较广泛的材料,主要包括聚乳酸、壳聚糖、胶原、藻酸钙等,解决了生物不可降解材料应用中的难题。然而在应用过程中,生物可降解材料也表现出一些不足,比如聚乳酸材料虽然具有生物相容性好,机械性能强及易成型等优点,但是,缺点是其酸性降解产物会引起局部pH值下降,易导致患者出现无菌性炎症反应。壳聚糖材料与动物的组织器官及细胞有良好的生物相容性,无毒,降解过程中产生的低分子寡聚糖在体内不积累,几乎没有抗原性且还具有其他生物活性功能,但由于机械性和降解性较差,得不到有效的应用。胶原材料在天然膜材料中被应用和研究最多,具有无抗原性,生物相容性好,可参与组织愈合过程,降解速率可根据需要调节等优点。但可引发免疫和慢性炎症反应,且来源以及类型较多,引发的机体反应也不尽相同,进口胶原膜价格昂责,囯产胶原膜临床疗效不稳定,未能广泛的运用。
中国专利申请CN108379656A公开了一种生物可降解性复合型引导骨再生屏障膜,该屏障膜由生物医用镁条和压制在镁条上下面的聚乳酸膜制备而成,该发明具备良好的生物相容性、一定的机械强度、可降解性、能选择性的引导组织再生,但是,由于聚乳酸降解产物会引起局部pH值下降,易导致患者出现无菌性炎症反应。中国专利申请CN101927036A公开了一种温敏凝胶引导组织再生屏障膜,该屏障膜由壳聚糖溶液和β-甘油磷酸钠组合而成,具有良好的生物相容性,但是该屏障膜降解时间长,且机械强度较差,限制了其在牙周组织再生中的应用。
综上所述,目前采用的生物可降解组织再生屏障膜材料存在机械性能、易于引发炎症以及生物可降解性能不能同时达到的问题。
发明内容
针对以上现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种可降解组织再生屏障膜及其制备方法。本发明提供的可降解组织再生屏障膜不仅具有良好的机械性能,还能够有效消除炎症,此外,与采用单组份壳聚糖溶液相比,本发明的降解时间大大缩短,满足了机械性能、杀菌消炎性能和降解性能于一身的需求。
本发明的技术方案如下:
一种可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:藻酸钙溶液35~55%、壳聚糖溶液30~40%和富血小板纤维蛋白溶液5~35%。
进一步的,所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:藻酸钙溶液40%、壳聚糖溶液35%和富血小板纤维蛋白溶液25%。
进一步的,所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
进一步的,所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:15-25:5-10:3-10;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为10-20:500-1500:20-30:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为1-3:9:1000。
进一步的,所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:20:7:5;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为15:1000:25:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为2:9:1000。
本发明还提供了所述可降解组织再生屏障膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、将藻酸钙溶液加至壳聚糖溶液中,搅拌均匀,离心脱气20~30min,制得藻酸钙/壳聚糖复合溶液;
S2、将步骤S1制得的藻酸钙/壳聚糖复合溶液倒入聚四氟乙烯模具中,烘干,置-25℃预冷2~3h;再置于-80℃冷冻12~24h,真空冷冻干燥成型;用NaHCO3溶液洗涤至pH为中性,再次置于-80℃冷冻12~24h后,真空冷冻干燥24~36h,制得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品;
S3、将步骤S2所得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品浸泡于富血小板纤维蛋白溶液中12~24h,取出后-80℃冷冻12~24h,真空冷冻干燥成型24~36h,即得。
进一步的,所述步骤S1中藻酸钙溶液的制备方法如下:
称取藻酸钙在蒸馏水中溶胀,再加入NaHCO3室温搅拌40min,然后将其逐滴滴加到冰乙酸中,搅拌至溶液为中性,即得。
进一步的,所述步骤S1中壳聚糖溶液的制备方法如下:
称取壳聚糖加入蒸馏水中,然后缓慢滴入冰乙酸,加入溶菌酶,完全溶解后,离心脱气20~30min,即得。
进一步的,所述步骤S3中富血小板纤维蛋白溶液的制备方法如下:
S1、将采集的全血放入含质量浓度为3.2%的柠檬酸钠溶液的真空试管中,1500~3000r/min离心3~5min,收集含有血沉棕黄层的上层清液;
S2、将步骤S1收集的含有血沉棕黄层的上层清液转移到新的真空试管中,并离心3~5min,离心速度为1500~3000r/min,收集浓缩于底层的富血小板纤维蛋白;
S3、将氯化钠溶于水中,搅拌均匀,然后将步骤S2收集的富血小板纤维蛋白与氯化钠溶液混合均匀,即得。
进一步的,所述可降解组织再生屏障膜的制备方法制备的可降解组织再生屏障膜在制备修复组织用制品中的应用;所述的修复组织用制品包括牙周组织再生膜、骨修复膜、人工皮肤、人工血管、人工神经导管、人工韧带。
与现有技术相比,本发明具有如下优势:
(1)本发明提供的可降解组织再生屏障膜采用的藻酸钙溶液由藻酸钙、NaHCO3、冰乙酸复合而成,几种组分相互配比,促进藻酸钙材料交联,增加了材料的机械性能,不仅如此,还有效降低了组织再生时炎症的引发。
(2)本发明提供的可降解组织再生屏障膜采用的壳聚糖溶液由壳聚糖、冰乙酸、溶菌酶混合而成,几种组分相互配比,不仅提高了材料的抗菌、消炎、抗病毒的效果,还提高了其机械性能。
(3)本发明提供的可降解组织再生屏障膜中加入富血小板纤维蛋白溶液,有效防止创口出血,促进了牙周组织再生。
(4)本发明提供的可降解组织再生屏障膜,藻酸钙溶液、壳聚糖溶液和富血小板纤维蛋白溶液相互配比,各组分作用相互协同,不仅增加了可降解组织再生屏障膜材料的机械性能,还有效抑制炎症的发生,尽快了组织再生速度,同时,还加快了壳聚糖溶液的降解速度。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。
实施例1、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
藻酸钙溶液35%、壳聚糖溶液30%和富血小板纤维蛋白溶液35%。
所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:15:5:3;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为10:500:20:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为1:9:1000。
所述可降解组织再生屏障膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、将藻酸钙溶液加至壳聚糖溶液中,搅拌均匀,离心脱气20min,制得藻酸钙/壳聚糖复合溶液;
S2、将步骤S1制得的藻酸钙/壳聚糖复合溶液倒入聚四氟乙烯模具中,烘干,置-25℃预冷2h;再置于-80℃冷冻12h,真空冷冻干燥成型;用NaHCO3溶液洗涤至pH为中性,再次置于-80℃冷冻12h后,真空冷冻干燥24h,制得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品;
S3、将步骤S2所得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品浸泡于富血小板纤维蛋白溶液中12h,取出后-80℃冷冻12h,真空冷冻干燥成型24h,即得。
所述步骤S1中藻酸钙溶液的制备方法如下:
称取藻酸钙在蒸馏水中溶胀,再加入NaHCO3室温搅拌40min,然后将其逐滴滴加到冰乙酸中,搅拌至溶液为中性,即得。
所述步骤S1中壳聚糖溶液的制备方法如下:
称取壳聚糖加入蒸馏水中,然后缓慢滴入冰乙酸,加入溶菌酶,完全溶解后,离心脱气20min,即得。
进一步的,所述步骤S3中富血小板纤维蛋白溶液的制备方法如下:
S1、将采集的全血放入含质量浓度为3.2%的柠檬酸钠溶液的真空试管中,1500r/min离心3min,收集含有血沉棕黄层的上层清液;
S2、将步骤S1收集的含有血沉棕黄层的上层清液转移到新的真空试管中,并离心3min,离心速度为1500r/min,收集浓缩于底层的富血小板纤维蛋白;
S3、将氯化钠溶于水中,搅拌均匀,然后将步骤S2收集的富血小板纤维蛋白与氯化钠溶液混合均匀,即得。
实施例2、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
藻酸钙溶液55%、壳聚糖溶液40%和富血小板纤维蛋白溶液5%。
所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:25:10:10;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为20:1500:30:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为3:9:1000。
所述可降解组织再生屏障膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、将藻酸钙溶液加至壳聚糖溶液中,搅拌均匀,离心脱气30min,制得藻酸钙/壳聚糖复合溶液;
S2、将步骤S1制得的藻酸钙/壳聚糖复合溶液倒入聚四氟乙烯模具中,烘干,置-25℃预冷3h;再置于-80℃冷冻24h,真空冷冻干燥成型;用NaHCO3溶液洗涤至pH为中性,再次置于-80℃冷冻24h后,真空冷冻干燥36h,制得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品;
S3、将步骤S2所得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品浸泡于富血小板纤维蛋白溶液中24h,取出后-80℃冷冻24h,真空冷冻干燥成型36h,即得。
所述步骤S1中藻酸钙溶液的制备方法如下:
称取藻酸钙在蒸馏水中溶胀,再加入NaHCO3室温搅拌40min,然后将其逐滴滴加到冰乙酸中,搅拌至溶液为中性,即得。
所述步骤S1中壳聚糖溶液的制备方法如下:
称取壳聚糖加入蒸馏水中,然后缓慢滴入冰乙酸,加入溶菌酶,完全溶解后,离心脱气30min,即得。
所述步骤S3中富血小板纤维蛋白溶液的制备方法如下:
S1、将采集的全血放入含质量浓度为3.2%的柠檬酸钠溶液的真空试管中,3000r/min离心5min,收集含有血沉棕黄层的上层清液;
S2、将步骤S1收集的含有血沉棕黄层的上层清液转移到新的真空试管中,并离心5min,离心速度为3000r/min,收集浓缩于底层的富血小板纤维蛋白;
S3、将氯化钠溶于水中,搅拌均匀,然后将步骤S2收集的富血小板纤维蛋白与氯化钠溶液混合均匀,即得。
实施例3、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
藻酸钙溶液40%、壳聚糖溶液35%和富血小板纤维蛋白溶液25%。
所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:20:7:5;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为15:1000:25:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为2:9:1000。
本发明还提供了所述可降解组织再生屏障膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、将藻酸钙溶液加至壳聚糖溶液中,搅拌均匀,离心脱气25min,制得藻酸钙/壳聚糖复合溶液;
S2、将步骤S1制得的藻酸钙/壳聚糖复合溶液倒入聚四氟乙烯模具中,烘干,置-25℃预冷2.5h;再置于-80℃冷冻20h,真空冷冻干燥成型;用NaHCO3溶液洗涤至pH为中性,再次置于-80℃冷冻20h后,真空冷冻干燥30h,制得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品;
S3、将步骤S2所得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品浸泡于富血小板纤维蛋白溶液中20h,取出后-80℃冷冻20h,真空冷冻干燥成型30h,即得。
进一步的,所述步骤S1中藻酸钙溶液的制备方法如下:
称取藻酸钙在蒸馏水中溶胀,再加入NaHCO3室温搅拌40min,然后将其逐滴滴加到冰乙酸中,搅拌至溶液为中性,即得。
进一步的,所述步骤S1中壳聚糖溶液的制备方法如下:
称取壳聚糖加入蒸馏水中,然后缓慢滴入冰乙酸,加入溶菌酶,完全溶解后,离心脱气25min,即得。
进一步的,所述步骤S3中富血小板纤维蛋白溶液的制备方法如下:
S1、将采集的全血放入含质量浓度为3.2%的柠檬酸钠溶液的真空试管中,2500r/min离心4min,收集含有血沉棕黄层的上层清液;
S2、将步骤S1收集的含有血沉棕黄层的上层清液转移到新的真空试管中,并离心4min,离心速度为2500r/min,收集浓缩于底层的富血小板纤维蛋白;
S3、将氯化钠溶于水中,搅拌均匀,然后将步骤S2收集的富血小板纤维蛋白与氯化钠溶液混合均匀,即得。
实施例4、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
藻酸钙溶液50%、壳聚糖溶液38%和富血小板纤维蛋白溶液12%。
所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:18:8:7;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为18:1200:28:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为3:9:1000。
所述可降解组织再生屏障膜的制备方法,包括如下步骤:
S1、将藻酸钙溶液加至壳聚糖溶液中,搅拌均匀,离心脱气28min,制得藻酸钙/壳聚糖复合溶液;
S2、将步骤S1制得的藻酸钙/壳聚糖复合溶液倒入聚四氟乙烯模具中,烘干,置-25℃预冷3h;再置于-80℃冷冻15h,真空冷冻干燥成型;用NaHCO3溶液洗涤至pH为中性,再次置于-80℃冷冻15h后,真空冷冻干燥28h,制得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品;
S3、将步骤S2所得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品浸泡于富血小板纤维蛋白溶液中15h,取出后-80℃冷冻15h,真空冷冻干燥成型28h,即得。
所述步骤S1中藻酸钙溶液的制备方法如下:
称取藻酸钙在蒸馏水中溶胀,再加入NaHCO3室温搅拌40min,然后将其逐滴滴加到冰乙酸中,搅拌至溶液为中性,即得。
所述步骤S1中壳聚糖溶液的制备方法如下:
称取壳聚糖加入蒸馏水中,然后缓慢滴入冰乙酸,加入溶菌酶,完全溶解后,离心脱气28min,即得。
所述步骤S3中富血小板纤维蛋白溶液的制备方法如下:
S1、将采集的全血放入含质量浓度为3.2%的柠檬酸钠溶液的真空试管中,2000r/min离心4min,收集含有血沉棕黄层的上层清液;
S2、将步骤S1收集的含有血沉棕黄层的上层清液转移到新的真空试管中,并离心4min,离心速度为2000r/min,收集浓缩于底层的富血小板纤维蛋白;
S3、将氯化钠溶于水中,搅拌均匀,然后将步骤S2收集的富血小板纤维蛋白与氯化钠溶液混合均匀,即得。
对比例1、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
壳聚糖溶液75%和富血小板纤维蛋白溶液25%。
所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为15:1000:25:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为2:9:1000。
所述可降解组织再生屏障膜、所述壳聚糖溶液及所述富血小板纤维蛋白溶液的制备方法与实施例3类似。
对比例1与实施例3基本相同,不同在于,所述藻酸钙溶液替换为相同组分的壳聚糖溶液。
对比例2、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
藻酸钙溶液40%、壳聚糖溶液35%和富血小板纤维蛋白溶液25%。
所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:20:7:5;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸的质量比为15:1000:25;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为2:9:1000。
所述可降解组织再生屏障膜、所述藻酸钙溶液、所述壳聚糖溶液及所述富血小板纤维蛋白溶液的制备方法与实施例3类似。
对比例2与实施例3基本相同,不同在于,对比例2的壳聚糖溶液中未加入溶菌酶。
对比例3、一种可降解组织再生屏障膜
所述可降解组织再生屏障膜,由以下原料及其质量百分数制成:
藻酸钙溶液40%、壳聚糖溶液60%。
所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶。
所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:20:7:5;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为15:1000:25:1。
所述可降解组织再生屏障膜、所述藻酸钙溶液及所述壳聚糖溶液的制备方法与实施例3类似。
对比例3与实施例3基本相同,不同在于,对比例3中富血小板纤维蛋白溶液替换为相同组分的壳聚糖溶液。
试验例一、炎症反应试验
1、试验材料:实施例1-4和对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜、完全弗氏佐剂。
2、试验对象:家兔80只。
3、试验方法:随机将80只家兔分为8组,每组10只,分别记为实施例1-4组、对比例1-3组和对照组。实施例1-4组、对比例1-3组中的70只家兔,每只家兔于左侧后足皮内注射完全弗氏佐剂,观察家兔左侧后足肿胀至最大面积,然后将实施例1-4组分别对应给予实施例1、实施例2、实施例3、实施例4制备的可降解组织再生屏障膜,对比例1-3组分别对应给予对比例1、对比例2、对比例3制备的可降解组织再生屏障膜,上述可降解组织再生屏障膜均移植入家兔左后足膝的关节处,空白组涂抹消毒酒精。然后游标卡尺测量各组家兔左侧后足的宽度。
4、试验结果:炎症反应试验见表1。
表1炎症反应试验数据
由表1可知,对照组的炎症恢复率为1.5%,对比例1-3组的炎症恢复率为6.8%以下,与此相比,实施例1-5组的炎症恢复率均大于15.9%,其中,实施例3的恢复率为19.2%,效果最好,为本发明的最佳实施例。实验结果表明,本发明制备的可降解组织再生屏障膜具有良好的杀菌抗炎效果。
试验例二、机械性能测试
1、试验材料:实施例1-4和对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜。
2、试验方法:对实验材料进行拉伸测试试验,参照GB/T 6672-2001,在拉力测试机上以100mm/min的速率进行样品拉伸测试。
3、试验结果:试验结果见表2。
表2拉伸测试试验数据
组别 | 拉伸强度(MPa) | 断裂伸长率(%) |
实施例1 | 6.28 | 94.76 |
实施例2 | 6.12 | 94.67 |
实施例3 | 6.34 | 95.01 |
实施例4 | 6.24 | 94.56 |
对比例1 | 4.95 | 73.21 |
对比例2 | 5.22 | 79.22 |
对比例3 | 5.76 | 80.13 |
由表2可知,实施例1-4制备的可降解组织再生屏障膜的拉伸强度分别为6.28MPa、6.12MPa、6.34MPa、6.24MPa,断裂伸长率分别为94.76%、94.67%、95.01%、94.56%,其中,实施例3制备的可降解组织再生屏障膜的综合性能最好,为本发明的最佳实施例,与其相比,对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜的拉伸强度和断裂伸长率均比实施例差。试验结果表明,本发明制备的可降解组织再生屏障膜具有良好的机械性能。
试验例三、材料降解速率测试
1、试验材料:实施例1-4和对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜。
2、试验方法:通过体外降解实验,研究可降解组织再生屏障膜的生物降解行为。
降解实验步骤如下:①配置磷酸缓冲溶液;②样品真空干燥其中真空干燥至恒重,每组样品剪成2*5mm条状,分成10份,每份质量约0.300g,并记为W0;③分别放入15mL螺口瓶中,加入15mL的缓冲液并编号,放入恒温水浴振荡器中(37℃,50次/min),每隔一周取出样品,真空干燥至恒重并记录重量WC,计算降解百分比W(%),W(%)=(W0-WC)/W0。
注:每个实验时段前后测量缓冲浓溶液的pH值,若pH值漂移超出极限值,用0.1mol氢氧化钠溶液调至pH=7.4±0.3。如果缓冲液变浊,若不是由材料本身或降解产物所导致,该试验样品应放弃。
3、试验结果:试验结果见表3。
表3材料降解速率测试数据
由表3可知,对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜在第4个月时降解速率小于16.4%,而本发明实施例1-4制备的可降解组织再生屏障膜在第4个月时降解速率达到49.2%,其中,实施例3的效果最好,为本实施例的最佳实施例。结果表明,本发明制备的可降解组织再生屏障膜降解速率明显提升,且其降解速率满足组织学上的骨性愈合时间要求。
试验例四、生物屏障作用试验
1、试验材料:用打孔机将实施例1-4和对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜材料剪成直径为6mm的小圆片,均以60Co辐射24h消毒,使用前用紫外线照射30min。试验前一天将材料放入24孔培养板中,用培养液预湿,备用。
取培养至细胞密度达到培养瓶的80%左右的人牙龈成纤维细胞,用胰蛋白酶消化后,计数,调整细胞悬浊液浓度为5×103/mL。取100μL接种于各种24孔板内已经预湿的可降解组织再生屏障膜上,标记可降解组织再生屏障膜接种细胞的一面为正面,另一面为反面,在37℃、50mL/L CO2、饱和湿度条件下培养,3h后向每孔补加100μL培养液,继续培养,每24h换液1次。
培养3天后取出材料,用PBS漂洗2遍,去除死细胞,经过预处理的细胞材料用扫面电镜观察牙龈成纤维细胞在材料正反面及断面的生长情况。
2、试验结果:实施例1-4制备的可降解组织再生屏障膜材料表面,人牙龈成纤维细胞粘附生长,多角形细胞伸出长长的伪足,向外铺展在可降解组织再生屏障膜材料表面;膜材料反面均成一致的二维网状多孔结构,未见有细胞生长;膜材料断面处也未观察到有细胞长入;而对比例1-3制备的可降解组织再生屏障膜材料的正反两面及断面处有人牙龈成纤维细胞粘附生长。实验结果表明,本发明制备的可降解组织再生屏障膜材料能够阻挡人牙龈成纤维细胞的长入,具有良好的屏障功能,有望成为引导牙周组织再生屏障膜的候选材料。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰或改变。因此,举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由本发明的权利要求所涵盖。
Claims (10)
1.一种可降解组织再生屏障膜,其特征在于,由以下原料及其质量百分数制成:藻酸钙溶液35~55%、壳聚糖溶液30~40%和富血小板纤维蛋白溶液5~35%。
2.如权利要求1所述的可降解组织再生屏障膜,其特征在于,由以下原料及其质量百分数制成:藻酸钙溶液40%、壳聚糖溶液35%和富血小板纤维蛋白溶液25%。
3.如权利要求1或2所述的可降解组织再生屏障膜,其特征在于,所述藻酸钙溶液的配制原料包括藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸;所述壳聚糖溶液的配制原料包括壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶;所述富血小板纤维蛋白溶液的配制原料包括富血小板纤维蛋白、氯化钠、蒸馏水。
4.如权利要求3所述的可降解组织再生屏障膜,其特征在于,所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:15-25:5-10:3-10;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为10-20:500-1500:20-30:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为1-3:9:1000。
5.如权利要求4所述的可降解组织再生屏障膜,其特征在于,所述藻酸钙、蒸馏水、NaHCO3、冰乙酸的质量比为1:20:7:5;所述壳聚糖、蒸馏水、冰乙酸、溶菌酶的质量比为15:1000:25:1;所述富血小板纤维蛋白、氯化钠、水的质量比为2:9:1000。
6.一种如权利要求1-5任一项所述的可降解组织再生屏障膜的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1、将藻酸钙溶液加至壳聚糖溶液中,搅拌均匀,离心脱气20~30min,制得藻酸钙/壳聚糖复合溶液;
S2、将步骤S1制得的藻酸钙/壳聚糖复合溶液倒入聚四氟乙烯模具中,烘干,置-25℃预冷2~3h;再置于-80℃冷冻12~24h,真空冷冻干燥成型;用NaHCO3溶液洗涤至pH为中性,再次置于-80℃冷冻12~24h后,真空冷冻干燥24~36h,制得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品;
S3、将步骤S2所得藻酸钙/壳聚糖复合固体样品浸泡于富血小板纤维蛋白溶液中12~24h,取出后-80℃冷冻12~24h,真空冷冻干燥成型24~36h,即得。
7.如权利要求6所述的可降解组织再生屏障膜的制备方法,其特征在于,所述步骤S1中藻酸钙溶液的制备方法如下:
称取藻酸钙在蒸馏水中溶胀,再加入NaHCO3室温搅拌40min,然后将其逐滴滴加到冰乙酸中,搅拌至溶液为中性,即得。
8.如权利要求6所述的可降解组织再生屏障膜的制备方法,其特征在于,所述步骤S1中壳聚糖溶液的制备方法如下:
称取壳聚糖加入蒸馏水中,然后缓慢滴入冰乙酸,加入溶菌酶,完全溶解后,离心脱气20~30min,即得。
9.如权利要求6所述的可降解组织再生屏障膜的制备方法,其特征在于,所述步骤S3中富血小板纤维蛋白溶液的制备方法如下:
S1、将采集的全血放入含质量浓度为3.2%的柠檬酸钠溶液的真空试管中,1500~3000r/min离心3~5min,收集含有血沉棕黄层的上层清液;
S2、将步骤S1收集的含有血沉棕黄层的上层清液转移到新的真空试管中,并离心3~5min,离心速度为1500~3000r/min,收集浓缩于底层的富血小板纤维蛋白;
S3、将氯化钠溶于水中,搅拌均匀,然后将步骤S2收集的富血小板纤维蛋白与氯化钠溶液混合均匀,即得。
10.权利要求6所述的可降解组织再生屏障膜的制备方法制备的可降解组织再生屏障膜在制备修复组织用制品中的应用;所述的修复组织用制品包括牙周组织再生膜、骨修复膜、人工皮肤、人工血管、人工神经导管、人工韧带。
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